Ad.mda-7高选择性杀伤不同转移潜能肝癌细胞的研究

目的利用携带人MDA-7／IL-24基因的复制缺陷型腺病毒（Ad．mda7）作为载体，感染不同转移潜能的肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常的肝细胞L02，观察该基因对肝癌的选择性杀伤作用和增殖抑制作用。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒Ad．mda-7感染正常肝细胞L02和肝癌细胞MHCC97H，MHCC97L和Hep3B，通过RT-PCR和ELISA方法观察MDA7基因的表达，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTT）观察该基因对肝癌细胞的生长抑制，Hoechst染色和流式细胞仪观察MDA-7对肝癌细胞的杀伤作用，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果RT-PCR提示复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7／IL-24在肝癌细胞株MHCC97H，MHCC97L，Hep3B和正常细胞L02中高效表达；ELISA方法检测提示细胞培养上清液中MDA-7／IL-24蛋白的表达，而且随着感染时间延长表达量升高；MTT实验结果表明MDA7能明显抑制肝癌细胞的生长，Hoechst染色和流式细胞仪提示MDA7能促进肝癌细的凋亡；细胞周期检测提示肝癌细胞大量被阻滞在G2／M期，正常细胞没有增殖阻滞作用。各项结果提示MDA7对正常的肝细胞没有促进凋亡和增殖阻滞的作用。结论Ad．mda-7选择性的杀伤肝癌细胞，促进细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡与肝癌细胞的转移潜能无关。     

内源性大麻素诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡中Caspase-3的作用

目的 检测内源性大麻素(AEA)是否诱导人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡、以及Caspase-3在细胞凋亡过程中的作用.方法 分别于AEA(100 μmol/L)作用细胞前后,应用Annexin V Binding方法 、流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,检测Caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达.结果 AEA作用细胞3、6、12、24 h,细胞凋亡率分别为(14.13±2.17)%、(27.04±3.21)%、(34.98±7.74)%及(81.35±9.71)%,其中24 h的细胞凋亡率与对照组(12.72±0.44)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).AEA作用细胞24 h,细胞的Caspase-3活性由142.0±5.8增加至226.0±6.4(P<0.01);Caspase-3 mRNA的表达由0.24±0.13升高至0.54±0.32(P<0.05);如预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后再加入AEA,则细胞的Caspase-3活性不再升高90.0±4.3.RT-PCR方法 未检测到bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达.结论 AEA对人肝癌高转移细胞MHCC97H具有凋亡诱导作用,Caspase-3参与了凋亡的调控.     

VK2对肝癌细胞株MHCC97H的抑制作用

目的 观察VK2对MHCC97H细胞在生长、黏附、侵袭、凋亡以及Caspase-3活性的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;体外细胞黏附及侵袭实验检测细胞的黏附和侵袭能力;Annexin V-FITC Apoptosis Detection K和Caspase-3 Fluorescent Assay试剂盒分别检测细胞的凋亡及Caspase-3活性.结果 当VK2浓度从10-7mol/L增加到10-4mol/L时,细胞生长抑制率由12.5%增加到59.7%(P＜0.01).VK2对细胞的黏附抑制能力呈剂量依赖关系(P＜0.01);100μmol/L的VK2作用细胞3 h后,细胞对Fibronectin黏附抑制率为69.9%.作用48 h后,细胞侵袭抑制率为65.5%(P＜0.01);作用6 h后,细胞凋亡率为(28.5±1.6)%,与此同时,细胞Caspase-3活性为(226.0±6.4),与对照组(92.0±5.8)比较差异有统计学意义(P＜0.01);预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后,Caspase-3活性无明显变化90.0±4.3(P＞0.05).结论 VK2对体外培养的MHCC97H细胞具有抑制生长、抑制黏附、抑制侵袭和诱导凋亡作用;Caspase-3参与了细胞凋亡的调控.     

多西紫杉醇诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对人肝癌细胞诱导凋亡的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2和Huh7用于实验.通过WST-1细胞增殖实验观察DTX对细胞生长的抑制作用,采用Hoechst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,采用Western印迹法检测DTX对Caspase-3和Caspase-9酶原的激活作用.结果 DTX对HepGZ和Huh7的生长有明显的抑制作用;经Hoeehst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测发现DTX可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡;在DTX诱导肝癌细胞凋亡的过程中.凋亡效应分子Caspase-3和Caspase-9酶原被剪切激活;Caspase3抑制剂Z-VAD-FMK抑制DTX诱导的肝癌细胞凋亡.结论 DTX对肝癌细胞具有较强的增殖抑制作用,凋亡是其抑瘤的机制之一.DTX导致肝癌细胞凋亡程序依赖于激活Caspase-3酶原途径.     

环氧化酶选择性抑制剂NS-398对Hela细胞线粒体膜电位改变及诱导凋亡作用研究

目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制.方法 用不同浓度NS-398作用于人宫颈癌Hela细胞,CCK-8法检测NS-398对宫颈癌细胞增殖的影响,应用罗丹明（Rhodanmine） 123染色检测癌细胞线粒体膜电位改变;琼脂糖凝胶电泳检测DNA 降解梯度（ladder）.结果 NS-398对Hela细胞的增殖具有明显抑制作用;其抑制率随药物浓度的增高、药物作用时间的延长而显著增高.NS-398作用24 h可以使线粒体膜电位显著降低且与NS-398浓度密切相关;作用48 h可以诱导Hela细胞发生凋亡.结论 NS-398对宫颈癌Hela细胞生长具有显著的抑制作用.其可能通过线粒体途径诱导癌细胞凋亡.     

缺氧增加肝癌细胞胚胎干细胞基因表达促进恶性转化

目的 研究缺氧对原发性肝癌恶性表型的影响及相关机制.方法 建立体内、外缺氧模型,比较缺氧对MHCC97H肝癌细胞成瘤和侵袭转移能力的影响,并通过检测细胞增殖周期,CD90、CD133标记的肝癌干细胞数量以及胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)样基因Oct4,Nanog,Sox2等的表达分析缺氧对肝癌细胞生物学特性的影响.结果 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞运动(t=2.792,P=0.023)、侵袭(t=7.624,P＜0.0001)、转移(x~2=5.507,P=0.031)潜能,并增加软琼脂集落形成(t=3.292,P=0.011)和裸鼠皮下成瘤率(x~2=8.571,P=0.015).在缺氧环境中,MHCC97H肝癌细胞增殖能力受到抑制,G1期细胞比例显著增加,Oct4,Nanog,Sox2等基因表达明显上调.结论 缺氧促进MHCC97H肝癌细胞成瘤和转移等恶件表型与获得胚胎干细胞样特征有关.     

低表达蛋白HAX1对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察低表达蛋白HAX1对Hela细胞维持线粒体膜电位及细胞凋亡的影响.方法 利用RNA干扰技术抑制Hela蛋白HAX1表达3 d后,利用阳离子脂质荧光染料JC-I标记法和流式细胞仪检测并比较实验组(蛋白HAX1低表达组)及对照组细胞线粒体膜电位变化趋势.加入H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡3 h后利用Annexin V-FITC法检测并比较两组细胞凋亡率.结果 对照组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为9.52%,实验组细胞线粒体膜电位下降百分比均值为21.12%,实验组细胞线粒体膜电位降低比率多于对照组(P＜0.05).对照组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为21.80%,实验组H2O2(2 mmol/L)诱导细胞凋亡率均值为31.73%.实验组细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 低表达蛋白HAX1不仅可以降低Hela细胞线粒体膜电位稳定性,而且促进Hela凋亡.     

三氧化二砷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡及与线粒体跨膜电位的关系。方法应用不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后，观察As2O3对肝癌细胞生长状态的影响；通过噻唑蓝（MTT）比色法观察其对Bel-7402细胞增殖的影响；利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察经Annexin V-FITC／PI双染后的细胞早期凋亡；通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测线粒体跨膜电位（MMP）的改变情况；并通过底物染色法反映Caspase-3的活性。结果不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后有明显的时间和剂量依赖性；经Annexin V-FITC／PI双染后，可观察到Bel-7402细胞的早期凋亡现象，2μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为9．89％，作用48h细胞凋亡率为48．53％，而4μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为18．27％，作用48h细胞凋亡率为67．52％；经As2O3药物作用后，细胞线粒体膜电位水平下降，且与药物作用时间和药物浓度有关（P〈0．05）；同时Caspase-3活性被激活。结论As2O3可明显抑制肝癌细胞Bel-7402的生长，并使细胞线粒体膜电位下降，诱导肝癌细胞凋亡。     

趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌表达及肺转移中作用的研究

目的 以人肝细胞癌高、低肺转移潜能细胞株MHCC97-H、MHCC97-L为研究对象,研究趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌肺转移过程中的作用和意义.方法 RT-PCR和Western blotting比较MHCC97-H、MHCC97-L细胞株CXCR4 mRNA及蛋白质水平的表达.CXCR4配体SDF-1α及肺提取物趋化实验和抗体抑制实验观察SDF-1α和裸鼠肺组织匀浆液对MHCC97-H的趋化迁移作用.结果 趋化因子受体CXCR4在MHCC97-H细胞株表达低于低肺转移潜能细胞株MHCC97-L,蛋白质水平与mRNA水平一致.SDF-1α对MHCC97-H趋化实验表明在1～100 ng/ml浓度范围内均有趋化作用,在浓度为50 ng/L时趋化作用最显著(P＜0.05).肺提取物亦发现对MHCC97-H有趋化作用,作用强于MHCC97-L及DMEM组(P＜0.05).但加入CXCR4抗体后其趋化作用并未明显下调.结论 CXCR4在肝癌组织及细胞表达并可能参与肝癌肺转移,但并非肝癌细胞趋化转移的主要受体分子.     

TNP-470对MHCC97-H体外血管生成拟态的抑制作用

目的研究血管生成抑制剂TNP-470对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H体外形成血管生成拟态的影响。方法TNP-470作用于MHCC97-H细胞,应用MTT试验、体外侵袭实验,检测MHCC97-H细胞增殖活性和侵袭力的变化。建立MHCC97-H细胞人工基底膜基质凝胶体外三维细胞培养模型,观察MHCC97-H细胞能否形成血管生成拟态以及TNP-470对其影响,应用扫描电镜、透射电镜观察细胞结构改变。结果TNP-470对MHCC97-H细胞增殖无显著抑制作用,可抑制其体外侵袭能力,明显抑制MHCC97-H细胞形成血管生成拟态,减少细胞表面的微绒毛和细胞间连接。结论人肝癌高转移细胞株MHCC97-H可形成血管生成拟态,TNP-470能抑制人肝癌细胞株MHCC97-H体外血管生成拟态形成。     

绿脓杆菌制剂对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨绿脓杆菌制剂(pseudomonas aeruginosa vaccine,PA)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用不同浓度的PA分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术分析(FCM)、侵袭、运动、迁移、VEGF和MMP2蛋白表达(ELISA法).结果 PA明显抑制MHCC97L细胞增殖和克隆形成,呈良好的剂量-效应关系.PA 48 h和72 h的IC50分别为3.1×108/ml和1. 9×108/ml.PA浓度为0.5×108/ml、1×108/ml和2×108/ml时,其细胞倍增时间依次增加,克隆形成率依次降低(P均＜0.01);FCM显示,G1期细胞比例随PA浓度增加而增加,S+G2期细胞比例随PA浓度增加而降低(P均＜0.01).PA浓度为1×108/ml时,穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数(分别为4.8±1.3和8.8±2.2)明显低于对照组(8.6±2.1和15.6±1.2)(P均＜0.01);细胞经72 h培养后,对照组划痕逐渐愈合,1×108/ml的PA组细胞划痕依然明显.ELISA法检测发现,1×108/ml的PA组其VEGF蛋白和MMP2蛋白含量和对照组相比均无明显差异(P均＞0.05).结论 在一定条件下,绿脓杆菌制剂可抑制人肝癌MHCC97L细胞增殖和克隆形成,其作用部分是通过使细胞周期阻滞在G1期实现的;绿脓杆菌制剂可以明显抑制MHCC97L细胞的侵袭、运动和迁移能力,其作用和VEGF、MMP2蛋白分泌关系不明显.     

全反式维甲酸对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法 应用明胶酶谱法检测ATRA对体外培养MHCC97-H细胞分泌MMPs酶谱的影响；细胞免疫荧光法检测ATRA对MHCC97-H细胞表达MMP-9的影响；利用侵袭小室模型，检测ATRA对MHCC97-H细胞体外侵袭能力的影响。结果 MHCC97-H在体外培养时可分泌大量的MMPs，其中以MMP-9和其活性形式为主。ATRA在体外可显著地抑制MHCC97-H细胞MMPs的表达，降低肿瘤细胞穿透人工重组基底膜的能力，且在一定的浓度范围内，抑制作用与药物浓度呈正相关。结论 抑制肿瘤细胞分泌MMPs的能力，是ATRA抗肿瘤侵袭转移的主要作用机理之一。     

抗肝肠钙粘连蛋白单克隆抗体对肝癌细胞生物学行为的影响

目的 观察抗肝肠钙粘连蛋白(CDH17)单克隆抗体Lic5对肝癌细胞生物学行为的影响.方法 Western blot和实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞株MHCC97H、MHCC97L、PLC/PRF/5及MIHA中CDH17的表达.噻唑蓝(MTT)比色法、细胞划痕法、Transwell法及平板克隆法检测Lic5对肝癌细胞生物学行为的影响.结果 CDH17仅在细胞株MHCC97H、MHCC97L中表达,Lic5可结合肝癌细胞表面的CDH17,并抑制CDH17表达.Lic5 50mg/L组、100mg/L组、小鼠IgG组4 d细胞增殖抑制率在MHCC97H为26.1%、43.6%、6.4%,MHCC97L为26.0%、40.7%、7.7%;Lic5100mg/L组、小鼠IgG组、磷酸盐缓冲液(PBS)组48h细胞迁移抑制率在MHCC97H为36.7%、8.4%、5.6%,MHCC97L为42.3%、10.2%、7.4%(P＜0.05);穿膜细胞数在MHCC97H为(39.20±9.56)、(106.50±7.56)、(96.60±13.02)个,MHCC97L为(26.00±8.61)、(86.00±10.26)、(90.40±12.04)(P＜0.05);克隆形成数在MHCC97H为(59.30±11.68)、(141.70±19.40)、(150.30±14.64),MHCC97L为(57.20±10.21)、(132.50±9.07)、(121.70±11.93)(P＜0.01).Lic5对PLC/PRF/5及MIHA细胞的生物学行为无明显影响.结论 单克隆抗体Lic5能够下调肝癌细胞CDH17表达,抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力.

Abstract：

Objective To investigate the effect of monoclonal antibody against liver-intestine cadherin (CDH17) on the cell proliferation, migration, invasion and colony formation of hepatocellular carcinoma cell lines. Methods Hepatocellular carcinoma cell lines MHCC97H, MHCC97L, PLC/PRF/5 and MIHA were examined for CDH17 expression by Western blotting and quantitative real-time polymerase chain reaction (PGR). The combination capacity between bepatocellular carcinoma cell lines and monoclonal antibody Lic5 was detected by the way of immunofluorescence staining. The cell lines were treated with Lic5, PBS and mouse IgG respectively. Methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, wound healing assay, Transwell invasion assay and colony formation assay were used to study the changes in cell proliferation, migration, invasion and colony formation of hepatocellular carcinoma cell lines. Results High expression level of CDH17 was detected in MHCC97H and MHCC97L cell lines. CDH17 protein level was down-regulated but there was no significant effect on CDH17 mRNA after treatment with Lie5 in MHCC97H and MHCC97L. Cellular growth rate of MHCC97H in Lic5 (50 mg/L), Lic5 ( 100 mg/L) and mouse IgG groups was decreased by 26. 1%, 43.6% and 6. 4%, and by 26. 0%, 40. 7% and 7. 7% in MHCC97L on the 4th day respectively (P ＜0. 05 ). The inhibition rate of cell migration at 48 h was 36. 7%, 8. 4% and 5.6% in Lic5 ( 100 mg/L), mouse IgG and PBS groups in MHCC97H, and 42. 3%, 10. 2% and 7. 4% in MHCC97L respectively ( P ＜ 0. 05 ). The number of invasion cells was ( 39. 20 t 9. 56),(106.50±7.56) and (96.60±13.02) in MHCC97H, and (26.00±8.61), (86.00±10.26) and (90.40±12.04) in MHCC97L in Lic5 (50 mg/L), Lic5 (100 mg/L) and mouse IgG groups, respectively (P ＜ 0. 05 ). The number of colony formation was ( 59. 30 ± 11.68 ), ( 141.70 ± 19. 40 ) and (150.30 ±14.64) in MHCC97H, and (57.20 ± 10.21), (132.50 ±9.07) and (121.70 ±11.93) in MHCC97L in Lie5 (50 mg/L), Lic5 (100 mg/L) and mouse IgG groups, respectively (P＜ 0. 01 ).There was no significant difference between Lic5 treatment groups and controls in PLC/PRF/5 and MIHA cell lines. Conclusion The anti-CDH17 monoclonal antibody Lic5 can down-regulate CDH17 expression and inhibit the cell proliferation, migration, invasion and colony formation in hepatocellular carcinoma cell lines.     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

内源性大麻素对人肝癌细胞生长及黏附和侵袭性的影响

目的 观察内源性大麻素(AEA)对人肝癌高转移细胞MHCC97H细胞生长、黏附、侵袭性等的抑制作用.方法 不同浓度AEA(100、50、0μmol/L)作用细胞后,应用体外细胞-基质黏附实验方法,检测细胞对Fibronectin黏附能力的改变;应用体外细胞趋化实验和侵袭实验,检测细胞的运动功能及对人工基底膜的侵袭能力;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率.结果 (1)不同浓度的AEA(100、50、0 μmol/L)作用细胞3、6、12 h后,细胞黏附抑制率分别为:3 h(24.4%、20.6%和20.8%)、6 h(23.6%、21.3%和19.6%)及12 h(25.2%、24.1%和22.8%),组间及组内比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)100μmol/L的AEA作用细胞48 h后,平均每个视野的透膜细胞数为(13.00±4.30)个,与对照组(15.70±3.30)个比较,差异无统计学意义(P＞0.05);平均每个视野的侵袭细胞数为(4.10±1.65)个,与对照组(3.40±1.24)个比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(3)不同浓度的AEA(100、50、0μmol/L)作用细胞24 h后,细胞生长抑制率分别为(39.30 ±9.17)%、(35.60±8.25)%和(28.70±0.04)%,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AEA对体外生长的人肝癌细胞MHCC97H的生长、黏附和侵袭性等方面无明显抑制作用.

Abstract：

Objective To evaluate the inhibitory effects of anandamide (AEA) on proliferation and adhesion and invasion in human hepatocellular carcinoma cell line MHCC97H. Methods Mmethyl thiazol tetrazolium (MTT) method, cell-matrix adhesion assay, and Transwell invasion chamber and matriger were used to analyze the effect of AEA on proliferation ability, adherence ability, and migration,chemotaxis and invasion of MHCC97H cells, respectively. Results After MHCC97H cells were treated with AEA at the different concentrations (100, 50, 0 μmol/L) for 3, 6 and 12 h, the inhibition ratio of cell adhesion was 24.4%, 20.6% and 20.8% for 3 h, 23.6%, 21.3% and 19.6% for 6 h, and 25.2%, 24.1% and 22. 8% for 12 h, respectively (P＞0.05). After MHCC97H cells were treated with AEA (100 μmol/L) for 24 h, the migration, adhesion and invasion was not markedly inhibited (P＞0. 05 ). Conclusion AEA did not show inhibition effects on adhesion, invasiveness and proliferation of MHCC97H cells.     

大肠癌中Caspase-8和Caspase-10的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨大肠肿瘤中Caspase-8和Caspase-10的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测121例大肠癌、52例腺瘤和121例癌旁组织中Caspase-8和Caspase-10 mRNA表达,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 与癌旁组织比较,腺瘤中Caspase-8 mRNA表达上调,Caspase-10 mRNA表达下调(P<0.05);大肠癌中Caspase-10 mRNA表达下调(P<0.01),下调程度与肿瘤的分化程度有关(P<0.05).大肠癌、腺瘤和癌旁组织中的凋亡指数分别为1.63%、2.42%和2.98%,各组间差异有统计学意义(P<0.05).大肠癌中凋亡指数与Caspase-10 mRNA表达呈正相关(r=0.408,P<0.01),与Caspase-8mRNA表达无明显相关.结论 Caspase-8 mRNA在腺瘤中表达上调,与肿瘤细胞凋亡无明显相关.Caspase-10与大肠癌的凋亡相关,并与肿瘤恶性程度关系密切.     

骨髓间充质干细胞对人肝癌细胞系MHCC97-H增殖能力的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSC)对肝癌细胞增殖能力的影响.方法 人肝癌细胞系MHCC97-H培养液中分别加入0、25%和50%MSC的条件培养基(MSC-CM),采用CyQUANT细胞增殖实验检测吸光度A值变化.在MHCC97-H细胞培养液中添加50%MSC-CM,荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67抗原的变化.16只裸鼠皮下接种MHCC97-H细胞后,实验组经静脉注射MSC,1×106个/次,每周3次,对照组静脉注射PBS;比较肿瘤体积.结果 培养液中加入MSC-CM后A值依次为211.65±54.72、236.24±57.15和283.59±62.16(P<0.05).PCNA和Ki-67的表达水平分别升高1.8和7.0倍.实验组肿瘤体积(1745±455)mm3m大于对照组(972±568)mm3(P<0.05),肿瘤体积平均增加速度(56.0±26.1)mm3/d高于对照组(32.4±14.5)mm3/d(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞可促进肝癌细胞系MHCC97-H的增殖.     

miR-195对胃癌BCG823细胞株增殖与凋亡的影响

目的 观察miR-195对胃癌细胞BCG823增殖与凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-195的模拟物转染入BCG823细胞中。Real-time聚合酶链反应(PCR)法测定BCG823内miR-195的表达。CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制。流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化。JC-1染色检测线粒体膜电位变化。Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性。结果 对照组24、48、72h吸光值分别为0.214、0.236、0.510、0.702,而转染组24、48、72 h吸光值分别为0.222、0.224、0.330、0.504,转染组凋亡率为21.84％,较对照组(4.24％)显著增加,转染组线粒体电位4.3,较对照组(13.8)显著降低(P＜0.05)。对照组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.265±0.029、0.652±0.042、0.244±0.047,而转染组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.504±0.039、0.214±0.037、0.262±0.032。miR-195能使Caspase-3、Caspase-9的活性增加,Caspase-8的活性无显著变化。结论 体外实验初步证明miR-195基因可抑制胃癌细胞株BCG823增殖并诱导其凋亡。