云南省德宏和昆明地区高效抗逆转录病毒治疗后HIV-1流行毒株pol区基因变异分析

目的 调查云南省德宏和昆明两个地区HIV-1流行毒株pol区基因在接受HAART后的变异情况.方法 选择接受HAART 1年以上血浆HIV-1病毒载量＞1 000拷贝/ml的139例HIV/AIDS患者,提取血浆中HIV-1 RNA,采用RT-nested-PCR扩增HIV-1的pol区基因蛋白酶(PR)和逆转录酶(RT)基因片段,测定DNA序列.经拼接整理后与美国斯坦福大学网站提供的HIV耐药数据库(Stanford HIV Drug Resistance Database)进行比对,分析耐药突变位点,采用MEGA 4.1构建系统进化树以确定HIV的亚型,结合HIV/AIDS患者流行病学资料进行综合分析.结果 昆明地区患者HIV以T215F/NY/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变较多,突变率分别为39%(24/62)、27%(17/62)和27%(17/62),高于德宏地区患者HIV的相应突变率[分别为16%(11/69)、13%(9/69)和9%(6/69)],差异有统计学意义(x2值分别为8.646、4.242和7.909,P均＜0.05).德宏地区HIV-1流行毒株pol区基因亚型主要为CRF01_AE亚型为32%(22/69)、C亚型为25%(17/69)、B亚型19%(13/69).而昆明地区主要是08_BC亚型60%(37/62)、CRF01_AE亚型21%(13/62)和07_BC亚型15%(9/62).结论 云南省德宏、昆明两地区HIV-1流行毒株pol区基因PR、RT基因突变频率存在部分差异,昆明地区T215F/N/Y/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变率高于德宏地区.两地共检出HIV-1流行毒株pol区基因CRF01_AE、B、C、BC、08_BC和07_BC共6种基因亚型.

Abstract：

Objective To investigate the variations in the pol region of HIV-1 strain in treatment failed patients in Yunnan province's Dehong prefecture and Kunming. Methods Blood samples were collected from 139 patients who experienced treatment failure ( HAART treatment ＞ 1 years and HIV-1 RNA Viral load ＞ 1 000 copies/ml). HIV-1 RNA was extracted from plasma, and nested-PCR was performed for amplification of PR and RT genes on the HIV-1 pol region. The PCR products were then sequenced and submitted to Stanford HIV Drug Resistance Database for comparison. The evolution tree was built up with MEGA 4. 1 system, combined with patients' demographics. Results The most prevalent mutation in Kunming patients were T215F/N/Y/I, M41L/M, and T69G/N/I/S/A/D, the mutation rates were 39%(24/62), 27% (17/62) and 27% (17/62) , respectively, which were higher than the corresponding mutations in the Dehong prefecture [16% ( 11/69), 13% (9/69) and 9% (6/69)]. The rate differences were statistically significant ( x2 = 8.646, 4.242 and 7. 909, all P ＜ 0.05 ). The most common HIV-1 pol region subtype in the Dehong patients were CRF01_AE subtype (32%, 22/69), followed by C subtype (25% ,17/69), and B subtype ( 19%, 13/69). Major subtypes in Kunming patients were 08_BC (60%,37/62 ), CRF01_AE subtype(21% , 13/62 ) and 07_BC ( 15% ,9/62). Conclusions Partial differences of the point mutations of the HIV-1 strain pol region and frequency of their occurrences exist among Dehong and Kunming patients, HIV-1 strains in Dehong prefecture for the NNRTIs mutations at the T215 Y/N/T, M41L and T69G/N/I/S/A/D are significantly higher than those in Kunming. Six isoforms are found respectively:CRF01_AE, B, C, BC, 08_BC and 07_BC from the epidemic strains of HIV-1 pol region subtype in Dehong and Kunming areas.     

云南省德宏和昆明地区高效抗逆转录病毒治疗后HIV-1流行毒株pol区基因变异分析

Objective To investigate the variations in the pol region of HIV-1 strain in treatment failed patients in Yunnan province's Dehong prefecture and Kunming. Methods Blood samples were collected from 139 patients who experienced treatment failure ( HAART treatment ＞ 1 years and HIV-1 RNA Viral load ＞ 1 000 copies/ml). HIV-1 RNA was extracted from plasma, and nested-PCR was performed for amplification of PR and RT genes on the HIV-1 pol region. The PCR products were then sequenced and submitted to Stanford HIV Drug Resistance Database for comparison. The evolution tree was built up with MEGA 4. 1 system, combined with patients' demographics. Results The most prevalent mutation in Kunming patients were T215F/N/Y/I, M41L/M, and T69G/N/I/S/A/D, the mutation rates were 39%(24/62), 27% (17/62) and 27% (17/62) , respectively, which were higher than the corresponding mutations in the Dehong prefecture [16% ( 11/69), 13% (9/69) and 9% (6/69)]. The rate differences were statistically significant ( x2 = 8.646, 4.242 and 7. 909, all P ＜ 0.05 ). The most common HIV-1 pol region subtype in the Dehong patients were CRF01_AE subtype (32%, 22/69), followed by C subtype (25% ,17/69), and B subtype ( 19%, 13/69). Major subtypes in Kunming patients were 08_BC (60%,37/62 ), CRF01_AE subtype(21% , 13/62 ) and 07_BC ( 15% ,9/62). Conclusions Partial differences of the point mutations of the HIV-1 strain pol region and frequency of their occurrences exist among Dehong and Kunming patients, HIV-1 strains in Dehong prefecture for the NNRTIs mutations at the T215 Y/N/T, M41L and T69G/N/I/S/A/D are significantly higher than those in Kunming. Six isoforms are found respectively:CRF01_AE, B, C, BC, 08_BC and 07_BC from the epidemic strains of HIV-1 pol region subtype in Dehong and Kunming areas.     

我国河南地区HIV感染者高效抗逆转录病毒治疗及耐药变异情况研究

目的 建立耐药变异研究队列,以明确我国HIV/AIDS患者抗病毒治疗反应及耐药变异发生和变化情况.方法 招募HIV感染者116例,每半年进行1次问卷调查,同时进行CD4+ T淋巴细胞计数、病毒载量和耐药检测.结果 应用AZT/DDI/NVP或D4T/DDI/NVP方案者,治疗36个月后CD4+ T淋巴细胞计数仍维持在较高水平[(470±251)个/ml],病毒载量低于治疗前水平,随着治疗时间的延长,耐药逐渐增加;更换为AZT/3TC/NVP或D4T/3TC/NVP方案者,随着治疗时间的延长,CD4+ T淋巴细胞计数逐步下降,病毒载量升高,耐药明显上升;治疗前仅1例存在原发非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)高度耐药突变,治疗6个月有2例出现了交叉耐药,治疗12个月后出现了蛋白酶抑制剂(PI)LPV的中度耐药,治疗18个月后NNRTI的高度耐药明显增加,治疗36个月后5例出现多药耐药和交叉耐药.结论我国艾滋病抗病毒治疗前原发耐药很少,随着治疗时间延长,耐药突变逐渐增加,虽然治疗方案较少,但坚持长期治疗仍能保持治疗效果,建议根据耐药检测结果更换治疗方案.     

艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗依从性及生活质量分析

目的 探讨艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗依从性、生活质量特点及相关因素.方法 在湖南、湖北、安徽3省采用整群抽样方法 ,对308名接受免费高效抗逆转录病毒治疗的患者进行现场调查.采用美国社区艾滋病临床研究抗逆转录病毒用筠自陈式问卷(CPCRA)和SF-36生活质量问卷,通过面对面访谈收集资料.结果 本组患者的抗病毒治疗服药平均依从程度为94.0%,有20.5%的患者属于服药依从性差.SF-36生活质量各领域得分均显著低于常模(p<0.05).服药依从程度好的患者在生理功能、躯体疼痛、一般健康状况、社会功能、情感职能领域得分优于依从程度差的患者(P<0.05).吸毒、治疗时间、药物不良反应、机会性感染影响生活质量.结论 接受抗病毒治疗的艾滋病患者生活质量偏低.为达到治疗目标.需通过综合干预提高患者服药依从性,同时应管理患者吸毒行为、机会性感染及药物不良反应,以改善患者生活质量.     

2014－2015年云南省文山州HIV-1毒株耐药基因变异研究

目的：了解2014－2015年云南省文山州免费抗病毒治疗获得性免疫缺陷综合征（简称艾滋病）感染者和艾滋病患者HIV-1基因型耐药发生情况及特点。方法收集文山州2014－2015年接受免费抗病毒治疗的艾滋病患者的临床及实验室资料,对抗病毒治疗持续6个月以上、病毒载量仍大于1000 copies／mL的患者进行基因型耐药检测,分析耐药发生情况及耐药毒株流行特点。结果2014－2015年共计176例艾滋病患者发生病毒学失败,共检测基因型耐药176人次,获得可用序列137条。该人群中耐药发生率为62．0％（85／137）。在使用过的药物中,对奈韦拉平（NVP）、依非韦仑（EFV）高度耐药的有62（45．3％）、50（36．5％）;对拉米夫定（3TC）、替诺福韦（TDF）、司他夫定（D4T）、齐多夫定（AZT）高度耐药的情况分别是31（22．6％）、12（8．8％）、8（5．8％）、2（1．5％）,对蛋白酶抑制剂（PI）没有出现高度耐药的情况。耐药突变与PI 相关的主要耐药基因突变位点有3例,占2．2％（3／137）;M46IM、T74S和L33I各1例。与核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）相关的突变中,突变位点发生频率最高的是 M184V／I,为23．4％（32／137）。与非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）的突变中,突变位点发生频率最高的是K103N／S,为27％（34／137）。137条完整基因序列中,主要为 CRF08 BC 亚型,共67例（48．9％）;其次是 CRF01 AE 亚型,共49例（35．8％）;CRF07 BC亚型有6例（4．4％）;另外还有15例（10．9％）URFs。结论当前文山州的耐药发生率在增加,毒株正变得复杂化,重组毒株在逐渐增加,应加强监测,防止耐药毒株的传播。     

高效联合抗逆转录病毒治疗服药依从性评价方法的研究进展

高效联合抗逆转录病毒治疗(Highly Active Antiretroviral Therapy,HAART)能够有效抑制HIV病毒复制,减少艾滋病的发病率、病死率,以及降低整体的卫生保健费用[1]。然而,抗病毒治疗效果的发挥需要患者的服药依从性达到一定的水平,一般认为需要高于95%[2-3]。随着依从性的下降,HIV病毒载量升高、疾病进展[4]、病毒耐药[5]和感染他人[6]的风险随之增高。服药依从性是反映抗病毒治疗效果的重要评价指标[7],准确评价患者的依从性水平能够为抗病毒治疗的管理提供重要的参考依据。目前,可以用于评价抗病毒治疗服药依从性的方法较多,但还没有所谓的"金标准"[8]。     

某地区2009～2014年抗病毒治疗AIDS患者HIV-1病毒载量分析

目的：了解临沧地区2009～2014年接受高效抗逆转录病毒治疗（HAART ）的获得性免疫缺乏综合征（AIDS）患者的人类免疫缺陷病毒（HIV）‐1病毒载量的变化情况及病毒学治疗效果。方法监测云南省临沧地区2009～2014年接受 HAART的AIDS患者血浆HIV‐1病毒载量,对监测结果进行分析。若患者接受治疗后病毒载量仍大于1000 copy／mL则为治疗失败。结果病毒学治疗失败率为14．34％（1935／13491）;儿童组病毒学治疗失败率为15．53％（50／322）,成人组失败率为14．31％（1885／13169）,成人组与儿童组病毒学失败率差异无统计学意义（χ2＝0．38,P＞0．05）;男性病毒学治疗失败率为16．34％（1156／7076）,女性失败率为12．14％（779／6415）,男性与女性病毒学失败率比较差异有统计学意义（χ2＝48．16,P＜0．01）。结论HAART能明显延缓AIDS患者的疾病进程,提高生存质量。     

护理干预对艾滋病高效抗逆转录病毒治疗患者生活质量的影响

目的探讨综合护理干预对艾滋病高效抗逆转录病毒治疗（HAART）患者生活质量的影响。方法将120例HAART患者按随机数字表法随机分为对照组60例和观察组60例,对照组给予常规护理,观察组在此基础上给予综合护理措施,采用HIV／AIDS生存质量表（HIV／AIDSQOL-46）调查两组患者的生存质量。比较两组患者乳酸酸中毒等药物严重不良反应的发生与生活质量改善情况。结果观察组患者HAART期间不良反应发生率（16．6％）明显低于对照组（33．3％）,两组比较差异有统计学意义（x2=11．368,P〈0．05）;观察组生存质量总评分（138．25±14．13）分优于对照组（67．38±10．69）分,两组比较差异有统计学意义（Z=-6．736,P〈0．05）。结论综合护理干预可有效减少HAART患者乳酸酸中毒等严重不良反应的发生,有利于抗病毒治疗的顺利进行,从而提高艾滋病患者生活质量。     

HCV RNA对HIV合并HCV感染者高效抗逆转录病毒治疗的影响

目的 探讨HCV RNA对HIV和HCV合并感染者接受高效抗反转录病毒治疗(highlyactive antiretroviral therapy,HA.ART)后疗效、肝脏功能和血脂的影响.方法 招募我国河南既往有偿供血人群中接受HAART治疗的HIV/HCV合并感染者275例,每6个月随访一次,定期检测HCVRNA、HIV RNA、CD+4T淋巴细胞计数、肝脏功能指标和血脂等实验室指标,采用卡方检验、成组设计秩和检验比较HCV RNA阳性组和HCV RNA阴性组HAART治疗后HIV病毒抑制率、免疫学应答、肝损伤和血脂的差异.结果 HAART治疗6月以上患者中,HCV RNA阳性组和HCV RNA阴性组HIV完全抑制率差异无统计学意义(45.6%vs.38.5%,x2=1.150,P>0.05);HAART治疗前(286个/μ1 vs.209个/μ1,z=0.734,P=0.463)、治疗后6个月(310个/μ1 vs.362个/μ1,z=0.562,P=0.574)、12个月(378个/μl vs.289个/μ1,Z=1.091,P=0.275)、18个月(363个/μ1 vs.288个/μ1,z=1.435,P=0.151)、24个月(413个/μ1 vs.348个/μ1,z=0.939,P=0.348)CD+4;T淋巴细胞计数在HCV RNA阳性组和HCV RNA阴性组间差异无统计学意义.HCV HNA阳性组血清ALT(55.0 U/L vs 29.5 U/L,Z=6.789,P<0.01)、AST(46.0 U/L vs.33.0 U/L,Z=4.890,P<0.01)、TBIL(9.3 mmol/L vs.7.2 mmol/L,z=3.748,P<0.01)水平显著高于HCV RNA阴性组;HCV RNA阳性组HAART治疗后发生肝损伤的风险显著高于HCV RNA阴性组(调整后优势比aOR=3.8,P<0.01).HIV/HCV合并感染者HCV RNA阳性组TG水平显著低于HCV RNA阴性组(1.2 mmol/Lvs.1.4 mol/L,Z=1.936,P=0.043)、而HDL-C水平显著高于HCV RNA阴性组(1.5 mmol/L vs.1.3 mmol/L,z=2.251,P=0.024).结论 HCV RNA对HIV/HCV合并感染者HAART治疗后HIV病毒抑制率无影响,亦不影响HAART治疗后CD+4淋巴细胞的恢复;HCV RNA是HIV/HCV合并感染者HAART治疗后肝损伤的独立危险因素,但可能减轻HAART治疗引起的血脂异常.     

联合高效抗逆转录病毒治疗艾滋病发生不良反应的护理

目的 :提高对联合高效抗逆转录病毒治疗所致不良反应及其护理重要性的认识。方法 :对在本院接受联合高效抗逆转录病毒治疗的 1 6例HIV/AIDS患者的不良反应及其护理效果进行分析。护理方法 :了解该药物的不良反应 ;严密观察病情 ,制定行之有效的护理措施 ,坚持科学合理的服药方法和科学的饮食方法 ,建立良好的护患关系并给予有效的心理支持。结果 :通过有效的护理方法 ,患者因药物所致的不良反应明显减少。结论 :行之有效护理措施 ,科学的服药方法和饮食方法 ,良好的护患关系能明显减少抗病毒药物不良反应的发生     

逆转录聚合酶链反应在艾滋病患者HIV-1毒株env基因的序列测定和亚型分析中的应用

目的 了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况，及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法 采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增，并对扩增片段进行序列测定和分析，同时检测其CD4^ 细胞计数与血浆病毒载量。结果 基因系统树显示深圳地区26例艾滋病患者的HIV-1毒株env基因序列，B亚型12例，其中1例与欧美B亚型序列十分接近，11例与中国云南B亚型序列十分接近；循环重组亚型AE(CRFD1-AE)13例，均与泰国AE亚型序列十分接近。比较B、AE亚型感染患者的CD4细胞计数与病毒载量之间的差异无统计学意义。结论 深圳地区艾滋病患者中以HIV-1毒株以B亚型和循环重组亚型AE最常见，尚未观察到B、AE亚型对艾滋病进展的影响。     

Validation of a quantitative RNA PCR assay for HIV-1 in human plasma

A quantitative human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) RNA polymerase chain reaction assay has been validated analytically and clinically in > 13,000 samples. The assay is highly reproducible with intra- and inter-assay precision of 16% and 19%, respectively. In 1,542 of 1,548 subjects with CD4⁺ counts of 0–500 cells per mm³, viral RNA levels were quantifiable and ranged from ∼ 3,000–52,200,000 copies per milliliter. Median plasma HIV-1 RNA values were inversely proportional to CD4⁺ counts from 0–400 cells per mm³. When patients were off antiretroviral therapies for ∼ 14 days prior to the initial baseline RNA PCR evaluation, the mean variance between the two baseline values was 23% (0.1 log). Of these patients, 95% had a sufficient plasma viral load to quantitate a 10-fold (1 log) diminution in viral load caused by antiviral therapy. In contrast, only 20% and 45% of these subjects had sufficient p24 and ICD p24 levels to detect a 50% diminution in circulating virus. The high precision and reproducibility of this quantitative RNA PCR assay provide an enhanced means of evaluating therapeutic drug regimens for HIV-1. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

消化道症状儿童白细胞介素-1基因簇多态性与幽门螺杆菌感染的研究

目的 分析探讨儿童白细胞介素-1(IL-1)基因簇多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染间的相关性.方法 随机选取128例消化道疾病患儿的胃黏膜标本.IL-1B-31,IL-18-511 SNP位点多态性使用实时定量聚合酶链(real-time PCR) 双色荧光探针法检测,IL-IRN的可变重复序列使用传统PCR方法检测.Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用Real-time PCR检测,用PCR扩增另-高毒力基因cagA羧基端EPIYA基因序列所在区,然后测序确定其亚型.结果 所研究的患儿中IL-1B-31T与IL-1B-511C完全连锁.未检测到H.pylori及其高毒力亚型感染与IL-1-511/-31SNP及IL-1RN基因多态性之间的相关性.结论 IL-1基因簇多态性不是广州地区儿童H.pylori感染的独立影响因素,它可能与其他因素共同影响着儿童H.pylori的感染.     

北京市一例HIV-1 CRFl5_01B亚型类似毒株的鉴定

目的 通过对一例HIV-1毒株env、gag和pol基因的序列分析,表明HIV-1 CRF15_01B亚型类似毒株已在北京市出现.方法 从一例在北京居住的四川籍女性HIV-l感染者(BJ06108,通过性途径感染)血浆中提取病毒RNA,使用套式PCR方法扩增env、gag和pol基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 病例BJ06108在env、gag和pol基因区与CRF15_01B亚型参考株1501B.TH.99.99TH_MU2079基因离散率较近,基因离散率分别为8.8%、6.1%和7.2%.系统进化树分析表明BJ06108与CRF15_01B亚型参考株1501B.TH.99.99TH_MU2079聚在一起.结论 CRF15_01B亚型类似毒株已在北京市出现,应该加强HIV-1毒株亚型变异的监测.     

Hugl-1基因在人大肠癌组织中的表达及其对LS174细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究Hugl-1基因在人大肠癌组织中的表达及其与临床病理的相关性,探讨外源Hugl-1基因转染对大肠癌LS174细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用RT-PCR及Western-blot法检测人大肠癌组织及相应癌旁正常组织中mRNA和蛋白质的表达水平。以成功构建的分别能稳定表达外源pcDNA3.0-Hugl-1、空载体pcDNA3.0的大肠癌细胞系和未转染的LS174细胞为研究对象,通过软琼脂集落形成、划痕修复、细胞黏附和Transwell细胞侵袭等一系列细胞学功能实验,观察稳定转染细胞株Hugl-1的表达差异对肿瘤细胞增殖、黏附、运动和侵袭的影响。结果 Hugl-1基因在大肠癌组织中表达下调或缺失,表达水平低于癌旁正常组织。Hugl-1表达降低与肿瘤分期及淋巴结转移相关。RT-PCR、Western-blot显示重组体pcDNA3.0-Hugl-1转染细胞株中目的基因Hugl-1在mRNA和蛋白质水平上表达均较空载体转染细胞株和未转染细胞株增强（P〈0.05）;对转染前后的细胞观察表明,重组体转染组细胞增殖能力无明显改变,但是其迁移运动和侵袭能力降低,细胞黏附能力增加。结论研究表明,Hugl-1表达下调与大肠癌的发生发展有关,Hugl-1基因表达下调可能使肿瘤细胞的结构稳定性丧失,促使肿瘤细胞扩散。     

治疗前血浆和全血干血斑样品HIV-1 Pol区基因型耐药检测结果比较

目的 比较治疗前静脉血浆和全血干血斑(DBS)人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)Pol区基因型耐药检测结果的差异,并分析DBS样品用于HIV-1基因型耐药检测的可行性.方法 采集44例HIV-1感染者治疗前静脉全血,分别制备全血DBS样品和血浆样品,提取RNA,检测病毒载量.采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增Pol区...