瘢痕中HIF-1α的表达及其与VEGF和HO-1的关系

目的:探讨HIF-1α减轻瘢痕内缺氧环境的机制。方法:采用免疫组化法检测烧伤后肉芽、不同时期瘢痕和正常皮肤中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的表达,采用权重方法分别对各组瘢痕的HIF-1α、VEGF、HO-1表达结果进行量化,分析各自规律及相互间关系。结果:随瘢痕的成熟,HIF-1α、VEGF、HO-1表达强度均逐渐减弱,相互间具有正相关性(P<0.01)。结论:HIF-1α、VEGF、HO-1在瘢痕成熟过程中起重要作用,HIF-1α可能通过诱导VEGF、HO-1的表达,促进血管生成、成熟,增加组织内供氧,来减轻瘢痕内缺氧环境。     

缺氧诱导乳鼠脊髓神经元HIF-1α表达和凋亡的体外实验研究

目的 研究缺氧诱导脊髓神经元低氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达和凋亡的变化，探讨HIF-1α在耐受缺氧和诱导凋亡机制中的作用。方法 以体外培养的乳鼠脊髓神经元细胞为研究对象。采用激光共聚焦显微镜（LCSM）、DNA琼脂糖凝胶电泳观察缺氧诱导脊髓神经元凋亡的变化；免疫组化检测HIF-1α在缺氧脊髓神经元中的表达；流式细胞术（FCM）检测缺氧对脊髓神经元P53、bcl-2蛋白水平表达的影响。结果 持续缺氧显著抑制脊髓神经元细胞的生长；荧光显微镜下可见脊髓神经元细胞呈典型凋亡的形态学改变。脊髓神经元缺氧2、4h时HIF-1α、P53、bcl-2表达上调（P〈0．01），8h时其表达下调（P〈0．05）。结论 缺氧诱导的HIF-1α的表达，在脊髓神经元的耐受缺氧和诱导凋亡机制中起着重要的作用。     

结直肠癌组织中p53、PTEN和VHL对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的研究结直肠癌组织中p53、PTEN和VHL对缺氧诱导因子-1α（hypoxia—inducible fac—tor 1α）表达的影响及意义。方法采用组织芯片技术制作60例结直肠癌组织芯片,同时采用SP免疫组织化学法和原位分子杂交（cDNA—mRNA）方法检测结直肠癌组织芯片中p53、PTEN、VHL、HIF—1α和HIF-1α mRNA的表达。结果60例结直肠癌组织中,p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1α mRNA的阳性率分别为55％、48．3％、41．7％、58．3％和71．7％。淋巴结转移组p53、HIF-1α和HIF-1α mRNA阳性率显著高于无淋巴结转移组（P〈0．01）。p53高表达、PTEN和VHL低表达与HIF-1α和HIF-1α mRNA高表达明显相关。结论p53、PTEN、VHL、HIF-1α和HIF-1α mRNA的表达水平可以作为评估结直肠癌预后的参考指标。     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞缺氧诱导因子-1α和Survivin基因表达的影响

目的 构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Survivin基因表达的影响。方法 利用氯化钴（CoCl2）构建缺氧诱导模型；利用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别测定CoCl2缺氧诱导与SW480细胞HIF—1α和Survivin基因mRNA表达的时效关系（0、2、4、8、24h）和量效关系（0、50、100、150、200／μmol／L）。结果HIF-1α和Survivin基因mRNA表达与氯化钴浓度呈明显的剂量依赖关系；HIF-1α基因表达随诱导时间的延长而逐渐增强，4h亚组出现一个表达高峰，Survivin基因在缺氧诱导4h呈现表达最高峰；HIF-1α与survivin基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系（r=0．521，P＜0．05）和时效关系（r=0．693，P＜0．05）中均呈显著正相关。结论 缺氧可以诱导HIF—1α和Survivin基因的表达增加；HIF—1α与Survivin基因的表达均呈显著相关，提示Survivin基因可能与HIF—1α存在某种调控关系并在缺氧抗凋亡机制中发挥作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞培养中缺氧与缺氧诱导因子-1α表达的相关性

目的研究缺氧程度与瘢痕疙瘩中缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor,HIF－1α）基因表达的量化关系和关联性,进一步探讨缺氧通过HIF-1a途径促进异常瘢痕形成的机制。方法设立不同O2浓度组,在常氧及不同程度缺氧条件下培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用Western印迹技术检测比较各组间HIF－1α基因蛋白的表达,进行数据处理和统计学分析。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞在常氧（20％）、不同缺氧浓度（10％、5％、1％）下．HIF－1α蛋白表达相对含量（HIF－1α／β肌动蛋白）分别为0．007±0．006、0．133±0．006、0．537±0．015和0．903土0．021,表明缺氧系统中瘢痕疙瘩成纤维细胞HIF—1α蛋白表达明显上调。结论缺氧条件促进了瘢痕疙瘩中HIF-1α蛋白的表达,而且表达的量与缺氧程度呈正相关。缺氧通过HIF－1α基因途径与异常瘢痕的形成密切相关。     

缺氧诱导因子1α调控wnt/β-catenin信号通路对常氧条件下大鼠髓核细胞衰老的作用及机制

【摘要】 目的：探究缺氧诱导因子1α（HIF-1α）调控wnt/β-catenin信号通路对常氧培养下大鼠髓核细胞衰老的影响及作用机制。方法：取5只4周龄雌性SD大鼠，提取鼠尾髓核原代细胞进行研究。（1）将髓核细胞分为5组：转染对照组[用磷酸盐缓冲盐水（PBS）处理髓核细胞]、空载腺病毒组（用空载腺病毒处理髓核细胞）、过表达HIF-1α组（用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞）、空载siRNA组（用空载siRNA处理髓核细胞）、敲减HIF-1α组（用siRNA敲减HIF-1α处理髓核细胞），在常氧下培养48h后，免疫蛋白印迹（western blot，WB）检测HIF-1α和衰老相关基因p53、p21、p16，β-gal染色检测细胞衰老，评估常氧条件下HIF-1α对于髓核细胞衰老的影响。（2）取髓核细胞，分为空载腺病毒组、过表达HIF-1α组、空载siRNA组、敲减HIF-1α组，处理方式同前，在常氧下培养48h后，WB检测HIF-1α、GSK-3β和β-catenin通路的表达。取髓核细胞，分为对照组（用PBS处理髓核细胞）、过表达HIF-1α组（用载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞）、XAV-939组（用XAV-939处理髓核细胞）、XAV-939+过表达HIF-1α组（用XAV-939+载过表达HIF-1α质粒的腺病毒处理髓核细胞），WB检测HIF-1α、p53、p21、p16和wnt/β-catenin的表达，β-gal染色检测细胞衰老，以检测HIF-1α与wnt/β-catenin信号通路的关系以及对髓核细胞衰老的影响。结果：（1）腺病毒转染HIF-1α后，与转染对照组和空载腺病毒组相比，过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加（P<0.05）。小干扰RNA转染HIF-1α后，与转染对照组和空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低（P<0.05）。WB结果显示，与空载腺病毒组相比过表达HIF-1α组HIF-1α表达增加（P<0.05），而p53、p21和p16表达降低（P<0.05），与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组HIF-1α表达降低（P<0.05），而p53和p16表达增加（P<0.05）。β-gal染色显示，在常氧条件下培养48h，与空载腺病毒组相比，过表达HIF-1α组衰老细胞降低（P<0.05），与空载siRNA组相比，敲减HIF-1α组衰老细胞数量则增加（P<0.001）。（2）与空载腺病毒组相比，过表达HIF-1α组β-catenin表达升高（P＜0.01），同时GSK-3β表达降低（P＜0.05）。与空载siRNA组相比敲减HIF-1α组β-catenin表达降低（P＜0.0001），同时GSK-3β表达升高（P＜0.05）。与对照组相比，XAV-939组β-catenin表达降低（P<0.001），p53、p21和p16的表达升高，XAV-939+过表达HIF-1α组β-catenin表达降低（P<0.05），p21表达升高（P<0.05）。与过表达HIF-1α组相比XAV-939+过表达HIF-1α组衰老细胞数增加（P<0.001），与对照组相比过表达HIF-1α组的细胞核内β-catenin表达更多，而XAV-939组和XAV-939+过表达HIF-1α组则相对较少（P<0.05）。结论：HIF-1α通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制常氧条件培养下大鼠髓核细胞的衰老。     

HIF-1α和P53蛋白的表达对肾透明细胞癌预后的影响

目的本研究旨在探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和P53蛋白在人肾透明细胞癌组织中的表达及其对患者预后的影响。方法应用免疫组化方法检测65例肾透明细胞癌组织中HIF-1α和P53蛋白的表达情况,通过生存曲线法比较阳性组和阴性组患者的预后情况。结果 HIF-1α和P53蛋白表达的阳性率分别为40.0%（26/65）和52.3%（34/65）;HIF-1α表达与肾透明细胞癌的组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）;HIF-1α蛋白阳性组患者的生存期明显较阴性组短（P=0.004）;P53蛋白表达与肾透明细胞癌患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移及生存期均无关（P〉0.05）;HIF-1α蛋白P53蛋白的表达之间存在相关性（r=0.402,P=0.001）。结论 HIF-1α的表达与肾透明细胞癌患者的预后相关,其阳性表达提示患者预后不良;检测HIF-1α表达水平有助于肾细胞癌预后评估。     

缺氧时丝裂原激活蛋白激酶类对人肾小管上皮细胞富含半胱氨酸蛋白61基因转录活性的调控

目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶类（MAPKs）对缺氧条件下人近端肾小管上皮细胞（HKC）中富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）基因转录活性的调控机制。方法 缺氧培养HKC，Northern印迹检测Cyr61mRNA表达；Western印迹检测Cyr61、p38、细胞外信号调节激酶（ERK1／2）、c—Jun—N末端蛋白激酶（JNK）以及缺氧诱导因子1c（HIF-1α）的表达。构建含有人Cyr61基因启动子的报告基因Cyr61-luc质粒，将其单独或者分别与表达活性MAPKs的质粒Ca—MEK1和Ca—MKK6共同瞬时转染HKC。通过荧光素酶活性检测观察缺氧、MAPKs抑制剂和MAPKs活性酶对Cyr61基因转录活性的调控。结果 缺氧时HKC表达cyr61、HIF-1α增高，ERK1／2、JNK、p38总量不变，而其各自的磷酸化形式均明显增加。HKC转染Cyr—luc后，p38通路抑制剂SB203580和ERK通路抑制剂PD98059显著抑制缺氧时Cyr61的转录活性，两者协同作用时抑制作用显著增强。Ca—MEK1与Cyr—luc共转染HKC后，Cyr61转录活性无改变；而Ca—MKK6与Cyr—luc共转染后，Cyr61转录活性显著增高。对缺氧培养的HKC，PD98059处理使HIF-1α和Cyr61蛋白表达显著降低；SB203580处理可显著降低Cyr61蛋白表达，但对HIF-1α无影响。结论 在HKC中，缺氧可通过p38通路直接上调Cyr61基因启动子活性，也可通过ERK1／2途径促进HIF-1α表达，间接调节Cyr61基因启动子活性。     

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌生长转移的影响

目的观察反义缺氧诱导因子（HIF）-1α对胰腺癌生长、转移的影响及其与β1-integrin的关系。方法缺氧条件下（0.5％O2）体外培养4h，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为缺氧对照组；常氧条件下体外培养，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为常氧对照组；缺氧条件下（0．5％O2）体外培养4h，稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为实验组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测HIF-1α和β1-integrin的表达情况。Transwell侵袭室方法检测BxPc-3细胞侵袭能力。裸鼠皮下接种BxPc-3细胞8周后，观察各组肿瘤生长情况。结果实验组HIF-1α和β1-integrin的表达明显降低，迁移的细胞数远少于对照组（P〈0．05）；实验组肿瘤的体积、重量、生长速度远低于对照组（P〈0.05）。结论反义HIF-1α可能通过阻断β1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移。因此，阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供了新途径。     

胃癌组织中P53和泛素对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的研究胃癌组织中P53和泛素(ubiquitin)对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及意义。方法采用组织芯片技术制作60例胃癌组织芯片,同时用SP免疫组织化学法和原位分子杂交(cDNA-mRNA)方法检测胃癌组织芯片中P53、ubiquitin、HIF-1α、HIF-1αmRNA的表达。结果60例胃癌组织中,P53、ubiquitin、HIF-1α、HIF-1αmRNA的阳性率分别为55.0%、43.3%、58.3%和71.7%。淋巴结转移组P53、HIF-1α和HIF-1αmRNA阳性率显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)。P53高表达、ubiquitin低表达与HIF-1α、HIF-1αmRNA高表达明显相关。结论应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点。P53和HIF-1α的表达水平可以作为评估胃癌预后的参考指标,突变型P53影响HIF-1α的高表达,ubiquitin影响HIF-1α的低表达。     

微环境诱导肝细胞癌多药耐药的形成及机制

目的探讨微环境在肝癌多药耐药（MDR）表型形成中的作用，并初探其作用机制，为逆转肝癌耐药提供有效的新的分子靶点。方法模拟肝癌体内生长的局部微环境，使HepG2细胞分别在缺氧、低糖的微环境下生长或稳定整合HBX基因。应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术和Westernblot技术分别检测这些局部微环境因素作用下的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、肺耐药相关蛋白基因（LRP）、多药耐药相关蛋白基因（MRP1）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的mRNA和蛋白水平的表达。同时运用免疫细胞化学技术检测肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白的表达。以及检测转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞中上述相关多药耐药基因的表达。结果在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合了HBX基因的HepG2细胞均不同程度地高表达多药耐药相关基因和HIF-1α；在肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白高表达；稳定转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞显著高表达多药耐药相关基因。结论肝癌生长的微环境可通过核转录因子HIF-1α调控多药耐药相关基因的表达。从而诱导肝癌多药耐药表型的形成；HIF-1α有望成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

缺氧预适应抑制内皮细胞冷缺氧/温复氧损伤

目的 研究缺氧预适应对内皮细胞冷缺氧／温复氧损伤的作用及可能机制。方法 培养的内皮细胞ECV-304分成4组，A组，对照组；B组，冷缺氧／温复氧（A／R）组95％N2／5％a=）2缺氧装置中用4℃UW液保存24h；C组，缺氧预适应组（APC），内皮细胞在缺氧前遭受4个循环短时间缺氧／复氧；D组，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）抑制组：缺氧预适应前，细胞培养液中加入5μmol／L的HIF-1α抑制剂NS398，余同C组。缺氧结束后，各组37℃5％CO2 95％空气中复氧6h。分别以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、Western blot法检测各组HIF-1α mRNA和蛋白表达，内皮细胞保护作用通过细胞存活率（台盼蓝拒染法）、LDH释出率及ICAM-1的表达判定。结果 缺氧预适应明显上调HIF-1α mRNA和蛋白表达，显著抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，表现为更高的细胞存活率，更少的LDH释出和ICAM-1的表达。而HIF-1α抑制剂可逆转这种保护作用。结论 缺氧预适应能有效地抑制冷保存内皮细胞缺氧／复氧损伤，这种细胞保护作用可能是通过HIF-1α介导的。     

缺氧环境通过HIF-1α/YAP信号促进大鼠生长板软骨细胞表型维持

目的 研究缺氧条件下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）和Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）蛋白在软骨细胞表型维持中的作用。方法 生长板软骨细胞取自7日龄的SD大鼠,并通过氯化钴干预以模拟体外缺氧微环境。通过检测细胞外基质水平和Ⅱ型胶原（Collagen 2, Col2）蛋白水平表达变化来确定软骨细胞在氯化钴刺激下软骨表型变化。通过Western blotting方法检测HIF-1α、YAP蛋白水平在氯化钴刺激后的表达变化。结果 氯化钴于体外实验中模拟的缺氧环境能够促进软骨细胞细胞外基质的表达水平,并且能够上调Col2蛋白表达,同时上调HIF-1α和YAP蛋白水平的表达。抑制HIF-1α的表达可以下调缺氧环境所致的YAP蛋白表达水平的上调,而抑制YAP的表达并不能影响HIF-1α蛋白表达水平。结论 氯化钴于体外实验中模拟的缺氧环境可能通过HIF-1α/YAP信号促进大鼠生长板软骨细胞软骨表型的维持。     

HIF-1α、P-Gp在结肠直肠癌中的表达及其相关性

结肠直肠癌发病率在我国有上升趋势，化疗耐药是导致结肠直肠癌治疗失败的主要原因之一。而引起恶性肿瘤化疗耐药的多方面因素中缺氧微环境是一重要原因，大量研究表明实体癌存在不同程度的缺氧，缺氧可诱导核转录因子——缺氧诱导因子-1（Hypoxia Inducible Factor-1，HIF-1）表达增高，从而上调下游靶基因的表达，其中也包括多药耐药基因1（Multidrug Resistance Gene 1，mdr1）编码的膜蛋白P糖蛋白（P-Glycoprotein，P-Gp）。本研究应用免疫组化方法检测了人结肠直肠癌组织中HIF-1α及耐药相关蛋白P-Gp的表达，旨在探讨P-Gp在结肠直肠癌中的表达情况及其与HIF-1α的关系。     

缺氧诱导因子1α过表达对前列腺癌细胞血管生成能力的影响

目的：观察转染缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对人前列腺癌细胞血管形成相关蛋白的影响,并探讨其分子机制。方法：用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1（-）/HIF-1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达的抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测血管形成相关蛋白血管内皮生长因子（VEGF）、iNOS、促血管生成素2（Ang-2）。结果：与未转染细胞LN-CaP相比,转染细胞LNCaP/HIF-1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,VEGF、iNOS表达增加,Ang-2未见明显变化。结论：HIF-1α过表达能够诱导LNCaP细胞血管形成相关蛋白表达增多,进而增强其体外血管形成能力。     

缺氧诱导因子-1α基因转染人间充质干细胞的体内促血管生成作用

目的研究将缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染人间充质干细胞（hMSCs）的体内促血管生成作用，为促进组织工程骨血管化提供新的方法和策略。方法构建pIRES3／HIF-1α逆转录病毒载体，制备含目的基因的重组逆转录病毒，感染hMSCs。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测转基因hMSCs表达HIF-1α的水平，用免疫组织化学法检测转基因hMSCs在缺氧和常氧条件下HIF-1α蛋白的存在情况。体内促血管生成的实验分为两组：实验组采用转基因hMSCs，对照组采用未转基因的hMSCs。两种细胞分别接种到13d的鸡胚绒毛尿囊膜（CAM），3d后将CAM制片，在显微镜下观察并摄像。用图像分析方法测量并分析血管面积。结果转基因hMSCs中HIF-1α mRNA表达较未转基因的hMSCs明显增高。转染HIF-1α基因的hMSCs，缺氧条件下细胞核内HIF-1α能稳定存在；常氧条件下细胞核内HIF-1α不能稳定存在。图像分析结果显示实验组CAM较对照组CAM血管面积明显增多，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF-1α基因能稳定转染到hMSCs并得到强制表达。转染HIF-1α基因的hMSCs有明显的促血管生成作用，对于促进组织工程骨的血管化有重要作用。     

二甲基乙二酰基甘氨酸对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 通过脯氨酸羟化酶抑制剂二甲基乙二酰基甘氨酸（DMOG）稳定缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达,探讨其对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞（HKC）损伤的保护作用及其机制。 方法 制作无糖缺氧复氧细胞损伤模型,用不同浓度的DMOG预处理,锥虫蓝染色和乳酸脱氢酶（LDH）活性方法检测细胞活力及损伤;Annexin V和PI染色流式细胞仪技术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR方法检测红细胞生成素（EPO）、热休克蛋白70（HSP70）和血红素氧合酶1（HO-1） mRNA的表达;Western印迹法检测HIF-1α、活性caspase-3和Bcl-2蛋白表达。 结果 正常情况下HKC细胞内几乎无HIF-1α蛋白表达,DMOG刺激6 h后HIF-1α蛋白及其靶基因EPO、HSP70和HO-1 mRNA表达均显著上调（均P ＜ 0.01）,且呈浓度依赖性。500 μmol/L或1 mmol/L DMOG预处理可明显改善缺氧复氧诱导的细胞损伤,表现为细胞存活率升高（95.6%±1.8%、96.1%±1.0%比 83.3%±3.1%）;培养上清液中LDH 活性下降;细胞凋亡减少（8.6%±2.7%、6.1%±2.3%比19.2%±4.0%）（均P ＜ 0.05）。另外,细胞内活性caspase-3蛋白表达显著下调,而Bcl-2蛋白表达则显著上调（均P ＜ 0.05）。 结论 DMOG预处理可稳定肾小管上皮细胞内HIF-1α表达,对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞损伤具有一定保护作用。其机制可能与促进EPO、HSP70和HO-1表达,抑制caspase-3活化,上调Bcl-2表达有关。     

小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死

目的 探讨沉默缺氧诱导因子1α （HIF-1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。 方法 利用氯化钴模拟缺氧状态,并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成5组,分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率;用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率;检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况;用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF-1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平。 结果 （1）siRNA的细胞转染效率为95%～100%。在常氧条件下,终浓度100 nmol/L 的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70%;在缺氧条件下,HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97%。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P < 0.05）;细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）;HIF-1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P < 0.05）。（3）HIF-1α siRNA组细胞的HIF-1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P < 0.05）;而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达,加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。     

HIF-1α 及肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）在乳腺癌组织中的表达及两者间关系。 方法：应用免疫组化法检测40例乳腺癌和癌旁组织中HIF-1α、TAM标记抗原CD68的表达。 结果：乳腺癌组织中HIF-1α、CD68的表达均高于与癌旁组织（均P<0.05）;乳腺癌组织中CD68与HIF-1α表达呈正相关（r=0.823,P<0.01）;两者表达均与乳腺癌的病理分期、淋巴结转移有关（均P<0.05）。 结论：乳腺癌中HIF-1α和CD68的表达明显高于癌旁组织,提示HIF-1α与TAM的共同作用可能参与了乳腺癌的发生与发展。     

缺氧及沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因表达的影响

目的 观察缺氧及应用小干扰RNA (siRNA)沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对胰腺癌细胞株BxPC-3中RUNX3基因表达的影响.方法 构建人RUNX3基因真核表达载体质粒pEGFP-RUNX3,CoC12化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧以及siRNA沉默HIF-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白水平的影响.结果 缺氧能使BxPC-3细胞中RUNX3基因的表达较常氧时显著升高[表达为(9.13±1.55),P＜0.05],siRNA转染BxPC-3细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90％),并导致RUNX3基因的表达也受到明显抑制.结论 缺氧促使BxPC-3细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调RUNX3基因的表达水平.