胃肠道弥漫性大B细胞淋巴瘤中之t（14;18）染色体易位及Bcl-2基因扩增的研究

目的：探讨胃肠道弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）中之染色体t（14;18）（q32;q21）易位及Bcl-2基因扩增与DLBCL亚型分类及病人预后间的关系;探讨其在胃肠道DLBCL发病中的作用机制。方法：应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术检测45例胃肠道DLBCL组织中之t（14;18）（q32;q21）染色体易位及Bcl-2基因扩增情况;应用免疫组化染色法检测该45例胃肠道DLBCL中之Bcl-2蛋白的表达。结果：在45例胃肠道DLBCL病人中,10例（22%）存在t（14;18）（q32;q21）易位,10例（22%）存在Bcl-2基因扩增。t（14;18）（q32;q21）易位阳性者与阴性者间的亚型分类比例差异有统计学意义（P〈0.01）。Bcl-2基因扩增阳性者与阴性者间之生存时间差异有统计学意义（P〈0.05）。而t（14;18）（q32;q21）染色体易位及Bcl-2基因扩增与Bcl-2蛋白表达间均属无关（P〉0.05）。结论：t（14;18）（q32;q21）染色体易位与胃肠道DLBCL的免疫表型分类相关,生发中心B细胞（germinal center B cell-like,GCB）型与非GCB型间存在分子遗传学差异。而检测Bcl-2基因扩增对判断胃肠道DLBCL病人的预后具有重要意义。     

肿瘤与环氧化酶2关系的研究进展

哺乳动物的环氧化酶至少有两种形式:COX1和COX2,COX1结构性表达于大多数细胞内,参与维持细胞正常的生理功能。COX2为诱导型,静息时不表达,当细胞受到各种刺激时迅速合成、表达增加。一、COX2基因的表达诱导与调控人的COX2基因长约8.3kb,定位于第一号染色体1q25.2～25.3,由5′端0.8kb的转录起始点上游区、6.0kb的蛋白质编码区(其中包括10个外显子和9个内含子)以及2.5kb的3′端非编码区(UTR)组成。同COX1相比,COX2基因少1个编码区信号肽的外显子;另外COX2mRNA3′URT大约多出1.5kb包括了22个拷贝的AUUUA基序,迅速降解mRNA的…     

Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对TNF-α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响及相关机制。方法将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染原代培养的大鼠成骨细胞并且进行阳性克隆筛选。用30 ng/ml TNF-α刺激转染组和对照组细胞24 h,流式细胞术、透射电镜检测细胞凋亡,应用免疫组化结合计算机图像分析技术检测转染组和对照组细胞Bcl-2蛋白及TNF-α刺激前后Caspase-3蛋白表达。结果 Bcl-2蛋白表达在转染加压筛选组显著高于对照组(P<0.05)。TNF-α刺激后转染组细胞亚二倍体凋亡峰比例为6.6％,对照组为16.1％。TNF-α刺激后转染组细胞.超微结构大多正常,对照组细胞出现明显凋亡征象。TNF-α刺激后两组细胞 Ciaspase-3蛋白表达均升高;TNF-α刺激前Caspase-3蛋白表达转染组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),TNF-α刺激后Cas-pase-3表达对照组较转染组显著高(P<0.05)。结论 Bcl-2过表达对TNF-α诱导的成骨细胞凋亡有抵抗作用,Bcl-2过表达的抗凋亡作用可能部分通过抑制TNF-α刺激引起的Caspase-3蛋白表达升高实现,有望作为抑制成骨细胞凋亡的侯选基因。     

瘢痕Bcl-2基因与细胞增殖和凋亡的关系

目的:探讨增生性瘢痕成纤维细胞Bcl-2基因表达水平与细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法:用原位杂交、免疫组化染色ABC法,对79例增生性瘢痕组织分别检测Bcl-2mRNA、Bcl-2蛋白和增殖细胞核抗原的表达,并用TUNEL法作原位细胞凋亡检测。结果:75例（94.9％）表达Bcl-2mRNA,70例（88.6％）表达Bcl-2蛋白,两者表达水平呈正相关（rs=0.989,P<0.01）;随成纤维细胞Bcl-2蛋白表达水平升高其增殖活性相应增加,而凋亡相应减少,Bcl-2蛋白+++组与++组（P<0.05）及前两组分别与-组和+组间（P<0.01）两项指标差异均有显著性。结论:增生性瘢痕中成纤维细胞Bcl-2基因高表达可抑制其凋亡,可能由此引起的细胞凋亡减少与其他基因异常所致的细胞过度增殖共同导致瘢痕的形成。     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。     

Bcl-2与胆管细胞癌

Bcl-2原癌基因是细胞凋亡的重要抑制基因，其编码蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，它的过度表达是肿瘤发生和发展的重要原因。胆管细胞癌是起源于胆道上皮细胞的恶性肿瘤，Bcl-2癌基因在该肿瘤细胞中高表达。本文综述Bcl-2及其在胆管癌细胞凋亡中的调节作用。     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

脆性组氨酸三联体基因蛋白在直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(FHIT)在直肠癌组织中的表达情况及其与细胞凋亡间的关系。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测16例正常直肠和16例腺瘤组织标本及80例直肠癌组织中的FHIT、Bax、Bcl-2和survivin基因蛋白的表达,并运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测直肠癌细胞凋亡。结果(1)直肠癌组织FHIT蛋白异常表达率为53.8%(43/80),其表达减弱与患者年龄、性别及肿瘤组织分型无关(P>0.05);而与肿瘤Dukes分期、淋巴结转移和患者的5年生存率关系密切(P<0.05,P<0.01)。(2)Bax、Bcl-2和survivin在直肠癌组织中的表达率分别为72.5%、51.3%和77.5%;survivin蛋白高表达与FHIT蛋白低表达密切相关(P<0.05);FHIT蛋白表达下降的同时,Bcl-2上调及Bax下调(P<0.01)。(3)FHIT蛋白表达减弱时细胞凋亡指数(AI)也下降;FHIT蛋白不同表达组间的AI比较,P<0.01。结论FHIT基因表达下降可能与直肠癌的发生密切相关,FHIT基因可能参与肿瘤细胞凋亡的调节。     

Mcl-1基因与肿瘤的靶向治疗

髓细胞白血病基因-1 (Mcl-1)基因是Bcl-2基因家族成员之一,在细胞的生长和分化过程中有重要作用.Mcl-1蛋白是通过线粒体途径参与细胞凋亡过程的重要分子,半衰期很短,其表达受多种信号转导通路调控.Mcl-1基因在人类多种肿瘤细胞中高表达,并且与肿瘤的耐药关系密切.近年来的研究显示,通过应用药物抑制Mcl-1基因的表达,可促进肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的治疗提供了新的靶点.本文就Mcl-1基因的功能以及靶向Mcl-1基因的药物在肿瘤化疗中的研究作一综述.     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

放射治疗对小鼠肾癌细胞凋亡和Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:观察放射治疗对BALB/c小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:建立BALB/c小鼠的肾癌细胞移植瘤放射治疗模型;HE染色测定肿瘤细胞死亡面积,采用免疫印迹法(western blot法)检测肿瘤组织的凋亡相关蛋白表达.结果:放疗组小鼠移植瘤生长速度较肿瘤对照组明显减慢.放疗组小鼠肿瘤组织中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调.结论:经放射治疗后,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,可能与放疗引发肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达变化相关.     

卵泡抑素对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制探讨

目的 探讨卵泡抑素（FST）对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质印迹法检测头颈鳞癌细胞系HSC-3、Fadu、Tu686以及人正常人口腔上皮细胞HOK中FST的表达水平。利用siRNA和shRNA构建敲低FST的细胞株，通过CCK8、细胞克隆形成、Transwell侵袭迁移和裸鼠皮下成瘤实验，研究敲低FST对肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响；将敲低FST的细胞株和对照组的总RNA送检转录组测序，对差异表达的基因进行信号通路富集分析，利用qRT-PCR对TGFβ信号通路进行初步验证，通过Western blot和流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 FST在Tu686、Fadu和HSC-3细胞中mRNA及蛋白表达水平均高于HOK细胞。肿瘤细胞敲低FST后穿过Transwell小室的数目显著减少、形成的克隆数目显著减少、肿瘤细胞增殖速度变慢、裸鼠皮下成瘤体积变小。RNA测序结果显示，与对照组相比，敲低FST的肿瘤细胞差异表达的基因在TGFβ信号通路中有明显富集，敲低FST后肿瘤细胞凋亡比例增加，凋亡相关蛋白Casepa...     

MiTF家族相关性肾癌的研究进展

<正>MiTF家族相关性肾癌包括Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌和t(6;11)(p21;q12)/TFEB基因融合相关性肾细胞癌。两者具有相似的临床特点、组织形态、免疫组化和分子遗传学特征,均以染色体易位形成转录因子基因,导致转录因子TFE3或TFEB过度表达,进而诱发肿瘤形成为特征。Mi TF家族相关性肾癌的分子生物学及临床特点显著不同于其他肾细胞癌。本文结合国内外研究进     

肝细胞癌中Bcl—2和Bax蛋白表达研究

目的：研究细胞凋亡抑制基因Bcl-2和细胞凋亡促进基因Bax在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法：应用免疫组织化学SABC法对35例HCC标本切片后进行Bcl-2和Bax蛋白染色,根据阳性率高低分析其表达与临床机理的关系。结果：HCC中Bcl02和Bax阳性细胞均为胞浆染色,35例HCC中Bcl-2和Bax蛋白各7例和13例阳性,Bcl-2和Bax蛋白在小肝癌更多见,全部7例Bcl-2蛋白阳性HCC中6例为组织分组II级,Bax蛋白在组织学分级I级的表达率明显低于Ⅱ＋Ⅲ级,Bcl-2蛋白表达有随临床分期升高而降低的趋势。Bcl-2,Bax蛋白联合表达仅见于4例HCC。结论：Bcl-2和Bax蛋白表达与HCC的组织学分级在关。Bcl-2和Bax蛋白在预后相对较好的HCC中较高表达,提示Bcl-2和Bax可能具有评估预后的价值。     

隔蛋白7抑制胶质瘤生长的体内研究

目的检测隔蛋白7（SEPT7）对U251细胞来源的胶质瘤的治疗效果并初步探讨其机制。方法建立SEPT7表达下调的人胶质瘤细胞系U251细胞来源的裸鼠皮下移植瘤模型，观察SEPT7构建体治疗后对肿瘤生长的影响，并应用免疫组化法检测SEPT7对肿瘤细胞的SEPT7、细胞周期因子、增殖相关蛋白PCNA以及抑制凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Caspase-3、侵袭相关蛋白MMP2／9和GFAP表达水平的改变以及TUNEL法检测肿瘤细胞闶亡。结果接受SEPT7治疗的裸鼠肿瘤的生长速度明显减慢，肿瘤体积小于对照组和空载体组，差异具有统计学意义（P〈0．01）。SEPT7治疗后肿瘤标本SEPT7、GFAP表达明显上调，Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4表达下降或消失，p21、p16表达上调。PCNA、MMP2／9的表达均下降，Caspase-3表达增加，Bcl-2表达下降。SEPT 7可诱导肿瘤细胞出现凋亡，而对照组和空载体组几乎没有凋亡细胞。结论SEPT 7可造成肿瘤细胞G0／G1期阻滞从而显著抑制肿瘤生长、增殖，同时可抑制肿瘤的侵袭能力，并诱导肿瘤细胞出现分化和凋亡，由此可初步认定SEPT7为抑癌基因。     

脑星形细胞瘤Livin基因表达与细胞增殖的关系

Livin是最近发现的凋亡抑制蛋白（IAP）家族的新成员，其基因位于染色体20q13．3，全长46kb，有α及β两种异构体，分别编码长度为298及280个氨基酸的蛋白质。近期研究表明Livin基因在某些恶性肿瘤中表达，但该基因与神经系统肿瘤的关系至今国内外尚未见报道。本研究采用实时逆转录-聚合酶链反应（real—timeRT，PCR）的方法检测脑星形细胞瘤中Livin α、β的表达，并结合免疫组织化学检测细胞增殖活性，现报告如下。     

Bcl-2与VEGF在膀胱移行细胞癌的表达及其意义

目的:探讨凋亡抑制基因Bcl-2与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCC)组织的表达,以及二者表达与TCC生物学行为的相关性.方法:分别对45例TCC组织、34例相应的癌旁组织和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学法检测Bcl-2的表达,免疫蛋白印迹(Western Blotting)法检测VEGF蛋白的表达,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果:Bcl-2和VEGF蛋白在45例TCC组织中的阳性表达率分别为51.1%和62.2%,均显著高于癌旁组织(7.9%和5.9%)(P<0.05);而在正常膀胱组织二者均无表达.同时,Bcl-2在VEGF表达阳性的TCC组织中呈高度表达,Bcl-2和VEGF的表达密切相关(x2=5.148,P<0.05).结论:提示Bcl-2可能参与TCC的发生和发展;Bcl-2可能通过上调VEGF的表达而促进TCC的转移,同时VEGF也可能通过诱导Bcl-2的表达而抑制肿瘤细胞的凋亡.     

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P0.05)。结论:STIM1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。     

铅致大鼠睾丸细胞凋亡的实验研究及临床意义

目的探讨铅致大鼠睾丸生精细胞凋亡及其机制。方法40只成年雄性Wistar大鼠随机均分为4组:对照组,低、中、高剂量实验组。实验组分别腹腔注射醋酸铅5、10、20mg/kg体重,对照组注射等体积生理盐水,3周后手术取睾丸,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel法)及免疫组化技术检测睾丸组织生精细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果3周后,中、高剂量组细胞凋亡及Bax基因表达较对照组差异有显著性(P<0.01),低剂量组较对照组无显著性。3个实验组的Bcl-2基因表达较对照组差异有显著性,且各组间亦有显著性(P<0.01)。结论铅负荷至一定程度时可致大鼠生精细胞凋亡,且呈一定量效关系,这种作用可能与Bcl-2基因低表达和Bax基因高表达有关。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。