原代培养角膜缘干细胞与ΔNp63蛋白表达的年龄相关性研究

目的建立兔角膜缘干细胞（LSCs）原代培养体系,了解年龄的增长对兔LSCs的ΔNp63蛋白表达的影响。方法选取3月龄、1.5年龄及3年龄新西兰白兔各10只,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液对LSCs的细胞悬液进行体外原代培养。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术和间接免疫荧光法分别检测培养细胞中ΔNp63蛋白的表达量。结果接种3d后大部分细胞贴壁,6d左右形成良好的细胞单层,细胞呈圆形、椭圆形或多边形,类似角膜上皮细胞。年龄越大,ΔNp63的表达量越低。不同年龄组之间ΔNp63表达量的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液能作为LSCs培养的基础液;ΔNp63蛋白的表达具有明显的年龄相关性,随年龄的增长ΔNp63表达量的下调可能是LSCs老化的分子机制之一。     

人角膜上皮细胞的体外培养方法探讨

目的:探寻角膜上皮移植细胞的体外培养方法。方法:用改良的细胞悬液培养法与组织块培养法,描绘两种方法获取细胞的生长曲线,并计算细胞倍增时间;用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入与液体闪烁技术观察细胞DNA合成能力。结果:改良的细胞悬液法与组织块培养法培养的细胞平均倍增时间分别为54.15± 4.28小时和67.68±1.96小时(P<0.01);应用前者培养的细胞DNA合成也明显活跃(P<0.01)。结论:从角膜缘取材,应用改良的细胞悬液培养法收集的角膜缘上皮细胞含有角膜上皮干细胞,具有更强的分裂增殖能力,更适于体外培养的角膜上皮细胞移植之用。也证实了角膜上皮干细胞存在于角膜缘基底层的观点。眼科学报 1997;13:67～69。     

组织块联合胰酶消化法培养兔角膜缘干细胞的初步探索

目的：建立一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养方法。

方法：获取兔角膜缘组织,采用组织块联合胰蛋白酶消化法进行兔角膜缘干细胞体外培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况,HE染色观察细胞形态和结构特点,并运用免疫组织化学技术进行细胞鉴定。

结果：采用组织块联合胰蛋白酶消化法可以简便、快速地培养出兔角膜缘干细胞,显微镜下动态观察细胞生长良好,有较高的增殖能力; HE染色证实细胞形态和结构正常; AE5及P63免疫组织化学鉴定呈阳性。

结论：采用组织块联合胰蛋白酶消化共同培养的方法,建立了一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养模式。     

胎儿角膜上皮细胞分离方法的研究

目的:为了利用流产儿角膜组织体外培养获取角膜上皮细胞,做为构建组织工程化角膜上皮的种子细胞。方法:收集30例(60个角膜)人流产胎儿,分别采用酶消化法、酶消化法结合组织块法和组织块法3种方法分离并培养人胎儿角膜上皮细胞。结果:用Dispase和胰蛋白酶冷消化角膜上皮后,在获取细胞总数、细胞活力和原代培养成功率上没有明显差异,但用Dispase消化后原代细胞容易成活,传代可得到纯化的上皮细胞;酶消化法结合组织块法培养时加入角膜缘组织块可以缩短细胞形成单层的时间,增加传代后细胞的活力;组织块法培养时,在胎儿全角膜组织培养时可得到角膜上皮细胞,角膜组织切割后培养不能获得纯化的角膜上皮细胞。结论:体外构建组织工程化角膜上皮时,种子细胞的获取可以采用流产儿角膜组织为材料分离并培养角膜上皮细胞。     

同一猴、兔眼角膜细胞成分原代培养的实验研究

目的建立从同一角膜片上分离培养角膜上皮、基质和内皮细胞的方法,为研究角膜细胞间的相互作用机制奠定基础。方法采用消化法分离培养猴眼角膜内皮细胞、上皮细胞和兔眼角膜上皮细胞．组织块培养法培养基质成纤维细胞和兔角膜内皮细胞。细胞接种于12孔培养板,并于培养不同时间行Wright染色检查细胞生长情况。结果采用消化法和组织块培养法能成功地培养猴、兔角膜上皮、基质和内皮细胞。猴、兔角膜内皮细胞培养1wk后,均能形成内皮细胞单层,细胞类似天然的六角形态．且以猴内皮细胞明显;猴角膜上皮细胞培养3～4d生长旺盛、但难以形成细胞单层,兔上皮细胞生长旺盛,1wk后已达融合状态,细胞呈膜状伸出板层伪足;猴、兔基质成纤维细胞易培养,1wk后已融合成单层细胞,细胞排列整齐,类似纤维走行样外观。结论从同一角膜材料中能分别培养出角膜3种细胞成份,消化法和组织块培养法相结合既能节省材料,又简单易行。     

培养兔自体角膜缘干细胞移植的实验研究

目的 观察以羊膜为载体的兔角膜缘于细胞膜片移植治疗兔角膜缘于细胞缺损的效果。方法 制造兔角膜缘干细胞缺损的动物模型,以右眼为实验眼,从兔左眼取角膜缘组织,将兔角膜缘干细胞消化下来,接种于铺有羊膜的无菌六孔培养板中,待细胞形成多层角膜上皮细胞后,对兔角膜缘干细胞缺损动物模型行角膜缘干细胞羊膜移植术,并对治疗后的角膜进行裂隙灯及病理学检查。结果 临床和组织病理学染色证实：体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上继续增生、分化为多层角膜上皮细胞;角膜缘干细胞移植术后兔角膜缘轻度充血、角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少或消失。结论 应用角膜缘干细胞羊膜移植术可恢复其角膜上皮结构的完整性,减少角膜新生血管的形成,维持角膜缘的细胞屏障功能。     

组织块培养法及酶消化法培养人角膜缘上皮细胞

角膜上皮的完整和无血管状态对维持角膜的生理功能和透明性十分莆要。角膜上皮的完整性有赖于角膜缘干细胞（limbalstemcells,LSCs）的增生和分化,多种原因可造成LSCs的缺乏或功能障碍,使角膜丧失完整性和透明性。LSCs功能障碍有许多新疗法,其中角膜缘上皮细胞体外培养后移植成为研究热点。目前多数学者采用组织块法进行角膜缘上皮细胞的培养．培养体系巾干细胞能否从在组织块中迁移出来尚有争议,而酶消化法越来越受重视。     

不同体外方法培养兔角膜缘上皮细胞作用的研究

自从1986年Schermer等发现角膜缘干细胞位于角膜缘基底Vogt栅栏内后，对角膜缘干细胞缺失和角膜上皮病变治疗有了许多新的疗法，其中以角膜缘上皮细胞体外培养法治疗上述疾病比较有效。目前，多数学者采用组织块法进行角膜缘上皮细胞体外培养，但在培养系中干细胞能否从组织块中迁移出来尚有争议。另外，最近角膜缘上皮单细胞悬浮液超低温冷藏、复苏以及体外培养技术越来越受到人们的关注，成为角膜缘干细胞研究中的一项重要的课题。此种培养方法既可以将角膜缘干细胞和其他角膜上皮细胞长期保存在超低温状态下，减少细胞传代培养次数，[第一段]     

猴,兔角膜细胞成分原代培养的研究

目的 建立从同一角膜上上分离培养角膜上皮,基质和内皮细胞的方法。方法 采用消化法培养猴角膜内皮细胞,上皮细胞和兔角膜上皮细胞,组织块培养法培养角膜基质细胞和兔角膜内皮细胞,结果 猴,兔角膜内皮细胞培养１周后,均能形成细胞单层,猴角膜上皮细胞培养３－４天生长旺盛,但难以形成细胞单层,兔上皮细胞生长旺盛,１周后已达融合状态,细胞呈膜状伸出板层伪足,猴,兔基质细胞易培养,１周后融合成单层细胞,结论 从同     

异体角膜缘上皮细胞培养后移植的实验研究

目的观察含培养的角膜缘上皮细胞的羊膜片移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上的效果。方法把羊膜为载体组织块培养的角膜缘上皮细胞移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上,术后观察角膜混浊度、角膜新生血管、角膜上皮等情况,定期兔进行病理组织学检查。结果角膜缘上皮细胞在羊膜上培养16d形成3～4层,用含有培养的异体角膜上皮细胞的羊膜片移植的12只兔眼,术后第5天,损伤的角膜表面全部上皮化,第16天开始,12只兔眼逐渐出现排斥反应。结论含培养的角膜缘上皮细胞羊膜片异体移植术后早期角膜全部上皮化,晚期则出现排斥反应。     

Treatment of retinal detachment of the course of retinopathy of prematurity

Cryo- and laser therapy of stage 3 have reduced, but not eliminated the occurrence of retinal detachment in stages 4a, 4b and 5 of ROP. In this disease the treatment of these stages is still the greatest challenge to the ophthalmologist. Therefore, the aim of this paper is to present our up-to-date possibilities of treatment of different kinds of retinal detachments in ROP, including segmental scleral buckling, encircling scleral buckling, scleral resection, vitrectomy and its modifications in ROP. Guidelines of surgery of retinal detachment in active stage 4 and 5 of retinopathy of prematurity have been described.     

Analysis of some of the possible neonatal risk factors of development of retinopathy of prematurity

PURPOSE: The aim of the study was to evaluate some of the possible risk factors for retinopathy of prematurity (ROP) treated with laser photocoagulation or cryocoagulation. MATERIAL AND METHODS: The study comprised 71 preterm infants with ROP needing treatment and 118 prematures without ROP or with ROP requiring no treatment, as a control group. All infants were born with gestational age < or = 32 weeks and birth weight < or = 1500g. The perinatal variables, including some of clinical data, the length of mechanical ventilation as well as continous positive airway pressure (CPAP), duration of total parenteral nutrition and some of laboratory data were analyzed, to evaluate their correlation with the development of ROP. RESULTS: Gestational age before 28 weeks (OR = 5.11), episodes of convulsiones (OR = 2.15), mechanical ventilation for more than 20 days (OR = 5.86) and > 30 days (OR = 7.47), CPAP for more than 5 days (OR = 4.15) and > 10 days (OR = 2.84), total parenteral nutrition for more than 10 days (OR = 7.84) and > 20 days (OR = 9.02) and elevated peak of alanine aminotransferase (AIAT) levels (OR = 3.17) were significant risk factors for ROP requiring treatment. CONCLUSIONS: The opthalmic examination for retinopathy of prematurity requiring laser photocoagulation or cryocoagulation should be obligatory for prematures born < or = 32 weeks of gestational age, with birth weight < or = 1500 g.The frequency of the consecutive ophthalmic examinations depends on the severity of prematurity and on the presence and intensification of the risk factors for ROP.     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。