醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及ＤＥＡＥ－纤维素、羟基磷灰石、葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻找有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索。结果：纯化的酶经ＳＤＳ－ｐＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲＭｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

鼠醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及多步层析法将鼠睾丸醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）分离纯化，纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，ＡＲ分子量为３９０００±１０００，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

高血糖对人红细胞醛糖还原酶活性的影响

目的研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）活性的影响。方法利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱层析法，将正常人、糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析。结果①高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约６～７倍；②糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；③高糖时醛糖还原酶不仅对多种底物的Ｋｍ值（包括葡萄糖）显著下降，而且对醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）的抑制不敏感。结论①高血糖时ＡＲＩｓ的用量需加大，才能取得满意的疗效；②（ＤＥ－５２）柱层析法测定红细胞ＡＲ活性准确、方便，可以作为判断糖尿病慢性并发症病情及评估醛糖还原酶抑制剂疗效的一项重要指标     

高血糖对人红细胞醛糠还原酶活性的影响

目的 研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖学原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅＡＲ）活性的影响。方法 利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＦ－５２）柱层析法，将正常人，糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析，结果 （１）高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约为６～７倍；（２）糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；（３     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药掌叶半夏（ＰｔｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）中通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝活性的凝集素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａｌｅｃｔｉｎＡ，ＰＰＬ－Ａ）。在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其Ｍｒ为１６．３×１０３，用等电聚焦电泳测得其等电点为５．８，经ＤＮＳ－Ｃｌ分析法分析其氨基末端为丙氨酸。对所含的１８种氨基酸作了定量分析。通过Ｓｃｈｉｆｆ试剂电泳染色法鉴定ＰＰＬ－Ａ为糖蛋白，用酶标凝集素结合法分析了糖链的结构，糖链部分含有甘露糖，岩藻糖和乙酰氨基葡萄糖。     

The Influence of Thymectomy on Germ-cells of the Testis in Mice

ＴｈｅＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＴｈｙｍｅｃｔｏｍｙｏｎＧｅｒｍ－ｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅＴｅｓｔｉｓｉｎＭｉｃｅＺＥＮＧＪｉｎ（曾进），ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ－ｓｈａｎｇ（章咏裳）；Ｓ．ＰＯＭＥＲ，Ｇ．ＳＴＡＥＨＬＥＲＲＥＮ；Ｄａ－ｈｏｎｇ（任大洪）（Ｄｅｐａ...     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯，可用于其结构与功能的研究     

SDS—PAGE法分离纯化牛角膜上皮特异性膜结合蛋白质55.3kD

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法离纯化了牛角膜上皮特异性膜结合蛋白质５５．３ｋＤ，结果显示，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可用于从少量样品中提高纯度的蛋白质，且有效好的收率。     

双胸蚓纤溶酶Ⅲ的分离纯化及其性质研究

用硫酸铵分段盐析，ＤＥＡＥ－纤维素，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析的方法，从双胸蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示一条区带，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量为２２．１ＫＤ     

结直肠癌Dukes各期局部免疫功能变化研究

采用ＡｐＡＡＰ法、ＥＬＩＳＡ和ＲＩＡ法检测４５例结直肠癌（ＣＲＣ）患者外周血和局部动静脉血Ｔ细胞亚群（ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋）、ｓＩＬ－２Ｒ、ＴＮＦα和ＰＧＥ２，结果发现，局部动静脉血中ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值随Ｄｕｋｅｓ分期进展而下降；ｓＩＬ－２Ｒ和ＰＧＥ２浓度则随Ｄｕｋｅｓ分期进展而升高，各期差异显著，局部静脉血ＰＧＥ２浓度显著高于局部动脉血；ＴＮＦα水平也随Ｄｕｋｅｓ分期不同而变化，Ｄｕｋ     

NON-PERFUSION COLD STORAGE METHOD FOR TOTAL THYROID-PARATHYROID PRESERVATION

ＮＯＮ－ＰＥＲＦＵＳＩＯＮＣＯＬＤＳＴＯＲＡＧＥＭＥＴＨＯＤＦＯＲＴＯＴＡＬＴＨＹＲＯＩＤ－ＰＡＲＡＴＨＹＲＯＩＤＰＲＥＳＥＲＶＡＴＩＯＮ￥ＣｈｅｎＹｕｘｉｎ（陈雨信）（Ｄｅｐｔ．ｏｆＳｕｒｇｅｒｙ，ＴａｉｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ）Ａｂｓ...     

大鼠睾丸乳酸脱氢酶同工酶－C_4的分离纯化研究

采用加热、硫酸铵分段盐析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从大鼠睾丸中分离纯化了ＬＤＨ－Ｃ４。比活性提高７８４倍，活性回收率为１２．３％，纯化的ＬＤＨ－Ｃ４经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）鉴定均为一条酶带，位于ＬＤＨ３和ＬＤＨ４之间。     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药堂叶半夏（Ｐｔｎｅｌｌｉａ ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ Ｓｅｈｏｔｔ）中通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝生的凝信要素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ｐｉｎｅｌｌｉａ ｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａ ｌｅｃｔｉｎ Ａ，ＰＰＬ－Ａ）ｄ ＰＡＧＥ＇ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定     

SDS－PAGE法分离纯化牛角膜上皮特异性膜结合蛋白质55．3kD

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法离纯化了牛角膜上皮特异性膜结合蛋白质５５．３ｋＤ，结果显示：ＳＤＳＰＡＧＥ可用于从少量样品中提取高纯度的蛋白质，且有较好的收率。     

绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６     

葡萄球菌核酸酶去C—末端的肽段52—79的分离纯化

目的 建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。方法 应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。结果 化的ＳＮ５２和ＳＡＮ７９级ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。结论 纯     

CORRELATION BETWEEN THE NUMBER OF MITOTIC FIGURES AND THE PERCENTAGE OF Ki67-POSITIVE CELLS IN NON-HODGKIN’S LYMPHOMAS

ＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮＢＥＴＷＥＥＮＴＨＥＮＵＭＢＥＲＯＦＭＩＴＯＴＩＣＦＩＧＵＲＥＳＡＮＤＴＨＥＰＥＲＣＥＮＴＡＧＥＯＦＫｉ６７－ＰＯＳＩＴＩＶＥＣＥＬＬＳ　ＩＮＮＯＮ－ＨＯＤＧＫＩＮ’ＳＬＹＭＰＨＯＭＡＳＨｕａｎｇＧａｏｓｈｅｎｇ；（黄高升）Ｆｅ...     

基因重组构建MDR基因表达载体及其表达研究

利用基因重组技术，成功地构建了ＭＤＲ Ｉ基因片断的表达载体ｐＧＥ－Ｈｍｄｒ－１，用氯化钙方法转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１，挑选２０个克隆扩增培养，经提质粒，酶切，Ａｇａｒｏｓｅ电泳检测证实：其中４个克隆含有重组质粒，选用含重组质粒载体的菌株扩增培养，经ＩＰＴＧ诱导，超声波破碎，抽提蛋白，ＧＳＨ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测证实：此重组载体已表达所需的目的蛋白（ＧＳＴ－ｍｄｒ