胃癌中显著下调的miR-433的作用靶点研究

目的 为了筛选胃癌中miRNAs 的表达标记,验证胃癌相关miRNAs的作用靶点,建立一种新的诊断和治疗胃癌的方法.方法 运用基因芯片技术检测3个正常胃组织标本,24个胃癌组织标本,胃癌细胞SGC7901和正常胃黏膜细胞GES-1中328个miRNAs的表达情况.用以上方法检测出在胃癌组织和SGC7901中,miR-433的表达水平显著下调.为了确保结果的准确性,采用实时荧光定量PCR对其进行验证.并用基因克隆和Western印迹方法分析miR-433的作用靶点.结果 共有26个miRNAs在胃癌标本(包括24个胃癌组织和SGC7901)中异常表达.其中19个miRNAs下调,7个miRNAs上调.实时荧光定量PCR检测出miR-433在胃癌标本中的表达水平显著下调,该结果和基因芯片检测结果一致.另外,在本实验中发现miR-433与Grb2(growth factor receptor-bound protein 2)的表达呈负相关.结论 胃癌相关miRNAs已进行了初步筛选.其中,miR-433可能是胃癌中的标记性miRNAs之一,Grb2是其作用靶点.这为建立新的以miRNAs为基础的诊断和治疗胃癌的方法提供了相关信息.     

胃癌组织中Snai2 mRNA的表达及意义

目的 检测Snai2 mRNA在正常胃黏膜及胃癌组织中的差异表达并探讨其意义.方法 新鲜胃癌组织30例, TRIzol法抽提总RNA,逆转录后Real-time荧光定量PCR检测Snai2 mRNA的表达;制备mRNA探针,在包含有100例胃癌和20例正常胃黏膜组织的芯片上进行Snai2 mRNA原位杂交,并对结果进行统计分析.结果 Real-time PCR显示在不同分化的胃癌组织中表达量不同,随分化程度降低,Snai2 mRNA表达量增加(P<0.05);组织芯片原位杂交结果表明Snai2 mRNA在癌组织中的阳性率(54.2%)高于正常胃组织(27.8%),其差异有统计学意义(P<0.05),在不同分化的胃癌组织中Snai2 mRNA的表达也随分化程度的降低,Snai2 mRNA的阳性率逐渐增加,但差异无统计学意义(P>0.05) .结论 Snai2可作为一个在分子水平上确定胃癌恶性程度和疾病进展及预后的生物学标志.     

Occludin表达与胃癌发生发展的相关性

目的:探讨Occludin mRNA、蛋白表达水平与胃癌发生发展、侵袭转移的关系。方法:应用组织芯片免疫组化染色和实时荧光定量PCR的方法,检测occludin在胃腺癌组织中的表达并分析其与临床特征的相关性。结果:免疫组织化学检测显示,Occludin在癌旁正常胃黏膜上皮中阳性表达率高于胃腺癌组织(96.9%vs85.4%,84.6%,89.2%,78.5%)(P0.05);Occludin的表达水平与胃腺癌TNM分期和分化程度有关(P0.05)。实时荧光定量PCR的检测结果显示,Occludin mRNA在胃癌组织和癌旁正常胃组织中的表达无明显差异(P0.05)。结论:Occludin蛋白的表达水平与胃腺癌的发生发展和侵袭转移呈负相关。     

基因芯片技术筛选主动脉瘤与正常主动脉差异表达基因

目的利用基因芯片技术研究人主动脉瘤组织与正常主动脉组织基因表达谱的差异。方法选取主动脉瘤病例标本5例,正常主动脉标本4例。提取总RNA,反转录成c DNA、体外转录合成aRNA后与芯片进行杂交,对结果进行分析。同时利用RT-qPCR对从表达谱筛选出的其中6个差异基因进行基因转录水平的定量验证。结果人主动脉瘤组与正常主动脉组相比,表达差异倍数大于2的基因共有270个,其中有211个基因上调表达,59个基因下调表达。差异表达的基因主要参与信号传导、免疫反应和炎性反应等生物学过程。RT-qPCR检测结果与基因芯片结果的符合率为100%。结论主动脉瘤与正常主动脉的表达谱有较大差异,利用基因芯片技术结合RT-qPCR验证可以筛选出主动脉瘤差异表达的基因,为研究主动脉瘤发病机制提供分子基础。     

胃镜活检胃癌组织中端粒酶的定量表达

目的通过检测端粒酶在人胃镜活检胃癌组织中的定量表达情况,然后分析其与术后胃癌标本的临床病理因素之间的关系,从而为临床医生术前预测胃癌的浸润及转移情况及选择合理的治疗方式提供一定的理论依据。方法应用Trizol法提取30例胃镜活检胃癌组织中总的RNA,以总RNA为模板经逆转录合成cDNA,再用实时荧光定量PCR的方法检测该30例胃镜活检胃癌组织中端粒酶的表达情况并分析其与各种临床病理指标的关系。结果荧光实时定量PCR扩增结果显示,胃癌组织中端粒酶的表达与浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(P0.05)。而且端粒酶在黏液腺癌中的表达远远高于在腺癌中的表达(P0.05)。结论通过该实验证明端粒酶在胃镜活检胃癌组织中的表达与胃癌侵袭转移密切相关,有可能成为术前预测胃癌侵袭转移的重要预后指标,进而为临床医生选择治疗方案及手术方式提供一定的临床参考价值。     

结直肠癌组织中CD151表达及其临床意义

目的 探讨结直肠癌组织中CD151的表达及其与结直肠癌发生、发展和转移的关系.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测22例肠癌组织及癌旁组织中CD151mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测此22例及另67例石蜡包埋肠癌组织及癌旁组织中CD151蛋白的表达,并分析其与肠癌临床病理因素之间的关系.结果 CD151mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达明显高于癌旁组织,其蛋白的表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 CD151可望成为与结直肠癌浸润、转移有关并提示预后不良的指标.     

胃癌组织中PIK3CA基因热点突变筛查及临床意义

目的 检测中国人群胃癌组织中PIK3 CA基因突变频率及热点突变模式,探讨PIK3 CA基因突变的临床意义.方法 应用荧光PCR法筛查胃癌PIK3 CA基因突变阳性病例,Sanger DNA测序法检测PIK3CA基因热点突变模式;统计分析PIK3 CA基因突变与胃癌临床病理特征之间的关系.结果 400例肿瘤标本中检测出PIK3 CA基因突变率为7.5％ (30/400),突变位点主要集中在第9外显子(E542K,E545K)和第20外显子(H1047R,H1047L);且PIK3 CA基因突变与肿瘤预后相关(P＜0.05),而与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结状态、患者年龄等因素无关.结论 中国人群胃癌组织中PIK3CA基因突变具独特的突变频率与突变模式;PIK3 CA基因突变对于胃癌预后判断及基因靶向治疗具潜在临床价值.     

PTHLH在鼻咽癌细胞系及组织中表达上调

目的检测PTHLH在鼻咽癌细胞系及组织中的表达水平,从理论上初步探讨其在鼻咽癌发生发展过程中所起的作用。方法实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测PTHLH在7个鼻咽癌细胞系的表达情况,RT—PCR检测PTHLH在鼻咽癌及非癌鼻咽组织中的表达,免疫组化鉴定其在鼻咽癌及鼻咽上皮组织中蛋白水平的表达。结果PTHLH在鼻咽癌细胞系中的表达上调,以HONE1细胞中表达最高。RT—PCR分析显示PTHLH mRNA在鼻咽癌组织中表达明显上调（61．1％）,免疫组化检测鼻咽癌石蜡标本（49例）发现,PTHLH蛋白在鼻咽癌组织中表达明显高于鼻咽上皮组织（12例）（P〈0．001）。结论PTHLH基因在鼻咽癌细胞及组织中表达增高,提示其可能参与了鼻咽癌的发生发展,有望成为分子生物学诊断的靶点。     

实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CD109蛋白的表达

目的CD109是最近克隆到的一种细胞表面抗原,为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白,属于含硫酯的啦巨球蛋白家族成员,本研究的目的是探讨CD109基因在人正常组织及癌组织中的分布。方法使用实时荧光定量PER方法分析了CD109在人正常组织及癌组织中的表达。结果研究结果表明,该蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中最高,而在其他组织中较低,在癌组织标本中检测到CD109表达水平上调。结论以上结果提示表达在细胞表面的CD109蛋白可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

应用基因芯片检测喉鳞状细胞癌甲醛固定石蜡包埋组织microRNA表达谱

目的 建立以甲醛固定石蜡包埋组织为材料、基于基因芯片技术的microRNA(miRNA)表达谱的分析方法 ;筛选与喉鳞状细胞癌(简称喉癌)生物学特征密切相关的差异表达miRNA.方法 从喉癌甲醛固定石蜡包埋组织中制备总RNA,经质量鉴定后进行荧光标记.采用Agilent公司的容纳723条人类miRNA探针的基因芯片完成杂交实验,以获得喉癌的miRNA表达谱.以GeneSpring GX和R-Project软件处理分析基因芯片实验数据,筛选与喉癌转移相关的差异表达miRNA.结果 从24例甲醛固定石蜡包埋组织标本中获得了符合基因芯片实验质量标准的RNA样品,并完成了基因芯片杂交及数据分析.从中共鉴定到319个miRNA,有96个miRNA在24例喉癌中均有表达,其中与淋巴结转移密切相关的(检错率<0.05)差异表达miRNA有5个,分别为miR-23a* 、miR-28-5p、miR-15a、miR-16和miR-425.结论 甲醛固定石蜡包埋组织可以提供符合基因芯片分析质量要求的miRNA,是研究miRNA的重要样品资源.从喉癌的miRNA表达谱中筛选出的转移相关差异表达miRNA(miR-23a*、miR-28-5p、miR-15a、miR-16和miR-425)有可能成为评估喉癌转移风险的新型分子标志.     

MicroRNAs与胃癌关系研究进展

MicroRNAs是一类内源性非编码RNA,近年来研究发现,若干microRNAs参与基因调控,直接参与胃癌的发生和分化,microRNAs表达谱与胃癌的进展和预后等密切相关.因此,microRNAs的研究对于阐明胃癌相关基因的功能和胃癌癌变的分子机制具有重要的意义.     

应用SELDI技术检测精浆抗精子抗体阳性不育患者精浆中差异蛋白

目的探讨用蛋白质芯片技术筛选精浆抗精子抗体阳性不育患者精浆中蛋白质表达谱，寻找精浆中的差异蛋白。方法采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）和CMl0蛋白质芯片对30例精浆抗精子抗体阳性不育患者精浆和30例健康人精浆的蛋白质谱图进行了检测，使用PBSII—C型蛋白质芯片阅读机读取数据，获得的结果采用CIPHERGEN公司的Biomarker wizard和Biomarker Patterns System软件分析。结果精浆抗精子抗体阳性不育患者与正常人精浆蛋白质谱相比有12个显著差异蛋白质，其中6个蛋白质在患者精浆中高表达，6个蛋白质在患者精浆中低表达。Biomarker Patterns System软件用12个显著差异蛋白质中的2个标志分子建立精浆抗精子抗体阳性不育患者诊断的分类树模型。检测灵敏度为90％、特异性为93．3％。结论实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从精浆中筛选出精浆抗精子抗体阳性不育患者相关的标志蛋白质，而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选精浆中的精浆抗精子抗体阳性不育患者的标志蛋白质是一种有效、快速的工具。     

光纤微珠芯片技术及其在医药研究领域中的应用

基因芯片技术是近年来与人类基因组研究同步发展起来的新技术,在基因表达谱测定、突变检测、多态性分析、基因组文库建立及杂交测序等多方面具有较高的应用价值,为现代医学科学及医学诊断学的发展提供了强有力的工     

前列腺癌特异性基因的功能和通路分析

目的 探讨前列腺癌特异性基因的相关功能和通路.方法 收集前列腺癌组织标本进行基因芯片分析,从结果中取差异倍数≥1.5并P≤0.05的基因通过特异性通路分析(IPA),鉴别所有差异表达基因的功能和通路.结果 由芯片数据得到769个上调基因和675个下调基因,得到基因功能差异最大的10个通路.结论 本研究的数据提供了前列腺癌的候选基因,为寻找新的肿瘤生物学指标、风险因素和治疗靶点提供帮助.     

荧光定量PCR技术对诊治阴道解脲脲原体感染价值的研究

目的　通过荧光定量PCR技术检测阴道内解脲脲原体感染状况 ,用以指导临床正确治疗。方法　对门诊的阴道炎患者 ,采用特制密封棉拭子宫颈管内取样 ,然后采用重量差减法 ,求出分泌物的重量 ,采用荧光定量PCR测定解脲脲原体。FQ -PCRUu的拷贝数 /g分泌物 ,与临床患者不同的症状体征作对照研究。结果　解脲脲原体拷贝数 /g≥ 1× 10 6的患者 ,82 9%具有典型阴道炎症状 ,71 9%具有阴道炎体征。拷贝数 /g <1× 10 6的患者 ,症状体征均不明显 ,二者之间差异显著     

Molecular analysis of primary gastric cancer, corresponding xenografts, and 2 novel gastric carcinoma cell lines reveals novel alterations in gastric carcinogenesis

We report the molecular characterization of 8 primary gastric carcinomas, corresponding xenografts, and 2 novel gastric carcinoma cell lines. We compared the tumors and cell lines, with respect to histology, immunohistochemistry, copy number, and hypermethylation of up to 38 genes using methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification, and TP53 and CDH1 mutation analysis where relevant. The primary tumors and xenografts were histologically comparable and shared expression of 11 of 14 immunohistochemical markers (E-cadherin, beta-catenin, COX-2, p53, p16, TFF1, cyclin E, MLH1, SMAD4, p27, KLK3, CASR, CHFR, and DAPK1). Gains of CASR, DAPK1, and KLK3--not yet described in gastric cancer--were present in the primary tumors, xenografts, and cell lines. The most prominent losses occurred at CDKN2A (p16), CDKN2B (p15), CDKN1B (p27/KIP1), and ATM. Except for ATM, these losses were found only in the cell line or xenograft, suggesting an association with tumor progression. However, examination of p16 and p27 in 174 gastric cancers using tissue microarrays revealed no significant correlation with tumor stage or lymph node status. Further losses and hypermethylation were detected for MLH1, CHFR, RASSF1, and ESR, and were also seen in primary tumors. Loss of CHFR expression correlated significantly with the diffuse phenotype. Interestingly, we found the highest rate of methylation in primary tumors which gave rise to cell lines. In addition, both cell lines harbored mutations in CDH1, encoding E-cadherin. Xenografts and gastric cancer cell lines remain an invaluable research tool in the uncovering of the multistep progression of cancer. The frequent gains, losses, and hypermethylation reported in this study indicate that the involved genes or chromosomal regions may be relevant to gastric carcinogenesis.     

荧光定量PCR检测孕妇外周血中游离胎儿DNA在子痫前期中的价值

目的探讨孕妇外周血中的游离胎儿DNA水平作为子痫前期预测指标的可能。方法普通PCR检测子痫前期孕妇22例和正常孕妇25例的血浆中Y染色体性别决定基因（SRY）,然后应用荧光定量PCR技术对有SRY基因表达者的胎儿DNA水平进行定量分析并比较子痫前期孕妇组和正常孕妇组胎儿DNA水平的差异。结果22例子痫前期患者及25例对照组中各有12例出现SRY阳性信号。子痫前期组的胎儿DNA水平明显高于正常对照组（P〈0.01）。结论孕妇外周血中的游离胎儿DNA可望作为预测子痫前期的指标之一。     

Management and outcome of gastric carcinoma in Zaria, Nigeria

Introduction

Gastric cancer is the second leading cause of cancer death in the world. The objective of this study was to present the clinical evaluation, treatment and outcome of 179 patients with gastric carcinoma in Zaria, Nigeria.

Methods

Patients managed for histologically diagnosed gastric carcinoma were reviewed. The extent of surgical intervention was based on pre-operative and intra-operative staging balanced against the age and overall fitness of the patient. Mortality, morbidity and patient''s survival were monitored.

Results

There were 179 patients, with a male to female ratio of 1.4:1. Their mean age was 51±6.3. Ten (5.6%) patients presented with early gastric cancer. Overall, 155(86.6%) patients had surgical intervention including gastric resection in 87 (56.1%). Of the gastrectomies , 28.7% were curative (R0). Postoperative complications were seen in 43(27.7%) patients. Postoperative mortality in 25(16.1%) patients was significantly associated with peritoneal metastasis (p<0.001), preoperative comorbidity (p<0.01) and age more than 60years (p<0.03). The overall median survival was 13.6 months while 70.1% and 21.8% of patients that underwent gastrectomy survived for 1 and 5 years respectively.

Conclusion

Treatment of gastric cancer should be based on a reasonable choice of operation that must consider not only the survival benefits but also the surgical risks and postoperative quality of life     

荧光定量PCR技术检测结核DNA在不同类型样本中的应用

目的 探讨荧光定量PCR技术检测结核DNA在不同类型样本中的阳性率。方法 收集2016年1月~2018年3月在我院进行结核DNA检测的9020例患者,运用荧光定量PCR技术检测不同类型的样本。结果 9020例患者中,检测结果阳性1220例,总阳性率13.53%;痰液检测5688例,检测结果阳性741例,总阳性率13.03%;肺泡灌洗液检测1799例,检测结果阳性363例,总阳性率20.20%;脑脊液检测704例,检测结果阳性40例,总阳性率5.68%;胸水检测559例,检测结果阳性35例,总阳性率6.26%;腹水检测62例,检测结果阳性6例,总阳性率9.68%;尿液检测193例,检测结果阳性35例,总阳性率18.13%;心包积液检测15例,检测结果阳性0例,总阳性率0。结论 荧光定量PCR技术检测结核DNA具有特异、灵敏、快速、准确等特点,但临床医生应根据症状体征等选择合适的临床标本进行结核DNA的检测,将进一步提高阳性率,明确诊断。