去甲斑蝥素对人原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖及相关基因的干预效应

目的　研究去甲斑蝥素 (NCTD)对人原发性胆囊癌GBC SD细胞系增殖及相关基因的干预效应。方法　实验分NCTD组 (7个浓度梯度组 ,每组 6孔 )和对照组 (n =6) ,分别应用四唑盐比色法和链霉素亲合生物素复合物法测定NCTD对体外培养GBC SD细胞的体外杀伤效应和对增殖细胞核抗原 (PCNA)、Ki 67表达的影响。结果　NCTD分别在浓度 10mg/L、时间 6h时 ,即对GBC SD细胞增殖有抑制作用 ,且随浓度升高、时间延长作用增强 ,呈剂量 时间效应关系 ;实验组PCNA和Ki 67表达的棕褐染色细胞数和阳性指数 (PCNA :0 .93 2± 0 .0 3 1vs 0 .3 18± 0 .0 2 3 ;Ki 67:0 .964± 0 .0 92vs 0 .2 97± 0 .0 18;n =10 )与对照组比较均显著减少 (P <0 .0 5 )。结论　NCTD能抑制人原发性胆囊癌GBC SD细胞的生长和PCNA、Ki 67增殖相关基因蛋白的表达。     

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系MMP2、TIMP2和MMP2/TIMP2的影响

胆囊癌是一种浸润转移早、预后差的恶性肿瘤。目前的治疗方法如手术、化放疗,疗效均不甚满意。本研究探讨中药斑蝥的低毒提取物去甲斑蝥素对人原发性胆囊癌GBC-SD细胞的基质溶解相关基因蛋白MMP2、TIMP2和MMP2／TIMP2的影响,以探讨其抗侵袭转移机制。 1.实验材料:人胆囊癌GBC-SD细胞株:购自上海细胞所国家细胞库。药物:去甲斑蝥素,购自北京第四制药厂。抗体:基质金属蛋白酶-2(matrix     

脐血源性CIK细胞的体外增殖及其对人胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的实验研究

目的探讨脐血CIK细胞的体外增殖活性及其对人胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤作用。方法通过在脐血单个核细胞中加入IFN-γ、IL-2和CD3单克隆抗体进行细胞培养,获得多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine inducde killer cells)即脐血CIK细胞。用流式细胞仪对细胞作动态表型分析,用MTT法测定其抗肿瘤活性,并与CD3AK作对比分析。结果脐血CIK细胞在培养2周左右获得大量增殖,CD3~-、CD56~ 双阳性细胞大量增殖达1000倍以上;CIK细胞及其培养上清抗人胆囊癌细胞株GBC-SD活性明显优于CD3AK细胞,其抑瘤率为85%与62.8%(P<0.05),早期培养过程中加入G-CSF可以显著提高CIK细胞的增殖活性。结论脐血CIK细胞是一种新型、高效的免疫杀伤活性细胞,其对人胆囊癌细胞株GBC-SD具有明显的细胞毒作用,研究脐血CIK细胞对胆囊癌的过继性免疫治疗具有重要的临床意义。     

姜黄素调控miR-199a-3p基因抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中,并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组;将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20...     

柚皮素对人与小鼠乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

背景与目的：柚皮素（NAR）是天然黄酮类单体,已被发现对卵巢癌、直肠癌、肺癌具有抗癌效果,但对乳腺癌的作用尚不清楚,故本实验探讨NAR对不同种属乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并初步分析机制,为乳腺癌的药物研发提供理论和实验依据。 方法：选用体外培养人乳腺癌MCF7细胞和小鼠乳腺癌4T1细胞为研究对象,分别将两种细胞分为2个浓度的NAR（100、200 μg/mL）处理组和对照组,对照组用溶剂DMSO处理。用CCK-8法检测以上处理不同时间后（24、48、72 h）细胞活力的变化;用细胞克隆实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验和Hoechst凋亡染色实验检测以上处理24 h后细胞的克隆形成、迁移、侵袭能力与凋亡情况,用Western blot检测Akt、凋亡和周期相关蛋白以及上皮间质转化（EMT）相关分子的表达。 结果：与各自对照组比较,NAR处理后的两种乳腺癌细胞的细胞活力明显降低,且呈一定的时间与浓度依赖趋势（均P<0.01）。与各自对照组比较,NAR处理后的两种乳腺癌细胞的克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率均明显增加（均P<0.01）;NAR处理后的两种乳腺癌细胞中Akt、Bcl-2、CDK4、cyclin D1、MMP-9蛋白表达量明显降低,而Bax蛋白表达量显著升高（均P<0.01）。 结论：NAR可以有效抑制人乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进凋亡。其作用机制可能与抑制Akt通路、细胞周期和EMT过程相关。     

阿司匹林通过抑制STAT3磷酸化下调MCL-1和VEGF mRNA和蛋白表达促进胆囊癌细胞凋亡、抑制增殖

目的 探讨阿司匹林对人胆囊癌细胞株GBC-SD细胞凋亡及增殖的影响及其潜在机制.方法 采用MTT法检测不同浓度梯度及作用时间下阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响;Real-time PCR检测GBC-SD细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、髓细胞白血病因子-1(MCL...     

靶向沉默维生素D受体基因对前列腺癌细胞迁移及侵袭性的影响

目的:探讨小干扰RNA靶向沉默维生素D受体(VDR)对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响。方法:构建VDR-shRNA慢病毒载体,用RT-PCR和Western印迹法分别检测VDR的mRNA和蛋白表达水平;通过细胞划痕愈合实验和Transwell小室检测VDR被沉默后的PC-3细胞迁移能力和侵袭性的变化。结果:VDR-shRNA质粒显著干扰VDR表达,并成功筛选VDR-shRNA干扰稳定的细胞株;细胞划痕实验结果显示划痕愈合率VDR干扰组为59%明显低于空白对照组73.6%和LV3阴性对照组的77.8%,组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。Transwell小室实验显示VDR干扰组透膜细胞数量明显低于空白对照组和LV3阴性对照组约为50%,细胞组间差异有显著性(P0.05),空白对照组和LV3阴性对照组组间差异无显著性(P0.05)。VDR干扰组细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组细胞。结论:VDR基因表达水平能影响前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力,VDR低表达可致前列腺癌细胞迁移及侵袭能力下降。     

ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法:以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、delta8.9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体。通过细胞增殖实验(CCK-8法)和transwell实验,分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3-shRNA1#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后,监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白p-AKT和p-ERK。结果:与NC组比较,RNAi组的细胞增殖能力显著下降(P     

外源性CC10基因表达对肝癌细胞增殖、 凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探究外源性Clara细胞分泌蛋白10（CC10）的基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和 侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blotting检测人正常肝细胞LO2和 肝癌细胞HepG2、Hep3B中CC10的内源表达水平;将HepG2细胞系分为pcDNA 3.1组和pcDNA 3.1-CC10 组,用LipofectionTM分别转染pcDNA 3.1空载体质粒和重组质粒pcDNA 3.1-CC10。用CCK-8法、TUNEL 法和Transwell小室实验分别检测两组细胞增殖、凋亡情况及迁移、侵袭能力。采用RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞中CC10和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达水平。结果 与正常肝细胞LO2相 比,CC10在肝癌细胞HepG2、Hep3B中呈明显低表达（P<0.05）;转染 pcDNA 3.1-CC10后的HepG2细胞内 CC10 mRNA和蛋白水平均显著增高（P<0.05）。与 pcDNA 3.1组相比,pcDNA 3.1-CC10组细胞活力受到抑 制,细胞活力以时间依赖性方式降低（P<0.05）,细胞迁移和侵袭实验中的过膜细胞数均低于pcDNA 3.1组 （P<0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA 3.1组（P<0.05）。同时,Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 （P<0.05）。 结论? 外源性CC10基因表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与 下调Cyclin D1表达有关。     

CircDONSON靶向miR-4458对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨CircDONSON对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法检测肝癌组织中CircDONSON、miR-4458表达量;肝癌细胞Huh-7分为si-NC组、si-CircDONSON组、miR-NC组、miR-4458组、si-CircDONSON+anti-miR-NC组、si-CircDONSON+anti-miR-4458组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭情况;双荧光素酶报告实验检测miR-4458与CircDONSON靶向的关系;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果:肝癌组织中CircDONSON表达量较癌旁组织升高(4.82±0.38比1.00±0.12,P<0.05),miR-4458表达量较癌旁组织降低(0.34±0.04比1.00±0.07,P<0.05);抑制si-CircDONSON或过表达miR-4458降低肝癌细胞活力、划痕愈合率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05)减少,细胞克隆...     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

siRNA诱导EZH2基因增强子的表观沉默及其对人前列腺癌细胞的增殖抑制

目的 通过小分子RNA(siRNA)介导靶基因沉默技术,干扰前列腺癌细胞中果蝇zeste基因增强子的人类同源物的表达,以探讨靶向EZH2基因的RNAi对前列腺癌细胞增殖抑制的效应.方法 设计靶向EZH2基因的RNA干扰(RNAi)载体,构建重组表达质粒并且转染人前列腺癌细胞22RV1.利用MTT比色法检测靶向沉默EZH2表达对于22RVl的增殖抑制的影响:利用qRealtime-PCR鉴定转染组与空白组细胞中EZH2基因mRNA的表达量;提取各组细胞的总蛋白,利用Western Blotting检测EZH2蛋白的表达情况.结果 在转染了靶向EZH2基因siRNA的细胞株中,可以检测到EZH2表达呈明显的下调趋势:而在空白对照组中其表达很稳定.另外,诱导EZH2基因沉默可以抑制该前列腺肿瘤细胞的增殖和生长.上述结果 在各组细胞间旱现明显的统计学差异(P<0.05).结论 siRNA诱导的RNAi可以有效的抑制其靶基因EZH2的表达,同时可以抑制前列腺癌细胞的增殖和生长,是一种潜在的基因治疗新方法 .     

吡咯替尼抑制胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭并诱导凋亡的作用研究

背景与目的:胆囊癌是胆道系统中最常见的恶性肿瘤,早期诊断困难,预后较差。研究显示,人表皮生长因子受体2(ErbB2)表达的异常可能在胆囊癌的发生发展中起了重要作用,故本研究通过体外实验观察ErbB2抑制剂吡咯替尼对胆囊癌细胞基本生物学行为的影响,以期为相关的研究与临床引用提供理论与实验基础。方法:选择胆囊癌NOZ细胞与SGC-996细胞为研究对象,用CCK-8法检测吡咯替尼对两种胆囊癌细胞作用的时间与浓度效应;根据CCK-8实验结果,选择最适作用时间下吡咯替尼对两种细胞相应25%(IC25)、50%(IC50)、75%(IC75)抑制浓度为后续实验浓度,通过细胞克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞分析法以及Western blot法分析吡咯替尼对两种胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭能力、凋亡以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:吡咯替尼处理24、48、72 h对NOZ细胞与SGC-996细胞的IC50分别为11.5、3.6、1.4 μmol/L和5.5、5.2、2.4 μmol/L。选择采用作用48 h时各自的IC25、IC50、IC75吡咯替尼浓度(NOZ细胞:1、3.5、12 μmol/L;SGC-996细胞:2.5、5、10 μmol/L)作用后,两种胆囊癌细胞均表现为集落的形成明显减少、迁移和侵袭能力明显减弱、细胞凋亡率明显增加、促凋亡蛋白(Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、cleaved-PARP)明显表达上调、抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-2/Bax比值)表达明显下调,且以上变化均呈明显的浓度依赖性(均P<0.05)。结论:吡咯替尼在体外能够抑制胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭,并通过促进凋亡发挥了细胞杀伤作用,为胆囊癌的分子靶向药物治疗提供了新的选择。     

miR-597调控FOSL2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的 探讨miR-597对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,及其与FOS样抗原2(Fos-related antigen 2,FOSL2)的靶向关系.方法 选取乳腺癌细胞株T-47D,SK-BR-3,MDA-MB-231,MCF7及BT-474,正常乳腺细胞株MCF10A为研究对象,分别转染miR-597(miR-59...     

microRNA-133b抑制人结直肠癌细胞迁移和侵袭的研究

目的研究microRNA-133b在结直肠癌细胞中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时定量PCR检测microRNA-133b(miR-133b)在不同恶性程度的结直肠癌细胞及正常结肠细胞中的表达差异;构建miR-133b的真核表达载体并稳定转染SW-620细胞,筛选出稳定表达miR-133b及对照质粒的细胞株SW-620-133b和SW-620-HK,实时定量PCR检测转染后miR-133b表达的变化;划痕实验检测miR-133b对SW-620细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-133b对SW-620细胞侵袭能力的影响。结果正常结肠细胞系CCD-18Co中miR-133b的表达显著高于4种结直肠癌细胞(SW-480,HT-29,LoVo,SW-620)(P0.05),且其在结直肠癌细胞中的表达随着肿瘤细胞恶性程度的增加而降低。稳定转染后,SW-620-133b细胞miR-133b表达量较SW-620及SW-620-HK组显著增高(P0.05);miR-133b对SW-620细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.2±2.6)%及(66.3±8.7)%。结论miR-133b在结直肠癌细胞中呈低表达,miR-133b高表达能显著抑制SW-620细胞的迁移和侵袭能力。     

5-Aza-dc对膀胱癌ScaBer细胞CDH13基因甲基化状态和蛋白表达以及细胞增殖迁移侵袭的影响

目的 探讨去甲基化药物5-Aza-dc对膀胱癌ScaBer细胞CDH13基因甲基化状态和蛋白表达以及细胞增殖迁移侵袭的影响.方法 以膀胱癌ScaBer细胞为研究对象,分为5-Aza-dc处理组和对照组.应用5-Aza-dc与ScaBer细胞共同孵育后,用MSP检测CDH13基因甲基化状态、western blot检测CDH13的表达水平、MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell法检测细胞侵袭能力.结果 5-Aza-dc与ScaBer细胞共同孵育后CDH13基因甲基化状态得到逆转,与对照组相比CDH13蛋白表达明显增加(P＜ 0.05);实验组细胞增殖能力下降,迁移和侵袭能力减弱,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 5-Aza-dc可逆转CDH13基因的甲基化状态并使其蛋白表达增加,CDH13表达增加后细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱,CDH13有可能成为膀胱癌治疗的新的靶点.     

长链非编码RNA ITGB1在胆囊癌组织表达及其对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) ITGB1在胆囊癌组织表达及其对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取2018年8月到2020年8月我院收集的98例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析胆囊癌组织和癌旁组织lncRNA ITGB1表达水平;胆囊癌细胞系GBC-SD随机分...     

敲低Abl相互作用蛋白1的表达抑制胃癌细胞NCI-N87的体外增殖和迁移

目的 探讨敲低Abl相互作用蛋白1(Abl interactor 1,ABI-1)对胃癌NCI-N87细胞体外增殖和迁移能力的影响.方法 利用脂质体和嘌呤霉素筛选稳定表达ABI-1短发夹RNA(short hairpin RNA,ShRNA)的NCI-N87模型细胞,用实时定量RT-PCR和Western blot鉴定ABI-1敲低的效果;用CCK-8试剂盒、细胞骨架染色和Transwell小室检测ABI-1敲低对细胞增殖、形态和骨架以及迁移的影响;用Western blot检测磷酸化AKT蛋白的表达.结果 成功获得表达ABI-1-ShRNA的NCI-N87细胞模型.CCK-8法检测显示NCI-N87-Vector和NCI-N87细胞在36 h和48 h的增殖率之间相比差异均无统计学意义(t=0.400、0.489,P＞0.05),而NCI-N87-ABI-1-ShRNA在36 h和48 h这2个时间点的增殖率均低于NCI-N87细胞(t=2.85、4.166,P＜0.05),ABI-1敲低抑制NCI-N87细胞的增殖.细胞骨架染色显示ABI-1敲低能够改变90%NCI-N87细胞的形态和骨架结构.Transwell研究显示NCI-N87、NCI-N87-Vector和NCI-N87-ABI-1-ShRNA的细胞迁移数分别是66±8、65±8和30±4,前两者相比差异无统计学意义(t=0.269,P＞0.05),敲低组与NCI-N87相比差异有统计学意义(t=9.550,P＜0.05),ABI-1敲低抑制NCI-N87细胞的迁移.Western Blot显示ABI-1敲低抑制磷酸化AKT蛋白的表达.结论 ABI-1敲低可能通过PI3K/AKT通路抑制胃癌细胞NCI-N87的体外增殖和迁移.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ABI-1 gene knockdown upon the proliferation and migration of human gastric cancer cell NCI-N87 in vitro. Methods NCI-N87-ABI-I-ShRNA cell model was successfully constructed and validated by Real-time PCR and Western blot. The cellular morphous and skeleton, proliferative and migrative potents, and also AKT expression were compared between NCI-N87-ABI-1-ShRNA and its parents by immunofluorental staining, CCK-8 assay, transwell chamber and Western blotting. Results CCK-8 assay showed there was no significant difference in the proliferation rates at different time points between the NCI-N87-Vector and NCI-N87 cells while the proliferation rates at the time points of 36 and 48 hours of the NCI-N87-ABI-1-ShRNA were significantly lower than the NCI-N87( t =2. 85and 4. 166, P ＜ 0. 05 ). Transwell assay showed that migrated cell number were 66 ± 8, 65 ± 8 and 30 ± 4,respectively, and there was significant difference between the NCI-N87-ABI-1-ShRNA and NCI-N87 cells (t =9. 550,P ＜0. 05). Finally, ABI-1- knock-down altered the cellular morphoos and skeleton of 90％NCI-N87 cells and inhibited p-AKT expression. Conclusion ABI-1 inhibits proliferation and migration of NCI-N87 cells in vitro probably by PI3K/AKT pathway.     

降钙素基因相关肽对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的组织工程骨的神经化能有效促进支架材料内血管生成,修复骨缺损。研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖与迁移的作用,进一步揭示组织工程骨的神经化促血管生成机制。方法体外分离获取HUVECs,并通过血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)与CD31抗原鉴定,取第1代细胞用于实验。实验分为6组,分别以0(A组)、1×10—12(B组)、1×10—11(C组)、1×10—10(D组)、1×10—9(E组)、1×10—8mol/L(F组)浓度CGRP干预HUVECs。采用细胞免疫荧光观察HUVECs的CGRP1受体(CGRP1 receptor,CGRP1R)表达情况,AlarmarBlue法动态检测各组HUVECs增殖率,Transwell小室检测各组HUVECs的迁移能力,ELISA法检测HUVECs分泌VEGF的水平,Westernblot法检测其局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达。结果分离的细胞通过形态学及vWF、CD31免疫荧光鉴定为HUVECs,并可见CGRP1R在细胞质和细胞膜表达。CGRP呈时间-浓度依赖性刺激HUVECs增殖;B～F组各时间点细胞增殖能力均高于A组(P<0.05),F组各时间点细胞增殖能力最高。B～F组迁移细胞数均显著高于A组(P<0.05),最大增幅达3倍以上。B～F组VEGF分泌量均显著高于A组(P<0.05);C、D组促进细胞分泌VEGF的能力最强。Western blot检测示,与A组相比,B～F组CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d后,FAK表达明显增加(P<0.05)。结论 CGRP对HUVECs的增殖和迁移有直接促进作用,可能作用机制为CGRP能促进VEGF分泌和增加FAK的表达。     

腺病毒介导的PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclinD1、p21表达的影响

目的:构建携带抑癌基因PTEN的腺病毒载体,探讨PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclin D1、p21表达的影响。方法:采用RT-PCR方法从大鼠海马神经元扩增目的基因PTEN,连接入pENTR2A载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以携带PTEN基因的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测细胞中PTEN的过表达情况。Western印迹检测PTEN、cyclin D1和p21表达的变化,通过细胞生长实验、平板克隆实验检测PTEN对PC-3细胞增殖能力的影响。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-PTEN;PC-3细胞经Ad-PTEN感染后PTEN蛋白表达水平明显增加。Western印迹实验所得条带进行灰度值分析后与β-actin求比值,PTEN蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.215±0.065)明显高于对照组[(0.052±0.009),t=4.30,P0.05]和Ad-LacZ组[(0.056±0.008),t=4.21,P0.05]。cyclin D1蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.256±0.072)明显低于对照组[(0.502±0.087,t=3.77,P0.05)]和Ad-LacZ组[(0.498±0.081,t=3.87,P0.05)]。p21蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.589±0.076)明显高于对照组[(0.146±0.026,t=9.55,P0.01)]和Ad-LacZ组[(0.163±0.024,t=9.26,P0.01)]。MTT实验显示Ad-PTEN对PC-3细胞的抑制作用自48h后(21.98%)有显著性(t=6.80,P0.01)。平板克隆实验显示Ad-PTEN组克隆形成率[(37.4±4.18)%]明显低于对照组[(54.9±4.81)%,t=4.76,P0.01]及Ad-LacZ组[(56.5±5.42)%,t=4.83,P0.01]。结论:通过腺病毒载体Ad-PTEN使PC-3细胞表达PTEN基因,可以明显抑制细胞的增殖,并可降低cyclin D1表达,同时增加p21的表达。