不同剂量流感病毒感染小鼠模型免疫应答的比较性研究

目的 比较不同剂量流感病毒感染小鼠后肺组织急性损伤情况,初步探讨感染剂量与机体抗病毒的固有、适应性免疫应答的关系。方法 用流感病毒A/PR/8/34（PR8;H1N1）构建小鼠感染102 PFU和103 PFU剂量模型,HE法检测肺组织损伤情况,HA法和免疫荧光染色法检测肺组织病毒滴度和感染程度,RT - PCR法检测肺组织炎性因子干扰素α（interferon - α, IFN - α）、干扰素β（interferon - α, IFN - β）、白细胞介素1β（interleukin - 1β, IL - 1β）、白细胞介素6（interleukin - 6, IL - 6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor - α, TNF - α）及Toll样受体7（Toll - like receptor - 7, TLR7）、髓样分化因子88（myeloid differentiation primary response gene 88, MyD88）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（TNF receptor associated factor 6, TRAF6）和核因子κB（nuclear factor κB, NF - κB）mRNA水平,免疫组化法对肺组织TLR7、MyD88、TRAF6和NF - κB蛋白定位。流式细胞术检测肺组织、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）和淋巴结中CD4+、CD8+T细胞比例。结果 与102 PFU组比较,103 PFU组小鼠肺组织病毒滴度显著升高（t = 3.071,P = 0.008）,炎症因子IFN - α、IFN - β、IL - 1β、IL - 6、TNF - α mRNA水平上升（t = 4.816,P = 0.003;t = 4.104,P = 0.006;t = 3.992,P = 0.007;t = 4.049,P = 0.007;t = 3.737,P = 0.009）,TLR7、MyD88、TRAF6和NF - κB mRNA水平有不同程度的升高（t = 2.905,P = 0.027;t = 3.854,P = 0.008;t = 3.760,P = 0.009;t = 4.312,P = 0.005）及蛋白表达显著增加（t = 4.712,P = 0.003;t = 4.008,P = 0.007;t = 4.398,P = 0.005;t = 4.564,P = 0.004）,BALF、肺组织和淋巴结中CD4+T细胞比例呈上升趋势（t = 3.771,P = 0.009;t = 2.463,P = 0.049;t = 3.386,P = 0.015）,BALF和肺组织CD8+T细胞比例上调（t = 5.297,P = 0.002;t = 3.502,P = 0.013）。结论 病毒载量影响机体固有和适应性免疫应答状态,通过上调 TLR7 - MyD88 - TRAF6 - NF - κB信号通路促进下游炎症反应,并启动CD4+T和CD8+T细胞发挥抗病毒效应。     

小檗碱对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

目的探究小檗碱对流感病毒感染小鼠免疫功能及炎症反应的调节作用。方法选取60只小鼠分为正常对照组、流感病毒组和小檗碱组,20只/组;除正常对照组外各组使用流感病毒滴鼻制成流感病毒小鼠模型;使用1 mg/ml小檗碱给小鼠灌胃0.4 ml/d。检测肺泡灌洗液中白细胞总数及各类白细胞数;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理改变情况;采用流式法检测辅助性T细胞(Th)1/Th2及Th17/调节性T细胞(Treg)比例;检测血清中白细胞介素(IL)-6、IL-4和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;使用蛋白质免疫印迹法检测视黄酸诱导基因蛋白-1(RIG-1)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)及核因子(NF)-κB蛋白表达情况。结果HE染色显示,流感病毒组肺组织炎性细胞增多、肺泡结构被破坏,小檗碱组小鼠炎性细胞数目减少。相比正常对照组,流感病毒组小鼠肺泡灌洗液中白细胞总数及各类白细胞数、Th1/Th2、Th17/Treg、IL-6、TNF-α、RIG-1蛋白、MAVS蛋白及NF-κB蛋白水平均升高,IL-4水平降低(P<0.05);相比流感病毒组,小檗碱组小鼠肺泡灌洗液中白细胞总数及各类白细胞数、Th1/Th2、Th17/Treg、IL-6、TNF-α、RIG-1蛋白、MAVS蛋白及NF-κB蛋白水平均降低,IL-4水平升高(P<0.05)。结论小檗碱可以通过影响RLH信号传导通路的活化,调节T淋巴细胞亚群比例,同时抑制炎症反应来实现抗流感病毒的作用。     

新型流感病毒出现和流感大流行

20世纪出现了3次流感大流行,分别由A型流感病毒H1N1、H2N2和H3N2三种不同的抗原亚型引起,其中1957年和1968年的两次流行发生在现代病毒学时代,流感病毒的特征得到了系统的研究。流感流行事件表明流感大流行在时间和形式上是不可预测的。有证据显示流感大流行主要是由人流感病毒与动物A型流感病毒的基因重排而产生新血凝素亚型的病毒引起。     

甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用

目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.     

逆转录聚合酶链反应法在北京市流感病毒型别鉴定中的应用

目的：建立在流感病毒型别鉴定中使用的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法。方法：用常规细胞培养法扩增病毒后,用2对型别鉴定引物和4对亚型鉴定引物进行RT－PCR反应。结果：在23株发生细胞病理变化的标本中RT－PCR阳性标本为10份,其中甲型7株（6株甲3亚型、1株甲1亚型）,乙型3株,结论：该方法快速、特异,灵敏,在流感病毒型别鉴定中具有较大的应用价值。     

流感病毒神经氨酸酶双表达DNA疫苗的构建及在小鼠中的免疫保护研究

目的研究对多亚型流感病毒流行提供预防的DNA疫苗。方法以pIRES为双表达载体,在其两个多克隆位点中分别插入H1N1（A/PR/8/34）和H3N2（A/Guizhou/54/89）的NA DNA片段,构建双表达质粒pN1-IRES-N2及pN2-IRES-N1。以BALB/c小鼠为模型,采用电穿孔法进行免疫,并用致死量流感病毒感染以检测双表达载体的保护力。结果实验表明pN1-IRES-N2能完全保护小鼠抵御致死量H1N1同源病毒的攻击,部分保护小鼠抵御致死量H3N2同源病毒攻击;pN2-IRES-N1能完全保护小鼠抵御致死量H3N2同源病毒攻击,对致死量H1N1同源病毒的攻击提供部分保护。结论双表达DNA疫苗可望开发为一种提供广泛保护的新型流感疫苗。     

甲型流感病毒的分离及HA基因的序列分析

目的 分离临床流感患者的甲型流感病毒及对其HA基因进行序列测定,分析HA基因是否存在变异.方法 采用流感病毒的增殖、血液凝集实验、RT-PCR、蓝自筛选、酶切、DNA序列测定方法,获得甲型流感病毒HA基因的序列,进行序列分析.结果 甲型流感病毒HA基因RT-PCR的电泳条带为1700bp;酶切后电泳条带为1700bp和3000bp;并获得甲型流感病毒HA基因的序列.结论 从临床流感患者分离的流感病毒H1N1/H3N2其HA序列与以往的流感病毒序列无明显差异.     

18岁以上人群接种四价流感病毒灭活疫苗免疫原性和安全性的Meta分析

目的 评价18岁以上人群接种四价流感病毒灭活疫苗(QIV)免疫原性和安全性.方法 检索美国国家医学图书馆数据库、Cochrane协作网图书馆、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库和万方全文数据库,将有关比较18岁以上人群接种QIV和三价流感病毒灭活疫苗(TIV)免疫原性和安全性的随机对照试验纳入分析.以接种疫苗21 d后产生的针对H1N1、H3N2、B/Victoria、B/Yamagata四个疫苗株的抗体保护率(SPR)和抗体阳转率(SCR)以及不良反应发生率作为结局指标,合并组间的SPR、SCR和不良反应发生率的相对危险度(RR).结果 共纳入5篇文献.针对B/Yamagata的SPR的RR是1.12(95％ CI:1.02～1.22),SCR的RR是2.11(95％ CI:1.51～2.95).针对B/Victoria的SPR的RR是1.14(95％ CI:1.03～1.25),SCR的RR是1.78(95％ CI:1.24～2.55).接种QIV和TIV(含B/Yamagata)后接种部位疼痛发生率的RR是1.23 (95％ CI:1.05～1.44).结论 18岁以上成人接种QIV不仅可以产生与TIV相似的免疫效果和安全性,而且可以对TIV未包含的乙型流感疫苗株产生较好免疫效果.     

重组流感病毒疫苗研制现状

流行性感冒病毒引起的流行性感冒是一种常见的急性呼吸道传染病。流感病毒可诱导感染宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体,从而表达寄生虫、细菌和病毒的多种蛋白。这些病原体包括约氏疟原虫、恶性疟原虫、硕大利什曼原虫、枯氏锥虫、结核分支杆菌、流产布鲁菌、呼吸道合胞病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、西尼罗病毒、人乳头瘤病毒16型和马流感病毒等,本文就研制现状进行综述。     

流感病毒RT-PCR核酸检测及流行病学特点

目的流感网络监测实验室对辖区内采集的流感样病例咽拭子标本进行流感病毒RT-PCR核酸检测,并对检测结果进行流行病学分析,以进一步掌握流感的流行规律,为制订有效的流感防控措施提供依据。方法自2009年9月～2010年2月,由哨点医院和辖区内各疾病预防控制中心采集的流感样病例咽拭子标本,用RT-PCR方法进行流感病毒核酸检测。并且从不同地区、年龄、性别、时间分布以及流感各亚型等多方面对检测结果进行比较分析。结果检测流感样病例咽拭子标本457份,从时间分布来看,甲型H1N1从2009年9月～2010年1月均有阳性病例,2009年11月和12月阳性率达到了43.6%和42.9%,而乙型流感每个月都有阳性病例,在2009年阳性率均在10%以下,2010年却超过了10%。从年龄分布来看,各型流感的发病人群主要为5～49岁年龄段,其阳性率为42.2%。哨点医院低于疫情采样的甲型H1N1流感检测阳性率,而季节性H1、季节性H3、A未分型以及乙型流感的阳性率与疫情采样均无差别。结论六安市半年来流感疫情以甲型H1N1为主,甲型H1N1流感病例逐渐降低,而乙型流感病例逐渐上升,流感的流行渐趋缓和。流感的发病人群以5～49岁年龄段为主,是流感防控的重点人群。     

流感疫苗免疫效果评估

目的 评估接种流感疫苗后对人群的免疫效果。方法 随机选择不同年龄组的志愿者,按照流感疫苗使用说明书的要求接种,接种前和接种后20d,分别对观察者体内甲1（A1）、甲3（A3）和乙（B）型抗体进行检测,比较观察免疫前后志愿者体内各亚型流感抗体效价、阳转率及保护率。结果 接种前后各年龄组各亚型的流感抗体效价有显著性差异,平均GMT从免疫前的1：14．45上升至免疫后的1：233．6;阳转率为71．9％～96．6％;抗体保护率从免疫前的0．023％～52％上升至免疫后的83％～100％。结论 流感疫苗无论是国产的还是进口的,流感疫苗毒株抗原与湖北省流行流感毒株的抗原是相匹配的,可用于湖北省流感流行的控制。     

玉溪市2009年流感监测分析

目的了解玉溪市流感流行动态,揭示玉溪市流感流行及病原学的变化,为更好地做好流感预防控制工作。方法按全国流感监测方案,对暴发疫情和哨点医院采集流感样病例咽拭子标本,用Real-time RT-PCR方法检测。结果 2009年玉溪市流感网络实验室共检测流感样病例标本980份,甲型H1N1核酸阳性143份,阳性率14.59%,甲型H1阳性11份,阳性率1.33%;甲型H3阳性80份,阳性率8.16%;B型核酸阳性6份,阳性率0.61%。结论玉溪市的流感病原,季节性H1、H3、B型和甲型H1N1流感同时存在,但甲型H1N1逐步成为流行的优势毒株。     

流行性感冒疫苗的预防接种

介绍了目前的流行性感冒 (流感 )疫苗种类、抗原含量、接种人群、免疫方案以及新一轮流感疫苗株的确定原则 ,列举了世界上 2 2个发达国家的流感疫苗使用情况。此外 ,详细阐述了流感疫苗的有效性、保护效果与开展流感疫苗效果研究应注意的事项 ,指出在评价流感疫苗的接种效果时 ,采用相对危险来评价更切合实际。     

Influenza Vaccine Research funded by the European Commission FP7-Health-2013-Innovation-1 project

Due to influenza viruses continuously displaying antigenic variation, current seasonal influenza vaccines must be updated annually to include the latest predicted strains. Despite all the efforts put into vaccine strain selection, vaccine production, testing, and administration, the protective efficacy of seasonal influenza vaccines is greatly reduced when predicted vaccine strains antigenically mismatch with the actual circulating strains. Moreover, preparing for a pandemic outbreak is a challenge, because it is unpredictable which strain will cause the next pandemic. The European Commission has funded five consortia on influenza vaccine development under the Seventh Framework Programme for Research and Technological Development (FP7) in 2013. The call of the EU aimed at developing broadly protective influenza vaccines. Here we review the scientific strategies used by the different consortia with respect to antigen selection, vaccine delivery system, and formulation. The issues related to the development of novel influenza vaccines are discussed.     

2005-2009年长沙市流感监测结果分析

目的分析既往4年长沙市流感监测结果,发现长沙市流感活动规律,为流感的防控提供科学依据。方法收集2005年10月-2009年9月长沙市流感监测流行病学和病原学数据,分析流感样病例(ILI)占门诊病例的百分比(ILI%)的变化规律,以及流感病毒各亚型的活动规律。结果2006年起,长沙市流感ILI%水平逐年升高,且每年存在2个高峰,即每年1-3月和7-9月;2005年10月-2009年3月,长沙市的流感优势毒株为季节性流感H1N1亚型和H3N2亚型,且两者交替出现;2009年4-9月的甲型H1N1流感病毒检出率逐渐增高,逐步成为优势毒株。结论长沙市流感活动的规律较为明显,存在季节性和周期性;ILI%的变化能够较好地反映当地流感病毒的活动情况,流感病毒活动的两个高峰时期当地的ILI%水平也处于高峰时期;甲型H1N1流感病毒对季节性流感病毒的活动影响较大,今后一段时间内防控的重点应放在甲型H1N1流感的防控中。     

The Influence of Therapeutic HBsAg Vaccine on Immune Responses in Mice

Objective To investigate the effect of various doses of HBsAg vaccine on cellular immune responses in mice. Methods Mice were immunized with one or two low, medium or high doses of HBsAg vaccine. T cell proliferation was tested by [^3H] thymidine incorporation. Secretion of IL- 2 and IFN - γ into culture supematants, and the concentration of serum anti - HBsAg IgG2a, were determined by ELISA. The lactate dehydrogenase method was used to detect the cytolytic activity of antigen - specific T cells. Results Primary immunization with medium- or high - dose HBsAg significantly enhanced T cell proliferation （ P 〈 0.01 ）, secretion of IL - 2 and IFN - γ/（ P 〈 0.05 for each ）, and anti - HBsAg IgG2a （ P〈 0.05）. Booster immunization further enhanced ＇all of these parameters. Booster, but not primary, immunization with low - dose HBsAg significantly enhanced all of these markers of cell - mediated immunity. Significant CTL activity was observed in all three groups of immunized mice and was independent of dose. Conclusion In mice, HBsAg vaccine induces cellular immune responses, boosts production of Thl - specific cytokines, and upregulates both cytolytic and noncytolytic immune responses. These findings suggest that this vaccine may be useful in treating patients with chronic hepatitis B.     

2007-2008年齐齐哈尔市流感监测结果分析

[目的]监测流感流行趋势,了解流感流行优势株。[方法]对齐齐哈尔市2007～2008年流感监测资料进行分析。[结果]2家哨点测医院2007年10月至2008年3月合计报告流感样病例2956例,占同期门急诊就诊病例总数75153例的3．93％。全市未发生流感暴发疫情,实验室收到并检测302份ILI标本,分离出19株流感病毒（分离率为6．29％）。其中,A（H1N1）亚型2株,A（H3N2）亚型10株,B型Yamagata系6株,B型Victoria系1株。[结论]2007～2008年度齐齐哈尔市流感呈散发状态,分离的流感毒株主要是H3N2和B／Yamagata。     

免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中的应用

目的评价免疫渗滤法在筛查临床甲型H1N1流感病毒感染中的诊断效率。方法收集2009年6月-10月医院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和实时荧光定量PCR检测,以评价免疫渗滤法的诊断效率。结果在297份咽拭子标本中,实时荧光定量PCR法检测为甲型H1N1流感166份,免疫渗滤法检出115份,两种方法检测均为阳性91份,均为阴性107份,灵敏度为54.82%,特异度为81.86%,阳性预测值为79.1%,阴性预测值为58.8%,总符合率66.67%,两种方法在甲型流感病毒检测中差异无统计学意义。结论免疫渗滤法可用于甲型流感病毒筛查,显示出良好的临床应用前景。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的通过对2009年6—11月北京怀柔地区流行性感冒(流感)病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区甲型H1N1型流感的流行趋势,为该地区甲型H1N1流感的防治提供科学依据。方法依据《全国流感监测实施方案》、《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案》、《甲型H1N1流感监测方案(第二版)》、7500Fast型实时荧光定量PCR的SDS软件操作。结果2009年6—11月共采集流感样病例咽拭子1780件,检出流感病毒核酸阳性507件,阳性率为28.48%。阳性样本中,季节性甲3亚型92件,占18.15%;季节性甲1亚型8件,占1.58%;乙型4件,占0.79%;甲型H1N1型395件,占77.91%。结论2009年6—9月,甲型H1N1型流感的流行趋势为上升状态,但期间季节性甲3亚型仍为主要流行毒株。10—11月,甲型H1N1型流感的上升趋势达到高峰期,甲型H1N1流感病毒为流感流行主要毒株。     

流行性感冒疫苗的预防效果观察

为了解流行性感冒（流感）疫苗的预防效果和安全性,于1996～1998年为健康军人及其家属共2 378人接种流感疫苗（免疫组）,并按儿童、成人、老年3个年龄段选取2 280人设立对照组。经6个月追踪观察结果显示,流感疫苗对流感样症状的预防有效率在儿童、成人、老年组中为 82.7％、69.6％和78.6％,平均77.4％,对预防上呼吸道感染症状的有效率分别是44.6％、50.7％和46.7％,平均47.8％。在第2年的观察中,接种流感疫苗的副反应率为1.2％。证实流感疫苗具有良好预防效果和安全性。