膀胱移行细胞癌P-糖蛋白的表达及其在肿瘤复发中的意义

目的 研究Ｐ－糖蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其在肿瘤复发中的意义。方法 应用Ｓ－ＡＢＣ免疫组织化学方法检测８０例膀胱移行细胞癌组织和２０例正常膀胱粘膜组织中Ｐ－糖蛋白的表达。结果 膀胱移行细胞癌组织Ｐ－糖蛋白阳性率明显高于正常膀胱粘膜组织（Ｐ〈０．０１），灌注化疗后复发肿瘤Ｐ－糖蛋白的阳性表达率明显高于初发肿瘤（Ｐ〈０．０１）。结论 Ｐ－糖蛋白介导的多药耐药是膀胱癌腔内灌注化疗失败、肿瘤复发的重要原因。     

膀胱移行细胞癌多药耐药蛋白P—gp170的表达及意义

目的：研究膀胱移行细胞癌的多药耐药性。方法：应用免疫组织化学方法检测80例膀胱移行细胞癌和20例正常膀胱粘膜组织中P－gp170的表达。结果：80例膀胱移行细胞癌组织P－gp170的表达阳性率为42％,明显高于正常膀胱粘膜组织;化疗后复发肿瘤P－gp170阳性表达率明显高于初发肿瘤。结论：P－gp170介导的多药耐药是膀胱癌腔内灌注化疗失败的重要原因。     

膀胱癌组织MDR_1基因产物P-GP_(170)表达的意义

为证实肿瘤多项耐药基因（ Ｍ Ｄ Ｒ１） 产物 Ｐ Ｇ Ｐ１７０ 与膀胱癌化疗失败及复发的关系,利用免疫组化方法对７２例膀胱癌进行了研究。发现膀胱癌术后丝裂霉素膀胱灌注化疗失败者的 Ｐ Ｇ Ｐ１７０ 阳性率及强阳性率均明显高于初发膀胱癌,并且高分级肿瘤的 Ｐ Ｇ Ｐ１７０ 阳性及强阳性表达均高于低分级肿瘤。通过本实验可以认为膀胱癌化疗效果如何与膀胱癌组织中 Ｍ Ｄ Ｒ１ 产物的量有关。     

P—糖蛋白在食管癌的表达及其意义

目的　观察Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）在食管癌的表达并探讨其临床生物学意义。方法　应用免疫组织化学方法检测６７ 例未进行化疗的食管癌和４４ 例食管癌周正常组织中Ｐ－ｇｐ 的表达。结果　Ｐ－ｇｐ 在４４ 例正常食管粘膜上皮中的表达率是８６．４％ ,在６７ 例食管癌组织中的表达为５６．７％ （Ｐ＜ ０．０１）。Ｐ－ｇｐ 在食管癌的表达与组织分化程度有关。随着癌组织分化程度的下降及出现淋巴结转移时,Ｐ－ｇｐ 表达率也下降,耐药性减弱。结论　检测Ｐ－ｇｐ 的表达对食管癌治疗方案的选择有指导意义。     

膀胱腔内灌注化疗对膀胱癌组织中P-糖蛋白表达的影响

目的：探讨膀胱癌P-糖蛋白（P—gP）的表达与临床膀胱灌注化疗之间的关系。方法：用免疫组化技术检测60例初发膀胱癌组织标本及应用膀胱腔内化疗后复发的32例活组织标本中P—gP的表达。结果：60例初发膀胱癌组织中P—gp阳性率30．5％，复发的32例中P—gp阳性率为62．5％，膀胱癌术后膀胱灌注化疗失败者的P—gP阳性率明显高于初发膀胱癌。结论：P-糖蛋白介导的多药耐药是膀胱腔内灌注化疗失败、肿瘤复发的重要原因，但P—gP表达不是引起多药耐药的唯一机制。     

Bcl—2和P16在膀胱癌的表达与预后的关系

目的 探讨ｂｃｌ－２和Ｐ１６基因蛋白膀胱癌的表达及其临床,病理意义与预后的关系,方法 采用免疫组化技术ＳＡＢ法对５１例膀胱癌组织和５例正常膀胱粘膜行原癌基因ｂｃｌ－２和抑癌基因Ｐ１６表达的检测。结果：ｂｃｌ－２在膀胱癌的阳性表达率为８２．４％（４２／５１）,在预后中生存组和死亡组之间比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５）,Ｐ１６在膀胱癌的阳性表达率为５１．０％（２６／５１）,５例正常膀胱粘膜均阳性,两者     

实体瘤多药耐药性与P-gp和p53表达的关系

目的探讨４种常见实体瘤多药耐药性与Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及ｐ５３表达的关系。②方法采用ＭＴＴ比色法检测胃癌、大肠癌、乳癌、肺癌对１４种化疗药的耐药性；用免疫组化方法检测同一标本Ｐ－ｇｐ，ｐ５３的表达。③结果１０９例标本中多药耐药者５１例，疏水性药物耐药者５９例。各肿瘤Ｐ－ｇｐ阳性表达者共４０例，ｐ５３阳性表达者共６３例。乳癌疏水性耐药组Ｐ－ｇｐ表达率为５７．１％，对照组表达率为９．０％；大肠癌多药物耐药组ｐ５３表达率为１００％，敏感组表达率为５０％．④结论Ｐ－ｇｐ阳性表达可反映乳癌的疏水性耐药，ｐ５３阳性表达是大肠癌多药耐药的标志之一。     

实体瘤多药耐药性P—gp和p53表达的关系

目的 探讨４种常见实体瘤多药耐药性与Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及ｐ５３表达的关系。方法 采用ＭＴＴ比色法检测胃癌、大肠癌、乳癌、肺癌以１４种化疗药的耐药性；用免疫组化方法检测同一标本Ｐ－ｇｐ，ｐ５３的表达。结果 １０９例标本中多药耐药者５１例，疏水性药物耐药者５９例。各肿瘤Ｐ－ｇｐ阳性表达者４０例，ｐ５３阳性表达者共６３例。乳癌疏水性耐药组Ｐ－ｇｐ表达率为５７．１％，对照组表达率为９．０％；大肠癌多药     

卵巢癌中P—糖蛋白的表达与预后的关系研究

目的：探讨卵巢癌多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的表达与上皮性卵巢癌患者预后的关系。方法：用免疫组织化学方法（ＳＰ法）对用福尔马林固定、石蜡包埋的３０例正常卵巢组织及７４例卵巢癌组织进行了Ｐ－ｇｐ检测。结果：３０例正常卵巢组织中,Ｐ－ｇｐ无１例阳性,而卵巢癌组织中Ｐ－ｇｐ阳性率为１８．９％（１４／７４）。对６２例卵巢癌患者随访资料进行Ｋａｐｌａｎ－ｍｅｉｅｒ曲线分析,发现Ｐ－ｇｐ阳性组的存活     

膀胱癌组织中P—GP170蛋白表达与化疗失败关系的研究

目的：探讨膀胱癌术后膀胱腔内化疗失败原因，方法：用免疫组织化学方法对膀胱癌手术切除的膀胱癌组织中MDR1基因基因产物P－GP170糖蛋白含量进行检测。结果：初发膀胱癌组织中P－GP170的阳性表达率明显低于复发膀胱癌组织，并且膀胱癌病理分级高者P－GP170阳性表达率明显高于病理分级低者，结论：膀胱癌MDR1基因产物P－GP170的测定有助于术后化疗方案的制定及判断预后，膀胱组织中P－GP170的表达可能揭示了膀胱术后腔内化疗失败的机理。     

膀胱癌多重耐药基因表达的研究

目的:从基因水平对膀胱癌多重耐药基因(MDR1)进行研究.方法:用PCR技术对膀胱癌组织及正常膀胱组织进行分析检测.结果:大多数膀胱癌及少数正常膀胱粘膜标本在167 bp处显示MDR1基因异常扩增.结论:随肿瘤分级的增高,MDR1表达率有增高趋势,MDR1基因表达与膀胱癌生物活性密切相关.     

小干扰RNA诱导人卵巢癌细胞MDR1基因沉默的研究

目的 采用RNA干扰技术逆转人卵巢癌OVCAR8/TR细胞中多药耐药基因,探讨该技术能否有效地抑制多药耐药基因MDR1的表达,降低该基因编码的糖蛋白P-gp的水平.方法 设计合成针对MDR1的小片段RNA(siRNA),将合成的siRNA用脂质体转染具有多药耐药基因MDR1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,用荧光定量RT-PCR检测转染后不同时间点MDR1的mRNA的变化,流式细胞仪定量测定转染后不同时间点P-gp表达的情况.结果 MDR1的siRNA转染细胞48 h基因的抑制达最高,转染的第5 d回到正常水平.阴性对照组mRNA的量与未转染组的mRNA的量差异无统计学意义.P-gp在转染后的72 h其抑制最强,至第5 d时恢复接近正常水平,阴性对照组蛋白表达与未转染组的蛋白表达差异无统计学意义.结论 siRNA能够有效地抑制多药耐药基因MDR1的mRNA和P-gp的表达,为逆转卵巢癌的多药耐药带来了新的希望.     

P糖蛋白在乳腺癌原发性耐药过程中的表达

目的:研究乳腺癌原发性耐药过程中P糖蛋白(Pglycoprotein,P-gp)的表达特征,初步探讨乳腺癌原发性耐药的发生机制.方法:采用免疫组织化学及逆转录多聚酶链反应技术,对25例接受术前新辅助化疗的乳腺癌患者、15例未接受术前化疗的乳腺癌患者、10例乳腺腺病患者组织标本内P-gp和MDR1 mRNA的表达情况进行检测.结果:P-gp表达阳性率在乳腺癌术前化疗组患者和未化疗组患者中分别为84.0%(21/25)和46.7%(7/15),对照组未见P-gp表达;MDR1表达阳性率在三组则分别为84.0%(21/25)、53.3%(8/15)和10%(1/10),组间差异均显著(P＜0.01).结论:部分乳腺癌细胞在恶性变的过程中同时伴有对化疗药物耐受能力的增加,肿瘤细胞内极低水平的MDR1 mRNA表达即可导致多药耐药,MDR1/P-gp与乳腺癌的内源性耐药相关.     

原发性肾细胞癌中HSP70与MDR1/P-gp的表达及其与预后的关系

目的 :研究原发性肾细胞癌组织中HSP70 和多药耐药基因 1(MDR-1/P gp)的表达情况并分析其与预后的关系。方法 :应用免疫组化SP法检测HSP70 和MDR1/P gp的表达情况。结果 :5例正常肾组织中均可见到HSP70和MDR1/P gp的表达。 6 0例原发性肾细胞癌中HSP70 和MDR1/P gp的阳性率分别为 5 5 %和 71.6 7% ,二者的表达与组织学类型、临床分期无关 ;与分级呈负相关 ,即分级越高 ,表达越低 ;与预后呈正相关 ,阳性表达预后好于阴性表达者 ;HSP70 和MDR1/P gp之间存在相关性。结论 :HSP70 和MDR1/P gp在肾细胞癌中高表达 ,二者可作为判断预后的指标。     

MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响

 [目的]探讨MDR1 siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的影响。[方法]设计合成两种针对MDR1 mRNA的siRNA双链分子（#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA）,并转染入COLO 320DM和HT-29结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp表达的影响。并分别与5-FU、阿霉素和长春新碱等抗肿瘤药联用,观察结肠癌细胞活力的变化。用阿霉素处理后,观察转染MDR1 siRNA结肠癌细胞的细胞内阿霉素累积浓度的变化。RT-PCR检测细胞MDR1 mRNA的表达,免疫印迹法检测细胞P-gp的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内阿霉素累积浓度。[结果]#4123 MDR1 siRNA和#4029 MDR1 siRNA均可抑制COLO 320DM结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达,其最低有效浓度分别为5nmol/L和25nmol/L。同时MDR1 mRNA和P-gp表达的抑制伴随着抗肿瘤药（5-FU、阿霉素和长春新碱）对COLO 320DM结肠癌细胞毒性的增强和细胞内阿霉素累积浓度的增加。而在对照HT-29结肠癌细胞却观察不到此效应。[结论]MDR1 siRNAs能特异逆转结肠癌细胞的多药耐药性,为MDR1/P-gp依赖的多药耐药性结肠癌的治疗提供了一条新的途径。     

粉防己碱逆转P-gp介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究

目的　观察粉防己碱 (Tetrandrine)对多药耐受糖蛋白 (P - glycoprotein ,P - gp)介导的膀胱癌细胞多药耐药 (MDR)的逆转。方法　MTT法观察MDR的逆转 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 - 12 3浓度。结果　粉防己碱组与对照组对敏感株的细胞毒作用无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;耐药株对粉防己碱组的敏感性是对照组的 4 .6倍 (P <0 .0 5 ) ,粉防己碱明显抑制了细胞内Rh - 12 3的外排 (P <0 .0 5 )。结论　粉防己碱可有效逆转P - gp介导的MDR。     

三种细胞因子对恶性肿瘤多药耐受影响的实验研究

通过体外转染多药耐受相关蛋白(MRP)基因和化疗药物VP-16、5-Fu诱导的方法分别建立了膀胱癌多药耐受(MDR)细胞亚系EJ／MRP和鼻咽癌MDR亚系LCE／VP、LCE／Fu,并观察了细胞因子rhG-CSF、IFN-αlb和IL2对这些亚系MDR水平的影响。结果发现IFNalb和IL-2可以一定程度地逆转3种MDR细胞对VP-16耐受程度,逆转倍数在3．4与5．2之间,可以增加柔红霉素Dau在MDR细胞内的聚集程度;相反地,rhG-CSF增强了MDR细胞对VP-16的耐受程度和降低了Dau的胞内聚集程度。以上揭示IFNalb、IL-2对P-gp或(和)MRP介导的MDR具有逆转作用,rhG-CSF则增强了P-gp或(和)MRP介导的MDR程度,这为MDR研究和临床癌症治疗提供了一定参考。     

Reversal of MDR1 gene-dependent multidrug resistance using short hairpin RNA expression vectors

Background RNA interference using short hairpin RNA (shRNA) can mediate sequence-specific inhibition of gene expression in mammalian cells. A vector-based approach for synthesizing shRNA has been developed recently. Overexpression of P-glycoprotein (P-gp), the MDR1 gene product, confers multidrug resistance (MDR) to cancer cells. In this study, we reversed MDR using shRNA expression vectors in a multidrug-resistant human breast cancer cell line (MCF-7/AdrR). Methods The two shRNA expression vectors were constructed and introduced into MCF-7/AdrR cells. Expression of MDR1 mRNA was assessed by RT-PCR, and P-gp expression was determined by Western Blot and immunocytochemistry. Apoptosis and sensitization of the breast cancer cells to doxorubicin were quantified by flow cytometry and methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assays, respectively. Cellular daunorubicin accumulation was assayed by laser confocal scanning microscopy (LCSM). Statistical significance of differences in mean values was evaluated by Student’s t tests. P&lt;0.05 was considered statistically significant.Results In MCF-7/AdrA cells transfected with MDR1-A and MDR1-B shRNA expression vectors, RT-PCR showed that MDR1 mRNA expression was reduced by 40.9% (P&lt;0.05), 30.1% (P&lt;0.01) (transient transfection) and 37.6 % (P&lt;0.05), 28.0% (P&lt;0.01) (stable transfection), respectively. Western Blot and immunocytochemistry showed that P-gp expression was significantly and specifically inhibited. Resistance against doxorubicin was decreased from 162-fold to 109-fold (P&lt;0.05), 54-fold (P&lt;0.01) (transient transfection) and to 108-fold (P&lt;0.05), 50-fold (P&lt;0.01) (stable transfection). Furthermore, shRNA vectors significantly enhanced the cellular daunorubicin accumulation. The combination of shRNA vectors and doxorubicin significantly induced apoptosis in MCF-7/AdrR cells. Conclusions shRNA expression vectors effectively reduce MDR expression in a sustained fashion and can restore the sensitivity of drug-resistant cancer cells to conventional chemotherapeutic agents.     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

ATP-TCA药敏试验测定的胃癌耐药性与MDR1 mRNA和P-gp表达的关系

目的评价三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验（ATP—TCA）测定的原发性胃癌耐药性与耐药基因以及蛋白表达的关系。方法选择2009—2011年间收治的胃癌患者52例，采用ATP-TCA检测胃癌患者对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶＋阿霉素＋丝裂霉素、奥沙利铂＋20倍5-氟尿嘧啶5种方案的体外药物敏感性，采用逆转录PCR以及荧光定量PCR检测胃癌患者组织中耐药基因MDR1的表达，采用流式细胞仪检测胃癌患者血中P-糖蛋白（P—gp）表达，采用X^2检验分析ATP—TCA检测结果与MDR1和P—gp表达之间的相关性。结果①5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶＋阿霉素＋丝裂霉素、奥沙利铂＋20倍5一氟尿嘧啶5种方案与临床疗效明显相关（P〈0．01），其中奥沙利铂＋20倍5一氟尿嘧啶方案的ATP—TCA检测结果与临床疗效的符合率最高，达84．6％（44／52）。②ATP—TCA检测化疗敏感和耐药患者MDR1mRNA的表达水平分别为（0．673±0．143）和（1．436±0．594），两者比较差异有统计学意义（P=0．008）。⑧用流式细胞仪检测52例胃癌患者P—gP表达量，其中阳性20例，阳性率达38．4％，P—gP的表达与ATP—TCA药敏试验有明显相关（P〈0．01）。结论ATP—TCA检测耐药结果与MDR1mRNA和P—gp表达之间存在明显的相关性，临床检测MDR1mRNA和P—gp表达可有效预测临床化疗敏感性，指导胃癌的个体化治疗。