靶向脑胶质瘤干细胞的树突状细胞疫苗治疗恶性脑胶质瘤的体外实验研究

目的 研究应用脑胶质瘤干细胞抗原制备的树突状细胞(DC)疫苗对胶质瘤细胞的杀伤作用.方法 反复冻融法获得源于胶质瘤细胞系U251中的肿瘤干细胞的胞溶物,和源于小鼠间充质干细胞的DC共培养,获得胶质瘤干细胞疫苗.流式细胞仪检测疫苗表面标志变化;CCK-8法检测其促T细胞增殖能力以及对胶质瘤细胞的靶向杀伤作用;ELISA法检测培养基中干扰素-γ的含量.用热处理U251细胞制备的DC疫苗作为对照组.结果 与对照组相比,脑胶质瘤干细胞疫苗的CD80、CD86、CD11c和MHC Ⅱ等表面标志表达显著提高,具有更强的促T细胞增殖能力(P＜0.01),对U251细胞特异性靶向杀伤率随效靶比的提高而增加,最高为(78.508±4.156)％,相应的干扰素-γ分泌水平也达到最高.结论 胶质瘤干细胞疫苗能更有效地诱导特异性细胞毒性T细胞,表现出更强的抗肿瘤特性.     

树突状细胞制备脑胶质瘤疫苗的体外研究

目的　通过体外实验探讨应用树突状细胞制备的肿瘤疫苗抗脑胶质瘤的作用机制。方法　培养大鼠树突状细胞,冻融法制备胶质瘤抗原,以肿瘤抗原致敏树突状细胞而制备胶质瘤疫苗。将实验动物分为4组,分别将胶质瘤疫苗、树突状细胞、生理盐水注入正常大鼠体内,到达预定时间取出大鼠脾脏,MTT法检测大鼠淋巴细胞活性。结果　1次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显低于3次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠;比较输入培养8d的树突状细胞和输入生理盐水的大鼠,其淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性无统计学差异。结论　应用树突状细胞制备胶质瘤疫苗可明显激活体内抗肿瘤免疫反应。     

树突状细胞疫苗治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

近年来随着对树突状细胞（dendriticcells，DCs）研究的不断深入，其在肿瘤抗原提呈和肿瘤免疫中重要作用逐渐被揭示，开拓了肿瘤免疫治疗的又一新领域。DCs是目前已知的抗原加工与提呈功能最强的专职抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APCs），也是唯一能刺激纯真T细胞的抗原提呈细胞，而T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤免疫中起重要的主导作用田。据此，本实验采用细胞因子诱导骨髓细胞分化为DC，以C6细胞裂解物致敏DC制备疫苗，再以该疫苗经颈内动脉、尾静脉、皮下三种不同注射途径回输荷C6脑胶质瘤大鼠，探讨其对荷瘤大鼠的免疫治疗效应，并试图从多种入药方式中寻找一种最为简便有效的方式，以便今后应用于临床工作。     

大鼠树突状细胞疫苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究树突状细胞疫苗对C6荷瘤大鼠的免疫治疗效应,并比较免疫治疗策略的异同。方法将成年健康SD大鼠40只平均分为4组,分别经RN A致敏和C6冻融抗原致敏的DC免疫以及对照组经未致敏D C和R PM I1640免疫,采用LD H试剂盒检测CTL的体外杀伤活性。建立大鼠C6脑胶质瘤颅内肿瘤模型,观察其生存期,并进行病理学检查。结果肿瘤RN A致敏的D C疫苗活性最强,与C6冻融抗原致敏的DC疫苗相比,CTL杀伤活性差异不显著(P>0.05),但与对照组相比,差异非常显著(P<0.01)。治疗组荷瘤大鼠生存时间与对照组相比,差异非常显著(P<0.01);两治疗组之间差异不显著(P>0.05)。治疗组肿瘤生长明显抑制。结论C6冻融抗原和肿瘤细胞R NA致敏的树突状细胞疫苗均是有效的免疫治疗方法。     

树突状细胞与脑胶质瘤

树突状细胞是一种抗原提呈细胞 ,通过将肿瘤抗原提呈给淋巴细胞来引发机体的抗肿瘤免疫反应 ,研究表明在以往认为缺乏树突状细胞的脑组织中也存在着树突状细胞 ,在中枢神经系统的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用 ,目前的实验充分证实了树突状细胞的抗瘤效应。本文就树突状细胞的特性、对胶质瘤的作用以及临床应用方法、前景等方面作一综述     

脑胶质瘤特异性肿瘤疫苗的制备

目的 探讨运用树突状细胞和肿瘤组织匀浆制成的特异性肿瘤疫苗(DC肿瘤疫苗)治疗脑胶质瘤的新途径。方 法抽取脑胶质瘤患外周血50ml，体外培养扩增树突状细胞，再利用患术中取出的肿瘤细胞裂解物体外致敏树突状细胞制成DC肿瘤疫苗，静脉回输病人体内。结果 经临床41例120次的DC疫苗治疗，无一例发生不良反应和其他副作用，安全系数大。结论 运用DC和肿瘤组织匀浆制备肿瘤疫苗安全有效，具有临床应用前景。．     

树突状细胞和脑胶质瘤自体免疫治疗的实验和临床研究

一、材料与方法研究胶质瘤抗原树突状细胞(DC)疫苗的制备,并探讨其临床应用。从胶质瘤患者外周血中提取单个核细胞,用含10%自体血清的RPMI-1640加入GM-CSF和IL-4培养,获得DC。进行流式细胞学检测及光镜和电镜观察。分别用冻融法和紫外线照射法制备胶质瘤可溶性和凋亡抗原。检测不同DC疫苗诱导CTL体外杀伤活性的差别。选取2000年1月至2003年4月病理证实胶质瘤手术患者56例。其中II级25例、III级20例、IV级11例。将病人分为3组,均经同一手术组成员手术治疗,基本上为术中肉眼全切肿瘤,术后均接受常规剂量的放疗,均未接受化疗。实验…     

树状突细胞疫苗在脑恶性胶质瘤治疗中的研究进展

脑恶性胶质瘤是中枢神经系统（CNS）原发性恶性肿瘤中最常见的肿瘤,采用目前现有的手术加放疗加化疗的综合治疗措施仍难以根治.树突状细胞（DC）是功能最强的抗原提呈细胞（APC）,能够诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）生成.应用肿瘤相关抗原或抗原多肽体外冲击致敏DC制成疫苗,回输或免疫接种于载瘤宿主,可诱发特异性CTL的抗肿瘤免疫反应.本文就DC疫苗在脑恶性胶质瘤治疗研究中的进展进行综述.     

努力探索新途径，提高脑胶质瘤的治疗效果

由于脑胶质瘤占颅内肿瘤的比例最高,且呈恶性侵袭性生长,其中位数生存期不足一年.国内外不少神经外科专家对脑胶质瘤的治疗,除争取尽早手术完全切除肿瘤外,还采取了许多积极的其它治疗措施,如手术辅助放疗、局部控释和全身化疗等,并取得了良好的效果,使脑胶质瘤患者的生命得以延续.     

自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗脑胶质瘤的临床初步观察

目的 本研究自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗人类脑胶质瘤的临床效果，并探讨其应用前景。方法 将41例病理证实的脑胶质瘤患分为3组，试验组9人接受自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗，阳性对照组17人接受全肿瘤组织匀浆疫苗治疗，阴性对照组15人，手术后仅接受放疗。结果 随访结果显示，试验组中位数生存时间大于22个月，阳性对照组为16个月，二均高于阴性对照组(7个月)。生存分析示3组间的生存曲线分布差异有显性意义。结论 自体树突状细胞肿瘤疫苗和全肿瘤组织匀浆疫苗可抑制脑胶质瘤的复发和进展，从而有效地延长脑胶质瘤患的生存时间，且前较后具有更好的疗效，有良好的临床应用前景。     

人胶质瘤干细胞样抗原致敏树突状细胞疫苗Ⅰ期临床试验研究

目的 探讨胶质瘤干细胞样抗原致敏DC疫苗在临床应用的可行性、安全性及有效性.方法 选取5例复发胶质瘤患者;二次手术后体外无血清培养胶质瘤细胞,CD133磁珠分选和X线照射后获取干细胞样抗原;同体外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4诱导后再与干细胞样抗原共孵育获得成熟DC疫苗;每周1次皮下接种DC疫苗,共3次,联合替莫唑胺化疗.观察不良反应,头颅MRI增强随访及生存期评估疗效.结果 5例胶质瘤标本中均含有不同比率的CD133+细胞,DC疫苗接种后患者无明显不良反应,患者平均生存期为72.2周.结论 干细胞样抗原致敏DC疫苗对于胶质瘤患者安全可行,联合化疗能延长患者生存期.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility ,safety and efficiency of dendritic cells (DCs) vaccine pulsed with tumor stem - like associated antigens against malignant glioma in recurrent patients.Method Cells derived from fresh specimens of recurrent gliomas in serum - free medium were magenetically sorted with CD133 -antibody and irradiated with X -ray to attain freeze -thaw lysates.Autologous DCs from mononuclear cells with GM-CSF and IL-4 were matured by the lysates.Five patients with recurrent glioma received the DCs vaccine once a week (3 times ) followed combination with chemotherapy after recurrent tumor resection.Follow - up was procedured with MRI scans and clinical protocol.Results Five malignant glioma cell lines contained different ratio of CD133 + cells.DCs were successfully prepared and applied in all patients.No side -effect was observed.Mean survival time was 72.2 weeks.Conclusions Combination of DCs vaccine and chemotherapy is safe and may benefit the patients with malignant glioma.     

干细胞样抗原提高树突状细胞介导胶质瘤免疫治疗的体外研究

目的 比较胶质瘤干细胞样抗原与非干细胞样抗原致敏树突状细胞(DCs)疫苗对胶质瘤的体外作用.方法 体外用无血清法和血清法培养恶性胶质瘤细胞,有限稀释法检测其克隆形成率;冻融法获取相应胶质瘤抗原;GM-CSF、IL-4体外诱导人外周血单核细胞获取DCs,与抗原孵育后再激活T淋巴细胞,同位素法检测效应细胞对胶质瘤细胞的杀伤率;流式细胞术检测DCs表面分子变化以及非贴壁细胞中T细胞比例的变化.结果 无血清培液中的胶质瘤细胞具有更高的克隆形成率(P<0.01);DCs经不同抗原刺激后HLA-A、HLA-DR、CD80、CD86表达上调(P<0.01);非贴壁细胞与DCs共培养后T细胞比例明显增高;干细胞样抗原激活的效应细胞对非干细胞样细胞和干细胞样细胞杀伤率分别为(70.2±5.13)%和(56.7±7.81)%(P<0.001),而非干细胞样抗原活化的效应细胞相应的杀伤率为(36.6±6.45)%和(9.05±3.49)%(P<0.001).结论 无血清培养液中的胶质瘤细胞具有更强的增殖能力,胶质瘤干细胞样抗原较传统抗原具有更强的抗原性,为进一步提高胶质瘤DCs疫苗疗效奠定基础.     

白细胞介素-18与C6细胞裂解物修饰的树突状细胞疫苗对脑胶质瘤的免疫治疗作用

目的观察经白细胞介素-18(IL-18)和C6细胞裂解物修饰的树突状细胞(DC)疫苗对大鼠脑胶质瘤的免疫治疗作用.方法用立体定向方法制作大鼠脑胶质瘤模型.通过白细胞介素-18和大鼠脑胶质瘤细胞(C6)裂解物修饰大鼠树突状细胞,制成DC疫苗.在大鼠皮下接种DC疫苗,检测大鼠体内特异性杀伤T细胞(CTL)活性,检测各组血清中细胞因子IL-18、干扰素(IFN-γ)的浓度,并研究了其对大鼠脑胶质瘤的免疫治疗作用.结果DC-IL18-C6组中IL-18与IFN-γ的浓度与其余各组比较有统计学意义(P＜0 01),与注射DC组比较有统计学意义(P＜0 01).DC-IL18-C6组接种C6细胞后56 d均未见移植肿瘤形成,与其余各组比较有统计学意义(P＜0.01).对C6胶质瘤细胞的细胞毒作用以DC-IL18-C6组最强,DC-C6裂解物组次之,DC-Ⅱ-18组较弱,其余两组则缺乏(P＜0.01).DC-IL18-C6组的荷瘤鼠生存期比其他各组明显延长,且肿瘤的大小比其他各组明显缩小.结论白细胞介素-18与C6细胞裂解物修饰的树突状细胞疫苗对大鼠脑胶质瘤有明显的免疫治疗作用.     

树突状细胞疫苗治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

目的研究G422肿瘤细胞RNA体外冲击致敏的树突状细胞(DC)回输诱导体内产生保护性免疫反应及对颅内荷瘤小鼠的免疫治疗效应,探讨以树突状细胞为基础的疫苗对脑胶质瘤治疗的可行性.方法提取G422胶质母细胞瘤RNA或肿瘤提取物冲击致敏DC制成疫苗,分别进行免疫保护和免疫治疗的体内实验,以及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外诱导及活性检测,并与PBS、未经致敏的DC、G422肿瘤细胞RNA组进行对照.疫苗能诱导产生针对G422肿瘤抗原特异性CTL,差异具有非常显著性(P＜0.01),接种疫苗后的小鼠能抵抗G422的再次攻击(P＜0.01),荷瘤小鼠接种疫苗后生存期较对照组延长(P＜0.05).结果疫苗能诱导产生针对G422肿瘤抗原特异性CTL,差异具有非常显著性(P＜0.01),接种疫苗后的小鼠能抵抗G422的再次攻击(P＜0.01),荷瘤小鼠接种疫苗后生存期较对照组延长(P＜0.05).结论肿瘤RNA或肿瘤提取物冲击致敏DC能诱导小鼠产生抗原特异性CTL,激活抗肿瘤T细胞,具有免疫保护和免疫治疗作用.该实验为DC疫苗免疫治疗胶质瘤提供了实验基础.     

树突状细胞瘤内注射和化疗联合治疗脑胶质瘤的实验研究

随着中枢神经系统免疫研究的发展，树突状细胞（DC）疫苗的研制、使用已取得了令人鼓舞的进展。已被视为第四种肿瘤治疗模式，但这几种治疗方法有各自的局限性。本研究基于我院3年来对DC肿瘤疫苗的基础工作，进一步研究如何提高免疫治疗的效果，通过动物实验探讨联合瘤内注射DC和化疗对脑胶质瘤的作用。     

树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的胶质瘤细胞融合瘤苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究脑胶质瘤的免疫治疗。方法采用骨髓来源的干细胞经IL-4与GM-CSF 培养的树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的C6胶质瘤细胞进行融合,后鼠脑内注射进行动物实验。实验分为四组:Ⅰ组:阳性对照组:C6细胞(每只动物注射细胞数1×106);Ⅱ组:转染反义 TGF-β1的C6细胞与树突状细胞相融合的融合细胞(每只动物注射1×105 C6细胞与1×106个树突状细胞的融合细胞)和C6细胞(1×106);Ⅲ组:阴性对照组,注射相同体积IMDM培养液。观察动物的组织学、生存期及图像分析肿瘤的肿瘤坏死面积及肿瘤面积。结果Ⅰ组:所有动物20d内全部死亡;Ⅱ组:动物存活59d无死亡;Ⅲ组:所有动物实验过程中均存活。Ⅰ组:图像分析仪下肿瘤面积为100％;Ⅱ组:仅见有少量的肿瘤细胞,肿瘤周围神经元减少、胶质增生,其肿瘤面积与Ⅰ组相比占整个视野的5．01％-6．20％,少见肿瘤坏死。统计学处理:Ⅱ组与其他各组比较P<0．01。结论树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的胶质瘤细胞融合瘤苗能够延长动物的存活期,为将来采用基因修饰的脑胶质瘤融合瘤苗治疗脑胶质瘤提供帮助．     

树突状细胞治疗脑胶质细胞瘤实验研究

目的研究树突状细胞疫苗瘤内注射对胶质瘤的治疗作用.方法建立大鼠C6脑胶质瘤皮下和颅内肿瘤模型,通过第一组为瘤内注射树突状细胞(DC)、第二组为腹部皮下注射DC、第三组为对照组,观察肿瘤生长情况和大鼠生存时间,比较细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性,并进行病理学检查.结果治疗组大鼠表现为肿瘤生长部分抑制,生存时间明显延长,与对照组比较,有极显著差异(P<0.01),瘤内注射DC和腹部皮下注射C6冻融抗原致敏DC,两治疗组间无显著性差异(P＝0.60);CTL杀伤活性增强,和对照组比较有显著性差异(P<0.05).双侧皮下种植的肿瘤治疗一侧后,生长均受到抑制,并逐渐缩小.结论瘤内注射DC治疗脑胶质瘤是一种新的、有效的免疫治疗策略.     

胶质瘤树突状细胞融合疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞

在本研究中,我们检测树突状细胞(DC)与胶质瘤细胞U87融合是否会产生融合细胞,并确定此融合细胞是否会于体外诱导产生胶质瘤细胞U87特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。一、材料与方法1. 培养产生树突状细胞:从基因型为HLAA0201的健康人外周血中得到的单核细胞。分离CD14 单核细胞,重悬于10mlX-VIVO15培养液中,加入GM-CSF和IL-4。第5天,移走一半培养液,并加入相同体积的含有细胞因子GM-CSF和IL-4的新鲜培养液。第7天,应用冷的Hanks液收集DC并将其用做抗原递呈细胞。2. 树突状细胞的表型分析:在培养的第7天,流式细胞仪(FCM)检…     

胶质瘤氩氦冻融产物负载树突状细胞对颅内胶质瘤大鼠的免疫治疗研究

目的 观察C6胶质瘤细胞经氩氦冷冻后,冻融产物对Wistar大鼠骨髓源性树突状细胞(BM-DCs)成熟的影响,以及致敏的树突状细胞(DCs)对胶质瘤模型大鼠的抗肿瘤作用. 方法 体外常规培养C6胶质瘤细胞,双循环氩氦冷冻法冻融C6细胞悬液为实验组,只插入探针不作冷冻为阴性对照组,双循环氩氦冷冻法冻融等量PBS为空白对照组;应用重组大鼠白细胞介素-4(rmIL-4)、重组大鼠粒一巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导Wistar大鼠骨髓DCs成熟,培养第7天分别加入各组冷冻产物,48 h后光镜下观察DCs细胞形态,流式细胞仪检测各组DCs细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达,ELISA法检测各组上清液中IL-12含量;将C6细胞接种于Wistar大鼠建立荷脑胶质瘤模型,第3、10天分别皮下注射空白对照组、阴性对照组、实验组DCs疫苗,比较各组大鼠的中位生存期. 结果 培养第7天未成熟DCs加入冷冻产物48 h后实验组具有成熟DCs形态学特征,表面分子CD80、CD86阳性表达率、上清中[L-12的分泌量高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组DCs疫苗治疗后荷脑胶质瘤大鼠中位生存期高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 胶质瘤氩氦冻融产物可以诱导DCs成熟,介导大鼠脑胶质瘤的免疫治疗,为冷冻免疫机制提供一定理论基础,同时该DCs疫苗为胶质瘤个体化治疗的研究提供一种新的方法.