紫外线减毒弓形虫ZS1株滋养体免疫小鼠的体液免疫反应

探讨紫外线减毒弓形虫活疫苗在小鼠体内的免疫保护性和体液免疫反应。采用波长为２５３７Ａ的紫外灯照射弓形虫ＺＳ１株滋养体，照射距离５ｃｍ，照射时间分别为３０，６０，９０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎ。小鼠分为４组，组１为免疫组，组２为免疫攻击组，组３为感染组，组４为正常对照组。接种照射３０ｍｉｎ虫体的小鼠在接种后７－８ｄ全部死亡，其他免疫接种小鼠均正常存活，各组织未查见滋养体，假包囊或包囊。     

紫外线减毒弓形虫ZS1株滋养体在小鼠体内的细胞免疫反应

目的： 探讨紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株在小鼠体内的免疫保护性和细胞免疫反应。方法： 用波长为２５３７°Ａ 的紫外线照射弓形虫ＺＳ１株滋养体, 照射高度为５ ｃｍ , 照射时间６０ ｍ ｉｎ。小鼠于免疫后４５ ｄ 用同株滋养体攻击感染, 攻击后４ ｄ 剖杀, 与单免疫组、单感染组及正常对照组小鼠比较其脾Ｔ淋巴细胞增殖反应及其亚群的变化。结果： 小鼠接种紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株滋养体后能正常存活, 于接种后４９ ｄ 各组织未查见滋养体、包囊或假包囊; 免疫组攻击感染后存活时间较单感染组延长; 体外特异抗原刺激后, 可诱导免疫组及免疫攻击组强的脾Ｔ淋巴细胞增殖反应; 免疫攻击组ＣＤ４＋ Ｔ细胞明显下降, ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 比率倒置; 免疫组、免疫攻击组及感染组的ＮＫ细胞活性均明显增强。结论： 紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株滋养体疫苗能够诱导免疫小鼠产生一定的抗攻击感染保护力, 其中ＣＤ８＋ Ｔ细胞和ＮＫ细胞可能发挥着重要作用。     

紫外线减毒弓形虫ZS1株滋养体在小鼠体内的细胞免疫反应

目的： 探讨紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株在小鼠体内的免疫保护性和细胞免疫反应。方法： 用波长为２５３７°Ａ 的紫外线照射弓形虫ＺＳ１株滋养体, 照射高度为５ ｃｍ , 照射时间６０ ｍ ｉｎ。小鼠于免疫后４５ ｄ 用同株滋养体攻击感染, 攻击后４ ｄ 剖杀, 与单免疫组、单感染组及正常对照组小鼠比较其脾Ｔ淋巴细胞增殖反应及其亚群的变化。结果： 小鼠接种紫外线减毒弓形虫ＺＳ１ 株滋养体后能正常存活, 于接种后４９ ｄ 各组织未查见滋养体、包囊或假包囊; 免疫组攻击感染后存活时间较单感染组延长; 体外特异抗原刺激后, 可诱导免疫组及免疫攻击组强的脾Ｔ淋巴细胞增殖反应; 免疫攻击组ＣＤ４＋ Ｔ细胞明显下降, ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 比率倒置; 免疫组、免疫攻击组及感染组的ＮＫ细胞活性均明显增强。结论： 紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株滋养体疫苗能够诱导免疫小鼠产生一定的抗攻击感染保护力, 其中ＣＤ８＋ Ｔ细胞和ＮＫ细胞可能发挥着重要作用。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的体液免疫和NK细胞…

本文分别用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴３００条免疫小鼠及正常尾蚴２５条感染小鼠，对小鼠血清中的ＩｇＧ抗体水平和脾脏ＮＫ细胞活性进行了动态观察，结果显示两组血清中针对ＳＷＡＰ和ＳＥＡ的ＩｇＧ抗体水平于４～１２ｗｋ明显增高，提示体液免疫和ＮＫ细胞在宿主抗日本血吸虫的保护性免疫机制中起重要作用。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的体液免疫和NK细胞活性的动态变化

本文分别用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴３００条免疫小鼠及正常尾蚴２５条感染小鼠，对小鼠血清中的ＩｇＧ抗体水平和脾脏ＮＫ细胞活性进行了动态观察。结果显示两组血清中针对ＳＷＡＰ和ＳＥＡ的ＩｇＧ抗体水平于４～１２ｗｋ明显增高。提示体液免疫和ＮＫ细胞在宿主抗日本血吸虫的保护性免疫机制中起重要作用。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的皮肤组织细胞反应

目的 :探讨紫外线减毒血吸虫尾蚴免疫宿主的皮肤组织在抗攻击感染中的作用。方法 :88只小鼠分为 4组 ,1、2组分别以 50± 3条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫或日本血吸虫尾蚴感染 ,5wk后以 10 0 0± 10 0条尾蚴进行攻击感染 ;3、4组分别以减毒尾蚴或尾蚴 10 0 0± 10 0条免疫或初次感染。各组均于感染或接种后 6- 12 0 h定时取局部皮肤组织作病理观察。结果 :( 1)免疫攻击组皮肤组织内炎症细胞杀伤童虫现象最明显、炎症反应最强且持续时间最长 ,嗜酸性粒细胞( EOS)浸润百分数最高 ;( 2 )感染攻击组呈现相似炎症反应但程度略轻 ;( 3)免疫对照组减毒童虫在皮肤内滞留时间延长 ,至 12 0 h皮下仍可见较多童虫 ;( 4 )感染对照组皮肤内的童虫数于 72 h后明显减少 ,童虫周围轻微炎症反应。电镜观察可见免疫攻击组童虫内部结构破坏 ,虫体周围 EOS、淋巴细胞增多 ,肥大细胞颗粒溶解。结论 :提示皮肤组织的细胞免疫反应在血吸虫减毒尾蚴免疫的宿主抗攻击感染保护性免疫中起重要作用。     

紫外线减毒血吸虫尾蚴免疫兔血清IgG水平动态及被动转移至小鼠诱导保护力研

目的 本文用紫外线减毒日本血吸虫昆蚴多次免疫兔血清在不同时间被动转移至小鼠体内,并动脉观察兔血清中的IgG抗体水平。结果 显示血清在攻击感染前被动转移可激起小鼠较高的免疫保护力（51%）,说明抗体在紫外线减毒日本血吸收尾蚴多次免疫兔诱导的保护性免疫机制中可能起着重要作用。     

弓形虫紫外线弱毒虫株的培育及免疫研究

本文报道了弓形虫NT强毒虫株,经紫外线全暴露垂直连续照射,通过细胞致弱培养筛选出抗辐射变异虫株NTA-Ⅱ系。本虫对猪、兔和小鼠的毒力均明显减弱。猪安全试验116头,21头出现弱反应,占18.1％,无重病或死亡;非带虫免疫试验36头,连续测至128天,均未查到虫体的包囊。用含虫数10~5/ml弱毒虫苗每头猪接种1ml,6个月免疫力保护为100％。     

小鼠口服弓形虫DNA混合疫苗的免疫保护反应

目的 观察携带弓形虫表面抗原复合基因重组沙门氏菌经口免疫BALB/c小鼠所诱导的免疫反应。 方法 构建弓形虫主要表面抗原SAG1、SAG2复合基因真核表达质粒，将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌BRD509 (BRD509/pSAG1/SAG2)，经口服免疫BALB/c小鼠，以携带空载体质粒的减毒沙门氏菌BRD509及生理盐水（NS）组为对照，分别于每次免疫前和免疫后断尾取血，并于末次免疫后第4周取小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、天然杀伤细胞（NK细胞）活性和T细胞亚群；ELISA法测定IgG抗体及血清中的细胞因子干扰素（IFN-γ），白介素-4（IL-4）。与末次免疫后4周，每只小鼠腹腔注射0.1 ml(10⁵)弓形虫RH株速殖子攻击，观察小鼠存活时间。 结果 免疫组小鼠的IgG抗体水平明显提高，滴度为1∶100；NK细胞杀伤活性和T细胞增殖活性也明显增强，其中NK细胞杀伤活性为85%±7%，T细胞增殖指数为2.83，与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。免疫鼠攻击感染后平均存活时间比对照组长5 d。 结论 弓形虫口服DNA混合疫苗可诱导小鼠产生保护性免疫。     

弓形虫RH株ROP1抗原基因的克隆与表达

目的 在大肠杆菌中高效表达ROP1抗原。方法 采用聚合酶链反应（PCR）从弓形虫RH株cDNA文库中扩增得到编码ROP1的基因,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX-5x-3,然后在大杆菌BL21中进行表达,用亲和层析柱纯化表达产物,并用SDS－PAGE和Western blotting进行鉴定。结果 （1）在我们比较的1249个碱基中,我们得到的ROP1基因在Ossorio报道的基因的447位与448位之间有一96bp的插入片段,另有14个碱基不同,造成3个氨基酸的改变,两基因之间有91.19%的同源性,（2）得到一分子量约为70kDa的融合蛋白。结论 1,我们获得了一与Ossorio报道的基因有较大差异的rop1基因（GeneBank登录号：AF350261）（2）,ROP1基因在大肠杆菌中得到了ROP1融合蛋白的高效表达。     

弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达

目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应（PCR）从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX-5x-3,然后在大肠杆菌BL21中进行表达,用亲和层析柱纯化表达产物,并以SDS－PAGE和Western blotting进行鉴定。结果 1、在我们比较的783个碱基中,弓形虫昆山分离株与RH株之间只有两个碱基不同;2、得到－分子量为54kDa的融合蛋白,占大肠杆菌总蛋白的38％。结论 1、弓形虫昆山分离株与RH株的P30基因没有大的差异;2、在大肠杆菌中得到了P30融合蛋白的高效表达。     

宫内感染弓形虫影响儿童生长发育的观察

目的了解宫内感染弓形虫对儿童身体、智力发育的影响.方法采用配对方法,选择1990～1996年保定市级医院经脐血弓形虫检测阳性的167例婴儿为出生阳性组,同时脐血弓形虫检测阴性的160例婴儿为出生阴性组.用比内、韦氏智力量表测定其智商值(IQ值);采用全国9市城区和郊区健康儿童体格发育测量数字为标准,均数加减2个标准差为正常,分析弓形虫感染与儿童智力、身体发育的关系.观察干预措施效果.结果宫内感染弓形虫儿童智力发育明显偏低,视力发育差,而对身高、体重无明显影响,给予合理的干预措施,能使智力得到改善提高.结论宫内感染弓形虫婴儿出生后,应进行系统抗弓形虫治疗,以减轻其对脑部、眼部的损害,给予合理的干预措施,提高儿童智力水平,促进其健康发育成长.     

弓形虫RH株在实验感染小鼠体内分布的研究

以间接免疫酶法观察弓形虫感染时的急性期病变特点及虫体在主体脏器的动态分布,以期为弓形虫病的病理诊断提供依据,并对弓形虫致病机理加深理解。方法用弓形虫ＲＨ株速殖子１０＾３个经腹腔感染昆明小鼠,于感染后第２、４、６和８ｄ,取肝、脾、肺和脑进行间接免疫酶染色。     

恶性肿瘤并发弓形虫感染的研究

本文采用间接血凝试验(IHA)方法,对75例恶性肿瘤患者,62例普通病人及正常人对照组75例,进行血清弓形虫抗体的检测,以效价≥1:64为阳性。结果表明,恶性肿瘤组感染率为33.3%,普通病人组感染率为11%(P<0.01),正常对照组感染率为5%以下(P<0.001)。以恶性葡萄胎患者感染率最高,达83%;其次为白血病及消化道肿瘤,分别为40%,39%,以上三种肿瘤患者的抗体滴度几何均数(GMT)分别为48.51,63.59和38.1。7例乳腺癌和11例肺癌患者抗体均为阴性。     

弓形虫抗原的保护性研究

目的　研究弓形虫抗原对免疫宿主的保护性。方法　用SDS-PAGE大胶板电泳对弓形虫抗原进行分离,选择4组份特异抗原带（P22～26、P30、P35、P67）洗脱获得抗原后,分别与福氏完全佐剂混匀免疫小鼠（每组10只）,发现P30诱导的小鼠抗弓形虫IgG抗体出现最早,滴度最高,其次为P35。以毒力减弱的RH株弓形虫对免疫后的各组小鼠进行攻击。结果　对照组、P22～26、P30、P35和P67组小鼠的平均存活时间分别为7.1、7.8、8.3、8.0和7.3d。结论P30对小鼠具有较强的保护力(P<0.05),次为P35。二者可能成为弓形虫疫苗的候选抗原。     

弓形虫cDNA文库的构建

目的：建立弓形虫ｃＤＮＡ文库。方法：用异硫氰酸胍酸性一步法提取弓形虫（ＲＨ株）ＲＮＡ，含ＰｏｌｙＵ的ｍＲＮＡ亲和膜分离Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ，进而合成双链ｃＤＮＡ。将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ接头连接，再与表达载体λｇｔ１１ＤＮＡ臂连接，经体外包装，感染大肠杆菌Ｙ１０９０。以３２ｐ标记的弓形虫ＲＨ株基因组ＤＮＡ为探针，对重组噬菌斑进行原位杂交。结果：ｃＤＮＡ产物分布在０．５－２ｋｂ，得到６．９７×１０５重组子，重组率为９８．７３％，克隆效率为６．９７×１０６克隆／μｇｃＤＮＡ。噬菌斑原位杂交的阳性斑点占重组克隆９５．２％。结论：用异硫氰酸胍酸性一步法提取弓形虫ＲＮＡ简便有效，已建立了一个容量大、质量好的弓形虫ｃＤＮＡ文库。     

弓形虫昆山分离株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定

目的　构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法　用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫昆山分离株的表达型文库。结果　获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度为 1kb。结论　本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选     

预防性治疗降低新生儿弓形虫亚临床感染的效果

目的探讨预防性治疗降低新生儿弓形虫亚临床感染的效果.方法对44例感染弓形虫的孕妇进行不同时期抗弓形虫治疗,并对其脐血和/或胎盘作弓形虫相关的免疫学和分子生物学指标IgG、IgM、cAg和虫体DNA检测.结果虫体DNA的阳性检出在脐血中为14例(37.8%),且以预防性治疗组为最低,与一般性治疗组相比,差异有显著性.结论预防性治疗能较好地降低新生儿的亚临床感染.     

扁桃酸对小鼠实验感染弓形虫的疗效

用扁桃酸对急性弓形虫感染小鼠进行实验治疗,动态观察小鼠感染弓形虫后腹水中弓形虫数量的变化、光镜结构及超微结构的改变。在小鼠感染弓形虫２４ ｈ 、７２ ｈ 将小鼠解剖及小鼠发病死亡后取小鼠腹水,分别计数试验组和对照组各时间腹水中弓形虫数,并将腹水涂片做Ｇｉｅｍｓａ 染色,光镜下观察虫体结构变化及用腹水制作电镜切片。结果显示,试验组小鼠３ 个不同时间腹水中弓形虫数与对照组相比均明显减少（ Ｐ＜ ０．０１） ;光镜观察可见试验组小鼠腹水中弓形虫形态异常,虫体肿胀,胞膜破裂,胞质减少,胞内出现空泡,胞核染色质疏松、聚集成块,核内出现空泡;电镜观察可见虫体超微结构受到不同程度的破坏。