牛胚胎玻璃化冷冻及一步解冻试验

本试验简化了牛胚胎冷冻保存方法的操作程序，为胚胎冷冻技术实用化打下了良好基础，试验选用１５％丙三醇＋４％丙二醇＋６％乙二醇作为细胞内液冷冻保护剂，用２５％丙三醇＋２５％丙二醇作为细胞外液冷冻保护剂，对黄牛胚胎进行冷冰保存试验，共冷冻优质桑椹胚和早期囊胚４６枚，通过液氮保存５－２０８天后解冻，有２７枚胚胎完好，置ＣＯ２培养箱中培养２４小时，有５５．６％（１５／２７）的胚胎继续发育，移植受体后，６０天     

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

本文系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律 ,卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻 ,结果如下 :①注射hCG后 1 2～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,42～ 48h为 2 -细胞期 ,48～ 6 0h为 4-细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8-细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中 ;②培养液中添加激素 ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育率 ;③在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 -细胞阻断 ,其 2 -细胞胚的发育率达 1 0 0 % ,8-细胞胚的发育率达55%以上 ;牛、羊上皮细胞培养上清也能有效克服 2 -细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞的发育率显著提高 ;④以D -PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D -PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9.3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 .4%。以上研究为建立小鼠胚胎库提供了基础     

一步稀释对在不同冷冻保护剂中冷冻的体外受精牛胚胎体外培养和直接移植的影响

本研究的目的是确定甲基cellosolve(MC)二甘醇(DEG)、甘醇(EG)和1,2-丙三醇(1、2Propanediol PG)对冷冻的牛体外受精胚胎在支持培养基中进行体外培养和直接移植对其直接用水气是否有益的作用。 仅将具有致密卵丘且用已获能精子受精的牛卵母细胞在添加有5％超排牛血清(SCS)中,培养20—22小时(38.5℃,5％CO_2)。7—8日龄胚胎在1.3M甲基cellosolve(MC),1.1M二甘醇(DEG),1.8M甘醇(EG),1.6M丙三醇(PG)和1.1M buthylene glycol(BG)溶液中平衡10分钟,再装入0.25毫升塑料细管中,于0℃放进酒精冷冻机中,然后以-1℃/分钟从0℃降至-6℃植冰,保持10分钟,再以-0.3℃/分或-0.5℃/分降到-30℃。在将塑料管入液氮中保存。在30℃水浴中解冻后,把胚胎放入TCM-199中(内含5％SCS)培养48小时,进行胚胎的直接再水化。解冻后发育至较晚阶段且形态好的胚胎被认为是存活的。将放入每种冷冻保护剂中的某些胚胎在不去掉冷冻保护剂的情况下进行非手术移植,在冷冻 和直接再水化期间,对于保护孵化胚胎的浓度来说1.8M EG(64.3％)和1.3M MC(54.5％),1.1M DEG(60.0％)要优于其他浓空。胚胎冷冻的速度中(0.3℃/分和0.5℃/分)没有明显差异(P≤0.05),但是以0.3℃降温时,体外培养后形成孵化胚胎的比率为64.6％(31/48);而以0.5℃/分冷冻的则为2     

显微注射对绵羊体外受精胚胎的影响

本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响,显微注射组和对照组的囊胚率分别为9．1％和32．2％（P＜0．05）。利用慢速冷冻的方法,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异（分别为75．5％和77．7％,P＞0．05）。显微注射组和对照组的冷冻胚胎移植后的产羔率分别为25．0％和33．3％（P＞0．05）。结果表明,绵羊合子原核显微注射外源DNA后的发育能力下降,而发育到囊胚阶段的胚胎的抗冻性及移植后的发育能力受到的影响较小。     

颐生母液对小鼠窒息性缺氧耐受力的影响

目的:分析颐生母液对小鼠窒息性缺氧耐受力的影响和对某些生理指标的影响。方法:在青海省德令哈市(海拔3 100m以上)进行小鼠窒息性缺氧耐受力的实验,将70只小鼠雌雄各半随机分为5组,对照组灌服等体积纯净水,阳性药物组灌服优质红参水煎液,颐生母液组分别为高、中、低剂量组,分别灌服5.0g/kg、3.5g/kg、2.5g/kg。结果:颐生母液三种剂量组及红参组(阳性对照组)均能提高小鼠的缺氧耐受力,其中3.5g/kg剂量组优于红参组,P<0.01。结论:颐生母液能明显提高小鼠的耐缺氧能力,具有较好的抗缺氧作用。     

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响７１００３２西安第四军医大学神经科学研究所孟晋宏梁吉吉杨浩鞠躬关键词锌；细胞，培养的；培养基，无血清中国图书资料分类号Ｒ３８８．２５锌是真核生物体内重要的微量元素，在中枢神经系统中的分布以皮层和海马为最多。长期以...     

RNA干扰沉默p16基因对小鼠胚胎成纤维细胞衰老的影响

目的：探讨RNA干扰沉默小鼠p16基因表达对137Csγ射线诱导的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）衰老的影响。方法构建p16 RNA干扰载体,采用实时荧光定量PCR、Western blot和衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察RNA干扰前后辐射诱导衰老的MEF细胞mRNA水平、蛋白水平和衰老细胞百分率等的变化。结果辐射诱导衰老的MEF细胞RNA干扰后24 h,照射＋p16 siRNA-1和照射＋p16 siRNA-2组p16 mRNA 相对表达水平较照射组显著降低（t=16.52、16.13,P均〈0.05）,蛋白水平较照射组显著降低;干扰后5 d,照射＋p16 siRNA-1和照射＋p16 siRNA-2组SA-β-Gal染色阳性细胞百分比[（34.17±2.08）%和（33.83±1.75）%]明显低于照射组[（68.83±1.26）%]（t=37.72、38.09,P均〈0.01）。结论 RNA干扰沉默小鼠p16基因表达能够抑制MEF细胞的衰老,为其在细胞衰老相关研究中的应用奠定了基础。     

钩吻对小鼠急性辐射损伤的保护作用

钩吻 (ＧＥＢ)是一种主要含多种吲哚类生物碱的剧毒植物。具有消炎、镇痛、抗肿瘤、调节免疫功能和保护骨髓选血功能等作用[1 3] 。ＧＭ ＣＳＦ是公认的造血细胞生长因子 ,它对放射损伤有较好的治疗作用 ,ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白同时具有ＧＭ ＣＳＦ和ＩＬ 3的功能 ,作用效果优于ＧＭ ＣＳＦ[4 ] 。笔者旨在比较ＧＦＢ和ｒｈＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 3融合蛋白对小鼠急性放射损伤的治疗效果 ,现报道如下。一、材料和方法1 药物 :钩吻乙醇粗提物为广西产钩吻茎乙醇粗提物 ,提取和制备方法见文献 [3],配成浓度 6 0ｍｇ ｍｌ,过滤除菌备用。…     

高温环境对受照射后小鼠生存及外周血淋巴细胞的影响

目的研究自然高温环境下，受γ射线照射小鼠生存的变化及外周血淋巴细胞的改变。方法实验动物分为室温组和不同时间的自然高温环境组，分别接受6．5，9．0Gy的γ射线照射和相应的高温作用后，观察30d内小鼠的死亡情况以及外周血淋巴细胞变化的规律。结果6．5Gy照射的小鼠，高温9h和全自然环境组的生存时间与室温组差异有显著性，9．0Gy照射的小鼠，高温6，9h、全自然环境组的生存时间和室温组差异有显著性；室温组小鼠外周血淋巴细胞的下降速度低于各高温组且外周血淋巴细胞存在顿挫回升，而各高温组无。结论高温环境，受照射小鼠的生存指标明显下降；加重照射后早期外周血淋巴细胞下降。     

高压氧对小鼠支气管肺泡灌洗液髓过氧化物酶活性的影响

一定压力一时程的高压氧暴露可以引起肺型氧中毒，其损伤以炎症渗出为主。小鼠支气管肺泡灌洗术(bronchoalveolarlavage，BAL)是研究动物呼吸系统机能变化的重要实验技术。本研究运用优化BAL方法，对高压氧暴露后小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中髓过氧化物酶(myeloperoxidse，MPO)活性变化进行探讨。     

狭叶红景天对小鼠常压缺氧耐力影响的再研究

为探讨狭叶红景天中口服毒性成分百脉根甙对其抗缺氧活性的影响，首先需先测定其醇提取物的作用，结果发现无延长封闭容器内小鼠存活时间的功能。为此，对该提取物和红景天甙是否具此作用再次进行探讨。选取健康小鼠，分设对照组和给药组。一次或连续６天给药后，封闭于玻璃容器内，记录小鼠存活时间。比较均数间是否有显著性差异。连续灌服醇提物（１０ｇ／ｋｇ，６天）组的平均存活时间为２３．０５±４．２７分，对照为２３．５２±４．４５；红景天甙（１００ｍｇ／ｋｇ，７天）组为２７．０７±４．６５，对照为２４．０５±４．２８，（１００ｍｇ／ｋｇ，１次）组为２７．０３±５．０３，对照为２５．８５±３．２５，各组均值间无差异，本实验结果表明狭叶红景天醇提取物和红景天甙对密闭容器内的小鼠无延长其存活时间的作用。但不排除可能由动物所致差异。     

颐生母液对小鼠低氧游泳耐力和免疫形态学的观察

目的:了解颐生母液对小鼠低氧游泳耐力和某些生理指标的影响.方法:在青海海晏县(海拔3 100m)进行小鼠低氧游泳耐力实验,将70只小鼠随机分为颐生母液高、中、低三种剂量组(分别灌服5g/kg、3.5g/kg和2.5g/kg)、阳性对照组(灌服红参水煎液)和空白对照组(灌服等体积蒸馏水),连续灌服10天.第11天进行游泳...     

不同功能状态滋养层对人胚胎生殖嵴干细胞生长作用的实验研究

目的筛选并建立高效胚胎干细胞滋养层体外培养的最佳条件,利于人胚胎生殖嵴原始生殖细胞（PGC）的增殖。方法分离培养孕14.5 d（E14.5 d）和新生0 d（P0）昆明小鼠原代胚胎成纤维细胞（MEF）并传代制备滋养层,以60Coγ射线照射后继续培养并接种人PGC。采用活细胞拒染法、免疫细胞化学染色,对比观察滋养层的生长活性和照射后分泌功能;采用碱性磷酸酶（AKP）染色技术鉴定人PGCs的生长状态。结果 （1）E14.5 d和P0来源的第3～5代MEF生长旺盛。P0来源第6代与E14.5 d来源同代MEF相比深染变形细胞增达32%,经60Coγ照射后衰老细胞明显增多（P〈0.05）。（2）E14.5 d来源第3～6代和P0来源第3～4代MEF经60Coγ照射后培养5 d时,Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞数目较多,染色较深;但P0来源第5代其阳性细胞数目明显减少,染色变浅。（3）人PGCs接种于E14.5 d第3代制备的滋养层3～4 d后见典型的ESC小克隆团,细胞呈圆形;AKP染色呈深蓝色团;而接种于P0来源第6代MEF制备的滋养层5～6 d,可见ESC克隆松散、变大,周围边界不清,细胞紊乱。结论以60Coγ射线照射小鼠E14.5 d来源第3～6代MEF是制备滋养层的最佳来源,可维持人PGCs增殖。     

冷血含钾停跳液对心肌保护的作用

近年来,在心内直视手术中,临床应用最广泛的心肌保护,是冷钾停跳液(CK)结合心脏局部深低温的综合方法。但在术前心功能较差,以及复杂性心脏病的手术纠治中,保护效果仍嫌不足。许多学者利用新鲜氧合血作为心停跳液的载体,加强心肌保护,取得了显著的效果。本文就冷血含钾停跳液(CBK)加强心肌保护的作用及其机理综述如下。 一、应用CBK的理论基础 以血液作为心停跳液的赋形剂,除了具有CK的全部优点以外,还含有丰富的氧合血红蛋白和溶解氧,含胶体成份的缓冲系统,生理水平的代谢基质以及正常代谢的各种酶系等等。 心脏功能状态和心肌保护好坏与ATP水平密切相关,而能量供需平衡又与心肌氧的利用率不可分离。100ml CBK可携氧10～12ml,满足于心停跳期间心肌氧化代谢的需要,一般认为用CK,主动脉阻断     

丙戊酸钠暴露对胚胎小鼠大脑皮质发育的影响

目的 探讨在胚胎发育关键期注射丙戊酸钠(VPA)对胎鼠大脑皮质神经元增殖与形态的影响.方法 孕E12.5 ICR小鼠分别腹腔注射VPA 350 mg/ml或生理盐水.使用BrdU/EdU双标或BrdU单标实验方法,检测两组胚胎小鼠在大脑皮质发育不同阶段的神经干细胞增殖和迁移情况;Pax6免疫荧光染色检测神经前体细胞数量;子宫内胚胎电转绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒,分析生理盐水组与VPA给药组胚胎小鼠的大脑皮质神经元形态和前导突起长度差异.结果 ①与生理盐水组相比,急性VPA暴露对胎鼠的大脑皮质神经前体细胞增殖无显著影响;VPA组小鼠的神经前体细胞密度无显著差别.②长期VPA暴露使小鼠大脑皮质的神经前体细胞增殖减少,迁移无显著影响.③VPA组中大脑皮质的皮质层(CP)内圆形细胞增多,单/双板细胞减少,前导突起变长;中间带(IZ)内多极细胞减少,圆形细胞与单/双极细胞均增多,前导突起变长.结论 胚胎期急性VPA暴露不影响胎鼠的皮质神经元增殖,但长期(10 d) VPA暴露却能导致神经前体细胞增殖能力显著降低,并导致胎鼠大脑皮质内神经元形态异常.     

快速冷冻和解冻对水牛精子酶类泄漏的影响

在冷冻解冻期间精子活力和存活率的下降已成为一个普遍问题,为了使这种损失尽可能地减少。曾进行过多次尝试(Bandopad-hyay等,1983)。在低温贮存期间,保持精子内酶的完整是必需的,而细胞内酶泄漏到周围的培养基中,与精子的低温损害直接相关。鉴此,进行了有关快速冷冻和解冻期间透明质酸酶和丙酮酸盐激酶泄漏的研究,以此作为衡量低温损害精子的标准。