弥漫性大B细胞淋巴瘤化疗后沙利度胺维持治疗疗效

目的比较中高危、高危弥漫性大B细胞淋巴瘤（IPI≥3）化疗后加与不加口服沙利度胺维持治疗的疗效。方法经病理学证实的弥漫性大B细胞淋巴瘤行CHOPE21或CHOPl4方案化疗6周期后完全缓解（CR）40例,随机分为口服沙利度胺维持组（n：20）与观察组（n=20）。主要观察终点为无进展生存（PFS）,次要观察终点为总生存（OS）和不良反应。结果维持组中位PFS为10．6个月,观察组为6．7个月（P=0．036）。维持组1、2、3年0s分别为80％、55％、45％,观察组分别为75％、45％、40％（P分别为0．705、0．527、0．749）。维持组仅有轻微血液学毒性。结论中高危、高危弥漫性大B细胞淋巴瘤（IPI≥3）化疗后予口服沙利度胺维持治疗可以延长PFS,但不能提高生存率,能否改善长期生存有待临床进一步加以研究。     

七氟烷通过P~(70S6K)/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达

目的探讨七氟烷(Sevoflurane)诱导神经元血红素氧合酶-1(HO-1)基因表达的信号转导通路。方法将培养7d的新生大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、2%七氟烷组(S1组)、4%七氟烷组(S2组)和4%七氟烷+Rapamycin组(R组)。C组神经元按正常培养方法培养。S1组和S2组神经元分别给予2%或4%七氟烷处理60min后继续培养24h。R组在神经元给予4%七氟烷处理同时在培养液中加入Rapamycin使其终浓度为10nmol.L-1后同S2组处理。收集神经元进行HO-1mRNA和P70S6K、Nrf2、AP-1和HO-1蛋白表达的检测。结果S1组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsC组,P>0.05)。S2组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS1组,P>0.05)。R组P70S6K和Nrf2蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS2组,P>0.05)。结论Sevoflurane通过P70S6K/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达。     

AKT/TSC2/p70S6K signaling pathway is involved in quinocetone-induced death-promoting autophagy in HepG2 cells

Quinocetone (QCT, 3-methyl-2-quinoxalin benzenevinylketo-1, 4-dioxide) is widely used as a veterinary drug and animal feed additive in China. Although it promotes growth and improves feed efficiency, QCT’s in vitro and in vivo toxicities remain uncertain. This study was conducted to explore the mechanism of QCT-induced autophagy in HepG2 cells. By the results obtained from monodansylcadaverine (MDC) staining, ultrastructural observation by transmission electron microscopy (TEM), as well as Western blotting analysis for LC3, p62, and Beclin-1, it was demonstrated that QCT induced autophagy in HepG2 cells. Furthermore, PI3K/AKT inhibitor significantly enhanced QCT-induced autophagy, while TSC2 knockdown attenuated this process. In addition, inhibition of autophagy by pharmacological approach remarkably increased the viability of QCT-treated cells detected by MTT assay, suggesting that QCT-triggered autophagy may play as a promotion mechanism for cell death. Meanwhile, apoptosis was markedly downregulated after autophagy blockage, and evaluated by flow cytometry and Western blotting analysis for caspase-3 cleavage. Consequently, these results suggested that QCT-induced autophagy was mediated by AKT/TSC2/p70S6K signaling pathway, and inhibition of autophagy promoted QCT-treated cell survival by attenuating apoptosis.     

CARD11与Bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达与意义

目的观察弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma）中CARD11与Bcl-2的表达情况,探讨它们在弥漫性大B细胞淋巴瘤中不同免疫分型中的表达及相互关系。方法选取弥漫性大B细胞淋巴瘤60例和反应性增生的淋巴结20例,采用组织芯片技术和免疫组织化学方法对弥漫性大B细胞淋巴瘤进行免疫分型并检测弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫学类型GCB和ABC型中CARD11和Bcl-2表达情况。结果 （1）免疫分型60例弥漫性大B细胞淋巴瘤中免疫类型GCB25例,ABC35例。（2）60例弥漫性大B细胞淋巴瘤中免疫类型中CARD11与Bcl-2的表达情况：免疫类型GCB中CARD11的阳性率为24.0%,ABC中CARD11的阳性率为57.4%,两者之间P〈0.05;GCB中Bcl-2的阳性率为32.0%,ABC中Bcl-2的阳性率为62.9%,两者之间P〈0.05。结论①CARD11、NF-κB高表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤的ABC类型相关。     

淀粉样β蛋白片段25~35下调大鼠海马PI3K/Akt/p70S6K信号传导通路(英文)

目的探讨阿尔茨海默病(AD)的淀粉样β蛋白(Aβ)的沉积是否损害神经细胞存活的信号传导通路。方法实验分为生理盐水对照组;Aβ25-35组;Aβ25-35+布洛芬组;Aβ25-35+布洛芬+LY294002组;Aβ25-35+LY294002组。大鼠分别灌胃给予布洛芬7.5或15 mg.kg-1,每日1次,连续3周后,左侧脑室内注射Aβ25-35(10 μL, 1 mmol.L-1),之后继续灌胃给予布洛芬1周。PI3K特异性阻断剂LY294002 (5 μL, 4 mmol.L-1)在注射Aβ25 -35前1 h左侧脑室内注射。注射Aβ25-35后1周,取海马CA1区,Western免疫印迹法观察P53,Bax, FasL, Bcl-2, Akt和p70S6K的蛋白表达水平。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化,RT-PCR方法观察p70s6k mRNA表达水平。结果脑室内注射Aβ25-35可引起大鼠海马CA1区磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达明显降低,分别从对照组1.32±0.14和0.769±0.028下降到0.69±0.08和0.479±0.032。同时,海马CA1区促凋亡蛋白P53, Bax和FasL表达及caspase 3活性明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。预先注射LY294002可使caspase 3活性较单独注射Aβ25-35组进一步增加。给Aβ25-35前后连续给予布洛芬4周可明显对抗Aβ25-35引起的上述变化。LY294002可明显减弱布洛芬上调磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达的作用。结论 Aβ25-35引起抗凋亡通路PI3K/Akt/p70S6K下调可能参与AD的神经元损伤。布洛芬具有较好的对抗作用,这可能与上调PI3K/Akt/p70S6K通路中的一些蛋白有关。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中bcl-2蛋白表达及其与基因异常的相关性

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中bcl-2蛋白表达情况及其与bcl-2基因易位和扩增的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测59例DLBCL中bcl-2蛋白表达情况,并应用IgH/bcl-2双色双融合探针荧光原位杂交(FISH)检测bcl-2基因的易位和扩增。结果 59例DLBCL中bcl-2蛋白的表达率为67.8%(40/59),bcl-2基因易位和扩增的发生率分别为1.7%(1/59)和22.0%(13/59),bcl-2基因异常(易位或扩增)的总检出率为23.7%(14/59),bcl-2蛋白表达与基因异常之间无相关性(P=1.000)。结论 bcl-2基因可能在DLBCL的发病机制中起重要作用,bcl-2蛋白表达的调控机制有待进一步阐明。     

利妥昔单抗联合沙利度胺维持治疗老年弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效评价

目的 评价利妥昔单抗联合沙利度胺维持治疗老年弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的有效性及安全性.方法 回顾性分析甘肃省武威肿瘤医院血液科使用R-CHOP方案化疗后完全缓解的≥60岁的DLBCL患者86例,按其治疗方案分为2组.对照组患者在完全缓解后单用利妥昔单抗...     

弥漫大B细胞淋巴瘤骨髓侵犯形态学及免疫表型特点分析

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）骨髓侵犯形态学及免疫表型特点,为临床DLBCL侵犯骨髓的准确诊断提供一定的科学依据。方法 收集2014年6月—2019年6月我院收治的59例DLBCL患者的骨髓组织和外周血,分析DLBCL患者的骨髓细胞形态学、骨髓病理学、流式细胞学、荧光原位免疫杂交及其他相关检测的结果与临床特征。结果 59例发生骨髓侵犯的DLBCL患者多数表现为白细胞增高、贫血、血小板减少,有43例（72.88%）外周血中可见数量不等的瘤细胞。59例患者骨髓涂片中瘤细胞占有核细胞比例≥10％的有31例（52.54%）。瘤细胞侵犯骨髓方式以弥漫性增生为主,造血组织明显减少或缺乏。免疫组化染色及流式细胞学检查示,淋巴瘤细胞 CD20、CD19、CD79b及 cCD79a均呈阳性表达,部分患者表达 HLA-DR、CD22、sIgM、CD43、CD10、FMC7及 CD123,均不表达CD38、TdT、CD103、CD25、CD3、CD2、MPO、CD33、CD13、CD7及CD56。12例患者进行FISH检测均未见C-myc基因重排。结论 骨髓形态学、病理学并结合免疫表型检测是DLBCL患者准确诊断的重要依据。     

石蜡切片荧光原位杂交检测弥漫性大B细胞淋巴瘤BCL6基因异常

目的 建立石蜡包埋的淋巴瘤组织切片荧光原位杂交(FISH)技术平台,探讨其在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)诊断中的价值.方法 应用家用高压锅和水浴变性法在淋巴瘤石蜡切片上行FISH分析,BCL6双色断裂点分离探针FISH检测58例石蜡包埋DLBCL病例中BCL6基因易位和扩增.结果 通过优化实验条件,成功地建立了淋...     

信迪利单抗联合DA-EPOCH-R方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的效果及安全性评价

目的 评价信迪利单抗联合环磷酰胺＋表柔比星＋依托泊苷＋长春新碱＋泼尼松、利妥昔单抗无放射治疗（DA-EPOCH-R）方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的效果及安全性。方法 回顾性选取2019年3月—2022年2月洛阳市第三人民医院收治的经一线治疗方案治疗后疾病复发或进展的DLBCL患者103例,根据治疗方案分为试验组54例、对照组49例。对照组给予DA-EPOCH-R方案治疗,试验组在对照组基础上加用信迪利单抗治疗。比较两组治疗前后免疫相关指标、血管内皮生长因子（VEGF）、血清胸苷激酶1（TK1）、白细胞介素-2（IL-2）水平,统计疗效和不良反应。结果 试验组客观缓解率（ORR）达72.22%,高于对照组的53.06%,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后,试验组Treg细胞占比及VEGF、TK1水平低于本组治疗前（P<0.05）,Th17细胞占比、IL-2水平高于本组治疗前（P<0.05）;对照组NK细胞占比及VEGF、TK1水平低于本组治疗前（P<0.05）,Treg细胞占比及IL-2水平高于本组治疗前（P<0.05）;两组CD3⁺T、CD3⁺CD4⁺T、CD3⁺CD8⁺T与治疗前比较无统计学意义（P>0.05）。试验组治疗后IL-2水平、NK细胞占比、Th17细胞占比较对照组更高（P<0.05）,Treg细胞占比及VEGF、TK1水平较对照组更低（P<0.05）。试验组和对照组败血症、皮疹、肺部感染、黏膜炎、腹泻、恶心呕吐、脱发、肾功能损伤、肝功能损伤、血小板减少、白细胞减少、贫血、发热、甲状腺功能减退等不良反应方面比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 信迪利单抗联合DA-EPOCH-R方案治疗DLBCL可改善患者免疫功能,降低VEGF、TK1的表达,加强疗效,安全性良好。     

七氟烷激活PI_3-K/Akt/P~(70S6K)信号转导通路抑制缺血/再灌注损伤神经元的凋亡

目的研究七氟烷对神经元缺血/再灌注损伤后PI3-K/Akt/P70S6K信号转导通路的影响,探讨七氟烷脑保护机制。方法将96孔和6孔培养板上培养7d的海马神经元随机分为6组:正常培养组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane组(Sevo组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10μmol.L-1LY294002(PI3-K拮抗剂)组(LY组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10μmol.L-1Tric irib in(Akt拮抗剂)组(Tri组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10 nmol.L-1Rapamyc in(P70S6K拮抗剂)组(Rap组)。C组神经元按正常培养方法培养。Sevo组在神经元缺糖缺氧的同时接受2%Sevoflurane麻醉。LY组、Tri组和Rap组在神经元进行缺糖同时分别加入LY294002、Tric irib in或Rapamyc in使其终浓度分别为10μmol.L-1、10μmol.L-1或10 nmol.L-1后同Sevo组处理。96孔培养板的神经元进行细胞存活力的检测。6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡和PI3-K、Akt和P70S6K蛋白表达的检测。结果Sevo组PI3K、Akt、P70S6K蛋白表达增加,神经元存活率增加、神经元凋亡率降低(vsI/R组,P<0.01)。LY组PI3K、Akt和P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.05或P<0.01);Tri组Akt和P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.05或P<0.01);Rap组P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.01)。结论Sevoflurane激活了PI3-K/Akt/P70S6K信号通路,在海马神经元缺血/再灌注损伤过程中抑制了神经元凋亡,保护了神经元。     

原发性胆囊癌组织中mTOR/p70S6K信号通路的表达及其临床病理学意义

目的探讨mTOR/p70S6K信号通路在原发性胆囊癌组织中的表达和临床意义。方法随机选取原发性胆囊癌患者86例,慢性胆囊炎患者15例,采用SABC免疫组化方法,检测胆囊癌组织和慢性胆囊炎症组织中mTOR及p70S6K蛋白的表达情况。并分析其与原发性胆囊癌组织临床病理学特征之间的关系。结果mTOR及p70S6K蛋白在原发性胆囊癌组织中的阳性表达率分别为77.91%（67/86）及80.23%（69/86）,显著高于两者在慢性胆囊炎组织中的阳性表达率。两者在原发性胆囊癌组织中的表达呈正相关（r=0.791,P〈0.01）。mTOR及p70S6K蛋白的阳性表达率与胆囊癌组织的分化程度、Nevin分期和淋巴结转移密切相关（均P〈0.05）,而与肿瘤直径、患者性别无明显关系。结论mTOR/p70S6K信号通路的特异性激活可能在原发性胆囊癌的发生、浸润、转移中起重要作用。     

七氟烷后处理对大鼠缺血/再灌注损伤心功能和ERK1/2表达的影响

目的研究七氟烷后处理对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)活性的影响,探讨其对大鼠离体心脏缺血/再灌注保护作用的机制。方法 (1)64只SD大鼠,随机分为8组(n=8):假手术组(Sham),缺血/再灌注组(Control),缺血后处理组(Post),七氟烷后处理组(Sevo),二甲基亚砜(PD98059溶剂)后处理组(DMSO),PD98059(ERK1/2抑制剂)后处理组(PD),缺血+PD98059后处理组(Post+PD),七氟烷+PD98059后处理组(Sevo+PD)。采用Langendorff离体心脏灌注模型,记录平衡灌注末,再灌注30、60、90 min心功能指标,灌注结束时,TTC法计算心肌梗死面积百分比。(2)48只SD大鼠,分组同上(n=6),复灌15 min,Westernblot法半定量测定心室胞质磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及其下游靶点70 000核糖体S6蛋白激酶磷酸化(p-p70S6K)表达水平。结果平衡灌注末各组间心功能指标(基础值)差异无统计学意义(P>0.05)。Sevo组和Post组可改善缺血/再灌注心脏的各项心功能指标和减少心肌梗死面积(与Control组比较,P均<0.05)。复灌15 min时,Sevo组和Post组p-ERK1/2、p-p70S6K的表达高于Control组(P<0.05)。PD98059完全拮抗了七氟烷诱导的p-ERK1/2的表达同时抵消了其心肌保护效果。结论七氟烷后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤有明显的保护作用,其保护强度与缺血后处理相当,机制可能与心肌细胞p-ERK1/2活性的增加有关。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤IL-6和VEGF表达水平与化疗耐药的相关性

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者血清白细胞介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与化疗耐药之间的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定16例化疗耐药患者(化疗耐药组)、20例化疗敏感患者(化疗敏感组)治疗前后和15例健康者(对照组)血清IL-6、VEGF水平。结果化疗耐药组患者血清IL-6、VEGF初治前表达水平明显高于化疗敏感组患者初治前和对照组(P<0.05),治疗缓解后明显低于治疗前(P<0.05)。DLBCL复发耐药时,患者血清中的IL-6、VEGF又高于缓解时水平(P<0.05)。化疗耐药组Ⅲ～Ⅳ期患者治疗前、复发耐药时IL-6、VEGF水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。结论 DLBCL患者血清IL-6、VEGF表达水平的变化,提示其可以作为观察DLBCL病情变化的检测指标,可能与DLBCL细胞耐药有关。     

以截瘫为临床表现的弥漫性大B细胞淋巴瘤合并甲状腺肿瘤一例

弥漫性大B细胞淋巴瘤 （DLBCL） 是非霍奇金淋巴瘤 （NHL） 中最常见的一个亚型, 发病年龄范围宽, 在临床特征、 侵袭部位、 组织形态学、 分子遗传学、 免疫表型等方面均表现出明显的异质性。此外, 随着恶性肿瘤诊治水平的提高, 同一患者存在多原发性恶性肿瘤 （MPMT） 的报道呈上升趋势。本文报告我科收治的以截瘫为临床表现的 DLBCL合并甲状腺肿瘤1例。     

苦参碱调控mTOR/p70S6K信号通路对大鼠心肌肥厚的保护作用

目的:研究苦参碱对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对mTOR/p70S6K信号通路的调控。方法:大鼠皮下注射异丙肾上腺素建立慢性病理性心肌肥厚模型,将大鼠随机分为正常对照组、异丙肾上腺素(ISO)模型组、苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1·d^-1)+ISO组和单用苦参碱(200 mg·kg^-1·d^-1)组。HE染色观察心肌病理变化;Western blot检测左心室组织中mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,ISO模型组大鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱,可见不同程度的纤维化、间质水肿和炎细胞浸润;苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1·d^-1)可减轻大鼠心肌细胞肥大、纤维化、间质水肿和炎细胞浸润等ISO致心肌组织病理学结构的异常改变。与正常对照组相比,ISO模型组心肌组织内p-mTOR、p-p70S6K和p70S6K的表达显著增加;苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1)可逆转ISO致大鼠心肌组织中p70S6K表达的上调,同时下调mTOR Ser2448和p70S6K Thr389位点的磷酸化水平,且呈剂量依赖性;mTOR表达在各组之间均无差异;单用苦参碱组与正常对照组比较无显著性差异。结论:苦参碱具有抑制ISO致大鼠心肌肥厚的作用,其机制与抑制mTOR/p70S6K信号通路有关。     

淀粉样β蛋白片段25～35下调大鼠海马PI3K/Akt/p70S6K信号传导通路

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）的淀粉样β蛋白(Aβ)的沉积是否损害神经细胞存活的信号传导通路。方法 实验分为生理盐水对照组；Aβ_25-35组；Aβ_25-35 +布洛芬组；Aβ_25-35+布洛芬+LY294002组；Aβ_25-35+LY294002组。大鼠分别灌胃给予布洛芬7.5或15 mg·kg^-1，每日1次，连续3周后，左侧脑室内注射Aβ_25-35（10 μL, 1 mmol·L^-1，之后继续灌胃给予布洛芬1周。PI3K特异性阻断剂LY294002（5 μL, 4 mmol·L^-1在注射Aβ_25-35前1 h左侧脑室内注射。注射Aβ_25-35后1周，取海马CA1区，Western免疫印迹法观察P53, Bax, FasL, Bcl-2, Akt和p70S6K的蛋白表达水平。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化，RT-PCR方法观察p70s6k mRNA表达水平。结果 脑室内注射Aβ_25-35可引起大鼠海马CA1区磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达明显降低，分别从对照组1.32±0.14和0.769±0.028下降到0.69±0.08和0.479±0.032。同时,海马CA1区促凋亡蛋白P53, Bax和FasL表达及caspase 3活性明显增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。预先注射LY294002可使caspase 3活性较单独注射Aβ_25-35组进一步增加。给Aβ_25-35前后连续给予布洛芬4周可明显对抗Aβ_25-35引起的上述变化。LY294002可明显减弱布洛芬上调磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达的作用。结论 Aβ_25-35引起抗凋亡通路PI3K/Akt/p70S6K下调可能参与AD的神经元损伤。布洛芬具有较好的对抗作用，这可能与上调PI3K/Akt/p70S6K通路中的一些蛋白有关。     

肝硬化合并以上消化道大出血为首发症状的胃弥漫大B细胞淋巴瘤一例

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中发病率最高的一类弥漫生长的B细胞淋巴瘤。该病以进行性淋巴结肿大为最主要的临床表现,可结外发病,临床表现多样性,易被误诊。本文报告为以上消化道出血为首发症状,合并肝硬化,内镜表现为胃溃疡的胃DLBCL患者1例。期望通过对本病例分析以提高对DLBCL的认识和诊治水平。     

Tangeretin and its metabolite 4'-hydroxytetramethoxyflavone attenuate EGF-stimulated cell cycle progression in hepatocytes; role of inhibition at the level of mTOR/p70S6K

BACKGROUND AND PURPOSE

The mechanisms by which the dietary compound tangeretin has anticancer effects may include acting as a prodrug, forming an antiproliferative product in cancer cells. Here we show that tangeretin also inhibits cell cycle progression in hepatocytes and investigate the role of its primary metabolite 4′-hydroxy-5,6,7,8-tetramethoxyflavone (4′-OH-TMF) in this effect.

EXPERIMENTAL APPROACH

We used epidermal growth factor (EGF)-stimulated rat hepatocytes, with [³H]-thymidine incorporation into DNA as an index of progression to S-phase of the cell cycle, and Western blots for phospho-proteins involved in the cell signalling cascade.

KEY RESULTS

Incubation of tangeretin with microsomes expressing CYP1A, or with hepatocytes, generated a primary product we identified as 4′-OH-TMF. Low micromolar concentrations of tangeretin or 4′-OH-TMF gave a concentration-dependent inhibition of EGF-stimulated progression to S-phase while having little effect on cell viability. To determine whether time for conversion of tangeretin to an active metabolite would enhance the inhibitory effect we used long pre-incubations; this reduced the inhibitory effect, in parallel with a reduction in the concentration of tangeretin. The EGF-stimulation of hepatocyte cell cycle progression requires signalling through Akt/mTOR/p70S6K kinase cascades. The tangeretin metabolite 4′-OH-TMF selectively inhibited S6K phosphorylation in the absence of significant inhibition of upstream Akt activity, suggesting an effect at the level of mTOR.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

Tangeretin and 4′-OH-TMF both inhibit cell cycle progression in primary hepatocytes. The inhibition of p70S6K phosphorylation by 4′-OH-TMF raises the possibility that inhibition of the mTOR pathway may contribute to the anticancer influence of a flavonoid-rich diet.