5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的 探讨IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响。方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、1000u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落。结果 IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、250u/ml。峰值浓度下,对CFU－E、BFU－Em、BFU－Eim、CFU－GM形成的作用强度不同,PIXY321条件下所形成的集落数最多。结论 这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著。     

脐血造血细胞体外集落培养最佳收获时机的探讨

目的 探讨脐血（CB）多系造血集落培养在不同培养条件下脐血造血细胞体外扩增的最佳收获时机。方法 将从新鲜CB标本中分离出的单个核细胞（MNC）分别接种于已建立的无血清培养基，该培养基分别含单用人骨髓基质细胞、单用细胞因子及细胞因子联合入骨髓基质细胞（HBMSC）支持培养体系。在0、6、10及14d各时间点分别取细胞进行巨细胞集落形成单位（CFU—MK）、红乐爆式集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（CFU—GM）培养。结果在体外培养过程中，第10d时各组CFU—MK、BFU—E及CFU—GM数均高于组内其它时间点（P〈0．05）；在含HBMSC支持培养的组集落生成数优于其它组（P〈0．05）。结论 脐血MNC体外培养过程中，第10d可能是收获的最佳时机。FIBMSC能更好地维持造血干／祖细胞的活性，使其集落形成能数得到有效扩增。     

全反式维甲酸对正常人脐血及正常小鼠造血细胞作用的研究

目的 了解全反式维甲酸（ATRA）在体外对正常人脐血造血细胞的作用以及其在体内对正常小鼠造血细胞的作用。方法 （1）在人脐血单个核细胞（MNC）的粒系集落形成单位（CFU－GM），红系集落形成单位（BFU－E）和混合集落形成单位（CFU－GEMM）的半固体培养基中加入不同浓度的维甲酸，观察其对人脐血造血细胞集落形成的影响；（2）用含0.5μmol/L ATRA和IL－6，G－CSF，EPO，SCF的体系培养人脐血MNC，第7，14天时检测扩增后的人脐血有核细胞（NC）数，CD34^ 细胞数并观测其CFU－GM，BFU－E和CFU－GEMM形成；（3）用不同剂量的ATRA处理BABL／c小鼠，分别于处理后2，4，6，8，10d检测小鼠外周血中CD34^ 细胞，WBC，RBC及PLT含量的变化，从而观察ATRA在体内对造血2细胞的影响。结果 （1）一定浓度的ATRA在体外能明显促进人脐血CFU－GM的生长，但对BFU－E，CFU－GEMM的形成无影响；高浓度时抑制CFU－GM，BFU－E和CFU－GEMM的形成。促进CFU－GM形成的最佳ATRA浓度为0．5μmol/L，浓度为5．0μmol/L时开始起抑制作用；当浓度达到10μmol/L时，无任何集落形成。（2）0．5μmol/LATRA联合IL－6，SCF，G－CSF和EPO须体外孵育人脐血MNC，第7天和第14天时，ATRA组NC数与对照组相比无显性差异；但其CD34^ 细胞数明显高于对照组，差异有显性（P＜0．05）；且ATRA组CFU－GM， CFU－GEMM及BFU－E的形成数均明显高于对照组（P＜0．05）；（3）不同剂量的ATRA处理小鼠8d后，其WBC及CD34^ 细胞均开始升高，与对照组相比，差异有显性（P＜0．05）；但不同剂量的ATRA对小鼠的RBC及PLT均无明显影响。结论 （1）浓度为0．1－0．5μmol/L的ATRA在体外能促进人脐血造血细胞CFU－GM的生长，但对BFU－E及CFU－GEMM的形成无影响；当浓度达到5μmol/L时，ATRA对各系集落的形成均起抑制作用，且随浓度的增加抑制作用增强。（2）液体培养时，ATRA联合造血细胞刺激因子能延迟人脐血CD34^ 细胞的分化。（3）在正常小鼠体内ATRA能促进小鼠WBC及CD34^ 细胞的增殖，但对小鼠RBC及PLT无影响。     

脐血红系祖细胞及其生长刺激因子的比较观察

本文采用细胞集落培养技术,对照研究40例脐血的红系祖细胞（BFU－E）和红细胞生成素（EPO）爆式集落促进活性（BPA）。结果显示,在不加用EPO、BPA而仅加脐血集落刺激因子（CB－CSF）的培养体系中,同样可生成BFU-U－E,而且富含EPO、BPA等红系集落刺激因子。     

Graves病合并白细胞减少患者血清对骨髓细胞粒-单核细胞系集落形成单位生长的影响

目的：探讨Graves病（GD）患者血清成分对骨髓细胞粒－单核细胞系集落形成单位（GM－CFU）生长的影响。方法：对11名正常人和11例GD合并白细胞减少患者的骨髓细胞进行体外培养,观察他巴唑、甲状腺素、甲状腺刺激免疫球蛋白（TSI）和GD患者血清对GM－CFU生长的影响。结果：TSI和GD合并白细胞减少患者的血清对正常人和GD合并白细胞减少患者的骨髓GM－CFU集落生长有抑制作用（P＜0．01）,他巴唑、甲状腺素和GD白细胞正常患者的血清对正常和GD白细胞减少患者的骨髓GM－CFU集落生长无明显影响（P＞0．05）。结论：TSI和GD合并白细胞减少患者的血清能明显抑制GM－CFU的生长,这提示免疫因素在GD患者白细胞减少的发病中起重要作用。     

环孢菌素A体外对再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征患者造血祖细胞作用的研究

目的　观察了环孢菌素A(CSA)体外对 18例再生障碍性贫血 (AA) ,17例骨髓增生异常综合征 (MDS)和 10例正常对照粒系和红系祖细胞 (CFU GM、CFU E)的作用。方法　采用RPMI16 4 0琼脂和McCoy’S5A甲基纤维素半固体平皿法。 结果　 (1)AA和MDS患者的CFU GM和CFU E较正常对照明显减低 (P <0 0 0 0 1) ;(2 )CsA能明显促进AA和MDS患者CFU GM、CFU E的增殖 ,这种促增殖作用随CsA剂量增加而增加 ;(3)SAA患者CFU GM和CFU E对CsA的有效率较CAA高 ;(4)MDS RAEB和RAEB T型患者CFU GM、CFU E对CsA有效率较RA、RAS高 ;(5 )MDS和AA患者中CFU GM、CFU E值重、中度减低者对CsA有效率较零者高。结论　CsA体外可促进部分AA和MDS患者CFU GM、CFU E的增殖     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

RhIL—2对人骨髓CFU—GM,CFU—E和BFU—E的影响

采用甲基纤维素体外半固体培养法证明，５０－１０００Ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ－２单用对人骨髓造血祖细胞的ＣＦＵ－ＧＭ〉ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ－Ｅ无直接刺激增生作用；当与ＧＭ－ＣＳＦ联用，１００－４００Ｕ＝ｍｌｒｈＩＬ－２其ＣＦＵ－ＧＭ集落形成率明显高于单用ＧＭ－ＣＳＦ的对照组；当与ＥＰＯ联用时，其ＣＦＵ－Ｅ及ＢＦＵ＝Ｅ集落形成率 于单用ＥＰＯ对照组，而１０００Ｕ／ｍｌｒｈＩＬ－２期 ３咱集落形成数目呈下降趋势     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞（CFU－GM）培养法。结果 伤后3－7d，有基质细胞贴壁的CFU－GM生长明显低于无贴壁组；伤后14d贴壁层形成后，放射损伤组的CFU－GM生长明显低于正常对照组；放射损伤后3－7d，骨髓基质细胞可抑制正常CFU－GM生长，用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞，其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子（CSF）时，基质细胞贴壁层对CFU－GM生长仍显示一定刺激作用，结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤，但在放射损伤造血修复与重建过程中，骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”双重的动态平衡调控作用。     

再生障碍性贫血发病机制及环孢菌素A干预的体外实验研究

目的：研究再生障碍性贫血（AA）发病机制及环孢菌素A（CsA)对AA患骨髓细胞体外培养的影响。方法：采用微量甲基纤维索法研究了18例AA患者骨髓粒一单系祖细胞（CFU－GM）集落形成及其骨髓细胞和血清对正常CFU－GM集落形成的影响,据此对AA按发病机制进行分组,同时加CsA与AA骨髓及正常骨髓共同培养。结果：干细胞缺陷组5例,微环境缺陷组4例,细胞抑制组7例,血清抑制组2例。AA骨髓CFU－GM集落产率明显低于正常对照组（P＜0．01）;CsA能显著增加AA集落,集族产率（P＜0．05）;8例AA骨髓CFU－GM集落产率明显低于正常对照组（P＜0．01）;CsA能显著增加AA集落,集族产率（P＜0．05）;8例AA骨髓对CsA敏感,其中细胞抑制组6例,干细胞缺陷组2例。结论：本研究可能为预测CsA治疗AA的临床疗效提供实验依据。     

胸腺肽α1对正常人造血功能和免疫功能的影响以及抗肿瘤作用

目的 探讨胸腺肽α1抗肿瘤的机制。方法 用间接酶联免疫吸附试验检测经胸腺肽α1刺激的8份正常人外周血单个核细胞培养上清液中的白细胞介素2（IL－2）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、可溶性TNFα受体（sTNFαR）和白细胞介素12（IL－12）含量，集落培养检测15份骨髓损捐献者骨髓单个核细胞粒单细胞集落形成单位（CFU－GM）、红细胞集落形成单位（CFU－E）。直接细胞计数法、MTT法检测胸腺肽α1对K562细胞的直接抑制作用。结果 胸腺肽α1能刺激正常人外周血单个核细胞产生IL－2 TNFα、sTNFαR和IL－12增多；胸腺肽α1浓度≥1μg/ml时CFU－GM、CFU－E集落数增多36.9%和70.3%（P＜0.001）；同时胸腺肽α1能直接抑制K562细胞的生长。结论 胸腺肽α1能促进造血干细胞增生，通过细胞因子途径和直接抑制作用发挥其抗肿瘤作用。     

慢性粒细胞白血症骨髓的体外净化

目的：探讨白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法：采用体外克隆形成培养技术，分别用白细胞介素，干扰素α2α，bcr-abl反义寡核苷酸不同的组合方案，进行体外净化5例慢性粒细胞白血病（CML）骨髓，结果：联用IL－2，IFN－α2α（各800um/ml),bcl-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，对白血病细胞克隆形成单位（L－CFU）抑制作用有显著差异（P＜0．01），而相同条件下，GM－CFU及L－CFU的集落存活率 分别为26．91％和3．49％（P＜0．01），结论：联用IL－2，IFN－α2α（各800g/ml),bcr-abl AS-ODN(30ug/ml)方案，选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好，可用于临床净化CML骨髓。     

细胞因子组合对小鼠骨髓单核细胞的体外扩增作用

目的　了解细胞因子组合对小鼠骨髓单个核细胞的体外扩增作用。方法　采用SCF、IL 3、IL 6、GM CSF、G CSF和EPO等 6种细胞因子组合在体外扩增培养小鼠骨髓单个核细胞 5d后 ,收集培养细胞作体外半固体培养计数各不同阶段祖细胞数 ,并计数细胞总数 ,与未经扩增培养的细胞作比较以判断其扩增情况。结果　有核细胞总数扩增不显著 ,为 (1 .3 60± 0 .1 2 6)倍 ,但造血祖细胞却获得了明显扩增 ,其中CFU E达培养扩增前的 (7.0 4± 1 .2 6)倍 ,BFU E为 (4 .74± 1 .0 4)倍 ,CFU GM和CFU Cs则分别为 (1 .78± 0 .47)和 (1 .74± 0 .48)倍。由此可见 ,在此培养体系中以红系祖细胞的扩增最为显著。结论　小鼠骨髓单个核细胞在单纯细胞因子存在的扩增体系中具有一定的扩增其细胞总数和集落形成祖细胞数的能力 ,为进一步作体内实验判断其造血重建的功能奠定了理论基础。     

脐血血清对正常及白血病骨髓粒－单祖细胞生长的影响

利用粒－单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）的体外培养，观察脐血血清（ＵＣＳ）对正常及白血病骨髓造血祖细胞生长的影响，结果表明：ＵＣＳ对正常及急性白血病（ＡＬ）患者完全缓解的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成有一定增殖作用，而对初发／复发未治ＡＬ患者的骨髓ＣＦＵ－ＧＭ形成无类似作用。     

小剂量MIP-1α联合IL-8体外对人骨髓造血细胞集落形成的影响

目的 了解小剂量巨噬细胞炎症蛋白－1α(Macrophage inflammatory protein-α MIP-1α）联合白细胞介素－8（Interleukin-8,IL-8）对人骨髓造血细胞集落形成的影响。方法 取人骨髓，根据随机单位组方差分析设计，将每例标本分为空白组（不加MIP－1α和IL－8）；10ng/ml联合组（加入10ng/ml的MIP－1α和IL－18）。建立半固体培养体系，一定时间后，观察集落粒单细胞集落形成单位（CFU－GM）、红细胞集落形成单位（CFU－E）和混合信集落（CFU－E）和混合集落（CFU－Mix）的形成情况。结果 1ng/ml的浓度下，相同浓度的MIP－1α与IL－8联合使用对人骨髓造血细胞集落的形成没有明显的抑制作用；而在10ng/ml的浓度下，两者联合使用则能明显地抑制人骨髓造血细胞集落的形成。两种因子单独使用，未见明显的集落形成抑制作用。结论 10ng/mlMIP-1α与IL－8能相互协同抑制人骨髓造血细胞集落的形成。     

造血生长因子对脐血单个核细胞的体外增殖效应

目的 :探讨不同造血生长因子组合对人脐血造血细胞的体外增殖效应 .方法 :采用免疫荧光染色和祖细胞集落测定 ,观察人脐血单个核细胞 (MNC)经多种造血生长因子的不同组合作用 2wk后其有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量的变化 ,并用脾结节形成实验和骨髓祖细胞培养等观察其在小鼠体内的短期造血能力 .结果 :脐血MNC分别与A(SCF /IL 3/IL 6 /G CSF/GM CSF) ,B(SCF/IL 3/IL 6 /FL/EPO) ,C(SCF/IL 3/IL 6 /EPO ) ,3种造血生长因子组合悬浮培养 2wk ,有核细胞、CD34+ 细胞和祖细胞数量增加 .有核细胞总数在B组因子作用下增加最显著 [(2 6± 5 )倍 ],而CD34+ 细胞数量在A组因子作用下增加最明显 [(8± 2 )倍 ].3种因子组合对不同种类祖细胞的增殖效应不同 ,其中A组因子主要刺激早期混合系祖细胞CFU Mix扩增 [(11± 2 )倍 ],B组因子主要刺激粒单系祖细胞CFU GM扩增 [(2 2± 3)倍 ],C组因子主要刺激早期红系祖细胞BFU E扩增 [(13± 4 )倍 ].此外 ,给受照小鼠输注A组因子作用后的人脐血细胞 ,13d在小鼠脾脏形成脾结节 (CFU S) ,30d从小鼠骨髓检出造血祖细胞(CFU GM和CFU E) ,造血细胞数量与从输注新鲜脐血细胞的小鼠体内检出的结果无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :造血细胞生长因子对人脐血单个核细胞具有体外     

螺旋藻多糖对骨髓造血干/祖细胞增殖能力影响的实验研究

目的 了解丁钝螺旋藻多糖（SPP）对造血干／祖细胞的刺激活性，以期发现恢复放射损伤造血功能的新药。方法 用内外源性脾集落和体外琼脂培养法。观察放射损伤小鼠注射SPP后CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数的改变。结果 给药组小鼠CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数均有显著的升高，与对照组比较有非常显著的差异（P＜0.001)。结论 SPP对造血干／祖细胞有显著的促增殖和分化的作用。     

脐血造血干／祖细胞体外扩增的实验研究

目的 探讨因子组合FL＋TPO＋SCF＋IL－6对脐血CD34^ 细胞的体外扩增效应。方法 采用Mini-MACS分离纯化出CD34^ 细胞,在无基质接触的液体悬浮培养体系培养,通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪技术、集落形成试验等动态测定细胞扩增情况。结果 培养4周后,FL＋TPO＋SCF＋IL－6组细胞总数、集落形成数均比扩增前显著增加（P＜0．05）,并且能维持一定比例的CD34^ 、Thy-1^ 细胞;SCF＋IL－3＋IL－6＋GM－CSF＋EPO组在第2周时集落形成数已降低,第4周时集落形成数、CD34^ 细胞基本检测不到。结论 与经典因子组合SCF＋IL－3＋IL－6＋GM－CSF＋EPO相比,因子组合FL＋TPO＋SCF＋IL－6能在较长时间内有效扩增脐血造血干／祖细胞,是一个优化组合方案。     

烷化溶血磷脂作为骨髓净化药物的实验研究

目的：探讨烷化溶血凝脂（ALP）作为骨髓净化药物的潜在应用价值。方法：克隆形成实验测定HL60细胞生长;正常粒－单核系造血祖细胞（CFU－GM）集落产率的变化检测ALP对正常造血祖细胞的影响;RT－PCR检测bcl-2mRNA表达;流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达。结果：ALP作用后,HL60细胞的克隆形成率明显下降（P＜0．01）;ALP对CFU－GM的影响不显著,20μg/ml预处理24h,CFU－GM集落产率才被抑制（P＜0．01）;ALP不影响bcl-2基因在mRNA及蛋白水平的表达。结论：ALP具有抑制白血病细胞增殖的作用,但对正常造血细胞无显著毒性,在白血病病人自体骨髓体外净化中有良好的应用前景。