青少年特发性脊柱侧凸椎体软骨终板核心蛋白、转化生长因子β1及碱性成纤维细胞生长因子的表达

青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis，AIS)的发病原因不明，临床上AIS患者侧凸椎体存在着不同程度的椎体楔形变，人体发育过程中椎体的生长需通过软骨终板的软骨内骨化来完成，对于软骨终板在侧凸中的变化迄今文献报道较少。研究表明，细胞因子同细胞的生长发育、再生及创伤的愈合有关。本研究选择北京协和医院骨科收治的年龄10岁以上并排除先天性、神经肌肉性等原因所导致的脊柱侧凸及成人脊柱侧凸患者，对前路手术切除的软骨终板研究细胞因子和蛋白多糖核心蛋白的变化。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞中转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外成骨细胞中的生长因子 :转化生长因子 β1 (TGF β1 )和bFGFmRNA表达的影响。 方法　将体外培养的新生SD大鼠颅骨成骨细胞 ,用不同浓度的bFGF(5～ 50 μg/L)进行处理 ,利用核酸原位分子杂交 ,检测两种生长因子在细胞中mRNA的表达。结果　依bFGF浓度的增加成骨细胞内TGF β1mRNA表达分别是对照组的 1 .5、1 .6、1 .9和 2 .0倍 ;bFGFmRNA表达则分别是对照组的 1 .2 8、1 .37、1 .40和 1 .51倍。bFGF组中 ,TGF β1和bFGFmRNA的表达量均明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　外源性bFGF可以对成骨细胞自分泌bGFG产生影响 ,还能够促进TGF β1的合成     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗转化生长因子-β1对人α1(Ⅰ)胶原基因的启动激活

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响,以及与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的相互作用,为防治增生性瘢痕提供依据. 方法正常皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养.采用FuGENE转染试剂,分别瞬间转染含人α1(Ⅰ)胶原基因5'端序列-2.5 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phCOL2.5至正常皮肤及瘢痕成纤维细胞.ELISA法测定bFGF及TGF-β1作用24小时后,转染phCOL2.5的两种成纤维细胞的报告基因CAT表达量. 结果 bFGF能抑制转染phCOL2.5重组体的正常皮肤及瘢痕成纤维细胞CAT表达量,且能拮抗TGF-β1对转染phCOL2.5重组体的两种成纤维细胞CAT表达的上调作用.与对照组相比有统计学意义(P＜0.05). 结论正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中,bFGF均能抑制人α1(Ⅰ)胶原基因的启动转录,且能拮抗TGF-β1对人α1(Ⅰ)胶原基因启动活性的上调作用,bFGF抗纤维机制有望为增生性瘢痕的防治提供新思路.     

激光对小鼠皮肤碱性成纤维细胞生长因子和β1转化生长因子表达的影响

目的 探讨1320nm波长非剥脱性激光对小鼠皮肤碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、β1转化生长因子（TGF-β1）表达的影响，为非剥脱性激光嫩肤提供实验依据。方法 以昆明小鼠为动物模型，共18只，分为A、B、C3组，每组6只。A组激光照射1次，B组激光照射2次，间隔1min，C组激光照射3次，间隔1min。共4个疗程，每个疗程间隔1周。选择1320nm波长激光，20J／cm^2能量照射小鼠背左侧皮肤，以背右侧作自身对照。用免疫组化法检测bFGF和TGF-β1在受照射小鼠皮肤真皮中的表达。以真皮成纤维细胞胞浆含黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，计算每高倍视野阳性细胞数。结果 1320nm波长激光照射后小鼠皮肤bFGF和TGF-β1表达增加，其中激光照射3次组，每高倍视野阳性细胞数为（1．57±1．12）个，与各组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 小鼠皮肤受1320nm波长激光照射后，其真皮bFGF和TGF-β1表达增加，表达量与激光照射次数有关。     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗转化生长因子—β1对人α1（I）胶原基因的启动激活

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人α1 ( )胶原基因启动子活性的影响 ,以及与转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )之间的相互作用 ,为防治增生性瘢痕提供依据。　方法　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养。采用 Fu GENE转染试剂 ,分别瞬间转染含人α1 ( )胶原基因 5'端序列 - 2 .5 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体 ph COL2 .5至正常皮肤及瘢痕成纤维细胞。 ELISA法测定 b FGF及 TGF- β1 作用 2 4小时后 ,转染ph COL2 .5的两种成纤维细胞的报告基因 CAT表达量。　结果　b FGF能抑制转染 ph COL2 .5重组体的正常皮肤及瘢痕成纤维细胞 CAT表达量 ,且能拮抗 TGF-β1 对转染 ph COL2 .5重组体的两种成纤维细胞 CAT表达的上调作用。与对照组相比有统计学意义 (P<0 .0 5)。　结论　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中 ,b FGF均能抑制人 α1 ( )胶原基因的启动转录 ,且能拮抗 TGF-β1 对人α1 ( )胶原基因启动活性的上调作用 ,b FGF抗纤维机制有望为增生性瘢痕的防治提供新思路     

转化生长因子-β和碱性成纤维细胞生长因子在腹股沟疝患者腹横筋膜中的表达

目的 观察转化生长因子(TGF)-β和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在原发腹股沟疝患者腹横筋膜中的表达.方法 采用免疫组织化学方法测定实验组(直疝组40人;斜疝组40人)及非疝对照组(20人)腹横筋膜中的TGF-β、bFGF的表达情况.结果 TGF-β在直疝组多表现为局灶染色或弥漫性淡染(65.0%),但其在斜疝组及对照组多表现为弥漫性深染(42.5%;45.0%),TGF-β在直疝组与对照组之间的差异有统计学意义(P＜0.05);而斜疝组与对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);bFGF在直疝组、斜疝组、对照组几乎都表现为局灶染色或散在淡染(85.0%、77.5%、65.0%),三组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGF-β的低表达影响了腹横筋膜的强度并进一步影响了腹股沟直疝的发生、发展,但其与斜疝无明显相关;bFGF与腹股沟疝的发生、发展无明显相关.     

转化生长因子β1对肾间质成纤维细胞胶原表达的影响

目的　探讨肾间质纤维化的机制。方法　体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,采用Ｌ３Ｈ脯氨酸掺入法测定胶原合成及ＲＴＰＣＲ 技术观察转化生长因子β（ＴＧＦβ１） 对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 表达的影响。结果　ＴＧＦβ１ 可促进肾间质成纤维细胞的３Ｈ脯氨酸掺入,且随着ＴＧＦβ１ 剂量的增加,３Ｈ脯氨酸掺入量增加,胶原合成增多。ＴＧＦβ１ 可促进Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的表达,且在ＴＧＦβ１ 浓度２ ～１０ ｎｇ／ｍｌ 时ｍＲＮＡ 的表达量与浓度呈现正相关;在６ ～４８小时内与时间呈现正相关。结论　ＴＧＦβ１ 可能通过促进肾间质成纤维细胞胶原的合成及ｍＲＮＡ 的表达而参与肾间质纤维化。     

转移生长因子—β,碱性成纤维细胞生长因子诱导人成骨细胞表达血小板衍生生

目的 探讨转移生长因子（ＴＧＦ）－β、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对人成骨细胞血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）－ＢｍＲＮＡ表达的影响及其意义。方法 体外分离培养人成骨细胞。在体外培养的成骨细胞中分别加入１０、２０、４０、８０、１６０ｕｇ／Ｌ梯度浓度的ＰＤＧＦ－ＢＢ培养细胞２４ｈ,以摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ为细胞增殖指标检测细胞增殖状况。以４ｕｇ／Ｌ的ＴＧＦ－β和１０ｕｇ／Ｌ的ｂＦＧＦ培养细胞２４ｈ,寡核苷酸探针检测细胞ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结果 １０～１６０ｕｇ／Ｌ的ＰＤＧＦ－ＢＢ可促进成骨细胞增殖（Ｐ〈０．０５）。在普通培养条件下,细胞下表达ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ;当培养体系中加入ＴＧＦ－β和ｂＦＧＦ,可见ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ的表达。结论 ＰＤＧＦ－Ｂ基因的表达可能是骨组织生长的储备因素,ＴＧＦ－β和ｂＲＮ     

转化生长因子βRⅡ抗体对皮肤成纤维细胞抑制作用的研究

目的探讨转化生长因子Ⅱ型受体(TGF-βRⅡ)抗体对皮肤成纤维细胞的影响,以期寻找利用生长因子控制瘢痕的途径.方法①测定培养细胞液中羟脯氨酸含量.②活细胞四甲基偶氮唑(MTT)增殖实验.③流式细胞仪测定细胞周期.④光学显微镜及电子显微镜形态学观察.结果①实验组中羟脯氨酸含量较对照组明显降低(P＜0.01).②抗体作用下细胞增殖受到抑制(P＜0.01).③抗体抑制细胞周期的G0-G1期,导致细胞无法完成正常有丝分裂.④抗体作用下,细胞外合成的纤维素样物质明显减少,细胞生长受到抑制.结论应用外源性TGF-βⅡ型受体抗体能阻断TGF-β的信号传导,有效地抑制培养成纤维细胞的增殖,降低其细胞外胶原基质的分泌.     

肾母细胞瘤组织中碱性成纤维细胞生长因子和纤维细胞生长因子受体表达分析

肾母细胞瘤 (ＮＢＴ)是婴幼儿泌尿系最常见的恶性肿瘤。我们采用ＲＴ ＰＣＲ技术对ＮＢＴ组织中碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)和纤维细胞生长因子受体 (ＦＧＦＲ)基因进行定量分析 ,探讨其临床意义。资料与方法　 38例ＮＢＴ标本、2 2例肾癌癌旁组织标本 ,均经病理学诊断证实为ＮＢＴ。患儿年龄 1～ 3岁。实验方法 :总ＲＮＡ提取。ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ引物由北京奥科生物有限公司合成。引物序列采用ｐｒｉｍｅｒｐｒｅｍｉｅｒ 5 .0软件处理系统设计 ,并以 β ａｃｔｉｎ为内参照。ＲＴ ＰＣＲ试剂购自大连宝生物有限公司 ,采用 2 0 μ…     

Effects of basic fibroblast growth factor on biological characteristics of osteoblasts

Objective: To elucidate the effects of exogenous basic fibroblast growth factor ( bFGF ) on biological characteristics of rat osteoblasts cultured in vitro. Methods: The osteoblasts isolated from a Sprague-Dawley rat and cultured in vitro were treated with different concentrations of bFGF ( 5-50 ng/ml) respectively. At 24 hours after treatment, the proliferating cell nuclear antigen was measured with immunocytochemistry, alkaline phosphatase (ALP) activity was determined and the expression of transforming growth factor beta 1 ( TGF-β1 )was detected to observe the effects of bFGF on growth and differentiation of osteoblasts. Resu/ts: bFGF ( 5-50 ng/ml ) could obviously promote the growth of osteoblasts. The intracellular expression of TGF-β1 mRNA increased significantly, but the intracellular ALP content decreased. Conclusions: bFGF can obviously stimulate the proliferation of osteoblasts and promote the synthesis of TGF-β1, but cannot promote the differentiation of osteoblasts.     

增生性瘢痕转化生长因子β及其受体的分布及表达

目的　探讨转化生长因子 β(TGF β)及其受体在增生性瘢痕形成中的作用机制。　 方法　收集临床手术切除后的正常皮肤组织 7例和增生性瘢痕组织标本 11例 ,用免疫组织化学和原位杂交的方法检测TGF β及其TGF β受体 (TGFR)Ⅰ、TGFRⅡ在组织中的定位分布、蛋白和mRNA表达。　结果　在正常皮肤组织中 ,与TGF β1 、TGF β2 、TGFRⅠ比较 ,TGF β3和TGFRⅡ呈较高表达 ;在增生性瘢痕组织中则呈现与正常皮肤组织中的表达相反的结果。与正常皮肤组织相比 ,增生性瘢痕组织中TGF β1 、TGF β2 和TGFRⅠ的蛋白和mRNA表达均明显增加 ,而TGF β3和TGFRⅡ的蛋白以及mRNA表达相对减少。　结论　创面愈合过程中TGF β及其受体不同水平的表达与增生性瘢痕的形成直接相关。     

转化生长因子β1诱导肌纤维母细胞分化机制的研究

目的 探讨肺移植后闭塞性细支气管炎中转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肌纤维母细胞分化的机制。方法 闭塞性细支气管炎动物模型采用Smad3野生型和基因敲除小鼠进行的同种异体异位气管移植,并采用原代培养的气管纤维母细胞,通过免疫组化、免疫荧光、Western Blotting、逆转录聚合酶链反应和DNA凝胶电泳迁移率检测等手段,检测肌纤维母细胞分化的标志物α平滑肌肌动蛋白（αSMA）的表达,以及Smad3、p38和ERK1／2的激活。结果 在闭塞性细支气管炎的受累气道中,发现有αSMA的大量表达。对纤维母细胞进行的离体研究,发现TGF-β1诱导Smad3激活,表现为蛋白磷酸化、细胞核转位和DNA结合。TGF-β1引起肌纤维母细胞分化增加,表现为αSMA在转录和蛋白水平的表达增加;而在缺乏Smad3的纤维母细胞中,TGF-β1诱导的肌纤维母细胞分化明显减少（t=2,080,P=0．027;t=1．982,P=0．032）,但未完全消除。TGF-β1可通过激活p38和ERK1／2来促进少量肌纤维母细胞的分化。结论 TGF-β1可通过激活Smad3依赖性和非依赖性信号传导途径,主要是Smad3依赖性途径,来促使纤维母细胞向肌纤维母细胞的转化,最终导致闭塞性细支气管炎的发展。     

碱性成纤维细胞生长因子对肌腱细胞基质合成及NF-κB基因表达的作用

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对兔屈肌腱细胞DNA合成、I型胶原和NF κB基因表达的作用。方法　采用BrdU掺入技术 ,观察肌腱细胞DNA合成情况 ;采用RT PCR方法 ,检测I型胶原mRNA、NF κBmRNA在不同浓度bFGF作用下的合成变化。结果　质量浓度为 2ng/ml的bFGF组、质量浓度为 10ng/ml的bFGF组与正常对照组相比 ,肌腱细胞DNA合成显著增多 (t =-3 .747、-4 .488,P <0 .0 1)。质量浓度为 10ng/ml的bFGF组和正常对照组相比 ,I型胶原密度表达相对比值显著增加 (t =-6.2 5 4,P <0 .0 1)。NF κB基因表达增强 ,实验组和正常对照组相比 ,差异有显著意义 (t =-11.174、-2 .63 4、P <0 .0 1)。结论　bFGF可提高I型胶原和NF κB基因表达水平     

鼠转化生长因子-β1基因的克隆及其在成骨细胞中的表达

目的 克隆鼠转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）基因并研究其在转染的成骨细胞中表达情况。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）可从大鼠淋巴细胞中扩增出１．２ｋｂ特异性片段,经酶切鉴定证实为鼠ＴＧＦ－β１ ｃＤＮＡ。将此片段插入５．４Ｋｂ的ｐｃＤＮＡ表达载体,构建得到６．６Ｋｂ的ｐｃＤＮＡ－ＴＧＦ－β１重组质粒。应用脂质体介导的基因转移技术将ＴＧＦ－β１表达载体导入鼠成骨细胞,４８ｈ后用ＳＡＢ     

急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及I型胶原变化的研究

目的 :研究转化生长因子 (TGF)对急性胰腺炎发生后胰腺组织修复的影响。方法 :雄性Wistar大鼠 96只 ,实验组和对照组各 48只 ,腹腔一次性注射L 精氨酸制成胰腺炎模型 ,分别于术后 4、12、2 4、48、72、96h各处死 8只取标本 ,进行病理学检查、血淀粉酶的测定及胰腺组织TGFβ1mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的检测 (Northern分子杂交方法 )。结果 :腹腔注射L 精氨酸后经病理学及血淀粉酶检测证实产生了急性水肿性胰腺炎的病理损害 ,但同时胰腺组织内TGFβ1mRNA水平升高 ,于 12h时达到较高水平 ,持续至 72h时开始下降 ;这一时段内Ⅰ型胶原mRNA水平也显著升高 ,并与TGFβ1mRNA的变化呈密切相关性 (r=0 72 8,P <0 0 5 )。结论 :在急性胰腺炎胰腺组织病理损害的同时存在着胰腺自身修复的机制 ,TGF和Ⅰ型胶原在这一机制中起重要作用     

Effect of fluvastatin on transforming growth factor beta 1 expression in peritoneal dialysis rats model

ObjectiveTo investigate the effect of fluvastatin on TGF-β1 expression in a rat model of peritoneal dialysis(PD). MethodsA rat model of PD was built by intraperitoneal injection of 2.5% or 4.25% peritoneal dialysate. SD rats were randomly divided into 7 groups: (1) Normal control group; (2)Saline control group: saline 100 ml/kg intraperitoneal injection(IP) each day; (3) Fluvastatin treatment group: fluvastatin intragastrically administration 10 mg/kg each day; (4) 2.5% PD group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (5)4.25% PD group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg everyday; (6)2.5% PD plus fluvastatin treatment group: 2.5% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday; (7)4.25% PD plus fluvastatin treatment group: 4.25% peritoneal dialysate IP 100 ml/kg plus fluvastatin 10 mg/kg everyday. The rats were sacrificed at 6 weeks and peritoneal tissues were dissected. The expressions of TGF-β1 and FN were examined by RT-PCR and immunohistochemical analysis. Masson staining was used for histological examination. ResultsMasson staining showed that the peritoneum thickened in 2.5% and 4.25% PD group than in normal control group and saline control group. The fluvastatin treatment ameliorated the thickening of peritoneum induced by PD. RT-PCR and immunohistochemical analysis showed that the mRNA and protein expression of TGF- β1 and FN increased in 2.5% and 4.25% PD group than in normal and saline control group (all P＜0.05). The fluvastatin treatment ameliorated the increased expression of TGF-β1 and FN induced by PD. There was no statistically significant difference among normal control group, saline control group and fluvastatin treatment group in both peritoneal thickness and the expression of TGF-β1 and FN. ConclusionFluvastatin can reduce the increased expressions of TGF -β1 and FN in rat peritoneum and ameliorate the thickening of peritoneum induced by PD.     

青少年特发性脊柱侧凸椎体软骨终板核心蛋白和细胞因子的变化

目的了解青少年特发性脊柱侧凸患者顶端椎凸、凹侧椎体软骨终板内核心蛋白、TGFβ1及bFGF的变化,探讨其在特发性脊柱侧凸发病中的作用。方法12例患者,男4例,女8例;年龄12～20岁,平均14.9岁;侧凸Cobb角43°～102°,平均65.1°。所有患者均经X线、CTM和(或)MR检查排除先天性、神经肌肉性等原因所导致的侧凸。对前路手术取下的顶椎和端椎的软骨终板进行S-P法免疫组化染色,染色结果采用北京航空航天大学图像中心医学彩色病理图像分析系统进行分析。结果经非参数Wilcoxon秩和检验,侧凸顶椎和端椎凹侧终板软骨细胞内TGFβ1表达的面密度和数密度高于凸侧及顶椎凸侧表达的数密度高于端椎均有统计学意义(P<0.05);侧凸顶椎和端椎凹侧bFGF表达的面密度和数密度高于凸侧亦有统计学意义(P<0.05);顶椎及端椎凸侧蛋白多糖核心蛋白的面密度和数密度高于凹侧,但无统计学意义(P>0.05)。TGFβ1及bFGF及核心蛋白在侧凸顶椎的表达较端椎表达略高,但无统计学意义(P>0.05)。结论青少年特发性脊柱侧凸患者凹侧TGFβ1、bFGF高表达和核心蛋白低表达,表明细胞因子和核心蛋白的表达异常可能是脊柱侧凸的发病原因或继发于侧凸的变化。     

转化生长因子-β1反义RNA腺病毒载体的构建

目的构建含转化生长因子β1(TGF-β1)反义RNA的重组腺病毒重组体。方法将TGF-β1的cDNA5＇端630bp片段反向插入穿梭载体pAdTraek-CMV,构建为TGF-β1反义RNA的重组体(pAdTrack-antiTGFβ1),将重组体pAdTrack-antiTGFβ1与包装质粒pAdEasy-1共转染BJ5183细菌。用选择培养基筛选同源重组的阳性克隆,同源重组的腺病毒载体转染293细胞,在荧光显微镜下观察细胞中的绿色荧光蛋白(GFP)及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果构建了含rGF-β1反义RNA的重组腺病毒,其滴度为2.4×10