花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究花青素协同奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的机制。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,并分为:对照组、花青素组、奥沙利铂组、联合组;采用MTT法检测花青素、奥沙利铂单药及联合使用对人结肠癌HCT116细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测细胞生长情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用Western blot检测TGF-βsmad信号通路相关蛋白及增殖凋亡蛋白表达情况。结果 由MTT实验发现,花青素对人结肠癌HCT116细胞48 h的半数致死浓度(IC50)为100 g/L,奥沙利铂人结肠癌HCT116细胞48 h的IC50为0. 01 g/L,两者联合使用其半数致死浓度显著下降为60 g/L和0. 6 g/L。相比对照组,花青素组和奥沙利铂组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01);相比花青素组和奥沙利铂组,联合组克隆形成率、Ki67蛋白相对表达、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 01),人结肠癌HCT116细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达、Smad2和p-Smad2蛋白相对表达、Smad3和p-Smad3蛋白相对表达、TGF蛋白相对表达均显著升高(P 0. 01)。结论 花青素协同奥沙利铂可以促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖,且作用效果显著优于使用单一药物,其作用机制可能是通过调节TGF-β/Smad信号通路实现。     

siRNA沉默ERCC1基因表达对结肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响和机制

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响。方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化。结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P<0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高。结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用。     

二甲双胍对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡的影响

目的研究二甲双胍对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度的二甲双胍处理人结肠癌HCT116细胞48 h后,采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测其对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测其对细胞凋亡及周期的影响;Western blotting法检测二甲双胍对HCT116细胞中bcl-2、Casepase-3及p53蛋白的影响。结果分别采用2.5、5、10、20和40 mmol/L二甲双胍处理HCT116细胞48 h后,CCK-8实验表明,各浓度组均可引起结肠癌细胞的增殖抑制作用,呈浓度依赖性;流式细胞仪术结果显示,经药物处理后,与对照组相比,细胞凋亡细胞比例逐渐增加。另外,肿瘤细胞G0/G1期细胞比例无明显改变,S期细胞的比例减少,但G_2/M期细胞的比例逐渐升高;Western blotting检测显示,二甲双胍可抑制抗凋亡蛋白bcl-2的表达,激活Casepase-3、p53蛋白表达。结论二甲双胍可抑制结肠癌细胞增殖,G_2/M期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制bcl-2的表达,活化Casepase-3、p53蛋白表达有关。     

顺铂对结肠癌细胞株HCT-116凋亡及存活素表达的影响

目的 探讨结肠癌细胞株HCT-116对化疗药物顺铂不敏感的原因与机制.方法　观察不同浓度顺铂(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/ml) 对HCT-116细胞凋亡及低浓度顺铂对抗凋亡基因存活素(survivin)mRNA及蛋白表达的影响,用流式细胞仪检测凋亡率;荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;Western印迹法检测survivin蛋白的表达.结果 高浓度 (5.0、10 μg/ml)顺铂对HCT-116细胞有较强促进凋亡作用,而低浓度 (0.1、0.5、1.0 μg/ml)顺铂干预24 h后,促进细胞凋亡的作用不明显;HCT-116细胞在1.0 μg/ml顺铂作用下, survivin mRNA及蛋白表达在24 h均有明显升高.结论 顺铂可诱导HCT-116细胞的凋亡,但该细胞对低浓度顺铂不敏感.survivin表达增高可能是HCT-116细胞对顺铂细胞毒性药物作用不敏感的原因之一.     

蟾蜍灵联合奥沙利铂对胃癌MGC803细胞增殖抑制及凋亡的影响

目的 研究蟾蜍灵联合奥沙利铂诱导人胃癌细胞株MG C803凋亡及对凋亡因子Bax、Bcl-2的影响.方法 应用MTr法检测不同浓度蟾蜍灵及奥沙利铂单药及联合对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡和周期阻滞;Western印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)蟾蜍灵及奥沙利铂单药均抑制MGC803细胞增殖,呈剂量时间依赖效应,且联合用药的细胞增殖抑制率高于单药组,差异有统计学意义.24、48 h及72 h联合指数(CI)分别为0.693、0.596、0.481;(2)药物作用细胞24h,流式细胞仪检测10 nmol/L蟾蜍灵及10 μg/ml奥沙利铂凋亡率分别为2.9％及4.3％,联合用药组为14.13％,与单药组对比有统计学差异;(3)Western印迹结果显示,蟾蜍灵、奥沙利铂单用于胃癌细胞24h后,Bax及Bcl-2表达无明显变化,而联合组Bax蛋白表达上调到对照组145.94％,Bcl-2蛋白下调到对照组57.14％.结论 蟾蜍灵联合奥沙利铂协同诱导胃癌MGC803细胞凋亡,且可能与下调Bcl-2、上调Bax蛋白有关.     

褪黑素对胰腺癌细胞株SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的 探讨褪黑素(MT)体外抑制胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用.方法 以不同浓度的MT(0.1、0.5、1.0、2.5及5.0 mmol/L)处理体外培养的胰腺癌细胞株SW1990细胞24、48、72 h.用MTT法测定细胞增殖,以Annexin V/PI检测细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期及Western blotting检测细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 MT呈浓度和时间依赖性抑制SW1990细胞的增殖.0.1～5.0 mmol/L MT作用48 h后,细胞的增殖抑制率为7.4%～85.8%.1.0～5.0 mmoL/L MT作用48 h后,G0/G1期比例为72.6%～85.3%,细胞凋亡率为21.5%～41.7%,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值下降.结论 MT可以抑制SW1990细胞增殖,其机制可能与上调Bax表达,下调Bcl-2表达,促进细胞凋亡,将细胞周期阻止于G0/G1期有关.     

奥沙利铂对人结肠癌细胞凋亡及FADD的影响

以不同浓度（0、25、50和100μg/ml）的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株（SW480）,分别于12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）mRNA水平,Western blotting检测FADD蛋白水平。结果奥沙利铂对SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性,SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率呈浓度依赖性的增加（P〈0.05）。不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h后,FADD mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性增加。提示奥沙利铂能诱导SW480细胞凋亡,其作用机制可能与其激活凋亡死亡受体途径使FADD表达上调有关。     

survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响.方法 人工合成survivin基因ASODN和正义ODN(SODN),并行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径转染SMMC-7721;分别用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA和蛋白表达;用MTT法检测ASODN对SMMC-7721增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率;倒置显微镜观察细胞形态变化.结果 SMMC-7721可强表达survivin mRNA和蛋白;ASODN呈浓度依赖性抑制survivin mRNA和蛋白表达及SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M期.SODN对survivin mRNA和蛋白及SMMC-7721的增殖、细胞周期无明显抑制作用.结论 脂质体介导转染survivin ASODN可抑制细胞增殖、使细胞阻滞于G2/M期,从而促进细胞凋亡.     

顺铂联合足叶乙甙对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的观察顺铂联合足叶乙甙（PE方案）对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,加入不同浓度的顺铂和足叶乙甙,作用24 h。MTT法检测细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞周期,免疫细胞化学法检测细胞的Cyclin B1、p34cdc2和survivin。结果足叶乙甙和不同浓度的顺铂联合应用,可明显抑制SKOV3细胞的增殖,S期和G2-M期细胞增加,G0-G1期细胞减少,细胞Cyclin B1、p34cdc2和survivin表达下调。结论顺铂联合足叶乙甙对SKOV3细胞具有协同抑制作用,阻滞细胞周期,其机制可能与细胞Cyclin B1p、34cdc2和survivin的表达下调有关。     

白藜芦醇通过G2期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

[目的]探讨白藜芦醇治疗结肠癌的作用机制。[方法]以10mg/ml浓度的白藜芦醇处理HCT116细胞,进行损伤愈合实验及克隆集落实验,检测白藜芦醇对结肠癌细胞株迁移及增殖能力的影响。使用Cytation5细胞成像微孔板检测仪动态检测HCT116细胞增殖情况。通过流式细胞术检测白藜芦醇对HCT116细胞凋亡以及对细胞周期的影响。运用Western Blot技术检测白藜芦醇处理后NF-κB蛋白的表达情况。[结果]给予白藜芦醇24h后HCT116细胞迁移能力减弱,增殖减少,凋亡增加,并且使细胞周期阻滞于G2期,蛋白NF-κB表达减少。[结论]白藜芦醇抑制HCT116细胞的迁移和增殖,并且促进凋亡及阻滞其周期于G2期,同时NF-κB蛋白表达降低,提示白藜芦醇上述抗癌效应与NF-κB通路密切相关。