抗人胰腺癌细胞单克隆抗体SZ-121的放射免疫显像实验研究

目的研究^99mTc标记抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121在荷人胰腺癌裸鼠体内的显像及生物分布,探讨其用于胰腺癌早期诊断的可行性。方法采用皮下种植法建立荷人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,以2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）修饰SZ-121,^99mTc-葡庚糖酸钠（GH）配体交换法标记SZ-121,经裸鼠尾静脉注入^99mTc-SZ-121后1、4h对裸鼠进行γ显像,于24h测定荷瘤小鼠体内组织的放射性分布。结果γ显像及生物分布显示,^99mTc-SZ-121被静脉注入荷瘤鼠后1h,肿瘤即清晰显影,随时间延长趋于增浓,且瘤组织与非瘤组织的放射性比值（T/NT）也逐渐增高,肿瘤每克组织百分注射剂量率（%IDPg）均高于注射^99mTc-IgG的对照组（P〈0.05）。结论^99mTc-SZ-121具有活体内定位导向能力,显像时间短,可能是一种有前途的胰腺癌显像剂。     

大肠癌放射免疫显像的研究近况

<正>自从1978年Goldenberg报道抗CEA抗体临床肿瘤定位至今,大肠癌单克隆抗体(McAb)的放射免疫显像(Rdioimmunoimaging RII)已发展20年,期间在抗体的制备、放射性核素的选择和标记、显像技术及临床应用等方面取得了较大进展。本文就该技术的研究近况及存在的一些问题做简要综述。     

胃癌单克隆抗体在裸鼠移植瘤中的免疫定位和显像

本文采用Ｉｏｄｏｇｅｎ法将鼠抗人胃癌单克隆抗体ＲＳＦ９（ＩｇＭ）予以１３１Ｉ标记，研究ＲＳＦ９在荷人胃癌裸鼠中的定位和显像能力。结果表明，ＲＳＦ９在体内能特异性地与肿瘤组织结合，Ｔ／ＮＴ比值随时间延长逐渐升高，９６ｈＴ／ＮＴ比值均大于２．５，瘤／血比值为２．６９，肿瘤定位指数达５．１８，ＳＰＥＣＴ得到清晰的肿瘤图像。ＲＳＦ９具有良好的体内导向定位能力。ＩｇＭ型单抗也可用于肿瘤显像。     

186铼标记单克隆抗体在荷人肺腺癌裸鼠体内的放射免疫显像研究

目的：建立^186铼（^186Re)标记单克隆抗体(McAb）方法，研究标记物的生物学特性，方法：用氯化亚硒（SnCl2)还原的^186Re与经抗坏血酸还原的McAb(Sc3A)直接标记制备成^186Re－Sc3A示踪剂，并在荷人肺腺癌裸鼠体内进行放射免疫显像和生物学分布研究。结果：此方法标记率＞96％，与250倍摩尔浓度的二乙烯三胺五乙酸和人血清白蛋白在37℃下共有24h，未见^186Re－Sc3A明显解离。用过量肿瘤细胞抗原结合法测定，标记物的抗体活性＞90％，经荷瘤鼠尾静脉注射示踪剂后24－48h均可获得肿瘤部位的清晰显像，以48h为佳，生物学分布在48h时示踪剂在肿瘤内呈性浓聚。结论：^186Re－Sc3A示踪剂使临床肿瘤的放射免疫诊断和放射免疫治疗成为可能。     

预定位技术肺癌放射免疫显像研究的综述

肺癌是常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率近年来明显上升，特别在一些大、中城市，肺癌的发病率和死亡率成倍增长［１］。临床上急需解决的问题是孤立性病的良恶性鉴别、早期诊断及寻找肺癌的转移灶。ＣＴ对淋巴结转移的检出灵敏度为２５～７１％，ＭＲＩ对原发性肺癌的检出灵敏度为５２～８０％。早期和明确的诊断是临床治疗和预后的关键。虽然ＰＥＴ显像在这方面具有特别的优越性，但其设备要求高，检查费用昂贵，很难推广普及成为临床常规检查项目。目前在应用放射性单克隆抗体对肺癌诊断和治疗研究方面国内外已经取得了一些令人鼓舞的成…     

131 I-抗CEA单克隆抗体卵巢癌病人放射免疫显像体内动力学研究

目的：探讨^131I-抗CEA McAb(C50)卵巢癌病人放射免疫显像中血药动力学的特性。方法：43例卵巢癌病人放射免疫显像前后分别测定血清中CEA含量，标记抗体循环血液中分布，T／NT比值，标记抗体放射性半排时间及病人人抗鼠抗体的产生。结果：标记抗体主要分布于血浆蛋白中，^131I-C50循环血液中的半清时间平均为23h，尿中放射性半清时间为24h，卵巢癌病人在接受标记抗体后2－3周即可产生人抗鼠抗体，在体内至少维持9月以上。结论：标记抗体血药动力学的研究可指导放射免疫显像的应用，抗鼠抗体的产生影响了二次显像效果，限制了鼠源性单抗的反复应用。     

人绒癌裸鼠移植瘤模型的建立及放射免疫显像

将人绒癌新鲜组织碎声接种于Ｂａｌｌｂ／ｃ裸鼠皮下，成功地建立了移植瘤模型，并已传代１６－１８代，荷瘤裸鼠腹水或瘤内血ｈＣＧ达４００－２００００ｍＩＵ／ｍｌ经上。利用＾１３１Ｉ标记的小鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体（抗ｃＣＧＭｃＡｂ）对荷瘤裸鼠进行放射免疫显像，结果标记抗体能够特异性地聚集于肿瘤部位，使肿瘤，最佳显像为注入记抗体后７２－９６ｈ。     

结直肠癌单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的 制备结直肠癌特异性单克隆抗体,为深入研究相关肿瘤的发病机制提供新的实验工具.方法 用人结直肠癌患者的手术标本制备细胞悬液免疫小鼠,按常规方法行细胞融合,经免疫组织化学染色筛选阳性克隆,并对其抗体的特性和生物学性状等进行分析.结果 共获得32个阳性克隆,其中针对结直肠癌较特异性的阳性克隆有2个(克隆株2-3,15-8).免疫组化染色显示,克隆株2-3培养上清和腹水与结直肠癌组织的冰冻切片反应的阳性率可达100%.癌旁正常组织的阳性率较低,且染色强度远弱于癌组织,当抗体稀释度超过1∶6 000时反应阴性,而肿瘤组织仍呈强阳性.从结肠癌的分化程度来看,分化较差的肿瘤组织,包括中、低分化的癌组织染色较强.另外,免疫染色阳性产物主要位于肿瘤的腺腔和正常黏膜表面,提示该抗体所识别的抗原可能为结直肠癌细胞和黏膜上皮分泌的黏蛋白等抗原.结论 本研究成功地制备了两株针对结直肠癌的较特异的单克隆抗体,可作为实验研究相关蛋白在结直肠癌及其他肿瘤发病中的作用机制的方法.     

卵巢癌荷瘤裸鼠~(99m)TcCOC183B_2放射免疫显像结果分析

目的 :研究99mTc标记抗卵巢上皮癌单克隆抗体COC183B2 在荷瘤裸鼠体内的分布 ,并进行放射免疫显像 ,为临床应用提供依据。方法 :COC183B2 用预亚锡法标记后 ,经腹腔注入荷瘤裸鼠体内 ,在 2 4小时进行放射免疫显像 ,并观察裸鼠体内的生物学分布。结果 :与对照组相比 ,标记抗体在肿瘤组织中出现了特异性浓聚。获得清晰的显像 ,T/NT比值在 0 99～ 5 99之间 ,T/B比值为 1 19。结论 :说明COC183B2 可特异地与卵巢癌结合 ,具有导向卵巢癌的作用     

Clinical application of radioimmunoimaging with 99m Tc-BDI-1 in the diagnosis of bladder cancer

Objective To evaluate the clinical application of radioimmunoimaging (RII) with [99m]Tc-BDI-1 in the diagnosis of bladder cancer. Methods 32 patients with bladder cancer and 5 with normal bladder were studied. RII was performed 1 hour after intravesical administration of 111-222 MBq [99m]Tc-BDI-1 followed by washing out and perfusing bladder with 50 ml PBS. The radioactivity ratio of target over background (C(T)/C(B)) was calculated.Results The radiochemical purity of (99m) Tc-BDI-1 was greater than 95%. RII showed radioactive accumulation area for most of bladder cancers but n o radio-active concentration for normal bladder. The sensitivity and specificity were 91.7% and 81.8% respectively with the assignment of the positive criterion of C(T)/C(B) ≥1.40. There was no statistical difference in sensitivity between tumors with diameters ≥1 cm (1.0-4.2 cm) and &lt;1 cm (0.2-0.8 cm). C(T)/C(B)was related to the pathological grade (G(1)/G(3) of the tumor. Conclusions RII by intravesical administration provides a new noninvasive method for the diagnosis of bladder cancer in morphology and in nature of tumor with high sensitivity and specificity. It may be used for the early diagnosis of bladder cancer, follow-up after surgery, and diagnosis of in situ tumor.     

^131I标记抗CEA、TPS及混合单抗在荷人乳腺癌裸鼠体内放射免疫显像及生物学分布

目的 研究^131I标记抗CEA、TPS单抗及混合单抗（CEA＋TPS）在荷人乳腺癌裸鼠体内的分布，为放免显像（RII）及临床应用提供依据。方法 荷瘤鼠分为3组，每组尾静脉分别注入^131I标记的抗CEA，TPS及混合单抗3．7MSq／0．1ml，于注射后2，4、48、96、120h行SPELT，于48、96、120h分批处死，测定肿瘤和血、肝、肺等重要脏器的单位放射性比值（T／NT）。结果 标记单抗注射后24～120h内，肿瘤部位出现放射性浓聚，T／NT比值120h最高达21．31。SPECT阳性率分别为50％、58％、91％。结论 混合单抗组在T/NT比值、SPECT阳性率方面明显优于对照组。单抗的混合使用有望成为RⅡ的首选方法。     

抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析

目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性?方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗?通过酶联免疫法?免疫荧光?免疫沉淀和质谱分析?流式细胞术?免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性?结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用?结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值?     

131I-抗-VEGF McAb荷瘤膀胱癌裸鼠放射免疫显像的实验研究

目的探讨131I-sc-7269放射免疫显像诊断人膀胱癌的可行性.方法 Iodogen法标记抗-VEGF McAb(sc-7269);SPECT仪行荷人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤模型131I-sc-7269放射免疫显像.结果 131I-sc-7269荷瘤裸鼠放射免疫显像(RII)移植瘤最佳显像时间为注入标记抗体后96h.结论实验结果提示,131I-sc-7269可以放射免疫显像诊断实验性膀胱癌,为应用131I-sc-7269显像诊断人膀胱癌的临床研究提供了实验依据.     

人源性噬菌体抗体库中抗CEA单抗的筛选与初步鉴定

目的：探讨利用噬菌体抗体库技术制备抗CEA的人源性单抗的可行性。方法：以纯化的CEA为抗原，应用噬菌体表面呈现技术，通过3轮亲和 富集及2轮淋巴细胞吸附实验，从已构建好的人源性噬菌体抗体库中筛选出抗CEA的人源性单抗，随机挑出10株单克隆在大肠杆菌中进行表达，并采用ELISA 、SDS－PAGE及基因测序进行初步鉴定。结果：ELISA显示有9株单抗具有与CEA特异性结合的能力，挑选其中2株具有较高亲和力的单克隆，经12％SDS－PAGE蛋白电泳，在分子量约为25kd处可见一新增蛋白带，与基因编码蛋白的理论计算相符合，基因测序结果与Gene Bank等相比对具有较高的序列同源性。结论：噬菌体抗体库技术是研制人源性单抗的有效途径。     

亲和素放大促排在抗CEA单抗二步法预定位放免显像中的实验研究

目的提高抗ＣＥＡ单抗二步法预定位放免显像的诊断效果。方法 荷人结肠癌裸鼠经尾静脉注射生物素化抗 ＣＥＡ单抗 １００μｇ,４８ ｈ后腹腔注射亲和素 ８０μｇ,０．５ ｈ再经腹腔注射１５３Ｓｍ标记的 ＳＡ ３．７ ＭＢｑ／１５μｇ（放大促排组）。以 二步法（生物素化ＣＥＡ单抗－１５３Ｓｍ标记链霉亲和素）和１５３Ｓｍ标记的ＣＥＡ单抗作为对照组。在注射放射性标记物后４ 和 ２４ ｈ进行体外 γ ＣＴ显像和体内标记物分布测定。结果亲和素放大促排组 ４ ｈ即见肿瘤部位浓聚放射性,而对照组 无明显显影。亲和素放大促排组瘤／血放射性比值在注药后 ４ ｈ和 ２４ ｈ分别为 １．５５±０．０５８和 ４．６２±１．０７６,高于对照组 （二步法组和直接标记法组分别为１．００４±０．２２１和２．０２８±０．３６７及０．２６０±０．０８４和０．８４７±０．３６８）。结论亲和素放大促排 能迅速降低血本底,提高靶／非靶（Ｔ／ＮＴ）放射性比值,缩短显像时间,改善显像质量。     

以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究

目的在Friguent方法基础上建立更加稳定可靠的基于抗原/抗体竞争结合原理的单抗亲和力常数(Kd)检测方法。方法以抗体对抗原进行竞争结合,通过双抗体夹心法检测在一定抗体浓度竞争下抗原的结合率计算Kd值。结果用改良方法在两次不同条件下检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:2.61×10-12mol/L和2.39×10-12mol/L,而使用Friguent方法在两次不同条件检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:5.57×10-10mol/L和1.41×10-10mol/L。结论相对于Friguent方法,本研究计算出的Kd值更能反映抗原/抗体结合的真实情况,而且在不同实验条件下检测结果重现性强。     

人睾丸特异表达基因TDRG1 单克隆抗体的制备及鉴定

目的：构建原核质粒表达TDRG1重组蛋白,制备其单克隆抗体（mAb）并鉴定其生物学特性。方法：用逆转录聚合酶链反应法从成人睾丸组织中扩增TDRG1编码序列,将其克隆到pET21原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）内进行诱导表达TDRG1重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体（mAb）。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌mAb的效价和类型,Western 印迹和免疫组织化学染色鉴定mAb的特异性。 结果：成功构建了pET21/TDRG1原核表达质粒并获得纯度较高的重组蛋白。筛选出2株能稳定分泌抗TDRG1的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶1.6×106,免疫球蛋白类型均为IgG1类。Western 印迹和免疫组织化学染色显示该mAb能特异结合成人睾丸组织中的TDRG1蛋白。结论：所获得的重组TDRG1蛋白纯度高,免疫抗原性强,并成功制备了抗TDRG1的单克隆抗体。