载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

载脂蛋白E基因敲除小鼠是目前在动脉粥样硬化 (AS)研究领域中应用最多的基因工程动物。参考国内外应用载脂蛋白E基因敲除小鼠研究AS的有关文献 ,就其AS病灶形成的规律及形态学改变 ,有氧运动和饮食对该小鼠AS病灶的影响 ,关于调脂药物和其它药物研究情况 ,骨髓移植和基因治疗对该种小鼠AS病灶的影响等方面作一综述 ,以期将这种基因工程小鼠动物模型更广泛地应用于中西医药研究     

载脂蛋白E基因敲除小鼠心肌微动脉内"微病灶”与外膜炎症

载脂蛋白E基因敲除小鼠心肌微动脉内“微病灶”与外膜炎症     

构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察

背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近,是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。 目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。 方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为2组,分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8,12,16,20,24周。 结果与结论：血清学指标检测显示,不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示,高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性,此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P < 0.05),小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明,实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠,此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

载脂蛋白E基因敲除鼠不同部位动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的 通过建立载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)动物模型,分析其不同部位AS病变的病理形态学特征.方法 用高脂高胆固醇饲料喂养载脂蛋白E基因敲除鼠,并行右颈总动脉套环术建立AS动物模型.连续石蜡切片,HE染色观察套环侧和未套环侧颈总动脉及主动脉粥样硬化病变,进行病变分型.结果 未套环侧颈总动脉未见病变,套环侧颈总动脉粥样硬化病变明显,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共14例;主动脉无病变的共8例,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共6例.结论 载脂蛋白E基因敲除鼠套环形成的AS病变严重且发生、发展迅速,主动脉自发形成的AS病变发展缓慢.     

脂欣康胶囊抗载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成作用

为观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化 (As)的影响 ,将 6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组 ,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉 ,模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃 14周后 ,用 10 %福尔马林灌注后 ,取主动脉做形态学观察及图像分析。结果表明 ,正常对照组主动脉壁正常 ,无As病灶。模型组动脉粥样硬化 (As)病变显著 ,多为粥样硬化期病灶 ,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变 ,也可见由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶。脂欣康组As病变较模型组明显减轻 ,多为早期粥样硬化 ,斑块面积显著小于模型组 ,P <0 .0 5。结果提示脂欣康有减轻ApoE基因敲除小鼠As的作用。     

小鼠胚胎干细胞药物代谢酶CYP3a11基因敲除的实验研究

目的研究小鼠胚胎干细胞药物代谢酶CYP3a11基因的敲除。方法根据已知小鼠的CYP3a11基因组DNA序列,从129品系小鼠E14胚胎干细胞基因组DNA中,通过PCR的方法分别获得用于构建基因敲除载体的0.65kb的5'-短臂(short arm,SA)和(3.3+4)kb的3'-长臂(long arm,LA)片段,通过常规分子克隆技术,构建完成针对小鼠药物代谢酶CYP3a11基因的替代型基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO,并对载体进行酶切鉴定。将线性化的pCR-CYP3a11_KO载体通过电穿孔技术转入E14胚胎干细胞。G418药物筛选4～6周直至克隆形成,用PCR和Southern blot技术对筛选出的细胞克隆进行鉴定。结果酶切结果表明基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO DNA序列正确;转染后的E14胚胎干细胞经过G418筛选后,存活的细胞可形成单克隆集落,经过PCR和Southern blot技术鉴定,其中有5个单克隆被证实CYP3a11基因已被敲除。结论成功构建了小鼠CYP3a11基因敲除载体,并在小鼠E14胚胎干细胞的CYP3a11基因敲除中获得阳性克隆。     

扫描电镜观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化主动脉内膜超微结构的影响

为观察扫描电镜下脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(As)主动脉内膜超微结构的影响，随机将6周龄ApoE基因敲除小鼠分为模型组与脂欣康组，以有相同遗传背景的同龄正常C57BL／6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康粉剂，模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃14周后，取新鲜的主动脉用2．5％戊二醛固定，扫描电镜观察并拍照。结果表明，模型组主动脉内膜病变显著且多样化，脂欣康组对主动脉内膜超微结构有良好的修复和保护作用。     

清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠脂质代谢的影响

目的:鉴定清道夫受体AⅠ/Ⅱ(SR-AⅠ/Ⅱ)基因敲除小鼠, 观察SR-AⅠ/Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法:应用SR-AⅠ/ⅡcDNA基因部分序列作探针, 用Southernblot方法检测SR-AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲除结果, 用生化分析仪检测血脂、载脂蛋白和血肌酐, 观察SR-AⅠ/Ⅱ基因敲除和未敲除小鼠分别在普通饮食和高脂饮食情况下脂质代谢的改变情况。结果:SR-AⅠ/Ⅱ基因敲除后小鼠的低密度脂蛋白(LDL)、体重较正常对照小鼠明显增高(P<005), 出现了脂质代谢严重失衡, 在高脂饮食情况下这种失衡更为明显, 体重、LDL的升高幅度均大于对照组(P<0.01).结论:SR-AⅠ/Ⅱ参与对组织和循环中的LDL的摄取和清除, 有利于保持机体脂质代谢的正常调节。小鼠SR-AⅠ/Ⅱ基因敲除后脂质代谢发生了明显紊乱, 机体对脂质代谢的调节功能减弱。     

IL-31RA基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的本研究通过构建IL-31RA基因敲除小鼠模型及哮喘模型,观察该基因敲除对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法采用OVA建立小鼠哮喘模型,于末次激发后取肺组织HE染色及甲苯胺蓝染色观察肺部炎症细胞浸润和肥大细胞增生情况,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测血浆中总Ig E、IFN-γ、IL-4水平。结果成功构建IL-31RA基因敲除小鼠模型及哮喘模型,哮喘小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比和血浆中Ig E水平明显增多,基因敲除哮喘小鼠较野生型哮喘小鼠增多更明显。哮喘小鼠肺组织病理切片EOS、肥大细胞浸润,基因敲除小鼠较野生型小鼠EOS、肥大细胞浸润增多。哮喘小鼠血浆中Th2类细胞因子IL-4水平明显高于正常对照组,Th1类细胞因子IFN-γ水平明显低于对照组,且基因敲除哮喘小鼠IL-4水平较野生型哮喘小鼠增高。结论 IL-31受体A信号可抑制哮喘小鼠气道的炎症反应。     

情志刺激加速小鼠动脉硬化进展与SDF-1/CXCR4失衡的相关性研究

目的:通过观察情志刺激对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠血浆、血小板、主动脉、海马及骨髓组织中基质细胞衍生因子1(SDF-1)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响,揭示情志刺激加重动脉粥样硬化斑块易损性的可能机制.方法:30只8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为正常对照组、高脂组和情志刺激模型组,每组...     

载脂蛋白E基因敲除小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的研究

目的：研究载脂蛋白E基因敲除( apoE-/-)小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的分布和组成；探讨病灶发生和发展的机理。方法：取60周龄和112周龄的apoE-/-小鼠心脏作连续切片，从冠状动脉在主动脉开口处连续追踪冠状动脉主干和心肌内冠状动脉小分支，行Movat特殊染色，寻找病灶。根据组织切片数计算病灶离冠状动脉开口处的距离和病灶的长度；根据病灶的长度将病灶分为大、中、小3类病灶；用图像分析仪测量血管口径；根据Movat染色结果观察病灶内组成成分。结果：在apoE-/-小鼠冠状动脉内发现从主动脉内直接延续的延伸病灶和在冠状动脉分支内形成的原位病灶；在60周龄和112周龄小鼠冠状动脉延伸病灶的发生率分别为60%和80%；有延伸病灶的冠状动脉外膜有大量炎性细胞浸润。每只apoE-/-小鼠均有原位病灶；原位病灶多发生在左室壁心肌内血管分支处和乳头肌附近；随着原位病灶增大，蛋白聚糖成分减少，细胞内外脂质成分增多；增大的原位病灶可堵塞小血管；在有原位病灶的冠状动脉外膜常可发现有增多的炎性细胞。112周龄apoE-/-小鼠大原位病灶多于60周龄小鼠 (P＜0.05)。结论：apoE-/-小鼠冠状动脉主干和心肌小分支内分别存在着延伸和原位的粥样硬化病灶，随着小鼠周龄增加，病灶增大。动脉外膜炎症和心肌收缩对血管的挤压与病灶的发生和发展有密切关系。     

建立载脂蛋白E基因敲除小鼠骨髓髓源性生长因子缺失模型及鉴定

背景:目前关于髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,MYDGF)与动脉粥样硬化及代谢性疾病的研究较少,因此建立一种载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)敲除骨髓MYDGF缺失的小鼠模型对于研究MYDGF与动脉粥样硬化疾病的关系尤为重要。目的:建立ApoE敲除骨髓MYDGF特异性缺失小鼠模型并进行鉴定。方法:ApoE敲除小鼠和骨髓特异性MYDGF敲除小鼠,均购于上海南方模式生物科技股份有限公司。选取5只ApoE敲除小鼠与10只骨髓特异性MYDGF敲除小鼠进行交配,得到基因型为MYDGF^flox/+ApoE^flox/+F1子代小鼠30只,MYDGF^flox/+ApoE^flox/+互相进行交配,一共得到基因型为MYDG F^flox/floxApoE^flox/flox双敲除小鼠30只和ApoE^flox/flox小鼠子代小鼠34只。采用PCR法进行MYDGF^flox及...     

载脂蛋白E基因变异和转基因研究

载脂蛋白apoE为脂蛋白受体的配体，涉及胆固醇C输入和排出的平衡，apoE包含与受体结合的-NH2区段和与脂蛋白结合的-COOH区段。人apoE基因位于19q13，有3个等位基因。apoE变异体与受体结合有缺陷。在高C食料下，apoE变异转基因小鼠易发动脉粥样硬化AS病变。apoEKO小鼠内源apoE基因遭到破坏，不能表达。即使在普通低C食料下，此等小鼠发生AS病变。用于防护AS试验。     

下丘脑-垂体-性腺轴在FKBP12.6缺失介导的性别差异性心肌肥大发生发展过程中的作用及其分子机制

<正>目的:我们的前期研究发现,敲除FKBP12.6基因可导致成年雄性小鼠心肌肥大。本研究旨在探讨FKBP12.6缺失导致性别差异性心肌肥大的分子机制。方法:手术摘除FKBP12.6基因敲除小鼠睾丸以观察对心肌肥大的影响;放射性免疫检测法(RIA)和ELISA法检测FKBP12.6敲除小鼠17β-estradiol(E2)、testosterone(T)、LHβ和FSHβ分泌变化情况;建立垂体神     

脂联素通过减轻氧化应激治疗动脉粥样硬化的研究

观察不同滴度的脂联素腺病毒载体对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型的影响,以探讨脂联素抗动脉粥样硬化（AS）是否与减轻氧化应激有关。将48只健康成年12周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为4组,对照组,模型组,低剂量脂联素组,高剂量脂联素组。对照组给予正常饮食8周;模型组给予高脂饮食8周;低剂量脂联素组每两周经尾静脉注射脂联素腺病毒载体1．0×108p．f．u,实验期间高脂饮食;高剂量脂联素组每两周经尾静脉注射脂联素腺病毒载体5．0×108p．f．u．实验期间高脂饮食。实验结束后,摘眼球采血取血清,测定总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白（LDL-C）,高密度脂蛋白（HDL-C）,以及血清脂联素（APN）含量,超氧化物歧化酶（SOD）活性,丙二醛（,MDA）含量,取小鼠主动脉血管。实时荧光定量扩增法（RT-PCR）测定小鼠主动脉血管APN,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达。与模型组比较,外源性的脂联素降低了血清TG,TC,LDL-C,MDA的含量,血清SOD活性增加,上调动脉血管中APN和eNOS的表达。AS损伤面积明显减少,分别降低了26％和31％（P＜0．05）,脂纹区的脂滴直径降低极显著（P＜0．01）,随着APN剂量的增加,AS损伤逐步减轻,但是低剂量脂联素组和高剂量脂联素组的差异没有统计学意义。减轻氧化应激是脂联素抑制动脉粥样硬化的一种保护机制和途径。     

促性腺激素对小鼠卵巢透明质酸和间α胰蛋白酶抑制剂表达的影响

目的:观察促性腺激素对野生型和bikunin基因敲除小鼠卵巢透明质酸(HA)和间α胰蛋白酶抑制剂(ITI)表达的影响。方法:应用免疫组织化学法检测激素诱导后HA和ITI在野生型和bikunin基因敲除小鼠中的表达。结果:HA阳性表达分布于野生型和bikunin基因敲除小鼠卵巢,给予促性腺激泉后,其表达增强;在野生型小鼠卵泡周围ITI呈阳性表达,在bikunin基因敲除小鼠ITI表达不受影响。结论:HA和ITI在卵泡发育中起重要作用。     

FGFR2基因敲除小鼠模型的应用

FGFR2基因与人类多种疾病密切相关。随着小鼠遗传工程技术的发展,利用基因敲除、转基因小鼠模型来研究基因与人类疾病的关系,已成为人们研究的热点。本文综述了FGFR2基因敲除小鼠模型近年来的研究近展,对几种FGFR2相关的基因敲除小鼠模型进行了系统的分类归纳,讨论了其在组织器官发育和相关人类疾病机制研究中的应用,并展望了其发展前景。     

载脂蛋白E基因敲除模型小鼠转化生长因子β1表达与尼古丁的刺激

背景：研究表明尼古丁可以诱导动脉粥样硬化,但其具体作用机制尚不明确。 目的：探讨不同剂量尼古丁刺激下,载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样斑块形成与外周血转化生长因子β1水平的关系。 方法：载脂蛋白E基因敲除小鼠腹膜下注射2种不同剂量的尼古丁[2 mg/(kg•d)及0.5 mg/(kg•d)]12周,对照组注射等量生理盐水。用ELISA法检测外周血转化生长因子β1水平,苏木精-伊红染色观察动脉粥样斑块的病理变化。 结果与结论：尼古丁干预12周后,低剂量尼古丁组的外周血转化生长因子β1水平低于对照组(P < 0.05),高剂量尼古丁组的外周血转化生长因子β1水平低于对照组及低剂量尼古丁组(P < 0.05)。高剂量尼古丁组的血管狭窄程度最严重,低剂量尼古丁组次之,对照组最低,各组间比较差异均具有显著性意义(P < 0.05)。低剂量尼古丁组及高剂量尼古丁组的斑块个数多于对照组(P < 0.05),高剂量尼古丁组的斑块个数与低剂量尼古丁组比较差异无显著性意义 (P > 0.05);血管狭窄率与转化生长因子β1水平呈负相关(r=-0.920,P =0.000)。结果提示尼古丁刺激增加载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块数量,这种作用可能与尼古丁抑制转化生长因子β1水平相关。     

载脂蛋白E与癫痫的关系

载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)在中枢神经系统修复受损细胞膜、轴索生长和突触形成的过程中起重要作用.研究证明,在外伤、中毒、免疫应答以及痫性放电引起的脑部损伤的病灶组织中都存在载脂蛋白E表达的上调现象.载脂蛋白E的基因多态性和表达量与难治性癫痫的发生和发展有一定的相关性,提示载脂蛋白E的异常可能是难治性癫痫产生机制中的一个重要环节.     

基因打靶技术在构建人源体细胞基因敲除或敲入细胞系中的应用

基因打靶技术能够帮助人们认识某些动物个体或细胞表型异常的遗传基础，利用该技术构建的模式生物（例如基因敲除小鼠）已经广泛地应用于人类基因的研究，截至1999年就已经报道了800多个模式小鼠种系。同源重组介导的基因打靶技术（基因敲除或敲入）是判定基因功能的强有力工具。与基因敲除小鼠相比，人类体细胞基因敲除或敲入细胞系构建的报道相对较少，但该项技术在细胞水平上对某些人源基因参与的生化或生理途径的分析是不可替代的。基因打靶技术最常见的应用是通过使所有等位基因连续失活建立基因敲除细胞系；