生长抑素及质子泵抑制剂对大鼠胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的影响

目的 通过检测慢活化电压依赖性外向钾离子通道电流(Iks)的变化,探讨生长抑素及质子泵抑制剂(PPI)对胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道及胰腺外分泌的影响.方法 分离SD大鼠胰腺组织,取得胰腺腺泡细胞悬液,用EPC10膜片钳放大器记录电压钳制下的不同组别胰腺腺泡细胞Iks的电流值并比较其间差异.分组如下:冲洗液处理为对照组,5μmol/L和20μmol/L 293B组,5 nmol/L促胰液素组,5 nmol/L促胰液素+100 nmol/L或10 nmol/L或1 nmol/L生长抑素组,0.3 mmol/L 8溴—环单磷酸腺苷(8Br-cAMP)组,0.3 mmol/L 8Br-cAMP+100 nmol/L生长抑素组,1 μmol/L乙酰胆碱(Ach)组,1μmol/L Ach+100 nmol/L生长抑素组,5 nmol/L促胰液素+10-5mol/L或10-6mol/L或10-7mol/L奥美拉唑组,1μmol/L Ach+10-5 mol/L或10-6 mol/L或10-7 mol/L奥美拉唑组.组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 大鼠胰腺腺泡细胞静息膜电位为(-40±0.8)mV,当去极化至+10 mV时,对照组的Iks为(420.0±3.2) pA.经5 μmol/L和20 μmol/L 293B作用后,大鼠胰腺腺泡细胞Iks减少为对照组的(60.4±4.2)％和(30.2±3.1)％(F=6.87,P＜0.05).5 nmol/L促胰液素刺激后,Iks增加为(823.0±2.2)pA,分别加入100 nmol/L、10 nmol/L和1 nmol/L生长抑素,Iks降低至(510.0±3.2)pA,(584.0±2.8)pA和(789.0±6.9)pA(F=5.67,P＜0.05);分别加入10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7mol/L奥美拉唑后,Iks峰值未见明显变化,分别为(806.5±3.6)pA,(814.8±3.2) pA和(816.3±2.9) pA (P＞0.05).1 μmol/L Ach刺激后,Iks的峰值为(966.0±3.2) pA;加入100 nmol/L生长抑素后,Iks峰值为(942.0±6.3)pA;分别加入10-5 mol/L,10-6 mol/L和10-7 mol/L奥美拉唑后,其Iks峰值未见明显变化,分别为(956.3±10.3) pA,(957.5±8.6)pA和(960.0±8.4)pA (P＞0.05).结论 生长抑素能抑制胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的开放,PPI对该通道没有明显抑制作用.     

棕榈酸致大鼠胰腺腺泡细胞损伤中内质网应激通路的作用

目的 研究棕榈酸对大鼠胰腺腺泡细胞的损伤作用及内质网应激通路的作用.方法 采用胶原酶法体外分离大鼠胰腺腺泡细胞.将胰腺腺泡细胞与0.05和0.1 mmol/L棕榈酸分别共育1、2、3 h后,以未加棕榈酸的细胞为对照组,分别给予胆囊收缩素八肽(CCK-8)刺激,测定细胞淀粉酶释放比例;共聚焦显微镜动态观察胰腺腺泡细胞内钙离子浓度变化;透射电镜观察胰腺腺泡细胞凋亡;RT-PCR检测胰腺腺泡细胞内质网应激过程重要分子GRP78/Bip、XBP-1、GADD153/CHOP和caspase-12的基因表达.结果 体外分离的胰腺腺泡细胞与棕榈酸共同培育,给予100 pmol/L CCK-8刺激30 min后细胞淀粉酶释放比例随培育时间和棕榈酸浓度的增加而增加,且明显高于对照组(P＜0.05);细胞与0.1 mmol/L棕榈酸共同培育3 h,给予100 pmol/L CCK-8刺激后,可检测到GRP78/Bip、GADD153/CHOP、分裂的XBP-1和caspase-12的mRNA表达.透射电镜下观察到相应的胰腺腺泡细胞凋亡.细胞与0.1 mmol/L棕榈酸共同培育2、3 h后,分别给予100 pmol/L CCK-8刺激,发现细胞内钙荧光强度维持的高水平,较对照组明显增加(P＜0.05).结论 棕榈酸可增高大鼠胰腺腺泡细胞对CCK-8的敏感性,通过升高细胞内钙离子的浓度诱发内质网应激,从而引起细胞凋亡,加重胰腺腺泡细胞损伤.     

高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞缩胆囊素/三磷酸肌醇信号通路的变化及意义

目的探讨高脂血症对胰腺腺泡细胞三磷酸肌醇(IP3)介导的信号通路的影响。方法将24只大鼠随机分为两组各12只,观察组建立高脂血症模型,予高脂饲料饮食,对照组予普通饲料饮食,4周后检测两组胰腺腺泡细胞内IP3水平及缩胆囊素(CCK)刺激的腺泡细胞淀粉酶释放率。结果观察组胰腺腺泡细胞IP3水平、淀粉酶释放率均明显高于对照组,P均<0.01。结论高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞CCK/IP3信号通路发生变化,其信号分子IP3表达增高,腺泡细胞对CCK刺激的外分泌敏感性增加。     

肥胖抑制素对大鼠胰腺腺泡和胰腺小叶淀粉酶分泌的影响

目的 研究不同剂量肥胖抑制素(Obestatin)对大鼠离体胰腺腺泡及胰腺小叶淀粉酶分泌的影响.方法 体外分离大鼠胰腺腺泡,与不同浓度Obestatin(0、0.1、1、10、30 nmol/L)共培养1 h;另一组加Obestatin 30 min后加入100 pmol/L的胆囊收缩素(CCK-8)继续培养30 min.分离含有胰腺内神经末端、胰岛细胞及外分泌细胞的胰腺小叶,与不同浓度Obestatin共培养30 min;另一组加Obestatin同时加75 mmol/L KC1共培养30 min.测定培养液及细胞或胰腺小叶组织内淀粉酶含量,计算淀粉酶分泌率.结果 0、0.1、1、10、30 nmol/L Obestatin不影响胰腺腺泡细胞淀粉酶分泌率[(3.48±1.44)％、(3.70±1.39)％、(3.36±1.24)％、(3.86±1.41)％、(4.54±2.01)％].CCK-8能显著刺激腺泡细胞的淀粉酶分泌率[(13.84±2.63)％比(3.48±1.44)％,P＜0.05],但0.1、1、10 nmol/L Obestatin 对CCK-8诱导的胰腺腺泡淀粉酶分泌无显著性影响[(14.55±1.70)％、(13.79±1.81)％、(14.39±1.12)％].Obestatin(0.1、1、10、30 nmol/L)不影响胰腺小叶淀粉酶分泌率.KCl可显著刺激胰腺小叶淀粉酶分泌率[为对照组的(1.84±0.29)倍,P＜0.05],但Obestatin对KC1诱导的胰腺小叶淀粉酶分泌无显著影响[为对照组的(2.01±0.30)、(1.89 ±0.41)、(1.74±0.14)、(1.88±0.33)倍].结论 Obestatin对体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞及胰腺小叶淀粉酶分泌率无显著影响,也不能阻断或协同CCK-8和KCl对胰腺淀粉酶分泌的促进作用.     

热休克蛋白A5对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞损伤的作用研究

目的探讨热休克蛋白A5(HSPA5)对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞损伤的作用。方法分别用高浓度(1×10~(-5) mol/L)、低浓度(1×10~(-11) mol/L)的雨蛙肽建立胰腺腺泡细胞损伤模型。分别将pcDNA3.1-HSPA5、pcDNA3.1、shHSPA5和shCon以脂质体法转染胰腺腺泡AR42J细胞,用qRT-PCR法检测细胞中HSPA5 mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,Western blot检测细胞中HSPA5的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高浓度和低浓度的雨蛙肽均能造成胰腺腺泡细胞损伤,且HSPA5在其中高表达。敲减HSPA5可加重胰腺腺泡细胞的损伤,过表达HSPA5可减轻胰腺腺泡细胞损伤,还可以逆转雨蛙肽对胰腺腺泡细胞的损伤作用。结论 HSPA5可修复雨蛙肽对胰腺腺泡细胞的损伤,这将为胰腺炎的治疗提供新方向。     

蛋白质摄入量在酒精性胰腺损伤中的作用

目的探讨在长期饮酒的基础上摄入不同量的蛋白质对胰腺腺泡细胞结构和功能的影响.方法 Wistar大鼠分为酒精组(酒精 + 常规蛋白质组、酒精 + 高蛋白质组、酒精 + 低蛋白质组)和对照组,观察6个月.在光镜和电镜下观察胰腺腺泡细胞结构变化,用比色法检测胰腺组织匀浆淀粉酶和脂肪酶的含量,TUNEL法检测腺泡细胞凋亡,免疫组化检测胰腺组织切片中COX-2的变化.结果与对照组相比,酒精组大鼠胰腺腺泡细胞可见髓样结构形成.酒精 + 常规蛋白质组腺泡细胞损伤最轻,酒精 + 高蛋白质组胰腺腺泡细胞内线粒体普遍肿胀,酒精 + 低蛋白质组主要表现为粗面内质网明显扩张,甚至部分细胞胞质溶解坏死.对照组淀粉酶含量为(6532.87 ± 100.11)U/g组织、脂肪酶含量为(10193.06 ± 206.27)U/g组织,与对照组比较,各酒精组淀粉酶及脂肪酶含量均有不同程度的降低(P < 0.01).对照组胰腺腺泡细胞凋亡指数为(0.31 ± 0.10)%,酒精 + 低蛋白质组胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增加(P < 0.01).对照组COX-2的ILD为0.09 ± 0.02,酒精 + 低蛋白质组胰腺腺泡细胞胞质COX-2的ILD为0.22 ± 0.03,表达明显增加(P < 0.01).结论长期酒精摄入导致胰腺腺泡细胞退行性变,饮食中适量的蛋白质摄入对延缓胰腺病变发展十分重要.过高或过低蛋白质摄入都将促进腺泡细胞结构的破坏,加速酒精性胰腺损伤的进程.     

大黄素对脱氧胆酸诱导的AR42J细胞损伤的调节

目的:研究大黄素(Emodin)对脱氧胆酸(deoxy-cholicacid,DCA)诱导的胰腺腺泡细胞损伤的调节作用.方法:以大鼠AR42J胰腺腺泡系为研究对象,分为5组,分别为CON组、0.4mmol/LDCA刺激组、0.4mmol/LDCA刺激+Emodin(20mg/L)干预组、0.8mmol/LDCA刺激组、0.8mmol/LDCA刺激+Emodin(20mg/L)干预组.利用流式细胞术AV/PI双染法检测各组细胞凋亡/坏死率,提取细胞浆蛋白,并分别检测各组细胞培养液上清与细胞浆淀粉酶的活性.结果:0.4mmol/LDCA诱导AR42J胰腺腺泡细胞损伤以凋亡为主,0.8mmol/LDCA诱导AR42J细胞损伤则以坏死为主.20μmol/LEmodin可以明显减少0.4mmol/LDCA诱导的AR42J胰腺腺泡细胞的晚期凋亡(27.9%vs34.1%),并明显降低0.8mmol/LDCA诱导的AR42J细胞坏死(38.1%vs45.4%).大黄素对DCA诱导下AR42J胰腺腺泡细胞培养液上清及细胞浆淀粉酶活性均没有明显变化.结论:Emodin对胆汁酸诱导的胰腺腺泡细胞损伤有一定的保护性作用,对细胞淀粉酶的合成与分泌功能没有明显影响.     

钙离子信使通路在溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流中的作用

探讨溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流影响及第二信使细胞内钙在这一效应中所起的作用 ,为动脉粥样硬化的有效防治提供理论依据。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,用乙酰化低密度脂蛋白负载使之形成巨噬泡沫细胞 ;酶学荧光法检测细胞胆固醇外流 ,荧光分光光度法检测细胞内钙 ,分别螯合细胞外钙和抑制蛋白激酶C活性后检测溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响。结果发现 ,在 10～ 80 μmol/L浓度范围内 ,各剂量溶血卵磷脂组培养基中游离胆固醇浓度明显高于对照组。各剂量溶血卵磷脂引起胞内钙离子浓度升高 ,当用EGTA螯合细胞外钙后 ,溶血卵磷脂不引起胞内钙离子浓度升高 ,以及不再促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流。当蛋白激酶C活性受抑制后 ,溶血卵磷脂不再促进细胞胆固醇外流。溶血卵磷脂在 10～ 80 μmol/L浓度范围内能够促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流 ,这一效应与胞内第二信使细胞内钙浓度升高有关 ,而且钙离子 -蛋白激酶C这一信使通路介导了溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流效应。     

蛋白质摄入量在酒精性胰腺损伤中的作用

目的探讨在长期饮酒的基础上摄入不同量的蛋白质对胰腺腺泡细胞结构和功能的影响。方法Wistar大鼠分为酒精组(酒精+常规蛋白质组、酒精+高蛋白质组、酒精+低蛋白质组)和对照组,观察6个月。在光镜和电镜下观察胰腺腺泡细胞结构变化,用比色法检测胰腺组织匀浆淀粉酶和脂肪酶的含量,TUNEL法检测腺泡细胞凋亡,免疫组化检测胰腺组织切片中COX-2的变化。结果与对照组相比,酒精组大鼠胰腺腺泡细胞可见髓样结构形成。酒精+常规蛋白质组腺泡细胞损伤最轻,酒精+高蛋白质组胰腺腺泡细胞内线粒体普遍肿胀,酒精+低蛋白质组主要表现为粗面内质网明显扩张,甚至部分细胞胞质溶解坏死。对照组淀粉酶含量为(6532.87±100.11)U/g组织、脂肪酶含量为(10193.06±206.27)U/g组织,与对照组比较,各酒精组淀粉酶及脂肪酶含量均有不同程度的降低(P<0.01)。对照组胰腺腺泡细胞凋亡指数为(0.31±0.10)%,酒精+低蛋白质组胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增加(P<0.01)。对照组COX-2的ILD为0.09±0.02,酒精+低蛋白质组胰腺腺泡细胞胞质COX-2的ILD为0.22±0.03,表达明显增加(P<0.01)。结论长期酒精摄入导致胰腺腺泡细胞退行性变,饮食中适量的蛋白质摄入对延缓胰腺病变发展十分重要。过高或过低蛋白质摄入都将促进腺泡细胞结构的破坏,加速酒精性胰腺损伤的进程。     

脂氧素A_4抑制单核巨噬细胞源性树突状细胞的分化及成熟

目的 探讨内源性抗炎症脂质介质脂氧素A4对巨噬细胞向树突状细胞分化及树突状细胞成熟的影响.方法 体外培养小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),根据分组,分别以0 μg/L(对照组)、100 μg/L的脂多糖、100 μg/L的脂多糖联合100 nmol/L或500 nmol/L的脂氧素A4干预小鼠单核巨噬细胞48 h,以流式细胞仪测定细胞表面标记物MHC-II、CD80及CD86的表达,并以激光共聚焦显微镜及相差显微镜观察细胞形态.结果 脂氧素A4能显著减少脂多糖刺激下RAW264.7细胞向树突状细胞的转化,并抑制脂多糖刺激下RAW264.7细胞MHC-II及CD86的表达(P＜0.01),而对CD80表达无明显影响(P＞0.05).结论 脂氧素A4能抑制脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞向树突状细胞转化及成熟,可能通过负向调控免疫炎症反而抑制动脉粥样硬化.