体外诱导骨髓与脐血间充质干细胞向成骨细胞分化及其成骨活性的比较

背景：脐血与骨髓来源的间充质干细胞在一定诱导条件作用下均具有多向分化的能力。 目的：比较脐血与骨髓来源间充质干细胞向成骨细胞诱导分化能力的差异。 方法：采用密度梯度法分离培养人脐血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,当细胞汇合90%后胰蛋白酶消化传代,取第3代脐血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,以细胞密度为8×10⁴/孔接种,当细胞达80%融合时,加入含体积分数为10%胎牛血清、0.1 μmol/L地塞米松、50 μmol/L维生素C、10 mmol/L β-甘油磷酸钠的低糖型DMEM成骨细胞诱导液培养。 结果与结论：两种来源间充质干细胞的形态和生物学特性无明显差异,细胞表面均强表达CD44,CD29,不表达CD34;两者均具有向成骨细胞诱导分化的潜能,稳定表达了成骨细胞标志性的产物碱性磷酸酶、骨矿化结节,而且两种细胞的成骨活性差异无显著性意义。结果表明脐血和成人骨髓来源间充质干细胞向成骨细胞诱导分化能力相似,均可作为骨组织工程的种子细胞。     

脐血间充质干细胞生物学特性及其成骨成脂分化潜能

背景:对于脐血来源间充质干细胞的研究是干细胞研究领域的重点和热点,但目前国内外研究对其报道尚较少,许多方面存在争议。目的:观察人脐血间充质干细胞的生物学特性,并探讨其向成骨、成脂肪细胞诱导分化的能力。方法:从不同胎龄脐血中分离培养间充质干细胞;通过倒置相差显微镜及透射电镜观察细胞的形态、生长增殖情况及其超微结构;并描绘细胞生长曲线;用流式细胞仪对细胞表面标志物进行检测。分别用成骨及成脂诱导液对脐血间充质干细胞进行诱导,通过茜素红染色检测脐血间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的能力;通过油红O染色检测其向脂肪细胞诱导分化的能力。结果与结论:倒置相差显微镜下观察脐血间充质干细胞贴壁生长,呈成纤维细胞样外观,细胞呈螺旋状排列;透射电镜观察脐血间充质干细胞细胞核大,胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞;原代及传代培养的脐血间充质干细胞生长曲线均呈S型,第3,5代细胞增殖能力最强。流式细胞仪检测结果显示,脐血间充质干细胞均稳定表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29,CD44和CD90等,不表达造血标志CD34和CD45。脐血间充质干细胞成骨诱导后3周时茜素红染色可检测到大量钙化基质的形成;成脂诱导3周时油红O染色可检测到胞质中脂滴的形成。提示脐血间充质干细胞的形态特征、生长增殖特点及细胞表面标志物等生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,具有强大的生长增殖与自我更新能力。脐血间充质干细胞在体外诱导条件下可以向成骨细胞及脂肪细胞等间质组织细胞定向分化。     

人胎盘间充质干细胞促进血管生成

背景：构建组织工程化骨组织的同时,促进种子细胞与材料复合物内血液供应的重建成为研究的关键。胎盘间充质干细胞可以作为骨组织工程研究的种子细胞,研究其分化为血管内皮细胞以及促进血管生成有着重要意义。 目的：观察胎盘间充质干细胞在体外分化为血管内皮细胞以及体内促血管生成作用。 方法：分离培养人胎盘间充质干细胞,鉴定其表面抗原,经血管内皮生长因子和人碱性成纤维细胞生长因子联合体外诱导胎盘来源间充质干细胞向血管内皮细胞定向分化,诱导后细胞通过内皮细胞标志物KDR、v-WF染色鉴定。8只新西兰大白兔制成桡骨中段1.5 cm长的骨缺损模型,分别植入人胎盘间充质干细胞/丝素蛋白/羟基磷灰石和丝素蛋白/羟基磷灰石进行对照。植入后4,12周分别行大体观察、组织学观察和X射线观察,比较骨缺损修复以及血管生成情况。 结果与结论：胎盘间充质干细胞的诱导分化形态明显改变,胞体逐步回缩,立体感增强,内皮细胞标志物KDR、v-WF染色结果阳性。胎盘来源间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料复合培养植入后,4周时新骨已开始形成,12周时有部分新生骨组织形成板层骨,骨小梁形成,内可见新生血管形成,而对照组支架材料降解较慢,未见新生血管。说明胎盘来源间充质干细胞体外可以分化为血管内皮细胞,与丝素蛋白/羟基磷灰石材料联合移植能够促进移植物内血管生成,较好的修复骨缺损。     

人羊膜间充质细胞定向分化的研究进展

人羊膜间充质细胞源自胎盘羊膜组织,具有间充质干细胞特性和多向分化潜能。在不同生长因子的调节下,人羊膜间充质细胞可分化成内、中、外三个胚层来源的细胞,如神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝样细胞等。并且人羊膜间充质细胞具有比骨髓间充质干细胞更强的扩增能力和免疫原性低等优势,在组织工程及细胞替代治疗等再生医学领域具有广阔的应用前景。本文就人羊膜间充质细胞分离培养、生物学特性及多向分化潜能方面作一综述。     

人脐血间充质干细胞的生物学特性及其成骨成脂肪分化*

背景：目前有关脐血间充质干细胞的生物学特性及分化能力的研究较少。 目的：观察人脐血间充质干细胞的生物学特性,及其向成骨、成脂肪细胞分化的能力。 方法：从不同胎龄脐血中分离间充质干细胞,对其进行原代和传代培养,并诱导其向成骨及成脂肪细胞分化。 结果与结论：倒置相差显微镜下见分离培养的脐血间充质干细胞贴壁生长,呈成纤维细胞样外观,细胞呈螺旋状排列;透射电镜下可见脐血间充质干细胞胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞;原代及传代培养的脐血间充质干细胞生长曲线均呈S型,第3,5代细胞增殖能力最强,低胎龄的脐血间充质干细胞集落形成能力最强。流式细胞仪检测结果显示,脐血间充质干细胞稳定表达间充质干细胞相关抗原CD29,CD44 和CD90,不表达造血细胞标志CD34和CD45。成骨诱导后3 周,碱性磷酸酶染色为强阳性,茜素红染色可见大量钙化基质的形成;成脂诱导3周,油红O染色可检测到胞质中脂滴的形成。提示脐血间充质干细胞具有间充质干细胞的形态特征、生长增殖特点及细胞表面标志物等生物学特性,可向成骨细胞及脂肪细胞分化。     

力学因素在间充质干细胞构建功能性组织工程化软骨中的作用

间充质干细胞具有多向分化潜能,可定向分化为软骨组织,并且取材广泛、体外扩增能力强,是广泛应用于软骨组织工程的理想细胞之一。由于关节软骨具有重要的生物力学功能,需要强调和评估间充质干细胞构建组织工程化软骨组织的力学生物学性能。为更好地了解和认识修复软骨的诱导因素、信号通路与力学特性之间的关系,本文回顾了间充质干细胞在功能性软骨组织工程研究中的力学生物学研究进展,并论述了该领域内目前存在的问题及若干可供探索的途径和新方向。     

大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构变化

背景：目前对骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构观察的报道甚少。 目的：采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导并染色鉴定,利用电镜观察诱导前后细胞超微结构变化特点。 方法：全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标记物,成骨染色鉴定向成骨方向诱导分化,扫描电镜及透射电镜观察成骨诱导前后细胞超微结构变化。 结果与结论：培养的第3代骨髓间充质干细胞纯度高、活力强,成骨诱导后的碱性磷酸酶活性染色、钙化结节染色均呈阳性。扫描电镜及透射电镜观察显示,经向成骨细胞诱导分化后,细胞形态铺展,不规则,其线粒体、粗面内质网、空泡明显增多,表明细胞功能活跃。     

晚期骨关节炎患者膝关节滑膜间充质干细胞的体外成骨分化

背景：间充质干细胞是组织工程中常用的种子细胞,而来源于人膝关节滑膜组织的间充质干细胞能否作为骨组织修复与再生中合适的种子细胞还需要进一步验证。 目的：观察晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织来源的间充质干细胞体外向成骨细胞定向分化的潜能,对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。 方法：无菌条件下从行全膝关节置换的晚期骨关节炎患者膝关节腔内获取滑膜组织,Ⅰ型胶原酶消化分离获得有核细胞。以最适密度接种(200个有核细胞/cm2),挑选单细胞克隆,筛选出滑膜间充质干细胞。基础培养基培养,传至第3代时改换为含地塞米松、β-甘油磷酸钠和抗坏血酸的成骨诱导培养基诱导培养。 结果与结论：体外分离培养的滑膜间充质干细胞早期可形成葵花样细胞集落,克隆样生长。传代至第3代,细胞呈成纤维细胞样生长,形态均一。滑膜间充质干细胞成骨诱导后呈典型的“铺路石样”成骨细胞形态,诱导至第7天碱性磷酸酶染色呈强阳性,碱性磷酸酶活性表达也在诱导7 d时达最高峰;诱导21 d茜素红染色可见大量钙结节形成;同时反转录PCR检测到Ⅰ型胶原、Runx2、骨结合蛋白和骨桥蛋白的表达在诱导后增加,21 d时表达最高。从晚期骨关节炎患者膝关节滑膜组织分离获得的滑膜间充质干细胞,在体外可成功诱导分化为成骨细胞,所诱导生成的细胞具有典型的成骨细胞特性。提示滑膜间充质干细胞有望成为骨组织工程理想的种子细胞来源,在骨组织的再生修复中发挥重要作用。     

玻璃酸钠及胎盘间充质干细胞和诱导的软骨细胞膝关节腔内注射:修复膝骨关节炎

背景:胎盘间充质干细胞已被证实具有较强的增殖能力,能向神经细胞、血管内皮细胞、表皮细胞以及胰岛样细胞等诱导分化,但向软骨细胞诱导分化并修复膝骨关节的研究不多。目的:人胎盘间充质干细胞体外诱导软骨细胞膝关节腔内注射修复兔膝骨关节炎,并比较璃酸钠和胎盘间充质干细胞膝关节腔内注射的修复效果。方法:1选新西兰大白兔制作骨关节炎模型,左后肢膝关节炎造模后石膏固定5.5周,镜下观察关节软骨情况。2利用Ⅳ型胶原酶消化分离培养人胎盘间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志物,证实为胎盘间充质干细胞。取第3代胎盘间充质干细胞进行实验,将胎盘间充质干细胞加入软骨诱导培养基向软骨细胞分化,倒置显微镜观察结果。3将大白兔随机分成玻璃酸钠膝关节腔内注射组、胎盘来源间充质干细胞膝关节腔内注射组和诱导软骨细胞膝关节腔内注射组,分别给予膝关节腔内注射,连续5周取膝关节软骨镜下观察,比较软骨修复情况。结果与结论:体外诱导培养的人胎盘间充质干细胞增殖形成大量贴壁细胞,贴壁细胞具有典型的间充质细胞形态;应用软骨诱导培养基培养后,细胞只保持微团,不继续增殖形成贴壁细胞,微团基部无贴壁细胞,显示人胎盘间充质干细胞可以分化为软骨细胞。苏木精-伊红染色镜下观察发现,各组兔膝关节软骨细胞均有修复,诱导软骨细胞膝关节腔内注射后兔膝关节软骨修复情况较好,优于玻璃酸钠和胎盘间充质干细胞膝关节腔内注射组。     

胎盘来源间充质干细胞的体外诱导成软骨分化

背景：胎盘间充质干细胞已被证实有较强的增殖能力,且能向成骨细胞、成神经细胞、类肝样细胞等诱导分化,但对其成软骨细胞诱导分化的研究不多。 目的：在体外诱导人胎盘间充质干细胞成软骨细胞分化。 方法：体外培养人胎盘间充质干细胞并鉴定。取第3代胎盘间充质干细胞,调整细胞悬液浓度为1.6×1010 L-1,在24孔板中央分别滴5,10,15 μL细胞悬液,培养2 h(目的是形成微团);然后加入间充质干细胞培养基或软骨诱导培养基培养14 d,阿利新蓝染色,进行大体观察及倒置显微镜观察。 结果与结论：应用间充质干细胞培养基培养的对照组,细胞增殖形成大量贴壁细胞,贴壁细胞具有典型的间充质细胞形态;应用软骨诱导培养基培养后,细胞只保持微团,不继续增殖形成贴壁细胞,微团基部无贴壁细胞,随着接种细胞数量的增加,微团直径增大。说明人胎盘来源间充质干细胞具有向软骨细胞分化的能力,可作为组织工程、细胞治疗等应用的种子细胞来源。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

胚胎及骨髓间充质干细胞增殖活性与成脂分化能力的比较

背景：间充质干细胞最先在骨髓中发现,且骨髓间充质干细胞的相关研究也最多,但是骨髓间充质干细胞来源有限且含量极低。近年来,已经从人胚胎组织分离出间充质干细胞,其与骨髓间充质干细胞在生物学特性上有很多相似之处,但是二者的成脂诱导能力比较尚无明确报道。 目的：比较人胚胎组织与骨髓来源间充质干细胞体外增殖能力及成脂诱导能力。 方法：采用全骨髓法获得骨髓间充质干细胞,胶原酶消化法获得胚胎组织间充质干细胞。流式细胞术鉴定两种间充质干细胞表面分子标记。用细胞计数方法检测两种间充质干细胞增殖能力。分别向两种细胞培养体系中加入成脂诱导剂诱导14 d,经油红O染色后观察并计数,计算不同来源间充质干细胞的成脂诱导分化率。 结果与结论：从两种不同组织中均可获取梭形贴壁的间充质干细胞,表面标记物CD44、CD73、CD90和CD105均呈阳性表达,CD14、CD34和CD45均为阴性表达;胚胎组织间充质干细胞的增殖能力明显强于骨髓间充质干细胞(P < 0.01)。胚胎组织间充质干细胞和骨髓间充质干细胞经过成脂诱导液诱导14 d后,油红O染色结果均为阳性,但是骨髓间充质干细胞体外成脂能力明显强于胚胎组织间充质干细胞(P < 0.01)。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较

背景：近几年来脂肪来源的间充质干细胞因其取材容易也被广泛研究。 目的：比较脂肪来源和骨髓来源间充质干细胞的生物学特性。 方法：分离及体外培养人骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌因子水平等。 结果与结论：脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异。脂肪来源间充质干细胞增殖速率比骨髓来源的间充质干细胞快。在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓的10倍以上。提示脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞具有相同功能,但脂肪组织是一个更有应用前景的干细胞来源。     

Mesenchymal cells of the decidual tooth pulp: cytophenotype and initial evaluation of possibility of their use in bone tissue engineering

Cultures of mesenchymal cells from human decidual tooth pulp were derived. The phenotype and capacity to osteogenic and adipogenic differentiation of these cells are close to those of bone marrow mesenchymal stem cells. Decidual tooth pulp mesenchymal cells populate biodegraded polylactide scaffolds and hence, can be used for the creation of tissue engineering transplants for bone defect repair. Storage of decidual tooth pulp mesenchymal cells in the stem cell cryobanks together with umbilical blood will appreciably extent the periods of age for collection of juvenile autologous stem cells for use throughout the life span.     

Mesenchymal Cells of the Deciduous Tooth Pulp: Cytophenotype and Initial Evaluation of Possibility of Their Use in Bone Tissue Engineering

Cultures of mesenchymal cells from human deciduous tooth pulp were derived. The phenotype and capacity to osteogenic and adipogenic differentiation of these cells are close to those of bone marrow mesenchymal stem cells. Deciduous tooth pulp mesenchymal cells populate biodegradable polylactide scaffolds and hence, can be used for the creation of tissue engineering transplants for bone defect repair. Storage of decidual tooth pulp mesenchymal cells in the stem cell cryobanks together with umbilical blood will appreciably extent the periods of age for collection of juvenile autologous stem cells for use throughout the life span.     

Osteoprogenitor response to semi-ordered and random nanotopographies

In bone tissue engineering, it is desirable to use materials to control the differentiation of mesenchymal stem cell populations in order to gain direct bone apposition to implant materials. It has been known for a number of years that microtopography can alter cell adhesion, proliferation and gene expression. More recently, the literature reveals that nanotopography is also of importance. Here, the reaction of primary human osteoprogenitor cell populations to nanotopographies down to 10 nm in size is considered. The topographies were originally produced by colloidal lithography and polymer demixing on silicon and then embossed (through an intermediate nickel shim) into polymethylmethacrylate. The biological testing considered cell morphology (image analysis of cell spreading and scanning electron microscopy), cell cytoskleton and adhesion formation (fluorescent staining of actin, tubulin, vimentin and vinculin) and then subsequent cell growth and differentiation (fluorescent staining of osteocalcin and osteopontin). The results demonstrated that the nanotopographies stimulated the osteoprogenitor cell differentiation towards an osteoblastic phenotype.     

人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞,在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更多优势,是当今的研究热点之一。 目的：在体外建立一种分离纯化人皮下脂肪来源脂肪干细胞的方法,进行体外培养扩增及诱导其向成骨、成脂细胞分化。 方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合,对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。倒置显微镜下观察人脂肪干细胞的细胞形态和生长特性。选取第2代及第5代细胞,用CCK-8法检测细胞活性,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。选取第5代细胞,分别进行成脂及成骨诱导分化,以确定其多向分化潜能。 结果与结论：①采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法,可成功从人脂肪组织中获得纯度较高的人脂肪干细胞。②人脂肪干细胞经历了生长滞缓期、对数增殖期和生长平台期,符合正常细胞的生长规律,且其生长具有对数生长期,其倍增时间较短。③人脂肪干细胞表达干细胞表面抗原标记,具有低免疫原性,且具有成脂成骨多向分化潜能。④DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法,DAPI不损伤细胞活性,对细胞标记率高。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

In vitro differentiation of human mesenchymal stem cells on Ti6Al4V surfaces

Long-term stability of arthroplasty prosthesis depends on the integration between the bone tissue and the implanted biomaterials, which requires the contribution of osteoblastic precursors and their continuous differentiation into the osteoblastic phenotype. Classically, these interactions are tested in vitro using mesenchymal stem cells (MSCs) isolated and ex vivo expanded from bone marrow aspirates. Human adipose tissue-derived stromal cells (AMSCs) may be a more convenient source of MSCs, according to their abundance and accessibility, but no data are available on their in vitro interactions with hard biomaterials. The aim of this work is to compare the osteogenic potential of human AMSCs and bone marrow-derived MSCs (BMMSCs) and to evaluate their response to Ti6Al4V alloy in terms of adhesion, proliferation and differentiation features, using the human osteosarcoma cell line SaOS-2 for comparison. The overall results showed that AMSCs have the same ability to produce bone matrix as BMMSCs and that Ti6Al4V surfaces exhibit an osteoinductive action on AMSCs, promoting their differentiation into functional osteoblasts and increasing bone formation. In conclusion, adipose tissue is a promising autologous source of osteoblastic cells with important clinical implications for bone tissue engineering.     

CD146阳性亚群有作为软骨组织工程种子细胞的应用潜力

文题释义：CD146：也称为MUC18,MCAM,Mel-CAM或S-Endo1,是一种跨膜糖蛋白,同时属于免疫球蛋白超级家族的一员。在人体组织中,CD146阳性细胞被认为是微血管的壁细胞,其具有较强的增殖、迁移及自我更新能力。 组织工程种子细胞：组织工程包括3个关键要素——种子细胞、支架和活性因子,其中种子细胞应具有良好的细胞活性、增殖能力、分化及合成基质等生物功能。 背景：再生医学的发展、组织工程技术的出现为软骨缺损重建提供了新的解决思路。在组织工程中,间充质干细胞是应用广泛的种子细胞,然而干细胞作为一个异质性的细胞群体其不同亚群发挥着不同的功能。因此,应用间充质干细胞关键功能亚群进行软骨修复具有广泛应用前景。 目的：从人脂肪间充质干细胞中分离出CD146阳性亚群细胞,验证其生物学特性及其作为软骨组织工程种子细胞的潜力。 方法：人脂肪间充质干细胞由浙江金时代生物技术有限公司提供,通过流式细胞术对人脂肪间充质干细胞表面标志物进行鉴定,应用免疫磁珠分选方法从人脂肪间充质干细胞中分选出CD146阳性表达的细胞亚群。通过基因芯片检测技术及生物信息学分析技术揭示2种细胞的分子特性;体外诱导2种细胞成软骨分化并进行鉴定;冻存复苏前后检测2种细胞的细胞活性及凋亡情况。 结果与结论：①人脂肪间充质干细胞表达高水平干细胞相关标志物CD73、CD90,不表达造血干细胞相关标志物CD34、CD45、HLA-DR;②生物信息分析结果表明CD146阳性亚群细胞与脂肪间充质干细胞相比在炎症通路及骨骼肌肉系统疾病有不同功能;③CD146阳性亚群细胞能够成球软骨分化,并且其成软骨分化能力要优于人脂肪间充质干细胞;④CD146阳性亚群细胞复苏后凋亡情况和活性均要优于人脂肪间充质干细胞;⑤结果表明,CD146阳性亚群细胞具有良好的成软骨分化潜力,是一种具有前景的软骨组织工程种子细胞。 ORCID: 0000-0003-4210-4708(眭翔) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

骨组织工程中干细胞的研究与应用

背景：是否可以通过改进对已知的可以分化成骨的干细胞的培养方式或者寻找到新的干细胞,为骨组织工程找到更为合适的种子细胞。 目的：从干细胞的分离培养、生物学特性及标志物等方面对各类干细胞的在骨组织工程中的应用进行综述。 方法：以英文检索词为“bone tissue engineering,seed cells,stem cell,osteoblast differentiation”及中文检索词为“骨组织工程,种子细胞,干细胞,成骨分化”,由第一作者检索1995年至2012 年PubMed 数据库及中国知网中文科技数据库,查阅近年种子细胞相关文献,最终保留50篇文献,从分离培养方法、基本特性及在骨组织工程中的应用3方面进行综述。 结果与结论：文章分别对各类干细胞(包括：胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脐带血间充质干细胞、外周血来源的多潜能间充质干细胞、脂肪干细胞、子宫内膜基质干细胞、人羊膜基质细胞、牙髓干细胞)的分离方法、生物学特性、标志物等相关实验研究进行了探讨。目前用于分离纯化骨髓间充质干细胞的方法主要有4 种：密度梯度离心法、全骨髓贴壁培养法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠法。研究证实各类干细胞在特定条件下均有分化成骨的能力。     

Acellular bone colonization and aggregate culture conditions diversely influence murine periosteum mesenchymal stem cell differentiation potential in long-term in vitro osteoinductive conditions

Periosteum contains mesenchymal stem cells (Pe-MSCs) that contribute to normal bone growth, healing, and turnover; understanding Pe-MSC capabilities may shed light over the treatment of bone defects using tissue engineering. Bone tissue regeneration needs in vitro bone precursors or stem cell coculture onto specific scaffolds but, despite extensive research in the field, very little is known about the matrix structure of the tissue-engineered tissues and the scaffold's effects on cell differentiation. To this purpose we have selected a clonal population (murine Pe-MSCs) that was seeded and differentiated onto an acellular bone scaffold. Cell differentiation was assessed after 3 months and 1 year by molecular, histological, biochemical, and biophysical analyses and results were compared with the same osteoinduced clonal cells cultured as cellular aggregates. Our data show that Pe-MSCs cultured onto acellular bone scaffold develop a complex three-dimensional matrix and an osteoblastic phenotype but do not produce hydroxyapatite (HA); moreover, they seem able to reabsorb the colonized bone scaffold. On the contrary, cells cultured as three-dimensional aggregates differentiate and produce osteoblastic markers and HA nanocrystals.