非小细胞肺癌组织MGMT基因启动子过甲基化与临床病理特征相关性的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)过甲基化状况与临床病理特征的关系.方法:甲基化特异性PCR(MSP)检测120例病理确诊的非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织和30例病理确诊为肺炎症组织中MGMT的甲基化状况.结果:120例NSCLC组织中MGMT基因启动子甲基化率(35%)显著高于癌旁正常组织甲基化率(5%,P<0.05),亦显著高于30例正常肺组织中甲基化率(0,P<0.05).NSCLC中MGMT基因启动子过甲基化状态与淋巴结转移、TNM分期、吸烟史、肿瘤分化程度有关(P值均<0.05),与患者年龄、性别、病理组织类型无关(P值均>0.05).结论:在NSCLC中,MGMT基因启动子甲基化可能与肺癌的发生、发展相关.     

脑胶质瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动区甲基化及其表达异质性的研究

目的研究脑胶质瘤组织不同部位O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）启动区甲基化状态及其表达的差异性。方法在54例脑胶质瘤组织的中心和周边部位分别获取标本,共获得92份标本,采用巢式甲基化特异性PCR（MSP）进行MGMT启动区甲基化状态的检测,同时采用免疫组织化学方法进行MGMT蛋白表达的检测。结果 38例胶质瘤中获得了肿瘤两个不同部位MG-MT启动区甲基化的状态,其中24例胶质瘤MGMT启动区甲基化的状态是一致的,占总数的63.2%（24/38）。在29例胶质瘤患者中获得了肿瘤两个不同部位MGMT蛋白表达的情况,其中10例胶质瘤MGMT蛋白表达是一致的,占总数的34.5%（10/29）。两总体一致性概率间差值的95%置信区间为（5.6%和51.8%）,两者的差异有统计学意义。巢式MSP和免疫组化都获得检测结果的标本有77份,在61份MGMT启动区甲基化标本中,25份MGMT蛋白表达阴性,14份蛋白表达可疑阳性,18份蛋白表达阳性,4份蛋白表达强阳性。在16份MGMT启动区非甲基化标本中,2份MGMT蛋白表达阴性,2份蛋白表达可疑阳性,9份蛋白表达阳性,3份蛋白表达强阳性,MGMT启动区甲基化状态与蛋白表达呈负相关（r=-0.318,P=0.005）。结论脑胶质瘤MGMT蛋白表达在同一肿瘤的不同部位存在明显的异质性。虽然脑胶质瘤MGMT启动区甲基化的状态在同一肿瘤的不同部位存在一定的异质性,但是大多数脑胶质瘤MGMT启动区甲基化的状态在同一肿瘤的不同部位是一致的。脑胶质瘤MGMT启动区甲基化状态的一致性优于蛋白表达的一致性。脑胶质瘤MGMT启动区甲基化,MGMT蛋白表达较少,MGMT启动区非甲基化,MGMT蛋白表达较多。     

胶质瘤患者外周血 DNA 修复基因甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（ O6-Methylguanine -DNA methyltransferase,MGMT）及人类错配修复基因 MSH2（Human mutS homolog2,hMSH2）蛋白表达与外周血相应基因启动子甲基化的相关性。方法分别采用免疫组化法及甲基化特异性PCR （ MSP ）检测275例胶质瘤患者肿瘤组织MGMT、hMSH2蛋白的表达及外周血中这两个基因启动子甲基化情况。结果脑胶质瘤患者肿瘤组织MGMT和hMSH2蛋白阴性表达率分别为47．2％和62．5％;基因启动子区甲基化阳性率分别为41．8％和22．4％。统计学分析显示外周血MGMT基因启动子甲基化与肿瘤组织蛋白阴性表达相关（P＜0．05）。 hMSH2基因启动子甲基化与肿瘤组织hMSH2蛋白表达不具有相关性（P＞0．05）。结论 MGMT基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与胶质瘤的发生有关;而hMSH2基因启动子甲基化可能并不是胶质瘤hMSH2蛋白失活的主要原因,可能存在其他重要因素影响其表达。     

DNA修复酶MGMT与食管癌关系的研究进展

人O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT），能特异地修复N-亚硝基化合物引起的烷基化损伤。现将其在食管癌发生发展中的作用综述如下。     

胃癌中MGMT和EGFR表达及其意义

目的：探讨胃癌组织中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine—DNA—methyltransferase,MGMT）和表皮生长因子受体蛋白（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达情况及其临床意义。方法：采用SP免疫组织化学染色法检测69例胃癌标本中MGMT和EGFR的表达。结果：胃癌组织中MGMT和EGFR阳性率分别为52．17％（36／69）和59．42％（41／69）。MGMT和EGFR在淋巴结转移组阳性率明显高于无淋巴结转移组,差异显著（P〈0．05）。癌细胞浸润深组EGFR表达增高,癌细胞分化程度低组MGMT表达增高。MGMT和EGFR的表达存在低度正相关性（r=0．2723）。结论：检测MGMT和EGFR的表达对判断胃癌患者预后及制定相应的化疗方案有指导意义。     

DNA修复基因MGMT启动子区过甲基化与食管鳞状细胞癌

目的：O^6－甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）可以转移DNA加合物O^6－甲基鸟嘌呤中的甲基,从而修复DNA损伤,许多肿瘤中发现MGMT基因启动子过甲基化导致该基因失活,我们研究了MGMT基因启动子甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应及测序方法分析食管癌。癌旁组织和正常食管上皮中MGMT启动子甲基化状态。结果：在检测的199例食管癌组织中,46例（38．7％）有MGMT基因启动子过甲基化,相应癌旁组织22例中也有5例（22．7％）出现MGMT基因甲基化,而21例正常食管上皮均无此种改变。结论：MGMT基因启动子过甲基化是食管癌中常见的分子事件,可能发生在癌过程的早期阶段。     

选择性化疗方案治疗恶性胶质瘤的疗效和生存情况分析

背景与目的：O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT）表达与胶质瘤患者的化疗耐药相关。本研究总结MGMT高表达和低表达恶性胶质瘤患者的化疗方案、近期疗效和生存情况．分析选择性化疗是否对MGMT高表达患者有益。方法：自2000年8月至2006年1月,中山大学肿瘤防治中心神经肿瘤科收治的经手术后病理确诊的成人恶性脑胶质瘤患者57例．所有病例化疗前均有可评价病灶。化疗前用免疫组化方法检测肿瘤组织MGMT表达情况．对MGMT高表达者．尽量避免使用亚硝脲类或替莫唑胺单药化疗,采用不含亚硝脲类或替莫唑胺方案,或由替莫唑胺（temozolomide,TMZ）和顺铂组成联合化疗方案;或亚硝脲类药物、替莫唑胺分别与其他细胞毒药物组成联合化疗方案（VM-26、DDP、CBP、IFO、VP16）;对MGMT低表达者,不限制亚硝脲类药物或替莫唑胺的应用。结果：35例患者MGMT高表达,22例MGMT低表达,MGMT低表达组的客观有效率（objective response,OR）和疾病控制率（response rate,RR）高于MGMT高表达组（40．9％：22．9％和72．7％：60.0%．但差异无统计学意义（P〉0．05）。57例中位随访时间11．7个月（0．7～53．4）。MGMT低表达组和高表达组中位无疾病进展时间（Drogressive-free survival,PFS）分别是8．5个月（95％CI 4．8—19．3）和6．7（95％CI 3．7—9．3）,中位生存时间（overail survival,OS）分别是20．3（95％CI 14．3～）和16．105％CI 11．1～26．2）,中位PFS和0S在MGMT低表达组和高表达组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：在化疗前检测恶性胶质瘤MGMT表达情况,对MGMT高表达患者选用有助于克服耐药的化疗方案进行选择性化疗。可使MGMT高表达患者的近期疗效（客观有效率和疾病控制率）和生存时间（无疾病进展生存和总生存）达到MGMT低表达患者水平。     

食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究

目的：探索O~0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果：76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论：MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。     

MGMT和EGFR在乳腺癌中的表达及其相关性分析

[目的]研究乳腺癌组织中DNA修复酶O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）和表皮生长因子受体（EGFR）表达的相关性及其临床意义。[方法]采用免疫组织化学SABC法。检测66例乳腺癌组织中MGMT及EGFR的表达。[结果]乳腺癌中MGMT的阳性率为57．58％。EGFR的阳性率为48．48％，MGMT与EGFR的表达具有中度相关性（r=0．403）。有淋巴结转移患者MGMT与EGFR阳性率均高于无转移（P〈0．05）。[结论]检测MGMT与EGFR的表达对乳腺癌患者的预后判断和制定化疗方案具有指导意义。     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在大肠癌中的表达及意义

目的：检测大肠癌组织中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）的表达情况及其在肿瘤发生发展中的作用和临床意义。方法：采用SABC免疫组化法检测79例大肠癌标本中MGMT的表达情况。结果：大肠癌中MGMT阳性率为53．16％（42／79），其阳性表达与性别、癌细胞浸润深度无关（P〉0．05），与患者年龄、淋巴结转移情况有关（P〈0．05）。结论：检测MGMT的表达情况对于大肠癌恶性程度的判断及临床化疗方案的制定具有指导作用。     

中国非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因启动子甲基化的分析(英文)

目的分析65名中国南京军区南京总医院的非小细胞肺癌(NSCLC)住院患者血清中DAPK、p16启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC患者血清DAPK、p16基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％(20/65),p16基因甲基化检出率为43．1％(28/65),而正常对照组和良性肺部疾病组血清未检出DAPK基因、p16基因甲基化,DAPK基因、p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论 DAPK基因、p16基因检出启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一。     

DNA修复酶基因MGMT启动子区异常甲基化与食管癌的关系

背景与目的： 分析食管癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化状态和食管癌发病风险的关系,探讨MGMT基因启动子的异常甲基化在食管癌筛查及早期诊断中的意义。 材料与方法： 对江苏淮安的91例新发食管癌病例的癌组织、癌旁组织及外周血血浆样本提取DNA,应用甲基化特异性PCR(MSP)分析MGMT启动子区CpG岛的甲基化状态;对食管癌组织和癌旁组织提取总RNA,采用SYBR GREEN I 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定MGMT的mRNA水平。 结果： MGMT启动子区CpG岛异常甲基化与食管癌发病风险增高有关联 (OR=7.750, 95％CI=2.736～21.955);MGMT启动子区CpG岛甲基化状态与MGMT mRNA水平无显著相关;血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化相关(P<0.01),血浆循环DNA中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率与癌组织中MGMT启动子区CpG岛甲基化检出率中度相关(Kappa=0.603, P<0.01)。 结论： MGMT基因的启动子区CpG岛的异常甲基化与食管癌发病风险增加有关;检测血浆循环DNA中MGMT基因启动子的异常甲基化,可为食管癌的筛查、早期诊断提供有价值的信息。     

Detection of O6-methylguanine in human DNA

Using very specific antibodies in sensitive radioimmunoassays for O6-methyldeoxyguanosine (O6-medGuo), we have been able to detect the presence of this modification in human DNA. Since O6-medGuo is not likely to be a normal component of DNA, its presence must be due to exposure to environmental alkylating agents. We have studied two groups of samples, one of which appears to have received exposure to an alkylating agent (so that most members of the group show a detectable level of O6-medGuo). Although some individuals in the other group showed detectable O6-medGuo (sometimes at levels exceeding those observed in the first group), the majority showed undetectable levels. This may indicate that they had much less exposure to environmental alkylating agents than the first group and that some individuals may have received additional exposures due to other factors such as life style or drugs that they may have been given.     

Repair of oligodeoxynucleotides containing O6-methylguanine by O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase

O⁶-Alkylguanine-DNA-alkyltransferase is a DNA repair proteinknown to carry out the transfer of alkyl groups from the O⁶-positionof guanine in alkylated DNA to a cysteine acceptor site containedwithin its own protein sequence. We have examined the abilityof this protein isolated from either E. coli or mammalian cellsto perform this repair reaction in short oligodeoxynucleotides.Dodecadeoxynucleotides of the sequence 5'-dCGNGAATTCm⁶GCG-3'where N is any one of the normal four bases were all repairedvery rapidly by the protein with 50% repair in < 15 s at0°C. The hexadeoxy-nucleotide 5'-dCGCm⁶GCG-3' was repairedslightly more slowly with 50% removal taking 7 min at 0°Cand 1.5 min at 37°C. The tetradeoxynucleotide 5'-dTm⁶GCA-3'was also a substrate but was repaired much more slowly requiring45 min for 50% repair at 37°C. These results indicate that(a) the AGT has a strong but not absolute preference for double-strandedDNA substrates; (b) the repair of O⁶-methylguanine is independentof the base opposite the lesion; and (c) that oligodeoxynucleotidesas short as tetramers are substrates for repair by this protein.     

Repair of O6-methylguanine in DNA by demethylation is lacking in Mer- human tumor cell strains

The ability of extracts of human tumor cells to demethylateO6-methylguanine (O⁶-MeG) in DNA was assayed using the syntheticDNA polymer poly(dC,dG,m⁶dG). Cell strains proficient in repairof O⁶-MeG in vivo (Mer+ phenotype) contained a methyltransferaseactivity while repair deficient cells (Mer^– phenotype)had little or no activity. Mixing extracts of different Mer^–strains did not result in the appearance of the activity. Extractsof Mer^– cells did not inhibit the activity in extractsof Mer⁺ cells. Both Mer⁺ and Mer^– strains contained methylnitrosourea-damage-specificendonudease activity. The data suggest that the Mer⁺ strainsare deficient in methyltransferase and that this is the fundamentalreason for their hypersensitivity to the cytotoxic effects ofDNA alkyla-tion. The activity was partially purified from aMer⁺ colon carcinoma cell strain. Its kinetics parallel therepair of O⁶-MeG in DNA in vivo and suggest that the activityis inactivated during repair of DNA.     

MGMT和Ki-67在胶质母细胞瘤中的表达对ACNU化疗预后的影响

背景与目的:胶质母细胞瘤是预后极差的常见颅内恶性肿瘤,手术切除、放疗和化疗联合应用是常规治疗方法;Ki-67是肿瘤细胞生长活跃程度的标志,与胶质瘤的分级显著相关;O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)是一种DNA修复蛋白,其表达影响肿瘤对化疗药的敏感性。本研究通过免疫组织化学方法对胶质母细胞瘤的Ki-67和MGMT进行检测,探讨其对胶质母细胞瘤化疗预后的影响。方法:总结39例脑胶质母细胞瘤患者的性别、年龄、术前Karnofsky评分、生存时间等;将患者手术切除标本石蜡切片进行Ki-67和MGMT的免疫组织化学染色,计算细胞核染色阳性率;多元逐步回归分析法判断Ki-67和MGMT的表达与患者生存时间的关系。结果:本组病例男22例,女17例;年龄21～75岁,平均54.0岁;生存时间6～38个月,平均19.3个月,中位生存期17.0个月。Ki-67在所有标本有不同程度的表达,表现为胞核明显染色,Ki-67阳性率4.0%～26.6%,平均10.5%。MGMT除2例外均有不同程度表达,胞浆染色较淡,胞核可见浓染,MGMT胞核阳性率0%～51.4%,平均21.2%。Ki-67阳性率与生存时间无相关性。MGMT胞核阳性率与生存时间呈负相关(P=0.002)。结论:Ki-67在胶质母细胞瘤表达与肿瘤的预后无关。MGMT在胶质母细胞瘤表达与肿瘤化疗后的预后有关,MGMT的检测对胶质母细胞瘤术后化疗可能有指导意义。     

FHIT基因甲基化检测对肺癌早期诊断的临床意义

目的探讨人原发性肺癌中FHIT基因启动子区的甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链技术（MSP）,对59例人原发性肺癌组织（肺癌组）、32例肺正常组织（正常组）、15例癌旁组织（癌旁组）及11例支气管鳞状化生组织进行FHIT基因5’-CpG岛甲基化状况检测,甲基化阳性标本采用基因克隆测序技术进行序列测定。结果肺癌组、癌旁组和正常组的FHIT基因甲基化率分别为37．3％（22／59）、20．0％（3／15）、0（0／32）,三组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18．1％（2／11）。FHIT基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT甲基化扩增产物测序结果显示,所有CpG岛中的胞嘧啶均保持不变,而CpG岛二核苷酸以外的胞嘧啶经过PCR扩增后,则被胸腺嘧啶取代。结论FHIT基因5’-CpG岛甲基化参与了肺癌的演变,可能在肺癌发生的早期阶段,采用MsP方法进行FHIT甲基化检测,可能对肺癌的早期诊断具有一定的临床意义。