As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。     

二藤散结方对SGC7901/VCR的多药耐药影响及与P-gp表达的关系

目的 观察二藤散结方对人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR的影响及与P-糖蛋白(P-gp)表达的关系.方法 体外培养SGC7901/VCR,采用MTT法、流式细胞仪、免疫组化法检测二藤散结方对SGC7901/VCR的影响及与细胞膜P-gp表达的关系.结果 二藤散结方能逆转SGC7901/VCR的多药耐药性,增加SGC7901/VCR细胞内ADM浓度,下调SGC7901/VCR细胞膜P-gp的表达.结论 二藤散结方能逆转SGC7901/VCR的多药耐药性,逆转机制与细胞膜P-gp表达减弱有关.     

Ras和磷酸化ERK信号通路参与三氧化二砷逆转耐药作用机制的研究

  目的   体外实验研究三氧化二砷(As₂O₃)对人胃癌阿霉素耐药细胞株(SGC7901/ADM)的逆转耐药机制。   方法   MTT法检测磷酸化ERK(p-ERK)激动剂G-CSF作用前后As₂O₃的逆转耐药倍数; 免疫细胞化学法测定As₂O₃及G-CSF作用前后SGC7901/ADM细胞内Ras和p-ERK的变化; 流式细胞仪测定G-CSF和As₂O₃干预后SGC7901/ADM的细胞周期和凋亡率。   结果   SGC7901/ADM对ADM耐药, As₂O₃可逆转耐药, 其中0.5μmol/L As₂O₃作用48 h后逆转耐药倍数约为6.29。G-CSF干预后, 逆转耐药倍数降至4.72;SGC7901/ADM中Ras表达高于亲本细胞株SGC7901/S, 而p-ERK无明显差异, As₂O₃可下调Ras及p-ERK的表达。G-CSF干预后, As₂O₃下调Ras及p-ERK表达的能力较干预前显著降低。0.1μmol/L和0.5μmol/L As₂O₃组的G₀~G₁期细胞比例和凋亡率均显著高于各个对照组; G-CSF干预后同一剂量的As₂O₃组G₀~G₁期细胞及凋亡率较干预前均显著降低。   结论   As₂O₃可逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM对ADM的耐药作用, 其机制与下调Ras/p-ERK信号传导通路中Ras、磷酸化ERK的表达有关。      

三氧化二砷逆转人胃癌细胞SGC7901/ADR耐药性的作用机制

目的：探讨三氧化二砷(As_2O_3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用及其逆转机制。方法：采用MTT法检测As_2O_3的非细胞毒性浓度和SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流武细胞仪检测细胞内药物浓度和P-gp功能,免疫组织化学法检测细胞GST-π和TPPOⅡ的表达。结果：0．4～0．8μmol/L As_2O_3对耐药细胞SGC7901/ ADR无明显毒性,0．8μmol/L的As_2O_3可抑制P-gp功能,下调GST-π表达,显著提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论：As_2O_3可部分逆转SGC7901/ADR细胞对ADM耐药性,其机制可能与抑制P-gp功能及下调GST-π表达有关。     

反义survivin核酸增强胃癌细胞对多西他赛敏感性及其逆转耐药机制的探讨

目的探讨反义survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导和化疗增敏作用,及其与多药耐药基因(mdr-1)的相关性。方法采用电转染法转染胃癌细胞系SGC7901,并筛选阳性克隆。以Western blot法检测survivin蛋白的表达,用透射电镜观察转染后对SGC7901的凋亡诱导作用,RT-PCR检测mdr-1 mRNA的表达,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。诱导SGC7901细胞耐药,检测耐药mdr-1和survivin的表达。结果转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞中,survivin蛋白表达较未转染组明显降低;透射电镜下,转染组细胞呈凋亡晚期变化;转染组的mdr-1 mRNA较未转染组明显降低,转染组与未转染组的MDR指数分别为0.196±0.013和3.126±O.019;转染组多西他赛的IC50值为(16.7±1.98)μg/L,而未转染组为(55.7±1.89)μg/L,差异有统计学意义。耐药SGC7901细胞的survivin mRNA表达随着mdr-1 mRNA表达增加而明显增强。结论反义survivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡,增强多西他赛化疗敏感性,其逆转耐药的机制与mdr-1低表达有关。     

KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药中的作用

目的:探讨KLF8（Kruppel-like factor 8）在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。方法:利用Western blot和实时定量PCR的方法检测三株胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901在常氧及缺氧条件下KLF8的表达水平。Western blot和实时定量PCR检测胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR、SGC7901/ADR和亲本细胞系SGC7901中KLF8的表达水平。构建KLF8正义表达载体及KLF8小干扰RNA的慢病毒载体,将其转染入实验细胞中,用Western blot和实时定量PCR的方法检测KLF8表达量的变化。MTT、Annexin V/PI染色法及阿霉素蓄积量与潴留实验检测KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。结果:缺氧可诱导胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901中KLF8的表达升高。与胃癌亲本细胞系相比,KLF8在胃癌耐药细胞系中的表达升高,并且在SGC7901/VCR细胞中表达升高的更为明显。外源性转染KLF8后可显著增加胃癌细胞中KLF8的表达量,KLF8小干扰RNA可有效降低常氧及缺氧条件下胃癌细胞中KLF8的表达。常氧条件下,外源性转染KLF8的正义表达载体可增加胃癌细胞对不同化疗药物的耐受性,降低化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡指数,同时可增加细胞内阿霉素的泵出率。缺氧条件下,KLF8小干扰RNA能够逆转胃癌细胞中上述现象的发生。结论:初步实验结果发现了一个新的缺氧反应分子-KLF8。表型试验证实该分子在缺氧诱导胃癌多药耐药中发挥作用。     

川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的探讨川芎嗪与三氧化二砷联合逆转耐药人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药的效果。方法采用WST-8法测定细胞的药敏性及抗药性逆转,应用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ADM浓度、P-gp蛋白的表达,采用免疫细胞化学二步法检测细胞GST-π表达。结果非细胞毒性浓度的TMP（20μg/ml）及As2O3（0.5μmol/L）可降低ADM对K562/ADM细胞的IC50（P〈0.05）,2种药物联合应用对ADM的逆转倍数明显高于两者单独应用（P〈0.05）,而且也高于两者单独应用之和;两者以非细胞毒性浓度联合应用提高K562/ADM细胞内ADM浓度和细胞凋亡百分率,作用大于两药单独应用,并且明显下调细胞P-gp和GST-π表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论非细胞毒性剂量的TMP和As2O3,均可部分逆转有多药耐药表型的细胞株K562/ADM对阿霉素的耐药性,两者联合应用效果优于单独应用,具有协同作用,其机制可能与下调P-gp和GST-π表达有关。     

尼美舒利逆转人胃癌细胞耐药的实验研究

目的:研究环氧化酶 -2 (COX -2)选择性抑制剂尼美舒利(nimesulide,NIM)对丝裂霉素 (mitomycin,MMC)抑制体外培养人胃癌细胞株 SGC 7901 及其耐药亚系 SGC 7901/VCR的细胞增殖及诱导凋亡的影响,初步探讨 NIM逆转人胃癌细胞耐药的机制。方法: 1) MTT比色法及集落形成实验研究 NIM对 MMC抑制人胃癌细胞 SGC 7901,及其耐药亚系 SGC7901/VCR细胞增殖的影响; 2)流式细胞仪技术及吖啶橙(acridine orange, AO)荧光染色研究NIM对 MMC诱导人胃癌细胞 SGC 7901,及其耐药亚系 SGC 7901/VCR 细胞凋亡的影响。结果:1) 联合应用 NIM 与单用 MMC 比较,SGC 7901细胞株中,MMC对 SGC 7901 细胞的半数抑制浓度(IC50 )降低 0. 74μg/mL,集落形成率下降 46 4%。SGC 7901/VCR 细胞株中, IC50 从 > 2. 0 μg/mL 下降到 0 .65μg/mL,集落形成率下降 31%;2) SGC 7901 细胞株及其耐药亚系 SGC 7901/VCR细胞株中,NIM+ MMC 组的染色阳性细胞数分别为47 .00±1 .00、30 .33±4 .16,较其他组别均有显著升高,流式细胞仪分析细胞凋亡结果与其基本一致。结论: 1) COX 2 选择性抑制剂 NIM能增强MMC抑制人胃癌细胞株 SGC 7901,及SGC 7901/VCR的细胞增殖和诱导其凋亡的作用;2)NIM对体外培养的人胃癌细胞株的多药耐药有一定的逆转作用。     

下调RPL23对胃癌耐药细胞SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:检测人胃癌细胞系SGC7901及其阿霉素（ADR）耐药细胞系SGC7901/ADR中RPL23的表达差异,探讨胃癌细胞中RPL23表达对ADR耐药的影响。方法:qPCR检测RPL23在SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞系中的表达差异;MTT法检测下调RPL23后SGC7901/ADR细胞对ADR的敏感性;流式细胞仪检测下调RPL23后对细胞凋亡的影响;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果:qPCR结果显示,RPL23在 SGC7901/ADR细胞系中的表达高于其在SGC7901细胞系中的表达(P＜0.001)。MTT法结果显示,下调RPL23后,在SGC7901/ADR细胞系中ADR的IC50明显升高(P＜0.001)。凋亡检测结果显示,下调RPL23后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P＜0.001)。Western Blot结果显示,下调RPL23后,细胞中Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显降低。结论:RPL23在SGC7901/ADR中的表达高于SGC7901细胞,下调RPL23表达可提高其对ADR的敏感性并促进细胞凋亡,提示RPL23可能通过作用于Bcl-2调节细胞凋亡。     

三氧化二砷对人胃癌细胞系MGC803凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞系MGC803的抑制和诱导凋亡作用及对MRP基因表达的影响.方法:选用人胃癌MGC803细胞系,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人其抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MRP mRNA的表达.结果:As2O3对人胃癌MGC803 细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系.不同浓度的As2O3均可诱导凋亡.1.0μmol/L、2.0μmol/L的As2O3可下调MRP mRNA的表达.结论:As2O3具有抗肿瘤作用,主要是通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调MRP mRNA 表达有密切关系.