重庆地区浆细胞病遗传学改变及其临床意义

目的:探讨间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测重庆地区浆细胞病患者遗传学变化及其临床意义。方法:采用组合探针(D13S319/RB1、CCND1/Ig H、p53、CKS1B/CDKN2C)对50例浆细胞病患者骨髓进行FISH检测,分析其分子遗传学异常,同时行常规染色体检查,并比较其与临床指标的相关性。结果:50例患者采用FISH检测,有34例(68%)检测出分子遗传学异常,24例(48%)检出1种异常,10例(20%)同时检测出2种及以上异常。其异常比例从高到低分别为:Ig H基因异位(36%),13号染色体缺失(24%)和p53基因丢失(20%);常规染色体检查只有6例患者(12%)发现染色体结构异常。遗传学异常检出与患者性别、年龄、临床类型及分期无关。结论:FISH较常规染色体检查更易发现异常;Ig H基因异位、13q14缺失及p53基因丢失在重庆地区浆细胞病中发生率较高,p53基因丢失及13q14缺失与近期预后无明确关系。     

荧光原位杂交技术应用于多发性骨髓瘤分子细胞遗传学异常检测的研究进展

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常积聚为特征的肿瘤,临床经过及预后个体差异较大具有明显的异质性,生存期从数月至数年不等。荧光原位杂交技术（FISH）的不断发展,大大提高了MM分子细胞遗传学异常检出率,为其预后提供了精确的检测平台,也为指导个体化治疗奠定了基础。     

应用FISH及细胞遗传学技术检测101例浆细胞疾病的基因异常

目的：探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)、意义未明单克隆免疫球蛋白增多症(monoclonal gammopathy of undetermined significance,MGUS)及反应性浆细胞增多症(reactive plasmacytosis,RP)的几种常见的异常基因,提高对几种常见浆细胞疾病的诊断及鉴别诊断水平。 方法：回顾性分析2012年8月至2015年8月在中南大学湘雅医院初诊的61例MM、20例MGUS及20例RP患者的临床表现、影像学、实验室检查及FISH检测结果。结果： FISH检测61例MM患者中50例患者出现基因异常,FISH阳性检出率为81.9%,其中1q21扩增19例(31.1%)、D13S319缺失18例(29.5%)、RB1缺失10例(16.4%)、IGH易位10例(16.4%)、p53缺失7例(11.4%),出现两种或多种基因异常的阳性率为12例(19.8%);20例MGUS中FISH阳性检出率为30%,其中1q21扩增4例(20%)、IGH易位2例(10%),未发现两种或多种基因异常;而RP患者仅1例出现D13S319缺失,阳性率仅为5%。三组两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：MM患者中FISH的阳性检出率为81.9%,明显高于MGUS及RP的患者,应用FISH可检测MM中的多种异常基因,对MM,MGUS及RP的鉴别诊断、预后判断有重要的临床参考 价值。     

荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常及其意义

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)常见染色体异常.方法 结合1q21/RB1、D13S319/p53、IGH一组DNA特异性探针和荧光原位杂交(FISH)技术检测MM患者13q14缺失、+1、p53缺失以及IgH基因重排的发生率.结果22例MM患者中,3q14缺失7例(31.8%),其中D13S319、RB1探针同时检出4例13号染色体异常;IgH基因重排6例(27.2%);+113例(59.1%);p53基因缺失4例(18.1%).不同免疫球蛋白类型的D13S319缺失率差异有统计学意义(P<0.05).结论 13q14缺失、IgH基因重排及+1在MM中发生率较高,ISH技术检测分子遗传学异常敏感度高,应作为MM的常规检查方法 .     

循环浆细胞在多发性骨髓瘤中的研究进展

在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中,骨髓瘤细胞不仅存在于骨髓内,其还可进入外周血中循环成为循环浆细胞（circulating plasma cell,CPC）。多项研究表明,CPC可预示MM患者的不良结局,CPC数量越多,患者的预后越差。本文对CPC在MM中的研究进展进行综述,以期为有效利用CPC诊治MM提供新思路。     

多发性骨髓瘤1号和11号染色体异常检测及分析?

目的：探讨国内初治及复发难治的多发性骨髓瘤( MM)患者1号、11号染色体异常及其与临床血清学指标与疗效的关系。方法对43例MM患者进行1q21、CCND1、ATM(11q22.22)特异序列探针FISH检测,同时采用常规细胞遗传学方法( CC, R 显带)分析染色体核型异常。结果43例 MM 患者 FISH 检测结果,41．86%(18/43)检测出染色体异常,其发生率由高到低依次为1q21扩增14例(32．6%),ATM 异常10例(23．3%),CCND1扩增4例(9．3%)。常规染色体核型成功分析40例患者,8例核型异常(20%),核型异常患者(100%)均伴有≥1种FISH探针异常,涉及11号异常5例62．5%,1号异常5例62．5%。疗效观察中1q21扩增14例,其中CR/nCR患者4例,PR患者4例,MR患者1例,PD患者4例,未治出院1例。 CCND1扩增异常4例,其中CR患者1例,PD患者2例,死亡1例。 ATM缺失异常3例,CR患者2例,PD患者1例。结论对于初治及复发难治MM患者,FISH检测异常率高于传统核型分析技术,核型为超二倍体及11号染色体三体MM患者预后可能较好,化疗完全缓解率较高;伴有1q21扩增、CCND1扩增且核型异常MM患者预后可能较差。     

多发性骨髓瘤14例间期荧光原位杂交分析

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种多发于中老年人的浆细胞恶性克隆性疾病,病程差异较大,几乎所有的患者均存在染色体异常,以与14q32相关的易位和13q缺失最常见[1].由于MM细胞比例低、体外有丝分裂指数低及中期分裂相少等因素,常规细胞遗传学方法染色体异常检出率低[1].间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术不需要中期分裂相,利用位点特异性探针可检测到常规细胞遗传学方法不能发现的间期细胞的异常.     

荧光原位杂交技术在性染色体异常诊断中的应用

用ＸＹ染色体α－卫星ＤＮＡ探针，对原Ｇ带分析性染色体异常的２０例患者外周血染色体及间期细胞进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）。结果：原Ｇ带核型４５，Ｘ，４５，Ｘ／４６，ＸＸ／４７，ＸＸＸ，４５，Ｘ／４６，ＸＹ，４７，ＸＸＹ，４５，Ｘ／４６，ＸＸ与ＦＩＳＨ结果一致，原Ｇ带判断不明的４５，Ｘ／４６，Ｘ，ｒ（？），４６，Ｘ，ｒ（？）经ＦＩＳＨ鉴别其真正核型是４５，Ｘ／４６，Ｘ，ｒ（ｘ），４６，Ｘ，ｒ（Ｘ），证     

肾意义的单克隆免疫球蛋白血症病例报道并文献复习

肾意义的单克隆免疫球蛋白血症（MGRS）是由低级别淋巴浆细胞增殖性疾病分泌的单克隆免疫球蛋白（Ig）介导的肾损害,为疾病早期阶段,尚不足以诊断为多发性骨髓瘤（MM）或淋巴瘤。本文分析了2018年3月-2020年2月首都医科大学附属北京朝阳医院西院血液科收治的1例MM合并肾损害和3例不同类型的MGRS患者的临床特点及诊治过程,对其肾损害进行了鉴别诊断,并结合病例和文献进行了系统分析。建议对表达浆细胞克隆或B淋巴细胞克隆的患者分别采用硼替佐米或利妥昔单抗为基础的治疗方案,提示临床医生对存在单克隆Ig和无法解释的肾脏疾病患者,需早期进行肾活检以确诊MGRS,遵循国际肾病和单克隆免疫球蛋白病研究组（IKMG）提出的诊断共识和诊断流程,进一步明确MGRS的诊断分型,有利于早期进行克隆指导的靶向治疗,改善患者的肾功能和预后。     

慢性淋巴细胞白血病的遗传学异常及其临床意义

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种B淋巴细胞肿瘤,免疫分型通常表达CD5、CD19、CD23,SmIg弱表达,CD22弱表达,不表达CD79b和FMCT。其临床表现和转归具有明显的异质性,一些患者生存期可长达30年,早期没有任何症状,数年之后才出现淋巴结、肝脾或其他器官的受累。而有些患者在短短几个月内即出现疾病进展,甚至转化为侵袭性淋巴瘤和白血病,     

优化的预包被式多探针荧光原位杂交技术可提高白血病细胞遗传学异常的检测效率

目的探讨对预包被式多探针荧光原位杂交(FISH)技术进行优化在检测白血病细胞遗传学异常的意义。方法 141例初诊为ALL或AML/MDS的患者骨髓标本,行预优化的包被式多探针FISH流程检测(在原始流程的基础上增加了调整细胞密度、蛋白酶消化步骤),其中35例行常规流程检测,对比优化前后对白血病细胞遗传学异常的检测成功率与阳性位点检出率。结果对多探针FISH实验流程进行优化后,ALL的检测成功率由85.3%提高到100%,阳性位点检出率由5.1%提高到8.6%;AML/MDS的检测成功率由67.4%提高到99.8%,阳性位点检出率由3.5%提高到6.0%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论通过对常规预包被式多探针FISH系统检测流程进行优化,显著提高了白血病细胞遗传学异常的检测效率,增强了该技术的临床实用性。     

Comparison of fluorescence <Emphasis Type="Italic">in situ</Emphasis> hybridization and immunohistochemistry for assessment of HER-2 status in breast cancer patients

The accurate assessment ofa proto-oncogene, human epidermal growth factor receptor-2 gene （HER-2）, is extremely important for the therapy and prognosis of breast cancer. Currently, immunohistochemistry （IHC） is the method widely used for the detection of HER-2 protein. Fluorescence in situ hybridization （FISH） has been suggested to be a golden standard assay for HER-2 amplification. This study examined the expression and amplification of HER-2 in paraffin-embedded sections of breast cancer tissues, and compared the two methods on the measurement of HER-2 status. HER-2 gene and protein were determined in breast cancer samples from 52 Chinese women by FISH and IHC respectively. The findings indicated that the HER-2 gene amplification was found in 18 cases （34.6%） by FISH and the HER-2 protein over-expression （score 3＋） in 15 cases （28.8%） by IHC. hnmunohistochemically, 28.6% of the cases scored as 2＋ and 93.3% of the cases scored as 3＋ were HER-2-positive by FISH. There was a significant correlation between the HER-2 gene amplification and HER-2 protein over-expression in breast cancer （P〈0.005）. No correlation was noted between the HER-2 gene amplification and any of the clinicopathological parameters examined, including age, menopausal status, menarche age, tumor size, histological tumor type, histological grade, lymph node status, and the expression of ER and PR. It was concluded that the detection of HER-2 gene amplification in breast cancer by FISH is valuable and can compare with HER-2 protein detection by IHC.     

菘蓝rDNA及端粒多色荧光原位杂交分析

目的 对菘蓝45S rDNA、5S rDNA和端粒进行物理定位,并分析其核型。方法 使用多色荧光原位杂交技术（FISH）进行定位。结果 菘蓝基因组有一对45S rDNA位点位于4号染色体,一对5S rDNA位点位于5号染色体,14对端粒信号位于染色体两端;核型公式为2n＝2x＝14＝10m（2SAT）＋4sm,属2A核型。结论 为菘蓝核型分析、分子细胞遗传图谱构建提供了稳定、有效的细胞学标记。     

玉屏风滴丸质量控制研究

目的 建立玉屏风滴丸的质量控制方法。方法 采用TLC法对防风、白术进行定性鉴别,采用高效液相色谱-蒸发光散射器（HPLC-ELSD）法测定玉屏风滴丸中黄芪甲苷的量及其溶出度。结果 定性鉴别分离度良好,专属性强;定量测定黄芪甲苷进样量在1.184～8.288 μg呈线性关系（r＝0.999 4）,平均加样回收率为98.1%,RSD为1.02%,且不同批次玉屏风滴丸中黄芪甲苷的量及其溶出度无明显差异。结论 所建立方法简便准确,重复性好,适用于玉屏风滴丸的质量控制。     

灵芝醇提生物活性物质的指纹图谱分析及质控评价

目的 采用HPLC法建立灵芝醇提生物活性物质指纹图谱的分析方法，通过中药指纹图谱相似度软件，对不同产地、不同种属、不同栽培方式的灵芝样品中所含生物活性物质的种类及数量进行综合评价。方法 采用Symmetry C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）反相柱，以1%醋酸水溶液-乙腈为流动相，体积流量1.0 mL/min，在250 nm波长下，进行二元梯度洗脱。结果 灵芝醇提生物活性物质的指纹图谱可达40多个指纹峰和15个共有峰，指纹图谱分离效果理想。结论 所建立的色谱法具有良好的精密度、重现性和稳定性，并能有效地对灵芝品质进行质量评价。     

延胡索质量控制的研究进展

延胡索行气止痛,主要有效成分为生物碱类,作为一种重要的中药在中医药的应用历史已超过数百年。由于延胡索国内外市场需求量持续加大,加之其生长环境的特殊性,产量一直不多,价格大幅上涨,导致伪劣混杂,加强对延胡索的质量控制对于保证临床疗效具有十分重要的意义。综述了近年来延胡索药材鉴别与质量控制方法的研究概况,为保证临床合理用药提供一定的依据。     

Comparison of polymerase chain reaction and catalyzed signal amplification in situ hybridization methods for human papillomavirus detection in paraffin-embedded cervical preneoplastic and neoplastic lesions

BACKGROUND: Two molecular methods for HPV genotyping in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue were evaluated: in house polymerase chain reaction assay (PCR) with consensus and type-specific primers and a novel procedure of in situ hybridization-a catalyzed signal amplification system (CSA-ISH, Genpoint, DAKO, Glostrup, Denmark). The number of HPV positive cases and detected viral types were compared in cervical biopsies and cone specimens according to histopathological diagnosis. Primer efficiency in detecting various types of HPV by PCR method was evaluated. METHODS: DNA samples (101) were used as a template to amplify with three pairs of consensus (MY09/11, GP5+/6 +, CPI/IIG) and four type-specific HPV primers (HPV-6/11, 18, 16 and 33). The according histological tissue sections were analyzed with CSA-ISH method, using commercial HPV biotinylated probes HPV-6/11, 16/18 and 31/33/51. RESULTS: The degree of concordance for PCR and CSA-ISH was 64.4%. In 63 of 101 samples (62.4%), HPV was detected by PCR, while only 35 (34.7%) were positive using CSA-ISH. CSA-ISH found lower percentages for all HPV types, except HPV-6/11. A lower percentage of positive results in all high-grade lesions was detected by CSA-ISH. Multiple infections were detected by PCR in only one sample and in three samples by CSA-ISH. Detection with My09/11 primers followed by Gp5+/6+ primers, in nested reaction, gave the highest number of positive results: 58 of 63 (92%). None of the samples diagnosed as condylomata planum or CIN I was positive for HPV-6/11 (low risk type), which was detected exclusively in condylomata acuminatum group. CONCLUSIONS: A significantly higher number of positive samples was detected with PCR than with CSA-ISH method. CSA-ISH method should be improved, especially in detecting HPV in high-grade lesions. CSA-ISH may be more accurate in detection of multiple infections. GP5+/6+ in nested reaction after MY09/11 detected the highest number of positive results. Samples diagnosed as benign lesions positive on HPV-X must be monitored as possible candidates for progression. CIN I lesions, which were HPV negative, probably will not progress. This finding may be important in planning therapy and avoiding unnecessary treatment.     

全基因组关联研究中NanoDrop检测D260/D230值在DNA质检中的意义

目的 探讨NanoDrop检测D260/D230值对全基因组关联研究(GWAS)中DNA标本质检的意义.方法 收集1 494例强直性脊柱炎(AS)患者的血液DNA样本,分别用NanoDrop和PicoGreen检测样本浓度.第一阶段,对24例NanoDrop和PicoGreen浓度＞50 ng/μL的DNA样本行Omni中华8芯片检测,比较16例芯片成功样本与8例失败样本的D260/D280值及D260/D230值.第二阶段,选取1 122例NanoDrop和PicoGreen检测浓度均大于50 ng/μL DNA样本行管家基因GAPDH的PCR检测,并对PCR反应成功的样本行Omni中华8芯片检测.采用Mann-Whitney U检验比较PCR反应成功与失败DNA样本的D260/D230值,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价D260/D230值对PCR结果的鉴别效率.结果 第一阶段中,芯片成功与失败样本的D260/D280值差异无统计学意义(P=0.444),而D260/D230值差异有统计学意义(Z=-3.920,P＜0.001);第二阶段中,PCR成功的DNA样本基因分型检测成功率为100％,PCR成功与失败组的D260/D230值比较差异有统计学意义(Z=-5.983,P＜0.01).D260/D230值预测PCR结果的曲线下面积(AUC)为0.727;最佳诊断点的D260/D230值为0.89;特异度为0.95时的D260/D230值为2.305.结论 在进行GWAS时,浓度及D260/I2s0值均较好而D260/D230值较低的DNA样本可能含有较多杂质,需联用PCR检测以确保样本质量;D260/D230值≥2.305时,样本纯度满足GWAS芯片检测的要求,可省略PCR检测.