脱氧氟尿苷增强顺铂对人肝癌BEL-7402细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨脱氧氟尿苷（5-DFUR）和顺铂（CDDP）联合应用对人肝癌细胞系BEL-7402的增殖抑制作用。方法 采用克隆形成法检测细胞的增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 5-DFUR（7.815～250mg/L）和CDDP（0.63～20mg/L）单独应用均对人肝癌BEL- 7402细胞有抑制作用，呈现剂量效应关系。5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402产生显著的协同杀伤作用，5-DFUR与CDDP浓度接近IC50时即5-DFUR 62.5mg/L与CDDP 2.5mg/L联合用药时可使CDDP的抑制率从单独用药的45.12%提高到联合用药的89%（P〈0.01）。CDDP、5-DFUR单独应用48h后可诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡，凋亡比率分别为15.37%和21.25%，联合用药组在48h细胞凋亡的比率则为19.37%，72h后CDDP、5-DFUR单独应用诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡的比率分别为19.3%和28.37%，而联合应用组诱导凋亡细胞的比例达到55.7%（P〈0.01），CDDP与5-DFUR单用72h时，细胞周期G1期阻滞较为明显，而当5-DFUR与CDDP合用后，G1期、S、G2期/M期细胞增加，尤其是G2期/M期细胞数增加明显。结论 5-DFUR与CDDP联合应用对人肝癌细胞BEL-7402可产生显著的协同杀伤作用，其细胞周期调节发生在G2～M期，细胞被阻滞于G2～M期。     

线粒体在雷帕霉素诱导肝癌细胞Bel-7402凋亡中的作用

目的观察雷帕霉素（rapamycin,RAPA）体外对肝癌细胞Bel-7402的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机理中的作用。方法以5、10、20、30、40和50nmol／L不同浓度的RAPA作用于体外培养的Bel-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞凋亡;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential）的变化。结果RAPA可显著地抑制Bel-7402的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系,50nmol／LRAPA作用72h,引起的细胞抑制率和凋亡率明显高于其他浓度药物组（P〈0．01）。RAPA作用Bel-7402细胞48h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见细胞核浓缩、细胞核碎裂等典型的细胞凋亡特征。凋亡过程中线粒体膜电位下降。结论RAPA能抑制Bel-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,线粒体膜电位下降在凋亡过程中可能起到重要作用。     

转染TSLC1基因肝癌细胞株BEL-7402生物学特性的研究

目的 将人TSLCl基因转染人肝癌细胞BEL-7402中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 用脂质体法将TSLCl基因的真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)/TSLCl导人人肝癌细胞株BEL-7402中,G418筛选克隆,再以逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)、Western blot的方法检测TSLCI的表达,细胞计数、流式细胞术及裸鼠负荷瘤实验分析转染后细胞的生物学特性变化.结果 TSLCl在BEL-7402细胞中的表达可抑制BEL-7402细胞的生长,BEL-7402-TSLCI与BEL-7402比较s期及G2/M期的细胞减少,G0/G1期的细胞增加.转染后的BEL-7402-TSLCl细胞的凋亡明显增加,转染后荷瘤裸小鼠肿瘤的生长受到抑制.结论 TSLCl基因的转染可以抑制BEL-7402细胞的增殖、诱导肝癌细胞的凋亡,为肝癌的基因治疗提供理论依据.     

表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的增殖腺病毒对肝癌细胞的抑制作用

目的 观察表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA(hTERT-siRNA)的增殖腺病毒(ZD-hTERT)对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡影响.方法 ZD-hTERT、增殖腺病毒ZD-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-hTERT、增殖缺陷腺病毒Ad-EGFP分别感染人肝癌Bel-7402细胞.Western blot法检测ElA表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测hTERT表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活;结晶紫染色法检测细胞毒作用;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡.结果 感染ZD-hTERT、ZD-EGFP的Bel-7402细胞表达ElA;抑制hTERT表达作用依次为ZD-hTERT>Ad-hTERT>ZD-EGFP>Ad-EGFP;抑制Bel-7402细胞生长及细胞毒作用依次为ZD-hTERT>ZD-EGFP=Ad-hTERT>Ad-EGFP.感染ZD-hTERT、ZD-EGFP、Ad-hTERT、Ad-EGFP的Bel-7402细胞凋亡率(%)分别为(88.1±2.2)、(39.2±2.1)、(42.1±5.1)、(7.5±2.1),ZD-hTERT诱导凋亡作用最高(P<0.01).结论 表达hTERT-siRNA的增殖腺病毒能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞hTERT基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

三氧化二砷对肝癌细胞系BEL—7402的影响

目的 观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对肝癌细胞BEL－7402的影响及其作用机理。方法 应用不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞后，观察肝癌细胞的存活、形态学改变，并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况。结果 不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性，发生作用后细胞生长明显受抑制；有明显的凋亡特征性改变：细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；流式细胞仪分析显示，肝癌细胞存在G2／M期阻滞，在G1峰前出现明显的凋亡峰；琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。结论 三氧化二砷可明显抑制肝癌细胞的生长，其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响.方法 采用Wester blot检测经TSA处理后肝癌细胞的乙酰化水平;运用流式细胞计数(FCM)分析TSA对肝癌细胞周期和凋亡的影响.结果 TSA处理BEL-7402细胞16 h后细胞乙酰化水平到达最高峰;用TSA处理BEL-7402细胞16 h后,肝癌细胞G0/G1细胞从43.39%升高到53.82%,统计学检验,其差异有统计学意义.S细胞从26.62%降到20.85%,G2/M细胞从27.86%降到22.07%,细胞凋亡由0.93%降到0.75%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TSA能够阻滞HCC细胞周期C1～S期进程,抑制细胞生长,而对HCC细胞凋亡无明显影响.     

氯化钴诱导低氧环境对人肝癌HepG2细胞株的生长影响

目的 建立人肝癌HepG2细胞在氯化钴诱导的低氧环境下的生长模型,观察不同浓度氯化钴(CoCl2)诱导的低氧环境对人肝癌HepG2细胞的增殖、细胞的周期与凋亡即细胞的生长状况影响,探讨氯化钴诱导的低氧对人肝癌HepG2细胞生长的作用机制.方法 将对数期人肝癌细胞株HepG2细胞,分为加入不同浓度(50 μm/L、100 μm/L、150 μm/L、200 μm/L)氯化钴的实验组和加入等体积培养基的对照组,(1)通过MTT法检测HepG2细胞增殖情况计算细胞的抑制率并绘制HepG2细胞生长抑制曲线;(2)划痕实验观察HepG2细胞的迁移能力;(3)通过流式细胞仪的Annexin-VFITC/PI双染法和PI单染法检测细胞的凋亡和周期变化;(4)通过Western Blot法检测HepG2细胞的Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)通过MTT法检测结果示在一定的时间和浓度范围内氯化钴抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性关系.(2)划痕损伤实验说明:氯化钴抑制HepG2细胞的迁移及损伤修复能力,呈浓度依赖性关系.(3)流式细胞仪的检测结果显示:对照组、不同浓度(50 μm/L、100 μm/L、200 μm/L、300 μm/L、500 μm/L)的实验组的细胞凋亡率(％)分别是:3.42、7.74、13.07、20.56、28.53、44.45(P ＜0.05),与对照组相比实验组的凋亡率明显增加,并呈浓度依赖性.细胞的周期结果显示:随着浓度增加,氯化钴能明显抑制HepG2细胞周期的变化,阻滞细胞周期于G1期,从而抑制细胞的增殖.(4) Western Blot法检测:与对照组相比,经过不同浓度氯化钴处理后的实验组Bcl-2蛋白的表达明显减少.结论 在一定范围内,氯化钻诱导的低氧环境可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖以及愈合迁移的能力,诱导细胞凋亡并呈时间-剂量的依赖性关系,其作用机制可能与Bcl-2蛋白的表达减少有关.     

脑源性神经营养因子对肝癌细胞氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的：探讨外源性脑源性神经营养因子（BDNF）对人肝癌Bel-7402细胞氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的影响。 方法：分别用5-FU（5-FU组）和5-FU+BDNF（5-FU+BDNF组）处理Bel-7402细胞,以无干预的 Bel-7402细胞作为对照组。用MTT法、克隆形成试验和流式细胞仪检测细胞生长与凋亡情况,RT-PCR法检测细胞bcl-2 mRNA的表达。 结果：5-FU组细胞OD值、克隆形成数明显降低,细胞凋亡率明显升高,bcl-2 mRNA表达明显下调（均P<0.05）,与对照组比较差异均有统计学意义（均P<0.05）;而5-FU+BDNF组以上指标的改变均不明显,与对照组的差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：BDNF能降低肝癌Bel-7402细胞5-FU化疗敏感性,该作用可能与BDNF上调bcl-2的表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度的DHA（0,25,50,100,200 μmol/L）分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用 Bel-7402细胞48 h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性。结果：不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性（均P<0.05）;细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性（均P<0.05）,但无明显时间依赖性（均P>0.05）。不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论：DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

三氧化二砷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡及与线粒体跨膜电位的关系。方法应用不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后，观察As2O3对肝癌细胞生长状态的影响；通过噻唑蓝（MTT）比色法观察其对Bel-7402细胞增殖的影响；利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察经Annexin V-FITC／PI双染后的细胞早期凋亡；通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测线粒体跨膜电位（MMP）的改变情况；并通过底物染色法反映Caspase-3的活性。结果不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后有明显的时间和剂量依赖性；经Annexin V-FITC／PI双染后，可观察到Bel-7402细胞的早期凋亡现象，2μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为9．89％，作用48h细胞凋亡率为48．53％，而4μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为18．27％，作用48h细胞凋亡率为67．52％；经As2O3药物作用后，细胞线粒体膜电位水平下降，且与药物作用时间和药物浓度有关（P〈0．05）；同时Caspase-3活性被激活。结论As2O3可明显抑制肝癌细胞Bel-7402的生长，并使细胞线粒体膜电位下降，诱导肝癌细胞凋亡。     

细胞增殖对DNA损伤敏感度的影响

目的 观察细胞增殖状态对DNA损伤敏感度的影响.方法 相同时间和强度的紫外线(uV)作用于过以及未经过植物m凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞(PBLs),荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DSBs)处的,y-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤,用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡.结果 经PHA刺激PBLs细胞进人增殖状态,UV可引起DNA双链断裂,增殖期的PBLs细胞DNA损伤程度明显大于静止期PBLs细胞.结论 受到相同打击后,处于增殖期的淋巴细胞DNA损伤较静止期更为明显.     

X线照射对胆囊癌GBC-SD细胞增殖周期的影响

目的：探讨X线照射对胆囊癌细胞系GBC—SD的生长及对细胞增殖周期的影响。方法：分别给予体外培养的人胆囊癌细胞系GBC—SD以0,5,10,20Gy X线照射。通过MTT方法测定在不同剂量X线照射下的细胞生长变化。通过流式细胞仪检测胆囊癌细胞于照射后增殖周期时相的变化。结果：较大剂量的X线能抑制胆囊癌GBC-SD细胞系的生长,24h表现出明显的抑制作（P=0．002）;72h抑制作用更加显著（P〈0．001）：其作用呈现效应．剂量依赖性。流式细胞仪检测发现不同的剂量照射后,处于细胞周期不同阶段的细胞会发生不同的变化。24h：胆囊癌细胞的G0-G1、S期细胞比例减少．G2-M期细胞比例增加。72h：胆囊癌细胞的G0-G1细胞比例增加,S期、G2-M期细胞比例减少。实验同时发现小剂量的照射可刺激胆囊癌细胞的增殖,使S、G2-M期细胞增加;而提高照射剂量,使胆囊癌细胞生长停滞在G0～G1期．而S期、G2-M细胞百分比减少。结论：X线照射可通过改变细胞增殖周期分布比例抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长：增加照射剂量可提高胆囊癌的治疗疗效。     

In vitro study of the effect of hyperthermia on normal bladder cell line and on five different transitional cell carcinoma cell lines.

Intraluminal hyperthermia is potentially useful in the management of superficial bladder cancer. The potential inhibitory effect of hyperthermia on various human bladder cancer cell lines, normal human bladder cells and the murine MBT-2 bladder cancer cell line has been studied in vitro. These cell lines were exposed for one hour to 43 +/- 0.5C and compared to controls. Cell survival was assessed comparing the cell growth curve and colony formation. The human transitional cell carcinoma (TCC) cell lines vary in their sensitivity to heat. MGH-U1 was the most heat sensitive cell line. The human A-1698, CUB-2, UM-UC-3 and the murine MBT-2 lines were heat insensitive. We conclude that the cytocidal effect of hyperthermia in bladder transitional cell carcinoma is variable. Further experiments using the combination of hyperthermia and intravesical anticancer agents are in progress.     

Effect of kallikrein on the Sertoli cell function

The effect of kallikrein on the Sertoli cells was investigated to determine the rat testicular androgen binding component (ABC = androgen binding protein + androgen receptor) concentration using the dextran-coated charcoal method. The results showed that the concentrations of testicular ABC were increased significantly by the administration of kallikrein to levels approaching those seen after stimulation by LH-RH or FSH. Therefore, it is suggested that kallikrein has an effect that influences the Sertoli cells directly or indirectly.     

肝干细胞来源的研究进展

从广义上讲,肝干细胞并非特指某一类细胞,而是与肝脏胚胎发育及再生有关的各类具有干细胞特性细胞类型的总称,是一种具有分化为成熟肝细胞和胆管细胞能力和自我更新能力的多潜能干细胞.根据其起源的不同,通常可分为肝源性肝干细胞和非肝源性肝干细胞.     

SNP对生殖细胞凋亡作用的研究

目的探讨一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记法(TUNEL),透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测生殖细胞凋亡的特征。结果TUNEL标记法检测表明,NO供体SNP可诱导生殖细胞的凋亡,并呈剂量时间依赖性,SNP组凋亡率明显高于对照组(P＜0.01)。透射电镜观察SNP处理15～20h后的生殖细胞,核染色质凝集,附着于核边缘呈新月形,核固缩、碎裂形成凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳显示生殖细胞DNA片段呈现凋亡特征性的梯形区带。结论一氧化氮对生殖细胞的凋亡具有促使形成作用,这对不育症的研究有重要的价值。