感染亚洲不同地域品系日本血吸虫小鼠的肝虫卵肉芽肿大小

目的 :了解亚洲不同地域品系日本血吸虫对宿主的致病性。方法 :应用相同宿主 C57BL小鼠在同等条件下感染亚洲 7地域品系日本血吸虫后 ,观察和比较其肝虫卵肉芽肿体积大小。结果 :虽然不同地域品系日本血吸虫对小鼠肝组织所致的虫卵肉芽肿体积大小有异 ,但以亲动物的中国台湾品系所致的单个卵的增生期虫卵肉芽肿平均体积为最小。它与亲人体的中国云南、中国广西、中国四川、中国皖鄂、日本、菲律宾 6地品系所致的增生期虫卵肉芽肿平均体积具有显著性的差别。结论 :中国台湾品系日本血吸虫尾蚴感染宿主后 ,寄生虫与宿主的相互关系可能具有某些独特性 ,或存在免疫应答程度上的差异。     

中国大陆日本血吸虫品系的研究 Ⅸ、肝虫卵肉芽肿的大小

比较了安徽、湖北、广西、四川、云南5地日本血吸虫引起C57BL小鼠和恒河猴肝虫卵肉芽肿的大小。结果表明,在相同感染期的条件下,感染同一地区日本血吸虫的动物肝组织中含单个卵的增生期虫卵肉芽肿平均体积随宿主种类的不同而异,恒河猴的虫卵肉芽肿体积远较C57BL小鼠的为大。在相同宿主C57BL小鼠中,云南和广西两地虫卵引起的肉芽肿平均体积较湖北、安徽和四川的为大,差别有显著意义。在恒河猴宿主,亦以云南和广西的虫卵肉芽肿平均体积较湖北、安徽和四川的为大,并与后两者(皖、川)的差别有显著意义。以上结果提示中国大陆各地日本血吸虫对宿主的致病性或毒力似有某些差别。     

日本血吸虫感染动物经免疫抑制后组织内虫卵肉芽肿病变与抗原及抗体水平变化的研究

应用醋酸可的松（ACT）腹腔注射日本血吸虫感染小鼠后观察其对肝、肠组织内虫卵抗原、特异性抗体的影响及对虫卵肉芽肿形成的抑制作用。实验结果表明:注射ACT后,组Ⅰ（1mng/d）感染小鼠肝、肠组织内不同时期的虫卵抗原及抗体GMRT均显著地低于对照组;肝、肠组织内肉芽肿的平均直径（μm）也明显地小于对照组。认为ACT对日本血吸虫感染小鼠组织内虫卵肉芽肿病变、特异性抗原和抗体反应均显示抑制作用。本项研究进一步阐明了感染宿主虫卵肉芽肿病变机理,可为今后寻找控制虫卵肉芽肿病变的有效方法,提供依据。     

活化剂HYP协同“425”制剂抗日本血吸虫卵肉芽肿病变的效果

目的:了解活化剂HYP能否增强“425”制剂抗日本血吸虫卵肉芽肿病变的效果。方法:采用皮肤感染日本血吸虫尾蚴制成BALB/c肝内虫卵肉芽肿病变模型,通过检测和计算肝内肉芽肿平均直径、面积和体积观察“425"制剂的治疗作用,以及活化剂HYP的协同增效作用。结果:用药2周与对照组相比,其肝内虫卵肉芽肿平均直径下降率42.12％,平均面积下降65.71％,平均体积下降80.4％,用药3～4周时平均直径、面积和体积下降率分别为31.61％～47.48％,55.14％～73.19％和71.15％～75.86％。单用“425”制剂2～3周,肝内肉芽肿大小与感染对照鼠无显著性差异,应用4周时其平均面积和体积分别下降14.15％和7.76％。结论:活化剂HYP具有明显的协同增强抗宿主肝内日本血吸虫卵肉芽肿病变的效果。     

亚洲不同地域品系日本血吸虫若干生物学性状的比较

目的：在同一实验室中比较和分析亚洲不同地域品系日本血吸虫的生物学特性。方法：在相同可容宿主和同等条件下，对中国云南、中国广西、中国四川、中国皖鄂、中国台湾、日本和菲律宾７地域品系日本血吸虫的若干生物学性状进行了比较。结果：亲动物的中国台湾品系日本血吸虫的哺乳动物开放前期最长，平均为４５．１±３．２ｄ，而其它亲人体的６地域品系均在３９．４±１．４ｄ以下，两者差别极显著。在形态度量学方面，菲律宾、日本、中国台湾和中国云南品系的尾蚴明显地较其它品系的为短小，且其成虫，尤其雌虫的平均体长也较短。菲律宾和中国云南品系雄虫含７个睾丸的百分比显著地较其它品系的为低。７地域品系日本血吸虫的卵指数平均为６７—７７。结论：亚洲不同地域品系日本血吸虫的哺乳动物开放前期及若干形态度量学存在差别。     

吡喹酮治疗对血吸虫感染小鼠免疫病理变化的影响

目的 :阐明吡喹酮治疗对血吸虫感染宿主免疫病理的影响。方法 :应用免疫组织化学和图像分析技术 ,观察日本血吸虫感染小鼠在吡喹酮治疗后肝组织内可溶性虫卵抗原 ( SEA)及抗体水平和虫卵肉芽肿的变化。结果 :治疗后 5wk,与对照组相比 ,治疗组减虫率为 98.3% ,平均肝重量和体积均显著减小 ,治愈小鼠的肝表面结节明显减少 ,组织内沉积的虫卵已钙化 ,部分虫卵肉芽肿已呈纤维疤痕样改变 ,对照组肝内仍可见慢性和少量急性虫卵肉芽肿。治疗组肝组织内抗原水平下降 ,而其抗体水平不受影响 ,肝内虫卵肉芽肿的平均直径和面积均较对照组显著缩小 ( P<0 .0 1)。结论 :吡喹酮治疗可使肝组织内 SEA水平下降 ,从而抑制了虫卵肉芽肿的病变 ,但不能逆转已形成的虫卵肉芽肿病变。     

柯里拉京对血吸虫病小鼠肝组织白细胞介素-13表达的影响及其抗肝纤维化疗效研究

目的：研究柯里拉京对感染日本血吸虫病所致小鼠肝组织虫卵肉芽肿的疗效和抗肝纤维化的作用,并观察其对肝组织白细胞介素13（IL-13）表达的影响。方法：21只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、治疗组,每组7只,模型组和治疗组小鼠同时感染日本血吸虫,感染6周后治疗组小鼠给予柯里拉京生理盐水溶液灌胃30天,同时正常组和模型组小鼠给予等量生理盐水灌胃。干预结束后比较各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小、纤维化评分,同时检测肝组织羟脯氨酸与IL-13含量。结果：柯里拉京组小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小、纤维化评分、肝组织羟脯氨酸及IL-13含量明显低于模型组,均具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：柯里拉京能明显减轻血吸虫虫卵肉芽肿所致肝纤维化,减少促纤维化型细胞因子IL-13的分泌,延缓纤维化的进展。     

T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活及肝脏虫卵肉芽肿形成的影响

目的观察T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活时间,肝脏虫卵肉芽肿形成及日本血吸虫雌虫产卵的影响。方法T细胞缺陷小鼠（裸鼠）和BALB／c小鼠各20只,每只感染日本血吸虫尾蚴（25±1）条,记录感染后存活时间。感染后第42d,从2组存活小鼠中各随机取7只剖杀,取肝组织,计数肝内虫卵;制作肝组织切片,观察虫卵肉芽肿病理学变化,并测量单个虫卵肉芽肿直径。结果20只裸鼠感染日本血吸虫后46d全部死亡。裸鼠肝组织中的雌虫产卵数为（4759．5±2161．3）个／条,BALB／c小鼠为（7323．4±2254．6）个／条,差异有统计学意义（P％0．05）。裸鼠肝脏中单个虫卵肉芽肿直径为（138．4±31．9）μm,与感染组BALB／c小鼠（316．4±68．2）μm比较,差异有统计学意义（P〈0．01）,且不能形成典型局限性虫卵肉芽肿,肉芽肿内嗜酸性粒细胞明显减少,周围肝组织伴有大面积坏死。结论宿主T细胞对虫卵肉芽肿的形成和维持感染宿主的生存具有重要作用。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿免疫调节作用的研究

目的研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对虫卵肉芽肿的影响。方法 ＮＰ３０腹腔注射主动免疫ＩＣＲ小鼠,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水,分别在尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周处死,观察和比较肝内虫卵肉芽肿的形成和演变。应用计算机图像分析技术,测量虫卵肉芽肿大小。结果尾蚴攻击感染第 １２周以后, ＮＰ３０免疫组虫卵肉芽肿的直径明显低于 ＳＰ２／０对照组,虫卵肉芽肿的演变时相提前,并出现２种特殊类型的肉芽肿。结论ＮＰ３０能减轻日本血吸虫对宿主造成的免疫病理损害。     

小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的建立

本文报告应用腹腔注射SEA致敏C57BL/6小鼠,继之经脾脏攻击注射虫卵的方法,建立了小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型,并与自然感染模型作比较.结果证明,SEA致敏组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为100%.其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程及单虫卵肉芽肿的直径和面积均与自然感染模型相似.本实验表明经脾脏注射虫卵及SEA致敏建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型是一种良好的肉芽肿实验动物模型.     

日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间相似抗原的研究

目的 :分析日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间共同抗原的相似程度。方法 :应用 EITB和 ELISA技术对此 2种寄生虫可溶性抗原进行了血清学交叉反应分析。结果 :EITB显示 :在Ts ML A中 ,4 4、 53、 60、 64、 66/ 70 k Da和约 10 0 k Da的抗原为 Sj IRS识别 ,而 31、 4 2、 4 6、 51/53和 58/ 60 k Da成分为 α- Sj EARS识别 ;在 Sj EA中 ,4 6、58和 64k Da抗原为 Ts IRS识别 ,58、60、64和 70 k Da成分为α- Ts MLARS识别。EL ISA显示 :在 Sj IRS中抗 Ts抗体滴度显著高于在Ts IRS中所含抗血吸虫卵的抗体滴度。结论 :日本血吸虫卵与旋毛虫肌蚴间存有较多的共同抗原决定簇 ,但两者间的相似程度有明显差异。     

经脾注射日本血吸虫虫卵诱发C57BL／6鼠肝脏细胞反应的初步探讨

为探讨日本血吸虫虫卵肉芽肿形成机理和病理作用，本实验改进Ｂｏｔｒｏｓ方法，设虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）致敏组和未致敏组，选用Ｃ５７ＢＬ／６鼠经脾注射虫卵诱发小鼠日本血吸虫肝肉芽肿，并对虫卵诱发的细胞反应进行了观察。结果显示：（１）经脾注射虫卵诱发小鼠肝肉芽肿方法简单、安全、有效；所建模型，特别是致敏组模型在肉芽肿形成机理研究中较有价值。（２）ＳＥＡ致敏可加强日本血吸虫肝肉芽肿形成．（３）抗体或抗原－抗体复合物作用参与日本血吸虫肝肉芽肿形成。（４）虫卵及虫卵肉芽肿均对肝细胞具有一定损伤作用。     

Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni

To investigate the relation between the size of circumoval granulomas and hepatic fibrosis, a variety of mouse strains infected with Schistosoma mansoni were examined and the number of eggs in the tissues, the fibrotic responses to the eggs, and the volume of the granulomas were determined. Marked differences in granuloma volume and in hepatic fibrosis were found between mouse strains, and those strains with the largest granulomas also showed the most hepatic fibrosis. On the other hand no significant correlation between granuloma size and hepatic fibrosis was found in the progeny of the F2 generation and backcrosses between F1 mice and the parental strains when crosses were made between Nmri mice (high granuloma volume and high fibrosis) and C57BL/6 mice (low granuloma volume and low fibrosis). Hepatic fibrosis per egg decreased with increasing infection intensity while granuloma volume was unaffected, indicating that fibrosis and granuloma size are at least in part modulated by different factors. The number of eggs found in the tissues per worm pair and the proportion of eggs in the liver also decreased as infection intensity increased. Some influence of the major histocompatibility complex on both granuloma size and fibrosis was found. Congenic mice on the C57BL/10 and C3H/HeSn backgrounds showed larger granulomas in H-2b than in H-2k mice, but no such correlation was found in comparing C57BL/6 mice with B6.H-2k mice. Less hepatic fibrosis was found in B10.M (H-2f), B10.SM (H-2v), and B10.RIII (H-2r) animals than in C57BL/10 mice. The regulation of granuloma size and of hepatic fibrosis is clearly complex and involves genes both outside of and within the major histocompatibility complex.     

日本血吸虫重组膜外蛋白rSj29免疫诊断的初步应用

目的用重组日本血吸虫相对分子质量(Mr)29000膜外蛋白(rSj29)作为诊断抗原,探讨其在血吸虫病流行区免疫诊断的价值。方法在血吸虫病低度流行区芜湖南陵县弋江镇蒲桥和竞河村现场采血394份,同时采集粪样,用改良加藤法(三送九检)或集卵孵化法检查。制备rSj29和成虫粗抗原(AWA),分别用2种抗原进行间接ELISA(单盲法)和间接红细胞凝集试验(IHA)检测血样。结果粪检、IHA、rSj29-ELISA和AWA-ELISA检测结果显示,阳性率分别为4.8%(19/394)、62.2%(245/394)、68.3%(269/394)和89.9%(354/394)。rSj29-ELISA和IHA检测结果差异无统计学意义(χ2=3.2,P0.05),一致率为80.7%(318/394)。IHA、rSj29-ELISA和AWA-ELISA与粪检符合率分别为42.6%(168/394)、36.0%(142/394)和15.0%(59/394)。结论 rSj29间接ELISA法对日本血吸虫病有一定诊断价值。     

曼氏血吸虫感染鼠肝脏虫卵肉芽肿反应及胶原含量定量测定

应用形态计量学方法和化学染色法 ,分别对 6个品系小鼠定量感染曼氏血吸虫后 7.5 wk的肝脏石蜡切片中虫卵肉芽肿面积和肝脏胶原纤维含量进行了定量观察。结果表明 ,感染鼠肝脏虫卵肉芽肿面积在不同种系小鼠间显示出一定差别 ,肝脏胶原含量较对照组均有明显增加。经相关分析 ,不同种系感染鼠肝脏虫卵肉芽肿面积与肝脏胶原含量间不存在相关关系。鉴于虫卵肉芽肿形成与肝纤维化过程在时相上的差别 ,提示两者受不同的免疫病理机制决定     

A study of immunomodulatory genes responses to macrophages of Schistosoma japonicum infection during different stages by microarray analysis

Macrophages initiate, modulate, and also serve as final effector cells in immune responses during the course of schistosomal infections. In this study, we investigated the gene expression profile and functional changes of macrophages in immune responses against the Schistosoma japonicum by microarray analysis. Hierarchical clustering analysis demonstrated that a significant switch in gene transformation associated with a type-1 response and linked with a type-2 cytokine phenotype occurs between 4.5 and 8 weeks post-infection. Moreover, the gene profiles at 3 later time-points following egg challenge were similar in complexity and magnitude. The data also showed that there were mostly inhibition of gene expression related TLR, IFN, MHC and TNFrsf at the switch between 4.5 and 8 weeks post-infection, It is suggested that these immunomodulatory genes may be down-regulated in defense against S. japonicum eggs and granuloma pathology. The induction of alternatively activated macrophage (AAM?) was important for dampening the inflammation in hepatic granulomas and contributing to a decrease in cytotoxicity. The gene expressions involved in repair/remodeling during liver fibrosis were also observed after egg production. Understanding the immune mechanisms associated with parasitic resistance, pathology of parasite infection, and parasite growth will provide useful insight on host–schistosome interactions and for the control of schistosomiasis.     

日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌(E.coli BL21)中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源(HLA)Ⅱ类、鼠源(H2-d)Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a(+)-SjPGAM-SjEnol,并在E.coli BL21中表达。用蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol(A组)、pET28a-SjPGAM(B组)、pET28a-SjEnol(C组)(各27μg)与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组(D组)和空白对照组(E组)。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数(EPG),计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量(Mr)为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组(18.5%)、C组(14.7%)比较,差异有统计学意义(均P0.05);肝减卵率与B组(47.5%)、C组(30.5%)比较,差异也有统计学意义(P0.05,P0.01)。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平(2.372±0.268),与D组(0.490±0.138)、E组(0.220±0.088)间的差异有统计学意义(P0.01)。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察

目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2～18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8～18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。结果静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5～9.0mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1∶16和1∶51200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25000和68000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。结论静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。