人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的逆转作用

目的人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸(homocy steine,Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的逆转作用。方法体外培养HUVECs,采用台盼蓝染色方法筛选人参皂甙Rg1最适浓度。将细胞分为对照组(无任何诱导物)、Hcy组(10μmol·L-1Hcy)、Hcy+Rg1组(10μmol·L-1Hcy和40mg·L-1Rg1)和Rg1组(单独用40mg·L-1Rg1处理的细胞),作用时间为24h。琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果台盼蓝染色结果显示:人参皂甙Rg1的最适浓度40mg·L-1。琼脂糖凝胶电泳结果显示:对照组和Rg1组未见凋亡条带,Hcy组可见清楚的细胞凋亡特征性的"梯状"条带,而Hcy+Rg1组可见不明显的细胞凋亡特征性的"梯状"DNA断裂条带。TUNEL染色结果显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组细胞凋亡数量显著增加(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组细胞凋亡数量显著减少(P<0.01),凋亡百分比由33.733%下降至9.200%,但仍高于对照组和Rg1组(P<0.01)。结论 40mg·L-1人参皂甙Rg1可一定程度逆转Hcy诱导的HUVECs凋亡。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞MCPIP表达

目的 探讨同型半胱氨酸是否可以诱导人脐静脉内皮细胞中MCPIP的表达.方法 体外培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;分别用10、50、100、200、500 μmol/L Hcy与HUVECs孵育24 h;用100 μmol/L Hcy与HUVECs分别孵育1、2、4、8、12、24 h;Real-time PCR检测MCPIP mRNA的表达,Western blot检测MCPIP蛋白质的表达.结果 Real-time PCR和Western blot分析结果表明,在所设置浓度下,Hcy均可诱导HUVECs中MCPIP的表达（P＜0.05）,其中以100 μmol/L Hcy作用24 h时MCPIP表达量最多;100 μmol/l Hcy与细胞作用2h时后MCPIP表达与对照组相比即有明显增高（P＜0.05）,并存在时间依赖效应.结论 Hcy可诱导HUVECs中MCPIP的表达,这可能与它致As的机理有关.     

同型半胱氨酸对体外人脐静脉内皮细胞ET的影响

1　实验资料　无菌条件下 ,从健康产妇新生胎儿脐带收集人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)进行培养 ,传至第 3代 ,使用完全培养液调细胞浓度于 1× 10 8m L- 1 ,加入生理浓度、病理生理浓度 0 .5 mmol· L- 1 、非毒性药理浓度和毒性药理浓度分别为 0 .0 1,0 .85 ,2 .0 0和 5 .0 mmol· L- 1 的同型半胱氨酸(Hcy)以及不含 Hcy的空白对照液继续培养 ,每组做 6个样本 ,分别于 4 ,6 ,8,2 4 h吸取培养液约 2 m L ,测定 ET的含量 .ET的检测应用南京建成生物工程研究所的试剂盒 .所有计量资料均用 x± s表示 ,统计方法采用多因素方差分析 .2　结果…     

蜕皮甾酮对同型半胱氨酸诱导人血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨蜕皮甾酮对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞株CRL-1730凋亡的影响.方法 体外常规培养人血管内皮细胞CRL-1730,细胞计数试剂盒法检测蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活力的影响;Hcy处理人血管内皮细胞CRL-1730建立损伤模型,分组为空白对照组、蜕皮甾酮高剂量组(Hcy+1.5μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮中剂量组(Hcy+1.0μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮低剂量组(Hcy+0.5μmol/L蜕皮甾酮)、Hcy组;流式细胞术检测CRL-1730细胞凋亡率,并利用荧光染色进行细胞凋亡形态学观察;RT-PCR法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2及Caspase-3基因的表达;采用Western blot法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 所选浓度蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活性无明显影响;流式细胞术结果显示经Hcy处理后的CRL-1730细胞凋亡率明显增高,但经过不同浓度的蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞凋亡率明显下降;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax和cleaved-Caspase-3的表达明显增高,Bcl-2的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy组比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞Bcl-2表达上调,Bax和cleaved-Caspase-3表达下调;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,CRL-1730细胞Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA表达下调.结论 蜕皮甾酮对Hcy诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730凋亡具有保护作用,这为其治疗心血管疾病提供了依据.     

SORBS1基因甲基化在Hcy诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激中的作用

目的:探讨SORBS1基因甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激中的作用。方法:将培养冻存的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)复苏培养至第三代,分成四组:(1)Hcy组;(2)叶酸组;(3)叶酸+VitB12组;(4)空白对照组。用基因芯片法筛选出具有差异的甲基化位点SORBS1。siRNA转染HUVEC,检测转染后三组(SORBS1-siRNA组,NC-siRNA组和空白对照组)HUVEC的SORBS1、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达水平。结果:与空白对照组相比,Hcy组SORBS1甲基化水平升高(P<0.05);与Hcy组比较,叶酸组、叶酸+vitB12组SORBS1甲基化水平均降低(P<0.05)。与NC-siRNA组和空白对照组相比,SORBS1-siRNA组SORBS1和SOD2表达水平均下降(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05)。结论:Hcy可通过调节SORBS1基因的甲基化水平诱导人脐静脉内皮细胞的氧化应激,为Hcy导致HUVEC氧化应激的分子机制提供了新思路。     

雷帕霉素抑制人脐静脉内皮细胞增殖与迁移

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的抑制作用。方法应用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞仪、迁移实验研究不同浓度雷帕霉素对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖、迁移的影响。结果雷帕霉素浓度大于10ng/ml、作用48h以上可以明显抑制VEGF诱导的HUVECs的增殖(P<0.05),呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞被阻滞在G0/G1期,并诱发了细胞凋亡;利用Transwell装置证实雷帕霉素浓度大于10ng/ml时抑制了HUVECs的迁移。结论雷帕霉素可通过抑制血管内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞表达白细胞介素8

目的　探讨同型半胱氨酸是否能诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达白细胞介素 8(IL 8)。方法　将培养的人脐静脉内皮细胞经相同浓度同型半胱氨酸处理后 ,采用原位杂交和流式细胞术分别检测其IL 8mRNA和蛋白的表达。结果　原位杂交显示 ,人脐静脉内皮细胞暴露于 0 .1mmol·L-1同型半胱氨酸分别孵育 4h和 8h后 ,其IL 8mRNA表达的平均吸光度值分别为 0 .0 313± 0 .0 0 5 5和 0 .0 4 2 5± 0 .0 0 6 9,均显著高于对照组 (0 .0 197± 0 .0 2 5 1,P <0 .0 1)。方差分析表明 ,各组之间均有显著性差异 (F=16 .5 5 ,P <0 .0 5 )。流式细胞术显示 ,上述实验组的IL 8荧光标记抗体阳性细胞的百分率分别为 34.7%和 38.7% ,均显著高于对照组 (2 9.5 % ,P <0 .0 1)。结论　同型半胱氨酸能诱导内皮细胞表达IL 8,与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用机制有关     

白藜芦醇抑制Gly-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 探究白藜芦醇(RSV)对糖化低密度脂蛋白(Gly-LDL)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响及作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,Gly-LDL诱导其损伤,设置为模型组;用不同浓度(5、10、20μmol/L)白藜芦醇干预内皮细胞24 h,分别设置为白藜芦醇低浓度组、白藜芦醇中浓度组和白藜芦醇高浓...     

同型半胱氨酸对内皮细胞 DNA 总甲基化水平的影响

目的研究同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞总甲基化水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并经Ⅷ因子法对其进行鉴定,分别用含有0,2、8、32mmol·L-1 Hcy的RPMI1640培养液对其作用48h后,测定基因组总甲基化水平。结果O、2、8、32mmol·L-1 Hcy组HUVEC细胞总甲基化水平分别为：（9．25±0．15）％、（8．53±0．49）％、（6．24±O．27）％、（3．79±0．13）％,呈明显的剂量效应关系（P〈0．05）。结论Hcy可下调人脐静脉内皮细胞DNA的总甲基化水平,并可能是Hcy致动脉粥样硬化的重机制之一。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的人肾脏系膜细胞增殖

目的观察叶酸对同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）诱导的人肾脏系膜细胞增殖作用的影响及其可能机制。方法人肾脏系膜细胞采用含5％胎牛血清的RPMl1640培养,采用不同浓度Hcy（200、400、600、800、1000“mol／L）处理细胞,MTT法观察Hcy对人肾脏系膜细胞增殖的影响。选取理想的Hcy浓度,加入不同浓度叶酸（50、100、200、400υmol／L）处理细胞,观察叶酸对细胞增殖的干预作用。相同方法处理细胞后提取总蛋白,Western blot检测转化生长因子～p（transforming growth factor-β,TGF-β）和细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）表达。结果Hcy能诱导人肾脏系膜细胞的增殖,促进TGF-β和ERK蛋白表达,呈现剂量依赖性。叶酸干预后能抑制Hcy诱导的细胞增殖,下调TGF-β和ERK蛋白表达。结论叶酸能抑制Hcy诱导的人肾脏系膜细胞增殖,可能与抑制TGF-β和ERK蛋白表达有关。     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Pg)对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响，探讨Pg对牙龈血管内皮细胞的毒性作用。方法：以厌氧袋法培养Pg，原代培养HUVEC，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）观察HUVEC的增殖状态。结果：活的和灭活的Pg都剂量依赖性地抑制HUVEC的增殖，活的Pg作用比灭活的Pg更为强烈，而Pg毒力株W83和非毒力株ATCC33277对HUVEC增殖的影响无显著差异。结论：Pg可能通过损伤牙龈组织的血管内皮细胞加重局部的炎性反应，可能是Pg诱导牙周组织破坏的病理机制之一。     

片仔癀对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的 观察片仔癀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 用MTT法检潮片仔癀对HUVEC增殖的影响,用划痕损伤实验观察片仔癀对HUVEC的迁移的影响.结果 片仔癀干预6、12、24、48 h后,与空白对照组比较,各剂量组抑制HUVEC的增殖能力(P＜0.01),且有剂量和时间依赖;片仔...     

人红白血病细胞株K562上清液对人脐静脉内皮细胞的促增殖作用

目的研究人红白血病细胞株（K562）上清液对人脐静脉内皮细胞（hUVEC）增殖能力的影响。方法以hUVEC与K562细胞共培养为K562细胞组,以hUVEC加K562细胞上清液为K562细胞上清液组,以单独培养hUVEC为对照组。采用RT-PCR技术检测各组中hUVEC周期蛋白E（cyclinE）mRNA及周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）mRNA的表达情况。结果K562细胞组、K562细胞上清液组中hUVEC cyclinE mRNA及CDK2mRNA表达明显增加,与对照组相比差异均有显著性（P〈0.01）。结论人白血病肿瘤细胞K562上清液能够促进hUVEC的分裂增殖。     

平阳霉素对体外培养的脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的：在体外研究平阳霉素（ＰＹＭ）对人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的作用。方法：在体外培养的ＨＵＶＥＣ中加入不同浓度的ＰＹＭ，培养０．５ｈ及１ｈ后取贴壁细胞及培养液进行研究。结果：⑴作用１ｈ后，２５μｇ·ｍｌ１以上浓度组均可见细胞多数收缩，随浓度增高，细胞脱落增多。⑵随药物浓度、作用时间增加，培养液中ＬＤＨ活性及细胞杀伤率明显升高。结论：ＰＹＭ对ＨＵＶＥＣ损伤具有剂量和时间依赖性。防止局部注射药物流失可能是治疗海绵状血管瘤的关键。     

微囊化人血管抑素基因工程细胞对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的了解海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊化人血管抑素基因工程细胞对人脐静脉内皮细胞(Huecv304)增殖的影响。方法采用APA制备微囊包裹的表达人血管抑素(human angiostatin,hAS)的基因工程细胞(APA-hAS/293细胞微囊)或空载体转染的基因工程细胞(APA-0/293细胞微囊)。分别将上述两种细胞微囊以不同浓度与人脐静脉内皮细胞Huecv304细胞共培养,于培养0、24、48及72h时,以MTT法测定Huecv304细胞的增殖情况。结果 APA-hAS/293细胞微囊对共培养的Huecv304细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),且具有良好的量效关系。而对照组APA-0/293细胞微囊对Huecv304细胞的增殖无明显抑制作用。结论体外培养的表达人血管抑素基因的工程细胞的分泌物可以通过微囊膜并对人脐静脉内皮细胞的增殖产生显著的抑制效应。     

藤梨根含药血清对人脐静脉血管内皮细胞增殖作用的影响

目的:研究藤梨根对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECS)增殖作用的影响,从抑制血管生成途径探讨藤梨根抗肿瘤的作用机制。方法:运用MTT法,观察高、中、低剂量藤梨根含药血清对HUVECS细胞活力的影响。结果:与对照组比较,藤梨根高、中剂量血清组OD值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:藤梨根含药血清有一定的抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖的作用。     

胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响.方法:采用细胞计数和MTT法观察不同稀释度胎盘多肽作用72 h后,ECV-304细胞增殖情况.同时以免疫组织化学法检测不同稀释度胎盘多肽对ECV-304细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果:一定稀释度的胎盘多肽可促进ECV-304细胞的增殖,25 ml/L即可发挥作用,200 ml/L作用最明显.ECV-304细胞PCNA表达阳性率与胎盘多肽稀释度呈剂量相关性.结论:胎盘多肽可促进体外培养的ECV-304细胞增殖.     

五氧化二砷对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 评估五氧化二砷(As_2O_5)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响,比较As_2O_5和三氧化二砷(As_2O_3)影响HUVEC增殖的差异.方法 以不同浓度As_2O_5和As_2O_3作用于指数生长期的3～5代HUVEC,采用3-(4,5-二甲基)-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)检测HUVEC存活情况,相差显微镜观察和Annexin V/PI双染法流式细胞仪观察HUVEC凋亡情况.结果 MTT检测结果显示,0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L As_2O_5作用48 h下HUVEC存活率分别为(72.5±13.8)%、(52.9±6.2)%、(15.0 ± 12.8)%、 (13.8 ± 13.2)%,其中1.0(P=0.006)、5.0(P=0.007)和10.0mg/L(P=0.008)作用组的HUVEC存活率明显低于对照组,但5.0与10.0mg/L组间差异无统计学意义(P=0.119);在1.0 mg/L As_2O_5作用下,24、48、72、96 h时HUVEC存活率分别为(88.4 ± 6.3)%、(53.1 ±8.8)%、(30.7 ± 7.9)%、(16.3 ± 4.6)%,其中48(P=0.042)、72(P=0.025)和96 h(P=0.012)时间组的HU-VEC存活率明显低于对照组.相差显微镜和Annexin V/PI双染法观测结果显示,As_2O_5可诱导HUVEC凋亡.培养48 h时,As_2O_5和As_2O_5对HUVEC的IC_(50)值分别为1.1和0.3 mg/L.结论 As_2O_5可抑制HUVEC增殖,起效浓度为1 mg/L.As_2O_5导致HUVEC死亡的主要方式是细胞凋亡.As_2O_5对HUVEC增殖的抑制作用弱于As_2O_3.     

清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响

目的研究清热消积方对体外肿瘤细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响。方法将不同浓度清热消积方与人肺腺癌细胞SPC-A-1和人脐静脉内皮细胞HUVEC共同作用,用MTT法检测清热消积方对SPC-A-1及HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞术检测对HUVCE细胞周期及凋亡的影响。结果不同浓度的清热消积方能够抑制SPC-A-1及HU-VEC细胞的增殖(P<0.01),呈现一定的剂量依赖性;并对两者存在差异细胞毒作用,对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于SPC-A-1细胞(P<0.01);可将SPC-A-1细胞诱导的HUVEC细胞阻滞于细胞周期G2～M期;并引起HUVEC细胞凋亡。结论清热消积方可抑制SPC-A-1及HUVEC细胞的增殖、阻滞SPC-A-1诱导的HUVEC细胞周期,并引起该细胞凋亡,清热消积方可能具有抗肿瘤血管形成效应。