实时聚合酶链反应检测切割穹窿海马伞大鼠海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白mRNA的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）mRNA的表达差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹隆海马伞后1、3、7、14、21及28d组,每组6只。提取各组大鼠的海马组织总RNA,应用实时PCR技术观察切割穹窿海马伞后海马中PEBPmRNA的表达变化。结果PEBPmRNA在切割后3d表达开始上升,7d达最高水平,随后缓慢下降,21d时降至正常。结论切割穹窿海马伞后海马中PEBP的高表达可能与诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化的海马神经再生有关。     

RT-PCR/Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4 mRNA的表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异。方法:42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹窿海马伞后1、3、7、14、21及28d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用RT-PCR/Southern杂交方法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA的表达变化。结果:海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3d开始升高,14d达到最高水平,随后下降,28d左右恢复至正常水平。结论:切割穹窿海马伞后海马内Brn-4mRNA表达明显上调,可能与促进海马内移植的或自体的神经干细胞向神经元分化有关。     

切割穹窿海马伞后大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较

目的:比较切割穹窿海马伞后大鼠海马与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱的差异,为研究切割穹窿海马伞后大鼠海马的神经再生内环境提供实验依据。方法:制作切割双侧穹窿海马伞大鼠动物模型,术后7 d分别取切割穹窿海马伞后大鼠和正常大鼠海马组织,提取总蛋白,进行双向电泳,比较切割穹窿海马伞后大鼠与正常大鼠海马组织的蛋白质表达差异。结果:通过双向电泳软件分析,切割穹窿海马伞后大鼠海马和正常大鼠海马组织双向电泳图谱经匹配比对后发现有7个蛋白点仅在切割穹窿海马伞海马蛋白双向电泳图谱中表达,35个蛋白在两组大鼠海马组织中含量发生了2倍以上的变化,其中切割穹窿海马伞大鼠组上调31个,下调4个。结论:初步建立了切割海马伞大鼠海马比较蛋白质组学的技术方法;切割穹窿海马伞后7 d大鼠海马与正常海马蛋白表达存在明显差异,差异点的发现为今后进一步深入研究切割穹窿海马伞后大鼠海马的神经再生机制提供了实验依据。     

切割穹窿海马伞后大鼠与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱比较

目的：比较切割穹窿海马伞后大鼠海马与正常大鼠海马蛋白质组双向电泳图谱的差异,为研究切割穹窿海马伞后大鼠海马的神经再生内环境提供实验依据。方法：制作切割双侧穹窿海马伞大鼠动物模型,术后7 d分别取切割穹窿海马伞后大鼠和正常大鼠海马组织,提取总蛋白,进行双向电泳,比较切割穹窿海马伞后大鼠与正常大鼠海马组织的蛋白质表达差异。结果：通过双向电泳软件分析,切割穹窿海马伞后大鼠海马和正常大鼠海马组织双向电泳图谱经匹配比对后发现有7个蛋白点仅在切割穹窿海马伞海马蛋白双向电泳图谱中表达,35个蛋白在两组大鼠海马组织中含量发生了2倍以上的变化,其中切割穹窿海马伞大鼠组上调31个,下调4个。结论：初步建立了切割海马伞大鼠海马比较蛋白质组学的技术方法;切割穹窿海马伞后7 d大鼠海马与正常海马蛋白表达存在明显差异,差异点的发现为今后进一步深入研究切割穹窿海马伞后大鼠海马的神经再生机制提供了实验依据。     

原位杂交法检测切割穹窿海马伞大鼠海马中PEBP mRNA的表达

目的：探讨切割穹窿海马伞侧大鼠海马与正常侧海马中PEBP mRNA的表达差异。方法：取6只大鼠,于切割右侧穹窿海马伞后第7d,应用寡核苷酸探针原位杂交技术观察PEBP mRNA在切割侧和正常侧海马中的表达差异。结果：切割侧锥体细胞层和齿状回颗粒层PEBP mRNA阳性细胞数量与正常侧比较无明显差异（P〉0.05）,但切割侧的杂交信号强于正常侧（P〈0.05）;而在齿状回门区和颗粒下层,切割侧PEBP mRNA阳性细胞数量多于正常侧,杂交信号也强于正常侧（P〈0.05）。结论：结合本课题组以往的工作,切割穹窿海马伞后海马内PEBP mRNA的表达上调,可能与海马内神经干细胞向胆碱能神经元的分化有关。     

去神经支配大鼠海马内MTSS1蛋白的表达变化

目的：探讨切割穹窿海马伞去神经支配大鼠海马内（metastasis suppressor 1,MTSS1）蛋白的表达变化.方法：SD大鼠随机分成正常组和切割穹窿海马伞后1、3、5、7、14 d组,采用Western Blot法检测穹窿海马伞切割后海马内MTSS1蛋白表达水平的变化.结果：海马内MTSS1蛋白的相对表达量在切割后1 d开始升高（P〈0.05）,3 d继续升高（P〈0.01）,5 d达到最高水平（P〈0.01）,7 d开始下降（P〈0.01）,14 d时基本恢复至正常水平（P〉0.05）.结论：切割穹窿海马伞去神经支配后海马内MTSS1蛋白表达水平明显上调,可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元的分化有关.     

穹窿海马伞切割后海马内NSCs的增殖和向神经元的分化

目的观察切割穹窿海马伞侧和非切割侧大鼠海马内自体神经干细胞的增殖和向神经元分化的情况。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,术后2 d腹腔注射BrdU,连续5d,于术后28 d取脑冰冻切片,进行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测。结果切割穹窿海马伞侧海马内的BrdU免疫荧光阳性细胞明显多于非切割侧,且发现有BrdU/NF-200双标神经元,而非切割侧未见到BrdU/NF-200双标神经元。结论穹窿海马伞切割后,切割侧海马内自体神经干细胞增殖加快,并可向神经元分化。     

穹隆-海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶表达的影响

①目的　观察穹隆 海马伞切断对大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶 (ChAT)表达的影响 ,探讨与学习、记忆相关的机制。②方法　成年健康雌性Wistar大鼠 ,随机分为穹隆 海马伞切断模型组和假手术组 ,各 5只。在脑立体定位仪上切断双侧穹窿 海马伞 ,建立动物模型。假手术组除不切断海马伞外 ,其余步骤同模型组。ChAT免疫细胞化学染色。观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化。③结果　假手术组大脑各观察区有基础水平的ChAT表达。模型组大脑海马CA1区皮质、大脑皮质区、杏仁复合体区以及Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少 ,与假手术组比较差异有显著性 (t =7.713～17.16 6 ,P <0 .0 1)。④结论　穹隆 海马伞切断大鼠脑内多部位ChAT表达减少可能是学习、记忆障碍原因之一。     

海马放射状胶质细胞体外诱导激活后的PEBP mRNA表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞侧海马提取液对海马放射状胶质细胞中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)mRNA表达的影响。方法:将培养的海马胶质细胞接种于培养板中,分成诱导组和对照组,诱导组中加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM/F12培养液,对照组加入单纯的细胞培养液。培养7d后,提取总RNA,然后逆转录合成cDNA,用real-timePCR观察诱导组及切割组中PEBPmRNA的表达情况。结果:PEBPmRNA在放射状胶质细胞中能够表达,诱导组的表达比对照组明显增加(P<0.05)。结论:表达增加的PEBPmRNA可能与切割侧海马提取液"激活"的放射状胶质细胞向胆碱能神经元分化有关。     

切割穹隆海马伞后大鼠海马中83ku差异蛋白的质谱分析

目的: 探讨切割穹隆海马伞海马中具有诱导神经干细胞向神经元分化生物活性的83 ku差异蛋白的组成成分及其功能. 方法: 切割SD大鼠穹隆海马伞后14 d海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE),应用电喷雾质谱分析、蛋白质数据库和文献分析等方法对83 ku差异蛋白进行检测和功能分析. 结果: 质谱分析找到了17组肽段,这些蛋白按照其功能可以分为:细胞骨架蛋白、参与代谢的酶、信号传递、蛋白降解、氧化应激、神经递质运输、突触形成、功能未知蛋白.结论: 切割穹隆海马伞海马83 ku差异蛋白可以通过参与Rho信号通路,调控神经干细胞向神经元分化.     

环孢素对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用

目的:通过观察应用环孢素对大鼠坐骨神经切断后脊髓前角运动神经元GAP-43mRNA的表达,研究环孢素对脊髓前角运动神经元的影响。方法:60只大鼠随机分为实验组和对照组,实验组进行环孢素干预,在3、7、14、21、28天,5个不同的时相点各从实验组和对照组中随机抽取6只大鼠,取下脊髓T12-L1节段,脊髓前角GAP-43mRNA的表达用荧光定量RT-PCR检测。结果:对照组GAP-43mRNA第3日呈低表达,第7天表达量增加,第14天表达量达到高峰,第21天表达量下降,第28天表达量接近第3天水平。实验组第3、7和14天表达量与对照组相似,第21和28天表达量较对照组有所提高,经统计学处理,第3、7和14天实验组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05),第21天和28天实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用环孢素对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元有一定的保护作用,可延缓神经元的退变。     

早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

超声乳化及囊外摘除人工晶体植入术后房水中白细胞介素8和钙离子的变化

目的:判断超声乳化及囊外摘除人工晶体植入术后炎症反应程度.方法:将30只青紫蓝家兔随机分3组,即晶状体超声乳化人工晶体植入术组、晶状体囊外摘除人工晶体植入术组和正常对照组.于术后1、3、7、14和28 d抽取房水;测定钙离子、IL-8.在术后第28天,取出植入的人工晶体,HE染色后进行病理学分析.结果:与正常对照组比较,手术两组术后房水中IL-8含量在1、3、7和14 d均升高(P<0.05),在术后第3天达到高峰(P<0.01),28 d恢复正常(P>0.05);但晶状体超声乳化人工晶体植入术组房水中IL-8含量在术后第1、3和7天明显低于晶状体囊外摘除人工晶体植入术组(P<0.05);与正常对照组比较,手术两组房水中钙离子浓度在1、3、7 d均降低(P<0.05),在术后第3天钙离子浓度最低(P<0.01),28 d基本恢复正常(P>0.05);钙离子浓度在晶状体超声乳化人工晶体植入术组与晶状体囊外摘除人工晶体植入术组比较差异无显著性(P>0.05).术后第28天植入晶体的病理检查结果显示:晶体表面附着一些吞噬细胞;晶状体超声乳化人工晶体植入术组比晶状体囊外摘除人工晶体植入术组吞噬细胞数明显减少.结论:IL-8、Ca2+参与人工晶体植入术后眼内炎症反应;晶状体超声乳化人工晶体植入术炎症反应较轻.     

穹隆-海马伞切断对大鼠脑内TrkA表达的影响

①目的　探讨穹隆 海马伞切断对大鼠脑内不同部位神经生长因子受体TrkA表达的影响及临床意义。②方法　成年健康雌性Wistar大鼠 10只 ,随机分为穹隆 海马伞切断模型组和假手术组。两组大鼠均常规取海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位脑组织与假手术组比较TrkA阳性细胞表达情况。③结果　假手术组大脑各观察区有基础水平的TrkA表达。模型组大脑海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区以及Meynert核区TrkA阳性细胞数明显减少 (t=3.94 4～ 8.4 4 2 ,P <0 .0 5 )。 ④结论　穹隆 海马伞切断可致大鼠脑内多部位TrkA表达减少 ,其可能是导致认知和情绪损伤的原因之一。     

生长因子-1诱骗寡核苷酸对大鼠颈总动脉球囊损伤后血小板源性生长因子-BB表达的影响

目的探讨针对早期生长反应因子-1（Egr-1）的诱骗性寡脱氧核苷酸（decoy ODN）对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制。方法制备大鼠颈动脉球囊损伤模型,将96只Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯损伤组、杂码寡脱氧核苷酸（SCR）组和治疗组,每组24只。术后3、7、14、21 d处死动物,每组6只。应用HE染色、Real time RT-PCR和Western blot方法观察大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生情况、Egr-1和血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）的表达及Egr-1 decoy ODN对它们的影响。结果①内皮损伤后3 d内膜增厚不明显,7 d内膜开始增厚,14、21 d时内膜明显增厚。②Egr-1 mRNA和蛋白水平于术后3 d开始升高,21 d时达到顶峰,而PDGF-BB的mRNA和蛋白水平均于3 d开始升高,14 d时达到顶峰。③转染Egr-1 decoy ODN治疗后,在各个时间点内膜增厚程度减轻,与对照组比较,Egr-1和PDGF-BB表达明显减少,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 Egr-1 decoy ODN可能是通过特异性抑制Egr-1的表达,进而抑制PDGF-BB的表达,达到减轻新生内膜厚度、从而减轻血管损伤后内膜增生的目的。