敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的：探讨敲低EphB1基因对过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法：体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组（不做任何处理）、H₂O₂组（H₂O₂细胞损伤）、阴性对照组（转染siRNA control）和转染si-EphB1组（转染si-EphB1后H₂O₂细胞损伤）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与空白组比较,H₂O₂组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,ROS和MDA水平升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,ROS和MDA水平降低（P<0.05）,SOD水平升高（P<0.05）。结论：敲低EphB1基因能够抑制H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。     

红景天苷对H9c2心肌细胞应激高糖损伤的保护作用及机制研究

目的?利用氧化应激联合高糖复合损伤心肌细胞,建立H9c2心肌细胞应激及高糖损伤模型,探讨应激高糖H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法?将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组（C组,正常培养基）;②高糖组（G组,高糖培养基）;③H₂O₂组（H组,H₂O₂处理2小时后,更换为正常培养基继续培养）;④高糖+H₂O₂组（GH组,H₂O₂及高糖处理2小时后,更换为高糖培养基继续培养）;⑤红景天苷+高糖+H₂O₂组（SGH组,H₂O₂+高糖+红景天苷处理2小时后,更换为红景天苷+高糖培养基继续培养）。分组加药培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率;Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平;JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果?①与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与C组比较,H组及GH组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低,线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。②与GH组比较,SGH组Drp1蛋白表达水平显著降低,OPA1蛋白表达水平显著升高,线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论?①氧化应激联合高糖通过降低线粒体膜电位,抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。②红景天苷可抑制氧化应激联合高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与升高线粒体膜电位水平以及增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡有关;红景天苷对应激高糖心肌细胞具有一定的保护作用,值得进一步深入研究。      

三氧化二砷对心肌细胞的毒性及其机制的探讨

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对H9c2心肌细胞株凋亡的诱导及其机制.方法 H9c2细胞培养,不同浓度As2O3干预后,采用MTT、AO/EB染色法、CaspACE检测系统观察细胞存活率、形态并检测凋亡.结果 As2O3(2～10 μmol/L)使H9c2心肌细胞株活力下降;AO/EB染色法观察可见细胞凋亡的特征形态;Caspase-3阻断剂AcDEVD-CHO可以阻断As2O3诱导的凋亡.结论 As2O3诱导的H9c2心肌细胞株凋亡,Caspase-3的激活是其所致凋亡的机制之一.     

CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后,用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化,用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）, 6和24 h时,200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05）,且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）;②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05）,24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

甲基汞对雄性小鼠生殖细胞的毒性作用

目的：研究甲基汞（MeHg）对雄性小鼠生殖细胞氧化损伤、细胞周期、细胞凋亡及其凋亡相关蛋白表达的影响。方法：应用MTT法检测MeHg对雄性小鼠生殖细胞的毒性;采用TBA比色法、OPA荧光法和KI比色法分别检测睾丸生殖细胞中脂质过氧化产物MDA、H₂O₂的含量和GSH-Px酶活性;采用AO/EB染色法和流式细胞术2种方法检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测MeHg对细胞周期的影响;应用免疫组织化学方法检测与线粒体途径细胞凋亡相关Caspase-9和CytC蛋白表达。结果：体外给予0.1、1.0、10.0和100.0 μmol•L^-1 的MeHg,随着甲基汞染毒剂量的增加,细胞存活率逐渐降低,作用2、4、8、24和48 h时,1.0、10.0和100.0 μmol•L^-1各剂量组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。体内给予1/100、1/50和1/10 LD₅₀的MeHg,随着甲基汞染毒剂量的增加,睾丸组织中MDA和H₂O₂含量有所增加,各剂量染毒组MDA含量与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。H₂O₂含量随着甲基汞染毒剂量的增加,1/50 LD₅₀、1/10 LD₅₀组与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。GSH-Px酶活性随着甲基汞染毒剂量的增加有所降低,各剂量染毒组与对照组比较差异均具有显著性（P<0.05）。随着染毒剂量的增大,凋亡率先增加,1/50 LD₅₀达到最大,1/10 LD₅₀组逐渐降低,1/10 LD₅₀组与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。采用流式细胞术检测,G₂/M期细胞百分数增加,1/50 LD₅₀染毒组时与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。Caspase-9与CytC阳性表达为棕黄色染色。分析结果表明,MeHg各剂量染毒组CytC表达先增加,随着染毒剂量的增加而逐渐降低,CytC表达各剂量染毒组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01),Caspase-9 的表达在1/50 LD₅₀组达到最高,1/50和1/10 LD₅₀ 组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论：甲基汞可以引起生殖细胞氧化损伤,影响细胞周期进程,使细胞有丝分裂延迟,并可能诱导细胞凋亡和凋亡相关蛋白的改变,对雄性生殖细胞具有细胞毒性作用。     

人参提取物对棕榈酸诱导心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的：观察人参提取物对棕榈酸（PA）引起的脂毒性心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其相关作用机制。方法：体外培养H9c2细胞。油红O染色检测不同浓度（100、200和1000 μmol·L^-1） PA作用后H9c2细胞中脂滴水平,MTT法检测不同浓度（200、400、600和800μmol·L^-1） PA作用后H9c2细胞存活率,流式细胞术检测不同浓度（200、400、600和800μmol·L^-1） PA作用后H9c2细胞凋亡率,筛选PA作用浓度和时间。依据筛选结果选择PA作用浓度为100和200 μmol·L^-1,作用时间为24 h。将H9c2细胞随机分为对照组、PA组（100和200μmol·L^-1）和不同浓度（0.2、2.0和20.0 mg·L^-1）人参提取物组。流式细胞术和FITC-Annexin Ⅴ/PI双染法检测各组H9c2细胞凋亡率,JC-1染色法检测各组H9c2细胞中线粒体膜电位（MMP）水平,DCFH-DA染色法检测各组H9c2细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与对照组比较,100、200和1 000 μmol·L^-1PA组H9c2细胞中脂滴水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,200、400、600和800 mmol·L^-1 PA组H9c2细胞存活率逐渐降低（P<0.01）,细胞凋亡率逐渐升高（P<0.01）。不同浓度人参提取物作用24h后,与100和200μmol·L^-1PA组比较,2.0和20.0 mg·L^-1人参提取物组H9c2细胞中脂滴水平降低（P<0.01）,细胞凋亡率逐渐降低（P<0.01）,ROS水平逐渐降低（P<0.01）;各浓度人参提取物组H9c2细胞中MMP水平逐渐降低（P<0.01）。结论：人参提取物可以抑制PA诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与受损H9c2细胞中ROS和MMP水平下调有关。     

miR-19b通过调节线粒体功能抑制H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡

目的：研究microRNA(miR)-19b抑制H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡并探讨其机制。方法：使用过氧化氢(H₂O₂)诱导H9c2心肌细胞损伤模型,将H₂O₂诱导的H9c2细胞分别转染miR-19b模拟物、抑制剂及其阴性对照。大鼠H9c2心肌细胞株分为6组,对照(Control)组,H₂O₂组,H₂O₂+miR-19b mimic阴性对照(NC)组,H₂O₂+miR-19b mimic组,H₂O₂+miR-19b inhibitor组,H₂O₂+miR-19b inhibitor NC组。采用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化应激水平,JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,试剂盒检测细胞色素c与线粒体共定位,Western Blot...     

FGF-1 对TGF-β1 诱导的H9c2 心肌细胞凋亡与Caspase-3，Caspase-8 和Caspase-9 表达的关系研究

目的 观察酸性成纤维细胞生长因子（FGF-1）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,半胱氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）和半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）表达的影响,并探讨可能机制。方法 体外培养H9c2 细胞,随机分为5 组：模型组,肝素（Heparin）组、FGF-1 组、FGF-1/Heparin 组和正常对照组。采用3-（4,5- 二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色分析检测H9c2 细胞的存活率,TUNEL 染色检测H9c2 细胞凋亡指数和Western blot 分析检测H9c2 细胞Caspase-3,Caspase-8 和Caspase-9 的表达。结果 模型组H9c2 细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,模型组降低;FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组H9c2 细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组均升高。模型组H9c2 细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,模型组升高;FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组H9c2 细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,FGF-1 组和FGF-1/Heparin 组降低。结论 FGF-1 对TGF-β1诱导的H9c2 心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8 和Caspase-9 的表达有关。     

缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用

目的:分离提取缺氧预适应（HPC）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性; 通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显著升高（P<0.01）,即成功构建HUVECs 的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60 μg/mL组细胞存活率显著降低（P<0.001）,且LDH活性和Caspase 3活性显著升高（P<0.01或P<0.001）,凋亡细胞量增加, Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.001） 。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。     

Smac过表达增强氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

目的:研究Smac过表达联合氯化镉(CdCl2)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为以Smac为基础的肿瘤基因治疗以及镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据.方法:实验共设立5组,分别为对照组、pcDNA3.1+组、pcDNA3.1+-hSmac组、CdCl2组以及CdCl2联合Smac组.对照组细胞不进行细...     

六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡

目的:探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法,并对其进行比较。方法:首先用6%的乙醇作用6h诱导人肝细胞癌细胞系HCC-9204细胞凋亡,然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色,细胞固定后的Hoechst33258荧光染色、May-Grunwald-Giemsa(MGG)染色和常规HE染色等形态学观察,并进行末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测。结果:用低浓度乙醇诱导细胞凋亡后,大部分肝癌细胞为台盼蓝拒染,TUNEL阳性着色。除了台盼蓝染色法以外,AO/EB、Hoechst33258、MGG和HE等染色法,以及TUNEL检测法均能够不同程度地显示典型的细胞变圆,细胞核深染,染色质边集、呈环状、团块或新月体状,以及细胞浆浓缩和“出泡”现象等细胞凋亡的形态学特征。AO/EB双染色法还能够显示呈致密浓染的黄绿色染色或出现黄绿色碎片的早期凋亡细胞,呈致密浓染的鲜红色染色或出现鲜红色碎片的晚期凋亡细胞,以及呈鲜红色膨大状的坏死细胞。结论:上述六种染色方法均可作为检测细胞凋亡的手段。除了台盼蓝染色以外,其余5种染色方法均可用于观察凋亡细胞的形态学变化。其中,从AO/EB双染色法还可以区分早期凋亡。晚期凋亡和坏死细胞。TUNEL法不仅能够通过检测凋亡细胞的DNA片段化来判别细胞凋亡,还可以从形态学上观察凋亡细胞。     

巯基乙酸-碲化镉量子点对人肝细胞毒性和DNA损伤的诱导作用

目的：研究巯基乙酸（TGA）包覆的碲化镉(CdTe)量子点（QDs）对人正常肝HL-7702细胞的毒性和DNA损伤的作用,为QDs毒理学研究和安全性评价提供实验依据。方法：实验设立对照组和不同浓度CdTe QDs作用组（浓度分别为6.25、12.50、25.00和50.00 mg/L）。CdTe QDs作用于HL-7702细胞后,分别采用MTT法检测细胞增殖变化,单细胞凝胶电泳法（SCGE）检测细胞DNA损伤情况,PI单染流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化,AO/EB双荧光染色法和Annexin Ⅴ- FITC/PI双染FCM检测细胞凋亡情况。结果：MTT法,CdTe QDs可抑制HL-7702细胞增殖,并存在剂量-效应和时间-效应关系;SCGE和PI单染FCM法,CdTe QDs作用于HL-7702细胞24 h后,随着剂量的增加,DNA损伤率逐渐增高,G0/G1期细胞百分率显著下降,S期和G2/M期细胞百分率明显上升（P<0.05）;AO/EB检测,CdTe QDs作用后细胞出现凋亡形态学改变;Annexin Ⅴ-FITC/PI双荧光标记FCM法,CdTe QDs染毒可促进细胞凋亡,各剂量组细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：CdTe QDs可影响细胞存活,引起DNA损伤、细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡。     

氯化镉对大鼠心肌H9c2细胞DNA损伤的作用机制

目的：研究氯化镉（CdCl2）在体外对大鼠心肌细胞DNA的损伤作用,探讨CdCl2心肌毒性作用机制。方法：以0、5、10、30、50和80 μmol?L-1 CdCl2作用于大鼠心肌H9c2细胞,采用单细胞凝胶电泳法（SCGE）检测作用6、12及24 h的DNA损伤,Western blotting法检测CdCl2作用24 h对聚ADP-核糖聚合酶（PARP）的影响,免疫细胞化学法检测细胞色素C（Cyt-C）和凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达变化的情况。结果：随CdCl2 浓度的增大和作用
时间延长,作用12、24 h后,10、30、50和80  μmol/L剂量组大鼠心肌细胞DNA损伤程度明显,组间比较差异有统计学意义（P< 0.05或P< 0.001）。作用24 h后,30、50和80  μmol?L-1剂量组可见明显PARP裂解89 000片段。Cyt-C和AIF蛋白的表达也随着CdCl2浓度的加大而显著增高,组间比较差异有统计学意义（P< 0.05或P< 0.001）。结论：CdCl2对大鼠心肌细胞的毒性作用机制可能与诱导DNA损伤,影响PARP、Cyt-C和AIF蛋白表达有关,且具有一定的剂量依赖关系。     

20(s)-原人参二醇对体外培养的人前列腺癌PC3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：观察20 (s)-原人参二醇 (PPD) 对体外培养的人前列腺癌（PCa）PC3 细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：将体外培养的PC3 细胞分为对照组及 20、30和40 μmol?L-1PPD组。采用PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖抑制情况,采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western blotting方法检测 Bcl-2、Bax和γH2Ax蛋白的表达情况。结果：不同剂量PPD处理后,PC3细胞变圆回缩并出现碎片,AO/EB染色呈现不同程度的黄绿色;不同剂量PPD作用后,各组细胞增殖抑制率均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量PPD作用PC3细胞48 h后,Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达变化不明显,γH2Ax蛋白表达上调(P<0.05)。结论：PPD可诱导PC3细胞凋亡,其作用机制可能与 Bcl-2、Bax信号通路以及DNA断裂基因γH2Ax蛋白表达上调有关。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

人质膜型唾液酸酶对丁酸钠诱导细胞凋亡的影响及其机制

目的：研究人质膜型唾液酸酶(hmSD)对丁酸钠(NaBT)诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞(PC3细胞)凋亡的影响及其可能机制。方法：以前列腺癌细胞PC3和稳定转染hmSD的前列腺癌细胞(PC3-hmSD)为靶细胞,分别设对照组、NaBT 2.5 mmol•L^-1组、NaBT 5.0 mmol•L^-1组、NaBT 10.0 mmol•L^-1组,采用MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色方法检测细胞凋亡情况,DCFH-DA激光共聚焦法检测细胞内ROS,Western blotting方法检测Bcl-XL、P65和Caspase 9蛋白表达。结果：① NaBT作用48和72 h时,PC3-hmSD细胞的生存率明显高于PC3细胞（P<0.05）;② NaBT 5.0 mmol•L^-1作用4 h,PC3-hmSD组细胞凋亡数明显少于PC3细胞（P<0.05）;③ NaBT诱导细胞内活性氧产生,PC3-hmSD细胞与PC3细胞比较差异无显著性;④ NaBT作用下,与PC3细胞比较,PC3-hmSD细胞Bcl-XL、P65蛋白表达水平增强,而 Caspase 9蛋白表达水平减低（P<0.05）。结论：① hmSD具有抵抗NaBT诱导细胞凋亡的作用;② hmSD对NaBT诱 导活性氧产生无抑制作用;③ hmSD抗凋亡作用可能与Bcl-XL和P65表达上调、Caspase 9表达下调有关。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

大蒜素诱导THP-1细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨大蒜素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1凋亡及凋亡基因Fas/FasL表达的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;AO/EB染色观察细胞凋亡形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;FCM检测细胞凋亡率和细胞周期分布;免疫细胞化学法和Western blot观察细胞Fas、FasL蛋白表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,呈时间-剂量依赖性,72h中效浓度(IC50)为12.8mg/L。Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加。6.4、12.8mg/L大蒜素作用THP-1细胞72h后,FCM检测G0/G1期细胞比率明显上升,而S期比率明显下降,均出现凋亡峰,凋亡率分别为(22.93±2.93)%和(36.73±2.88)%,呈剂量依赖性,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。在荧光显微镜下可区分早、晚期凋亡细胞、活细胞和坏死细胞。免疫组化显示大蒜素作用后Fas/FasL蛋白上调,主要分布在细胞浆和细胞膜。Western blot结果显示Fas/FasL蛋白表达量随大蒜素浓...