家兔棘阿米巴角膜炎动物模型的建立

目的:建立棘阿米巴角膜炎的动物模型。方法:在6 只新西兰家兔角膜基质层内注射地塞米松3 d 后,再注入棘阿米巴原虫悬液。结果:6 只家兔均发生角膜炎。经家兔角膜刮片用10% 氢氧化钾封片镜检、角膜组织原虫培养和病理切片染色检查证实,成功地建立了家兔棘阿米巴角膜炎动物模型。结论:通过角膜基质内注射建立的家兔棘阿米巴角膜炎动物模型,方法简便又易于操作     

棘阿米巴角膜炎的实验诊断

[目的 ]寻找棘阿米巴角膜炎快速诊断和棘阿米巴快速鉴定的方法。 [方法 ]10 %氢氧化钾 (KOH)湿封片镜检、棘阿米巴培养、倒置显微镜观察、病理切片H .E .染色和SPA染色检查。 [结果 ]角膜刮片及手术切除的角膜材料 ,经 10 %氢氧化钾湿封片镜检 ,前者检出 7例棘阿米巴角膜炎病例 ,后者确诊 5例 ;手术切除的角膜材料经培养 ,分离出 6株棘阿米巴 ;应用倒置显微镜直接观察 ,检出棘阿米巴的包囊、滋养体和棘刺。 [结论 ]应用 10 %KOH湿封片镜检可对棘阿米巴角膜炎作出快速诊断 ;通过倒置显微镜直接观察也可对棘阿米巴角膜炎在 2 0h内作出诊断 ;倒置显微镜可直接观察和鉴定棘阿米巴 ,方法简便、无污染、快速及实用。     

鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B对H2O2诱导的海马神经元损伤的作用及可能机制

目的探讨鱼腥草提取物去甲头花千金藤二酮B(NB)对H_2O_2诱导的海马神经元细胞损伤的作用及可能机制。方法将对数生长期的HT22海马神经细胞分为正常对照组、H_2O_2处理组、NB干预组(H_2O_2+NB)、单独NB组和阳性药物对照组(H_2O_2+NAC)。其中H_2O_2组为加入终浓度为300μmol/L的H_2O_2与细胞共孵育24 h;H_2O_2+NB组和H_2O_2+NAC组是于H_2O_2处理前2 h分别给予100μmol/L的NB或5 mmol/L的NAC共孵育24 h。为明确磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/血红素氧合酶1(PI3K/Akt/HO-1)途径是否参与了NB的神经保护作用,对细胞给予PI3K抑制剂Ly294002预处理30 min,再加入NB及H_2O_2共孵育24 h。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,生化试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)及细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax,及相关信号通路蛋白p-Akt和HO-1水平。采用SPSS 19.0软件进行统计分析,组间比较采用方差分析或Tukey′s检验。结果 (1)细胞活性。与空白对照组比较,H_2O_2组细胞存活率明显下降,细胞上清LDH含量显著增加,细胞形态出现明显皱缩、空泡变性及细胞减少。给予NB或NAC干预可显著增加细胞活性、减少LDH释放,细胞形态的破坏得到明显改善。(2)氧化损伤指标。与正常对照组比较,H_2O_2组细胞MDA水平显著增加,SOD及GSH活性显著降低;与H_2O_2组比较,加入NB或NAC的细胞MDA漏出量显著降低,SOD、GSH活性显著升高。(3)细胞凋亡情况。流式细胞术结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显增高,加入NB及NAC处理后,与H_2O_2组比较,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,H_2O_2处理组Bcl-2表达显著下降,Bax水平显著升高;与H_2O_2处理组比较,给予NB或阳性药物NAC处理的细胞Bcl-2显著升高,Bax水平显著下降。(4)相关信号通路蛋白表达。Western blotting显示,与正常对照组比较,H_2O_2组p-Akt、HO-1水平升高;与H_2O_2组相比,NB+H_2O_2组p-Akt、HO-1水平显著升高(P0.05)。上述所有指标在正常对照组与NB组细胞间比较差异均无统计学意义(P0.05)。另外,加入Ly294002组的细胞p-AKT及HO-1表达水平均较H_2O_2+NB组显著降低。结论 NB可通过抗氧化、抗凋亡减轻H_2O_2诱导的神经元损伤,发挥神经保护作用,其机制可能是激活PI3K/Akt/HO-1信号通路。     

莱菔硫烷对过氧化氢诱导人脐静脉血内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨莱菔硫烷(Sulforaphane,SFN)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉血内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并进一步研究莱菔硫烷在保护内皮细胞损伤中的机制。方法复苏由中国科学院上海细胞库提供的人脐静脉内皮细胞株,37℃、5%CO2条件下培养细胞至80%以上融合度时,分组进行干预。实验分组:(1)空白对照组(对照组):细胞正常培养2.5 h;(2)过氧化氢组(H_2O_2组):分别给予100、200、400、600、800μmol/L浓度培养细胞2 h,选择400μmol/L为其最佳干预浓度(后续各组如未特殊注明,默认H_2O_2浓度为400μmol/L);(3)莱菔硫烷+过氧化氢组(SFN+H_2O_2组):不同浓度SFN(2.5、5、10μmol/L)预孵育30 min后,加入400μmol/L的H_2O_2继续培养2 h。收集干预后的各组细胞,用MTT法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞内ROS水平,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)测定细胞内转录因子核因子E2(Nrf2)m RNA和血红素加氧酶-1(HO-1) mRNA表达情况。结果与对照组相比,H_2O_2组MTT法测定的细胞吸光光度值(A值)降低(P0.05),并浓度依赖性的使A值下降,SFN+H_2O_2组细胞吸光光度值高于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2组ROS水平高于对照组(P0.05),SFN+H_2O_2组ROS水平低于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平低于对照组(P0.05),SFN+H_2O_2组Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平高于H_2O_2组(P0.05)。结论莱菔硫烷对过氧化氢致HUVEC的氧化损伤有保护作用,其机制可能与莱菔硫烷在转录水平激活Nrf2/HO-1表达有关。     

维生素C对体外培养的H_9C_2心肌细胞系的影响

目的:探讨维生素C对大鼠H_9C_2心肌细胞抗氧化能力与细胞活力的影响。方法:以体外培养的大鼠H_9C_2心肌细胞为研究对象,在培养过程中,分别加入不同浓度的维生素C,观察细胞形态,MTT法检测心肌细胞活力,DCFH-DA荧光探针法测定维生素C对H_2O_2处理的心肌细胞活性氧(ROS)生成的影响,用比色法检测半胱天冬酶(caspase)-3和caspase-9活性。结果:0.05 mg/mL维生素C处理后,H_9C_2心肌细胞形态发生变化,细胞质中颗粒状物质增多,排列紊乱,间隙增宽;0.05 mg/mL维生素C可有效抑制H_2O_2导致的ROS积累;但随着培养基中维生素C浓度的升高,心肌细胞存活率明显降低,且维生素C处理后caspase-3和caspase-9活性明显升高。结论:H_9C_2心肌细胞培养中添加维生素C可产生明显的抗氧化作用,但维生素C对H_9C_2心肌细胞生长具有抑制作用。     

miR-92a对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡以及MAPK-ERK通路的影响

目的探讨下调miR-92a表达对过氧化氢(H_2O_2)诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞分为空白对照组(Blank)、H_2O_2模型组、阴性对照组(NC)、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组。Blank组不经任何特殊处理。NC组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞进行转染,q RT-PCR法验证转染效率。另H_2O_2模型组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor+H_2O_2组细胞经H_2O_2诱导6 h,流式细胞术法检测细胞凋亡率。采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量。Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路蛋白磷酸化情况。结果成功建立miR-92a inhibitor转染细胞模型。经H_2O_2处理6 h后,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组H9C2细胞的凋亡率、ROS产生量、MDA和LDH释放量均低于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组,而细胞培养上清中SOD水平高于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组(P0.05)。Western blot法检测,与H_2O_2模型组相比,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组细胞Bcl-2蛋白表达量上调,Bax、Caspase-3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、p-ERK蛋白表达量降低(P0.05)。H_2O_2对H9C2细胞AKT和ERK蛋白表达量无影响(P0.05)。结论下调miR-92a表达可抑制H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡,其可能的作用机制与降低ROS释放量、调控Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白以及MAPK-ERK信号通路有关。     

Real—TimePCR检测棘阿米巴方法建立及应用

目的采用TaqMan探针法建立检测棘阿米巴18srDNA的实时荧光定量PCR（Real—timePCR）方法,为早期诊断棘阿米巴病提供基因诊断标准方法。方法提取实验室培养的4株土壤中分离的和1株水中分离的不同基因型棘阿米巴DNA,测序后在物种保守区域设计Real—time引物和TaqMan探针,用建立的方法检测动物模型兔眼分泌物、大肠杆菌、人巨细胞病毒、卡式肺孢子虫、疑似棘阿米巴角膜炎160例病人眼分泌物。结果与传统实验室培养病原相比,所建立的qPCR检测棘阿米巴角膜炎方法测定大肠杆菌、人巨细胞病毒和卡式肺孢子虫与该研究的实验室分离棘阿米巴物种没有交叉反应,检测结果均为阴性。而160例疑似病人,用培养法检测出感染棘阿米巴患者为5例,用qPCR方法检测出6例,其中5例为培养法测出患者,qPCR方法检测阳性率（3．75％）略高于普通培养法（3．13％）,但无统计学意义（P〉O．05）。qPCR方法在95％置信区间中灵敏度100％（47．95％～100％）高于普通培养法83．33％（36．10％～97．24％）。结论所建立测定棘阿米巴18srDNA的Real-timePCR基因检测方法具有无创伤性、高效、特异、经济等特点,适用于疑似棘阿米巴角膜炎病人门诊筛选的有效方法。     

右美托咪定对过氧化氢引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定对过氧化氢(H_2O_2)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法 PC12细胞随机分为正常对照组,H_2O_2组(200μmol/L H_2O_2),右美托咪定低、中、高浓度组(50、100、200μmol/L右美托咪定+200μmol/L H_2O_2),培养48 h,分别检测细胞活力、凋亡情况、天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Caspase9活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化水平。结果与H_2O_2组比较,右美托咪定低、中、高浓度组细胞活力显著提高,细胞早期及晚期凋亡率显著降低,LDH释放量显著减少,MDA含量显著降低,SOD、CAT及GSH-Px活性显著升高,Caspase3、9活性显著降低,Bcl-2及p-ERK1/2表达量显著上调,Bax表达量显著下调(均P<0.01)。结论右美托咪定能通过抗氧化及抗细胞凋亡进而抑制H_2O_2引起的PC12细胞损伤。     

艾地苯醌抑制氧化应激所致皮层神经细胞凋亡的机制

目的探讨艾地苯醌抗氧化应激所致的皮层神经细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度过氧化氢(H_2O_2)诱导皮层神经细胞损伤;MTT法测定细胞损伤程度。Western印迹检测蛋白表达变化。结果(1)不同浓度H2O2(0.1,0.3,0.5,0.7 mmol/L)处理原代培养的皮层神经细胞24 h后,细胞死亡率呈浓度依赖性,0.5 mmol/L H_2O_2可使细胞的死亡率达50%;经0.5 mmol/L H_2O_2处理3 h、6 h和24 h后,细胞死亡率呈时间依赖性增高,与正常对照组比较24 h时增加明显(P<0.01)。(2)不同浓度的艾地苯醌(1~50μmol/L)预处理原代培养的皮层神经细胞2 h后,分别用0.5 mmol/L H_2O_2损伤细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放率随艾地苯醌剂量的增加而降低,在10μmol/L时LDH释放率与H2O2损伤组比较下降最显著(P<0.01),随后随艾地苯醌剂量的增加LDH释放率反而升高。(3)用0.5 mmol/L H_2O_2损伤皮层神经细胞后p53蛋白水平的升高可被提前2 h加入的10μmol/L艾地苯醌所抑制。结论艾地苯醌通过降低p53蛋白水平实现抗氧化作用。     

热休克蛋白70抑制c-Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察热休克蛋白70(HSP70)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞,随机分为5组:对照组、H_2O_2组、热休克组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪分析心肌细胞凋亡,噻唑蓝(MTr)法测定心肌细胞相对活力,Western blot法检测JNK的表达。结果H_2O_2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组(P<0.01),而SOD活性则明显低于其他组(P<0.01)。细胞凋亡率H_2O_2组明显高于其他各组(P<0.01)。细胞活力H_2O_2组明显低于对照组(P<0.01),而热休克组、JNK抑制剂组、热休克 JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H_2O_2组(P<0.01)。JNK只在H_2O_2组有表达。结论HSP70对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。     

Three-dimensional endoanal ultrasonographic assessment of an anal fistula with and without H2O2 enhancement

AIM： To evaluate the effectiveness of three-dimensional endoanal ultrasound （3D-EAUS） in the assessment of anal fistulae with and without H202 enhancement. METHODS： Sixty-one patients （37 males, aged 17-74 years） with anal fistulae, which were not simple low types, were evaluated by physical examination and 3D-EAUS with and without enhancement. Fistula classification was determined with each modality and compared to operative findings as the reference standard. RESULTS： The accuracy of 3D-EAUS was significantly higher than that of physical examination in detecting the primary tract （84.4% vs 68.7%, P = 0.037） and secondary extension （81.8% vs 62.1%, P = 0.01） and localizing the internal opening （84.2% vs 59.7%, P = 0.004）. A contrast study with H202 detected several more fistula components including two primary suprasphincteric fistula tracks and one supralevator secondary extension, which were not detected on non-contrast study. However, there was no significant difference in accuracy between 3D-EAUS and H202- enhanced 3D-EAUS with respect to classification of the primary tract （84.4% vs 89.1%, P = 0.435） or secondary extension （81.8% vs 86.4%, P = 0.435） or localization of the internal opening （84.2% vs 89.5%, P = 0.406）. CONCLUSION： 3D-EAUS was highly reliable in the diagnosis of an anal fistula. H2O2 enhancement was helpful at times and selective use in difficult cases may be economical and reliable.     

7-二氟甲氧基金雀异黄素对H_2O_2诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用

目的 探讨7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导血管内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制.方法 荧光分光光度计检测单核细胞与血管内皮细胞的黏附,酶联免疫吸附法检测E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子的释放,Western blotting检测P38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平.结果 H2O2处理血管内皮细胞24 h后,内皮细胞-单核细胞的黏附率显著增加,内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放增加;加入7-二氟甲氧基金雀异黄素后,血管内皮细胞-单核细胞的黏附率以及内皮细胞释放E选择素和细胞间黏附分子1等黏附分子呈浓度依赖性减少.H2O2处理血管内皮细胞24 h后,可显著激活P38丝裂原活化蛋白激酶,这一作用可被7-二氟甲氧基金雀异黄素所抑制.给予P38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制荆SB203580亦可阻断H2O2诱导的内皮细胞-单核细胞黏附及内皮细胞E选择素和细胞间黏附分子1的释放.结论 7-二氟甲氧基金雀异黄素对氧化应激诱导的血管内皮细胞与单核细胞黏附具有拮抗作用,其机制可能与其抑制P38丝裂原活化蛋白激酶的激活进而阻断内皮细胞释放黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1有关.     

不同浓度脂联素对心肌细胞氧化应激损伤后GRP78及Caspase-12表达的影响及意义

目的 通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立H_2O_2心肌细胞氧化应激损伤模型,观察脂联素对心肌细胞氧化应激所致内质网应激的保护作用.方法 采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定.选用原代培养3～4天的心肌细胞,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+10 mg/L脂联素组、H_2O_2+20 mg/L脂联素组和H_2O_2+30 mg/L脂联素组.实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放,通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡,用RT-PCR与western Blotting方法检测内质网应激指标GRP78和Caspase-12的表达.结果 与对照组相比,给予H_2O_2后,细胞凋亡率显著增加(70.7%±6.4%比1.0%±0.6%,P<0.05),LDH释放增加(1411.5 ±189.7 U/L比353.3 ±50.3 U/L,P<0.05),内质网伴侣蛋白GRP78以及Caspage-12在mRNA(分别为1.25±0.50比0.18 ±0.10和1.32±0.15比0.26±0.06)及蛋白水平(分别为0.92±0.50比0.37±0.10和1.24 ±0.50比0.51±0.01)表达增加(P<0.05),30 mg/L脂联素预处理后给予H_2O_2,可较大程度地逆转上述指标变化,细胞凋亡率显著下降(43.6%±3.8%),LDH释放减少(686.7±61.1 U/L),内质网伴侣蛋白GRP78以及Cagpase-12在mRNA(分别为0.56±0.03和0.83±0.04)及蛋白水平(分别为0.66±0.03和0.64±0.03)表达减少(P<0.05).结论 氧化应激使GRP78和Caspase-12表达增强,启动内质网应激,脂联素可以通过减轻内质网应激逆转H_2O_2所致的心肌细胞损伤及凋亡作用,对心肌细胞有保护作用.     

过氧化氢对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

目的观察不同浓度的过氧化氢(H2O2)对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)骨桥蛋白(OPN)基因表达的影响。方法用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC,随机分为对照组,H2O2不同浓度(10,50,100μmol/L)干预组,应用逆转录聚合酶链反应及Western blot技术结合吸光度扫描分析,观察H2O2对VSMC的OPN表达的影响。结果不同浓度H2O2均明显刺激VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达,且具有剂量依赖性促进作用。结论H2O2能在基因水平上刺激VSMC的OPN的表达。     

银杏叶提取物对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察银杏叶提取物（EGB）对活性氧诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法用含100 g/L小牛血清的DMEM体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的过氧化氢（H2O2）作为外源性活性氧刺激VSMC增殖,应用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）掺入和细胞周期时相测定等方法观察给予不同浓度的EGB预处理后,EGB对H2O2作用后VSMC的增殖的影响。结果H2O2对VSMC的增殖活性具有剂量依赖性促进作用,EGB可以抑制H2O2诱导的VSMC增殖,且具有剂量依赖性。结论EGB对于动脉粥样硬化形成及经皮腔内冠状动脉介入治疗后再狭窄的防治可能具有应用前景。     

Salvianolic acid B protects hepatocytes from H_2O_2 injury by stabilizing the lysosomal membrane

AIM To investigate the capability of salvianolic acid B(Sal B) to protect hepatocytes from hydrogen peroxide(H_2O_2)/carbon tetrachloride(CCl_4)-induced lysosomal membrane permeabilization. METHODS Cell Counting Kit-8 assay was used to measure cell viability. Apoptosis and death were assayed through flow cytometry. Brd U incorporation was used to detect cell proliferation. Serum alanine aminotransferase activity and liver malondialdehyde(MDA) content were measured. Liver histopathological changes were evaluated using hematoxylin-eosin staining. Lysosomal membrane permeability was detected with Lyso Tracker Green-labeled probes and acridine orange staining. The levels of protein carbonyl content(PCC), cathepsins(Cat)B/D, and lysosome-associated membrane protein 1(LAMP1) were evaluated through western blotting. Cytosol Cat B activity analysis was performed with chemiluminescence detection. The m RNA level ofLAMP1 was evaluated through quantitative real-time polymerase chain reaction. RESULTS Results indicated that H_2O_2 induced cell injury/death. Sal B attenuated H_2O_2-induced cell apoptosis and death, restored the inhibition of proliferation, decreased the amount of PCC, and stabilized the lysosome membrane by increasing the LAMP1 protein level and antagonizing Cat B/D leakage into the cytosol. CCl_4 also triggered hepatocyte death. Furthermore, Sal B effectively rescued hepatocytes by increasing LAMP1 expression and by reducing lysosomal enzyme translocation to the cytosol.CONCLUSION Sal B protected mouse embryonic hepatocytes from H_2O_2/CCl_4-induced injury/death by stabilizing the lysosomal membrane.     

Protective effects of Taxifolin on H_2O_2-induced damage in H9C2 cells

Background Taxifolin(Tax) is an essential natural antioxidant. Multiple studies have shown that Tax can protect cardiomyocytes from ischemia-reperfusion injury. However, the underlying mechanism is still unclear.Methods H9C2 cells were randomly divided into control, H_2O_2 group, Tax pretreatment group(Tax + H_2O_2);Tax effect group. Cell activity was detected by CCK-8 and the intracellular structure was observed by transmission electron microscopy. Autophagy was determine by Western blotting analysis of Beclin-1, Bcl-2 and PKC.Results Tax pretreatment significantly increased anti-apoptotic protein Bcl-2 and autophagy protein Beclin-1.Expression of PKC was inhibited by Tax. Conclusions Tax pretreatment could protect H9 C2 cells against H_2O_2-induced damage through the Bcl-2 and autophagy pathways.     

In vitro effect of artesunate against Acanthamoeba spp

The in vitro effects of artesunate, the antimalarial agent, and metronidazole against Acanthamoeba spp were studied. Acanthamoeba Group II and Acanthamoeba polyphaga-like were isolated from natural water courses in Buri Ram Province, northeastern Thailand. The trophozoites were axenically cultured in PPYG medium and treated with artesunate in a concentration of 5-700 microg/ml. Artesunate showed its ability to inhibit the growth of acanthamoeba trophozoites: 54% at 50 mg/ml (after six days of exposure) and 93.2% at 100 microg/ml (after two days). The 500-700 microg/ml concentration caused inhibition on the first day of more than 93.2%; excystation did not occur in drug-treated medium. The present study shows that artesunate is amebastatic rather than amebicidal in an axenic culture of trophozoites at the highest concentration of 100 microg/ml. Metronidazole, in concentrations of 5-1,000 microg/ml, had no effects on either trophozoites or cysts.