海马活化素βA亚基基因表达与神经元对抗兴奋性损害内源性保护效应的关系

背景自从发现活化素可促进鸡视网膜神经细胞存活以来,活化素在神经系统的研究受到关注.近年发现,缺血、缺氧等多种脑损伤模型的海马组织活化素βA mRNA表达上调,但癫痫活动后活化素βA mRNA表达的变化有待研究.目的观察小鼠毛果芸香碱(pilocarpine,C)致惊后不同时间海马活化素βAmRNA的表达,探讨其作用机制.设计以实验动物为研究对象,随机对照的实验研究.单位一所大学医院的神经内科和一所大学神经病学研究所.材料实验于2001-11/2002-07在复旦大学附属华山医院神经病学研究所及上海医学院病理室完成.选择8～10周龄健康雄性C57BL/6小鼠168只,体质量20～25 g,由中国科学院上海实验动物中心提供.干预实验组小鼠腹腔注射PC 350mg/kg(10 g/L),并于注射PC前30min皮下注射东莨菪碱1 mg/kg,以拮抗其外周胆碱能反应.注射PC后呈连续的肌阵挛或全身强直阵挛发作并持续1 h为癫痫持续状态(statusepilepticus,E)模型鼠.成模后即刻腹腔注射安定(4 mg/kg)终止发作,未成模鼠(NSE)于注射PC 1.5 h后亦注射相同剂量的安定.对照组小鼠用生理盐水代替毛果芸香碱腹腔注射,余同实验组.SE鼠、NSE鼠及对照组鼠按致模后时间随机分为0,,3,,24,8 h 6小组,每小组6只(原位杂交分析中无NSE组及0 h点).主要观察指标应用RT-PCR观察SE成模鼠与NSE鼠不同时间海马活化素βA mRNA的表达;应用原位杂交观察SE后不同时间小鼠海马活化素βA mRNA表达的分布.结果NSE鼠与对照组鼠海马活化素βA mRNA的表达各时间点间无明显变化;SE开始时(0 h)活化素βA mRNA(0.49±0.11)有一过性显著将低,至SE 1 h时(0.73±0.12)迅速回升至对照水平(0.74±0.13).活化素βAmRNA继续增高, h达(0.97±0.24), h达(1.34±0.19),并维持至近24 h(0.98±0.17),此后于48 h(0.83±0.09)下降至略高于对照水平.与对照组相比,,6,4 h增高有显著差异(t=2.668,.289,2.916,＜0.001～0.05).活化素βA mRNA表达明显上调的部位最早于SE后3 h出现于海马CA2与DG区, h后CA3区亦见明显表达,24 h后仅CA2,A3区有表达,8 h后仅CA2区可见少量阳性细胞.结论PC诱导的SE能明显上调海马活化素βA mRNA的表达,而NSE对之无明显上调作用;活化素βA mRNA表达的上调很可能是神经元对抗兴奋性损害的一种内源性保护效应.     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

颞叶癫痫大鼠海马内谷氨酸脱羧酶蛋白表达的动态变化及其意义

目的：观察大鼠颞叶癫痫发生后海马谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase，GAD)亚型GAD67蛋白的动态变化，探讨其意义和可能机制。方法：112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42)，实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型，对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3，6，12，24，48h，7，30d为研究的时间点，颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化，大鼠处死前进行脑电图描记。免疫组织化学法检测GAD67蛋白的表达。结果：海人酸致痫后6h实验组大鼠海马齿状回、CA3,CA1区的GAD67蛋白表达分别为0．60&;#177;0．02，0．61&;#177;0．02，0．58&;#177;0．02，致痫后24h分别为0．33&;#177;0．03，0．32&;#177;0．03，0．31&;#177;0．02，均较对照组(0．23&;#177;0．02,0．21&;#177;0．02，0．20&;#177;0．02)增高(P&;lt;0．05或0．01)，6h时增高显著。结论：颞叶癫痫大鼠海马GAD67蛋白表达的增高是癫痫发生后机体的内源性抗痫机制之一。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景：睡眠剥夺是否引起细胞变性，其信号传导是否与某些基因调控有关。目的：探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计：随机对照实验研究。地点和材料：实验地点：郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠，雌雄不限，体质量(200&;#177;20)g，由河南省实验动物中心提供。干预：采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化，应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2．bax mRNA表达。主要观察指标：睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化；海马bcl-2和bax mRNA表达。结果：快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1，CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多，异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6．60&;#177;2．24)％，(1．69&;#177;0．45)％，(6．87&;#177;1．32)％，(1．74&;#177;0．98)％。CA1，CA3区细胞凋亡率和CA2，CA4区相比较差异有显著性意义(t=5．26～6．95，P&;lt;0．05)。bc1-2mRNA阳性信号表达积分值较强，四个区之间差异无显著性意义，bax mRNA表达增强[CA1为(211．12&;#177;59．85)；CA3为(205．56&;#177;56．99)]与CA2和CA4区[(123．42&;#177;22．80)。(124．21&;#177;20．47)]比较差异有显著性意义(t=3．20～4．36．P&;lt;0．05)。结论：睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡，与凋亡相关的bc1-2。bax mRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制

目的：观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核昔酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响，探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法：双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水，应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果：①反义组大鼠海马珊基因mRNA表达水c-fos平23．40&;#177;8．87明显低于生理盐水组60．38&;#177;15．52和错义组53．14&;#177;11．71，差异有显著性意义(F=22．54，P&;lt;0．001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义，(P&;gt;0．05)。②反义组大鼠海马c-fos蛋白阳性细胞数在海马CA1，CA3和齿状回分别为16．33&;#177;6．18，27．00&;#177;9．72和109．67&;#177;23．44，均低于生理盐水组和错义组，而错义组与生理盐水组之间。c-fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论：神经肽Y2受体可能是通过调节。如c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：观察穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2-2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学染色。激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达及其共存表达的变化。 结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A绿色荧光细胞数与对照组比较显著减少[皮质区（11．85&;#177;8．11），（22．14&;#177;8．68），P〈0．05]；[海马CA1区（11.28&;#177;3．04），（17.28&;#177;5．85），P〈0．05]。淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶红色荧光细胞数与对照组比较显著增多[皮质区（21.14&;#177;6．20），（5．57&;#177;3.10），P〈0．01];[海马CA1区（12．43&;#177;6．24），（3．42&;#177;2．76），P〈0.01]。海马CA1区呈现黄色荧光的舣标细胞数与对照组比较显著增多[（5．71&;#177;3．64），（0．57&;#177;1．51），P〈0．01]，大脑皮质区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较，差异无显著性意义[（5．71&;#177;3．14），（2．85&;#177;3．07）。P〉0．05]。 结论：穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区出现淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多、酪氨酸激酶A表达减少，海码CA1区共存细胞表达增多现象，说明神经生长因子系统与淀粉样β蛋白前体系统可能存在内在的相互联系。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后fas基因和fasL基因表达变化的规律

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas mRNA和FasL mRNA的表达变化。方法：实验于2004-03-01／06-30在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心进行。取健康Wister大鼠48只随机分为6组，即假手术组，缺血2h再灌注6，12，24，48和72h组，每组8只鼠。线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及再通模型，应用RT-PCR技术检测MCAO及再通后缺血半暗带皮质Fas mRNA和FasL mRNA表达。结果：假手术组Fas mRNA，FasL mRNA均未见表达，再灌注6h起二者开始有少量表达(分别为0．23&;#177;0．02和0．06&;#177;0．01)，Fas mRNA的表达高峰在再灌注24h(0．94&;#177;0．06)，FasL mRNA的表达高峰在再灌注48h(0．35&;#177;0．02)，再灌注72h二者的表达均明显下降(分别为0．45&;#177;0．03和0．22&;#177;0．03)。结论：脑缺血再灌注可诱导Fas mRNA和FasL mRNA表达。     

何首乌对淀粉样β蛋白致海马神经元的凋亡和学习记忆障碍的作用

目的：探讨凋亡机制在凝聚态淀粉样β蛋白(beta-awyloid protein，Aβ)脑内致阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)作用中的意义及何首乌(PMB)对Aβ脑内神经毒性的干预效果。方法：实验于2002-09／2003-02在湘雅医学院解剖学实验室进行。取SD大鼠40只，经Y迷宫测试淘汰4只，36只随机分为生理盐水组，假手术组，模型组和何首乌组。用Aβ1～40微量注射至大鼠右侧海马，建立AD模型，用何首乌进行干预，于不同时间点分别进行电Y迷宫测试，用免疫组化染色法测定Bcl-2阳性神经细胞数的表达，及TUNEL法检测海马神经细胞凋亡的表达。结果：模型组的学习记忆尝试次数为(27．8&;#177;7．5)次，海马Bcl-2蛋白表达为(8．71&;#177;1．83)个／视野，凋亡细胞为(13．83&;#177;3．26)个／视野：何首乌组的学习记忆尝试次数为(15．2&;#177;2．9)次，海马Bcl-2蛋白表达为(13．5&;#177;2．17)个／视野，凋亡细胞为(9．57&;#177;2．16)个／视野，与对照组比差异仍有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论 Aβ1～40人海马引起大鼠学习记忆损害，可能与其诱导脑内神经元的凋亡，抑制Bcl-2的表达有关，何首乌对模型鼠的学习记忆障碍具有保护作用，可能与促进Bcl-2的表达而减轻Aβ致AD鼠脑海马神经细胞的凋亡有关。     

大鼠脑组织经反复高加速度暴露后bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶的表达

背景：反复高正加速度(+Gz)暴露可引起脑损伤，但其病理机制尚不清楚。目的：了解反复高正加速度(+Gz)暴露后大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶基因的表达变化，探讨细胞凋亡在反复高+Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。设计：以SD大鼠为研究对象的随机对照实验研究。单位：一所医院的航空医学研究中心。材料：选用体质量为180～220g健康雄性SD大鼠26只，随机分成对照组和+Gz暴露组，其中对照组4只，+Gz暴露组22只。干预：将大鼠固定于动物离心机的转臂上，头朝向离心机轴心，+Gz暴露组条件为G值+14Gz，增长率1．5G／s，峰值持续时间45s，共作用3次，两次中间间歇0．5h。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤，所承受的G值为+1Gz。分别于暴露后0．5，6．0，24．0和48．0h断头取脑。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测对照组和+Gz暴露后0．5，6．0，24．0和48．0h大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平，并用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测脑组织中凋亡细胞。主要观察指标：各组大鼠+Gz暴露后大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平。结果：+Gz重复暴露后6h，大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0．32&;#177;0．08)明显低于对照组(0．69&;#177;0．15)，bax，p53和ICE mRNA表达水平[(．55&;#177;0．09)，(0．48&;#177;0．12)，(0．79&;#177;0．12)]明显高于对照组[(0．33&;#177;0．09)，(0．31&;#177;0．05)，(0．51&;#177;0．09)]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。+Gz重复暴露后24h，大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0．28&;#177;0．05亦明显低于对照组(0．69&;#177;0．15)，bax，p53和ICEmRNA表达水平[(0．61&;#177;0．15)，(0．54&;#177;0．07)，(0．84&;#177;0．15)]亦明显高于对照组[(0．33&;#177;0．09)，(0．31&;#177;0．05)，(0．51&;#177;0．09)]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。+Gz重复暴露后0．5h和48h，大鼠脑组织bcl-2，bax，p53和ICEmRNA表达水平与对照组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。+Gz重复暴露后6h和24h在大脑皮质、海马CA1区和纹状体可见部分神经元细胞发生凋亡。结论：反复高+Gz暴露可引起大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶表达变化，细胞凋亡可能是反复高Gz暴露致脑损伤的机制之一。     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2003—03／2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注，促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U／b注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2，6，12，24，48h，应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数：生理盐水对照组再灌注后12，24，48h比正常对照组细胞数明显减少[(268．6&;#177;44．5)个／视野。(240．8&;#177;22．5)个／视野，(201．8&;#177;30．7)个／视野，(337．3&;#177;45．3)个／视野，t=2．845—5．587，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286．7&;#177;33．8)个／视野，(271．9&;#177;30．4)个／视野，(258．3&;#177;29．5)个／视野，t=3．189—5．589，P&;lt;0．01]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24、48h比正常对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显增多[(16．5&;#177;3．5)个／视野，(28．4&;#177;6．5)个／视野，(48．8&;#177;7．6)个／视野，(60．7&;#177;10．2)个／视野，(81．6&;#177;12．3)个／视野，(8．8&;#177;2．1)个／视野，t=2．985—6．324，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显减少[(12．7&;#177;3．4)个／视野，(21．5&;#177;5．8)个／视野，(32．7&;#177;4．6)个／视野，(42．8&;#177;6．6)个／视野，(51．8&;#177;9．5)个／视野，t=3．457—6．347，P&;lt;0．01]。③脑海马CA1区热休克蛋白70表达水平：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24，48h比正常对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．264&;#177;0．027，0．328&;#177;0．053，0．475&;#177;0．067，0．587&;#177;0．095，0．512&;#177;0．063，0．225&;#177;0．024，t=3．254—6．028，P&;lt;0．01)，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12h比生理盐水对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．335&;#177;0．033，0．448&;#177;0．055，0．647&;#177;0．078，t=3．262—5．483．P&;lt;0．01)。结论：促红细胞生成素治疗可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，使热休克蛋白70表达上调，从而起到了对神经细胞的保护作用。     

压力超负荷早期大鼠心肌组织转化生长因子β1及c—myc和c-jun mRNA表达的差异

目的：观察转化生长因子β1，c-myc和c-jun癌基因mRNA在压力超负荷早期大鼠心肌中的表达。 方法：实验于2004-11／2005—07在华中科技大学同济医学院附属协和医院老年病科老年医学实验室完成。选择雄性Wistar大鼠50只，随机数字表法分为压力超负荷组和假手术组，每组25只。采用腹主动脉缩窄法建立左室压力超负荷模型，分子杂交系列观察心肌组织转化生长因子β1，c—myc和c-jun癌基因mRNA的变化，并用计算机图像分析技术定量分析，以假手术组作对照. 结果：纳入动物50只，均进入结果分析：①压力超负荷组转化生长因子β1mRNA术后4h开始升高，8h达峰值，48h降至术前水平（分别为1．08&;#177;0．30，5．83&;#177;0．40，0．90&;#177;0．61，0．86&;#177;0．22）；c-myc和c-jun癌基因mRNA均于术后8h开始升高，24h达峰值，48h降至术前水平（c-myc mRNA分别为4．25&;#177;0．97，5．94&;#177;1．42，0．80&;#177;0．43，0．68&;#177;0．11；c-jun mRNA分别为4．36&;#177;0．55，5．91&;#177;1．66，0．93&;#177;0．35，0．79&;#177;0．12）。②假手术组各时间点转化生长因子β1,c-myc，c-jun癌基因mRNA斑点积分光度均无明显差别。 结论：压力超负荷早期大鼠心肌组织中转化生长因子β1 mRNA先于c-myc及c-jun mRNA升高，提示转化生长因子β1可能是比c-myc及c-jun更早表达的信号因子。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

海马小白蛋白阳性神经元对缺血反应的区域性特征

背景：短暂全脑缺血再灌流早期海马各区域小白蛋白(parvalbumin，PV)阳性神经元的变化程度以及变化时间是否存在敏感性差异?目的：研究缺血敏感脑区海马的PV阳性神经元的改变以及缺血性脑损伤的细胞分子机制。设计：随机对照的实验设计。地点和对象：实验在中山大学中山医学院人体解剖学教研室完成。40只成年健康雄性大鼠，由中山大学中山医学院实验动物中心提供。干预：建立4管阻塞缺血大鼠模型，随机分为正常对照组，缺血再灌流0，6，12，24h共5组，每组8只。全脑缺血20min后再分别灌流0～24h。PV免疫组织化学反应观察海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。主要观察指标：海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。结果：正常对照组大鼠海马各区域(CA1，CA2，CA3)的始层、锥体层、放射层和腔隙分子层，齿状回的颗粒层、分子层及多形层(门区)的切片观察均出现PV阳性反应。再灌流6～12h内见PV阳性神经元出现胞体肿胀、胞浆染色变淡等变化。放射层突起密度减少；PV阳性终末的颗粒密度稀疏，以锥体细胞胞体周围的变化为明显。PV阳性神经元数目：缺血再灌流0h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．66&;#177;3．06)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(4．33&;#177;1.53)个；再灌流6h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．33&;#177;3．51)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(5．00&;#177;1．73)个；再灌流24h时，海马CA1区从(0．33&;#177;1．53)个减少为(2．33&;#177;4．93)个，门区从(1．67&;#177;1．53)个减少为(3．33&;#177;4．51)个；上述缺血再灌流组PV阳性神经元数目减少与缺血前比较有统计学意义(t=4．4505～9．2258，P&;lt;0．05)。结论：海马PV阳性神经元对全脑缺血存在区域敏感性差异。     

针刺预处理全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA的表达

目的：探讨针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达的影响，并与缺血预处理的效果进行比较。 方法：实验于2003-10在黑龙江中医药大学神经解剖实验室进行。取120只Wistar大鼠随机分为5组，每组24只：①正常对照组：不干预。②假手术组：暴露4条血管，不造模。③脑缺血组：四动脉阻断法全脑缺血10min制作大鼠全脑缺血模型。④脑缺血预处理组：预全脑缺血3min，再灌注24h后再次全脑缺血10min。⑤针刺预处理组：术前7d给予针刺，双侧足三里、曲池穴，双侧连接全能脉冲电疗仪，频率为1Hz，电压为2V，30min／次，针刺百会30min／次，1次／d，7d后全脑缺血10min。每组分别于再灌注12，24，48和72h麻醉状态下取材，免疫组织化学法检测海马CA1区B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数，原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达。结果：经补充后120只大鼠进入结果分析。①脑海马B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，再灌注48h为高峰，脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[（33．65&;#177;9．57），（34．56&;#177;12．64），（17．89&;#177;5．96）个／mm^2；（39．14&;#177;9．11）．（38．69&;#177;10．54），（23．35&;#177;7．68）个／mm^2；（40．65&;#177;10．53），（38．99&;#177;9．34），（15．87&;#177;4．67）个／mm^2，〈0．05]，但两组间无差异（P〉0．05）。②脑海马B细胞淋巴瘤2mRNA阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，再灌注72h为高峰，而脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[（42．64&;#177;9．57），（44．66&;#177;11．61），（20．8&;#177;5．97）；（45．14&;#177;8．12）．（46．68&;#177;11．54），（27．39&;#177;6．55）；（50．65&;#177;10．53），（52．19&;#177;9．33），（20．87&;#177;6．67）；P〈0．05]，但两组间无差异（P〉0．05）。 结论：针刺预处理可能通过上调B细胞淋巴瘤2mRNA和蛋白表达而减轻严重缺血后细胞凋亡并促成脑缺血耐受的产生。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：分析穹隆-海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆-海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2～2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学法染色，激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达以及共存表达的变化。 结果：14只大鼠参加实验，中途无脱落，均进入结果分析。①穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠皮质区绿色雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少，差异有显著性意义[（4．42&;#177;3．99），（9．71&;#177;4．53）。P〈0．05]；红色淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量显著增多，差异有显著性意义[（20．00&;#177;5．16），（5．71&;#177;3．14），P〈0．05];共表达双标阳性细胞数量显著增多，差异有显著性意义[（4．00&;#177;2．94），（1．14&;#177;1．67），P〈0．05]。②穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠在海马CA1区雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少，差异有显著性[（5．14&;#177;3．80），（12．57&;#177;3．59），P〈0．01]；淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量明显增多，差异有显著性意义[（17．14&;#177;4．45），（6．85&;#177;1．95），P〈0．01]；共表达阳性细胞数无显著变化意义[（2．01&;#177;2．08），（2．00&;#177;2.08），P〉0．05]。 结论：穹隆-海马伞切断与卵巢切除可以导致大鼠大脑皮质区、海马CA1雌激素受体α表达减少、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多，皮质区接存细胞表达增多，说明雌激素与淀粉样β蛋白前体代谢系统存在内在的联系。     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的：探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Caspase-8蛋白表达与神经元保护作用的关系。方法：雄性Wistar大鼠70只，随机分为对照组（10只)、预处理组(10只)、缺血预处理组(25只)和缺血组(25只)。四血管阻断法复制全脑缺血模型，尼氏和TUNEL染色法观察脑皮质及海马CA1区神经元数和凋亡细胞数，免疫组化方法检测Caspase-8蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果：①缺血7d时，缺血预处理组皮质及海马CA1区神经元数无显著变化[(2.68&;#177;8．5)个／视野]，缺血组神经元数则显著减少[（135.0&;#177;5.6）个／视野]。②缺血预处理组Caspase-8蛋白缺血12h表达升高[(125.6&;#177;9.0)个／视野]，24h达高峰[(167.0&;#177;8.1)个／视野]：缺血组(caspase-8蛋白缺血6h表达升高[(154．2&;#177;18.4)个／视野]，12h达高峰[（222.8&;#177;17.1)个／视野]：各对应时点缺血组Caspase-8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多。③缺血预处理组和缺血组均在缺血12h皮质及海马CA1区凋亡细胞数开始增多[(15．5&;#177;2．1)，（39.8&;#177;3．9)个／视野]，缺血48h凋亡细胞数达高峰[(68.3&;#177;13.6），(328.4&;#177;24．0)个／视野]，但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多。结论：全脑缺血可能通过诱导Caspase-8蛋白的表达增多，启动细胞凋亡，导致缺血后神经元凋亡的发生，缺血预处理延缓并降低缺血后Caspase-8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一。     

葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响

背景：Fan及P53是重要的促进凋亡的调控基因，属于肿瘤坏死因子／神经生长因子受体家族，其表达产物具有传递凋亡信号的作用，可调控脑缺血再灌注损伤时细胞的凋亡，而葛根素则能够减轻细胞的凋亡程度。 目的：观察葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因Fas及P53的影响。 设计：随机对照实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科。 材料：实验于2001-09／2002-02在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成。选取清洁级3个月龄Wistar大鼠45只。随机分为假手术组、模型对照组、葛根素治疗组，15只／组。 方法：葛根素治疗组及模型对照组建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。假手术组只分离第一颈椎两侧翼小孔，但不电凝两侧椎动脉，只分离两侧颈总动脉，但不夹闭之。葛根素治疗组于缺血前1h给予葛根索注射液100mg／kg，模型对照组给予等量生理盐水，假手术组不给药。各组大鼠分别于脑缺血再灌注后3，6，12，24，48h即速处死，每次每组3只。分离海马组织，制备组织切片，利用免疫组化法、原位末端标记法检测各组大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Fas及P53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas及P53蛋白表达的阳性细胞数。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较。 结果：实验纳入大鼠45只，全部进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显Fas基因表达。与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后各时间点均明显降低：6，12，24，48h时差异显著[（15．0&;#177;4．3）。（13．5&;#177;4．9）；（40．7&;#177;3.4），（27．2&;#177;3．1）；（37&;#177;4．8），（22.0&;#177;2．1）；（24．7&;#177;4．1）。（18．9&;#177;5．3）个／mm；P〈0．05，P〈0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区P53蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显P53基因表达。与模型对照组比较，葛根索治疗组于脑缺血再灌注后24，48h均明显降低[（25．3&;#177;4．4），（12．8&;#177;2．7）；（24．3&;#177;3．6），（10．9&;#177;3．0）个／mm；P〈0．01]。④各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较：与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后12，24，48h均明显降低[（34．0&;#177;3．7），（21．0&;#177;3．7）；（41．0&;#177;4．2），（33．0&;#177;4．8）；（71．0&;#177;5.5），（41．0&;#177;3．4）个／mm；P〈0．01]。 结论：给予葛根紊治疗的大鼠缺血再灌注6-48h时Fas的表达显著降低，缺血再灌注24—48h时P53的表达亦明显减少，且凋亡细胞数也呈下降趋势，进一步证实葛根紊的脑保护作用，提示葛根素抑制脑复苏后的细胞凋亡可能与其减少促凋亡基因Fas及P53蛋白表达有关。