高应力环境导致腰椎软骨终板蛋白聚糖含量改变

采用组织切片的计算机图像分析系技术，测量双后肢大鼠增龄过程中腰椎软骨终板蛋白聚糖（ＰＧ）的含量与分布。８月龄正常大鼠软骨终板外区浅层ＰＧ含量已呈下降趋势，而双后肢大鼠１２月龄组ＰＧ含量开始下降。在此以前，外区浅层ＰＧ含量随年龄增长而加大，尤以双后肢大鼠增加为著，４、８月龄组平均较正常大鼠组增加１７％。１、２月龄双后肢大鼠外区深层和内区ＰＧ含量明显小于对照组，但该差别在４月龄后即不明显。双后肢大鼠软骨终板的过度钙化可能与其ＰＧ含量减少有关。     

椎体软骨终板血管芽的形态学实验研究

目的：通过兔椎体软骨终板不同部位血管芽的形态学观察，揭示椎间盘营养供应途径的超微结构特点探讨其与渗透性的关系。方法：采用血管灌注ＡＢＳ制备兔腰椎体罗骨终板血管铸型标本，通过投射光显微及扫描电镜观察椎体终板不同部位血管芽的形态学变化，结果：终板血管在椎间盘髓部分分布密集在，在内层纤维环部位分布稀疏；科人血管呈树枝状形态，缠绕形成微血管襻，即血管芽；在终板的内层纤维环部位，血管形状呈简单的襻样结构，但     

皮层躯体感觉诱发电位在监测腰神经根损伤中作用的研究

目的：利用大鼠髓核突出动物模型。探索皮层躯体感觉诱发电位（CSEP）的波幅和潜伏期变化是否与神经根性疼痛有关系。方法：取大鼠自体尾部的髓核无压迫下放置在L4和L5神经根上，制成髓核突出动物模型。分别在术后3d,1,2及4周观察大鼠术侧肢体机械刺激敏感性和热刺激敏感性和热刺激敏感性的变化，并引出大鼠后肢CSEP，观察术侧肢体CSEP的变化。结果：在无明显机械压迫的情况下，大鼠腰神经根上植入自体髓核可产生痛觉过敏，CSEP波幅增高。结论：髓核自身是引起腰腿痛的重要原因，CSEP波幅的增高与神经根性疼痛有一定相关性。     

双后肢大鼠椎间盘退变动物模型的建立

目的　为椎间盘相关研究建立一种经济科学的椎间盘退变动物模型。方法　对 15 2只新生SD大鼠采用截除双前肢和特殊饲养的方法培育双后肢大鼠 ,以 10只正常同龄大鼠作为对照 ,18月龄时处死后通过光镜和电镜检查来观察两组大鼠L2～ 3 椎间盘的退变情况。结果　截除双前肢后 ,双后肢大鼠生长良好 ,术后 18个月存活 17只。光镜检查证实其椎间盘均发生了严重的髓核和纤维环退变。有 2例还出现了腰椎间盘突出。超微结构观察发现髓核中脊索细胞出现明显的退变和坏死 ,软骨样细胞中出现大量脂滴。基质中胶原纤维排列紊乱 ,出现大量板层样结构和团块。而正常大鼠的椎间盘仅发生轻度退变 ,胶原纤维排列整齐。结论　本造模方法简单经济、成功率高、重复性好 ,建立的双后肢大鼠模型符合人体椎间盘退变规律。     

椎体终板形态与椎间盘营养的关系

椎体终板是椎间盘的主要组成部分。以往研究表明 ,椎体终板对维持椎间盘营养和保护椎间盘形态起到重要作用 ,保持椎体终板有效的抗压作用是可以减少椎间盘退变的力学因素 ;椎间盘是人体最大的无血管组织 ,终板途径做为椎间盘营养的主要途径 ,其营养椎间盘的血管通路的多少及范围也直接影响到椎间盘营养供应。1　椎间盘与椎体终板的解剖椎间盘是由椎体终板、纤维环及髓核三部分组成的 ,椎间盘在出生时包含许多微血管 ,成人时则变为人体最大无血管结构 ,然而仍保持活跃的代谢 ,是椎体海绵质主要渗透及弥散部位。椎体终板位于椎体的上、下面的…     

软骨终板通透性对体外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响

目的:观察软骨终板营养通路通透性对外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响。方法:4周龄雄性SD大鼠20只,处死后立即手术切取腰段椎间盘(包括邻近的软骨终板),每只6个,随机分为A、B、C 3组,其中A组为正常对照组,B组用骨蜡封闭上软骨终板,C组用骨蜡封闭上、下软骨终板,3组椎间盘在体外进行整体器官培养。于培养前和培养7d、14d时,分别用Mitotracker Green荧光探针和RT-PCR方法评估椎间盘髓核细胞的活力和髓核Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达;于培养前和培养14d时用免疫组化方法观察髓核蛋白多糖、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达。结果:取材后培养前髓核细胞的荧光强度最高;在体外培养7d,3组髓核细胞的荧光强度较培养前变化均不明显,3组之间无显著性差异(P>0.05);培养14d时A、B、C组荧光强度较培养前分别降低约19%、22%和30%,与培养前比较差异均有显著性(P<0.05),其中C组与A、B两组比较有显著性差异(P<0.05),A、B两组比较差异无显著性(P>0.05)。免疫组织化学观察显示在培养14d时3组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的染色强度与培养前比较均有所降低,MMP-3阳性染色增加,蛋白多糖、Ⅱ型胶原和MMP-3染色强度的变化以C组最为明显。3组髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA的表达在培养7d和14d时均较培养前显著降低(P<0.05),其中7d时3组之间无显著性差异(P>0.05),14d时A、B两组间无显著性差异(P>0.05),C组与A、B组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:降低体外培养大鼠椎间盘上下软骨终板的通透性,可在短期内影响髓核细胞的生物学特性,加速椎间盘的退变。     

周围神经旁移植自体髓核对大鼠疼痛行为的影响

目的　探讨髓核在坐骨神经痛发病机制中的作用。方法　选择 16只SD雄性大鼠随机分为两组 ,分别将自体尾椎髓核混悬液注射到腰椎硬膜外腔或坐骨神经周围。测定其后肢机械刺激缩爪阈值。结果　在没有明显机械压迫下 ,腰椎硬膜外腔的髓核使大鼠后肢产生明显的痛觉过敏反应 ,坐骨神经旁的髓核不能使大鼠产生上述变化。结论　与髓核相关的炎症的介质是引起坐骨神经痛的原因之一 ,神经根缺乏神经外膜保护是引起疼痛的解剖学基础。     

兔椎体软骨终板内血管三维影像结构研究

目的:研究兔椎体软骨终板内血管的三维影像结构。方法:选取6月龄日本大耳白兔(2.5~3kg)5只,使用Micro-CT对通过腹主动脉注射硫酸钡造影剂后的兔L4、L5椎体及其终板进行10mm与5mm范围扫描,将扫描结果导入Mimics软件进行血管三维结构重建,观察椎体终板内血管的三维结构。10mm与5mm范围扫描结果分别为10mm组和5mm组,从两组血管三维图中随机选取5个血管末端并测量其直径大小。结果:Mimics软件重建的椎体终板内血管三维结构清晰可见。10mm组终板内血管俯视图可见血管在终板内接触髓核部分的中心区域分布密集,管径粗,并向四周的接触纤维环部分的终板呈放射状辐射;矢状面上可见终板将椎体部分与椎间盘内纤维环及髓核部分明显分隔开,其内血管从椎体后方发出,沿终板后方向前方辐射长入。5mm组图像可见终板内接触髓核部分的中心区域的血管与接触纤维环部分的外周区域的血管结构不同,接触纤维环部分的外周区域的血管形状为单一襻样结构,而终板内接触髓核部分的中心区域的血管是一种复杂的完全缠绕在一起的血管襻结构。5mm组血管末端直径明显小于10mm组血管末端直径(P0.001)。结论:注射硫酸钡造影剂后用Micro-CT扫描建立终板内血管三维结构的方法可以清楚地显示兔终板内血管的三维结构,为进一步研究终板血管变化提供新的技术手段。     

单侧坐骨神经干髓核移植对大鼠双足痛阈的影响及其可能机制的探讨

目的观测髓核组织对单侧坐骨神经干的损伤作用,探讨这种损伤作用与大鼠双足痛阈之间的关系。方法24只雄性SD大鼠(体重260~280g)随机分为四组:、假手术组、脂肪组、肌肉组、髓核组,每组n=6。另外3只雄性SD大鼠用来提供异体脂肪、肌肉和髓核,移植到各组一侧坐骨神经干,用神经行为学的方法观测大鼠双足痛阈变化,并于术后第10d、20d取植入侧坐骨神经用病理切片组织化学染色方法光镜观察坐骨神经干组织学变化。结果术后3、5、7、10、15、20、25、30、35d对照组双后肢均未出现痛觉过敏,而髓核组双侧后肢均出现明显的痛觉过敏,并且以术后7~10d最明显;组织学光镜观察发现髓核组植入侧坐骨神经干出现水肿、大量淋巴细胞浸润,部分髓鞘呈空泡样变等损伤表现,术后10d表现明显。结论髓核组织对坐骨神经干有炎性损伤作用,此损伤作用与痛觉过敏可能存在联系。     

兔椎体软骨终板血管芽增龄性变化

目的 探讨不同年龄段兔椎体软骨终板内血管芽的形态变化与椎间盘退变的关系.方法 15只不同年龄段新西兰兔,2月龄5只,1年龄5只,3年龄5只,雌雄不限.X线观察终板有无钙化及椎体周围有无骨赘形成,组织学观察软骨终板和椎间盘的形态学变化,血管铸型后扫描电镜观察终板各部位血管的形态变化.按Miyamoto等分级标准将椎间盘分为1～5级,分别规定为1～5分.采用t检验,分别对2月龄组和1年龄组髓核区与内层纤维环区,2月龄组及1年龄组兔髓核区、内层纤维环区椎体终板内血管直径进行比较.结果 2月龄组终板无明显钙化、软骨终板结构良好、潮标清晰,髓核及纤维环结构饱满清晰;1年龄组终板轻度钙化,髓核皱缩,纤维环出现裂隙;3年龄组终板钙化明显,密度增高,并可见骨赘形成,髓核消失.随着年龄增加,终板内微血管逐渐减少,最终消失,软骨终板中心部位较周围部血管减少更为明显.组织学显示软骨终板出现钙化,软骨终板退变重于椎间盘;钙化的程度与椎间盘退变程度呈正相关.2月龄组髓核区与内层纤维环区椎体终板内血管直径比较,差异有统计学意义;2月龄组与1年龄组髓核区椎体终板内血管直径比较,差异有统计学意义.结论 随着兔年龄增加终板内血管逐渐减少,终板发生退变,其程度重于椎间盘,提示椎体终板内微血管的变化可能是椎间盘退变的重要促进因素.

Abstract：

Objective To observe the morphologic changes of of vascular buds in vertebral cartilage endplate in age-specific rabbits and also to investigate the correlation between the changes of vascular buds and interverbral disc degeneration. Methods There were 15 New Zealand white rabbits in our study,which include three groups, 2-week-old rabbits, 1-year-old rabbits and 3-year-old rabbits, and each groups had five rabbits. The X-ray radiograph, histology and scanning electron microscope were used to observe the changes of vertebral cartilage endplate. According to Miyamoto standard, the interverbral disc was graded 1-5, and scored 1-5 respectively. Results The changes of micro-vascular structure of vertebral cartilage endplate were observed during aging. Under the scanning electron microscope, the vascular structure degenerated gradually, and disappeared in the end. The blood vessels in the central region of the vertebral cartilage endplate reduced more obviously than those in periphery region. The severe degeneration was found in vertebral endplate, compared with intervertebral disc. The changes of vascular buds in rabbits vertebral cartilage endplate had positive correlation with the vertebral endplate calcification and the interbertebral disc degeneration. Conclusion Changes of vascular buds in vertebral endplate may accelerate intervertebral disc degeneration.     

猴自体椎间盘移植的组织学研究

本实验观察了猴自体椎间盘移植术的不同时期间盘组织学变化。结果表明大体形态移植间盘髓核的含水景减少，呈较粘稠胶状，光镜下纤维环和终板软骨结构无明显变化，髓核中有部分细胞退变，同时亦有成软骨样纤维细胞再生。透射电镜发现间盘髓核中仍有脊索细胞存在，移植后不同时间组髓与纤维环中均可见部分细胞变性坏死。本实验成功地建立了椎间盘移植动物模型，为进上步深入研究提供了依据。     

椎间盘退变与终板内微血管形态改变的相关性研究

目的：通过观测大白兔椎间盘退变过程中椎间盘终板内的血管形态以及血流量的改变，探讨终板内微血管的改变与椎间盘退变之间的相关性。方法：选用40只新西兰大白兔随机分为2组，通过切除造模组20只兔腰椎棘间、棘上韧带及棘突、关节突，造成力学失稳状态诱导形成椎间盘退变模型。分别在术后4、8个月通过扫描电镜、血流激光多普勒仪测定椎体终板内的血管形态以及血流量。结果：在椎间盘退变过程中，椎间盘终板内的血管芽形态逐渐被破坏，微血管数量相应减少，终板内的血流量也明显减少，同时终板内血流量中心部位(靠近髓核区域)血流量多于终板内周围区域的血流量。结论：椎体终板内微血管的改变可能是椎间盘退变的促进因素。     

双后肢大鼠增龄制备颈椎间盘退变动物模型

目的通过截除幼年大鼠双前肢建立颈椎间盘退变的动物模型。方法健康4周龄雄性SD大鼠76只，随机分为两组，手术组40只，对照组36只。手术组动物麻醉后于双上肢根部截除肢体，分别于术后3、6、9、12个月随机分为4组，每组10只处死大鼠后摄颈椎正侧位X线片，并切取椎体标本制备C2-C3至T2～T3的中欠状面组织学切片，分别进行HE、番红O染色行椎间盘组织学观察。对照组动物分别于实验开始后4、8、12、16个月分为4组进行与实验组相同的处理。结果截除双前肢后，双后肢大鼠全部存活，实验组大鼠术后9、12个月均出现颈椎间盘退变的X线征象，光镜检查证实其椎间盘均发生了严重的退变，脊索性髓核完全为纤维软骨性髓核取代，软骨终板缺损或消失，基质中胶原纤维排列紊乱，椎间盘突出并骨化。而正常大鼠的椎间盘仅发生轻度退变。结论本造模方法不损伤动物靶器官正常的解剖结构，成功率高、重复性好，符合人类颈椎间盘退变规律。     

动静力失衡性大鼠颈椎间盘组织形态学及超微结构

[目的]动态观察大鼠颈部动、静力失去平衡后颈椎间盘组织形态学及超微结构的改变。[方法]SD大鼠60只，随机分为3、5、7个月模型组和对照假手术组，每组10只，通过破坏大鼠颈部肌肉、韧带诱导颈椎间盘退变，按月取材。各组椎间盘HE、Toluidine blue染色，在光镜下观察用体视学分析软件、Dissector自动计数法分析软骨终板内血管芽的数量、面积和软骨终板的厚度，Miyamoto分级法综合评判颈椎间盘退变的程度；透射电镜观察椎间盘细胞凋亡的超微结构。[结果]与对照假手术组比较，3个月造模组动物颈椎间盘已开始退行性变化，纤维环板层结构紊乱，关节软骨钙化层增厚，软骨下血管明显减少；5个月模型组髓核完全纤维化，纤维环板层状结构消失，血管芽稀少，血管壁充血曲张；7个月模型组椎间盘内部结构与5个月模型组相似，部分椎体边缘骨赘形成。在电镜下，3个月造模组椎间盘细胞，细胞表面突起减少，细胞器稀少，胞质内有脂滴，可见到凋亡细胞形成的凋亡小体。5个月和7个月模型组椎间盘组织中细胞较少，基质中胶原纤维断裂，可见到许多坏死空化的细胞。[结论]模型组大鼠颈椎间盘都出现典型的退变形态学变化，随着造模月份的延长退变程度越严重；早期和中期退变椎间盘中可观察到凋亡细胞，在退变的晚期可观察到坏死细胞。     

雌激素α、β受体在大鼠椎间盘组织中的免疫组织化学定位

[目的]探讨雌激素α、β受体(ERα、ERβ)在大鼠椎间盘组织的定位和分布.进一步探讨ER与椎间盘退变的关系,对早期预防和治疗椎间盘退变提供一定的理论依据.[方法]用免疫组织化学染色法(Elivison二步法)检测大鼠关节软骨,椎体终板及椎间盘组织中ER-α,ER-β的表达及分布情况.[结果]免疫组织化学染色见ER-α,ER-β在椎体骨组织中表达明显,在终板软骨组织表达较为明显,在髓核组织中均有表达,在纤维环中未见表达.[结论]在大鼠的髓核组织中的髓核细胞(类软骨细胞)中存在ER.     

颈椎终板软骨细胞凋亡的检测及相关意义

目的检测颈椎终板软骨细胞的细胞凋亡指数,探讨其在椎间盘退变中可能的作用机制。方法颈椎间盘终板及髓核取自我院行颈椎前路手术的35例颈椎椎间盘退变患者（退变组）和19例颈椎外伤患者（外伤组）。光镜观察退变组和外伤组终板和髓核的细胞密度,TUNEL法检测两组终板软骨细胞和髓核细胞的细胞凋亡指数,咔唑分光光度法比较两组髓核蛋白多糖含量。结果退变组终板细胞密度较外伤组减少（P〈0.05）,TUNEL染色显示退变组终板细胞凋亡指数为（34.6±16.1）%,外伤组为（20.1±9.3）%,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。Pearson相关分析显示,颈椎终板TUNEL染色阳性细胞率与终板细胞密度、髓核蛋白多糖含量之间呈负相关（r=—0.805,P=0.001;r=—0.677,P=0.023）,与髓核TUNEL阳性细胞率之间呈正相关（r=0.758,P=0.003）。结论颈椎退变终板软骨细胞凋亡率较高,推测在椎间盘退变过程中可能发挥重要作用;软骨细胞凋亡可能与髓核细胞凋亡增加、终板细胞密度与髓核蛋白多糖含量降低密切相关。     

成人腰椎软骨终板的组织学特征

目的探讨健康成人腰椎软骨终板组织学特征。方法选取18具新鲜成人尸体腰椎标本,死亡原因为车祸伤或意外,无腰椎外伤和糖尿病。从8个不同区域取材,制备软骨终板样本,利用高敏感测高仪测量软骨终板厚度,通过显微镜观察经HE染色后终板的组织学特征。结果不同区域软骨终板厚度差异有统计学意义(P 0.05),终板厚度为0.696～1.045 mm,后区下部终板最厚,中央区上部最薄。HE染色结果显示,软骨终板的细胞密度比髓核和纤维环的细胞密度高,软骨终板中央区和侧区的胶原纤维分别比髓核和纤维环组织中的胶原纤维更加紧密。结论腰椎不同区域软骨终板厚度不同,其组织学特征与椎间盘的营养供应相关。     

椎间盘退变与终板内微血管形态改变的相关性研究

目的:通过观测大白兔椎间盘退变过程中椎间盘终板内的血管形态以及血流量的改变,探讨终板内微血管的改变与椎间盘退变之间的相关性。方法:选用40只新西兰大白兔随机分为2组,通过切除造模组20只免腰椎棘间、棘上韧带及棘突、关节突,造成力学失稳状态诱导形成椎间盘退变模型。分别在术后4、8个月通过扫描电镜、血流激光多普勒仪测定椎体终板内的血管形态以及血流量。结果:在椎间盘退变过程中,椎间盘终板内的血管芽形态逐渐被破坏,微血管数量相应减少,终板内的血流量也明显减少,同时终板内血流量中心部位(靠近髓核区域)血流量多于终板内周围区域的血流量。结论:椎体终板内微血管的改变可能是椎间盘退变的促进因素。     

仙灵骨葆对去势大鼠腰椎软骨终板退变的预防作用

目的探讨仙灵骨葆预防去势大鼠腰椎软骨终板退变的作用机制。方法 30只3月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机均分为3组,每组10只:双侧卵巢切除(OVX)手术组;手术对照组(Sham组);双侧卵巢切除+仙灵骨葆组(OVX+XLGB组),3组术后三个月处死,常规组织切片,HE常规染色、番红0-固绿特殊染色测量软骨终板血管芽相对面积及运用免疫组化检测软骨终板MMP-13的表达。结果 OVX组大鼠椎间盘MMP-13表达及软骨终板血管芽相对面积减少显著高于Sham组和OVX+XLGB组(P<0.05);Sham组显著低于OVX+XLGB组(P<0.05)。结论仙灵骨葆可能通过降低软骨内MMP-3表达量、增加终板血管芽相对面积,延缓椎间盘的退变.     

椎间盘退变与终板内微血管形态改变的相关性研究

目的:通过观测大白兔椎间盘退变过程中椎间盘终板内的血管形态以及血流量的改变,探讨终板内微血管的改变与椎间盘退变之间的相关性.方法:选用40只新西兰大白兔随机分为2组,通过切除造模组20只免腰椎棘间、棘上韧带及棘突、关节突,造成力学失稳状态诱导形成椎间盘退变模型.分别在术后4、8个月通过扫描电镜、血流激光多普勒仪测定椎体终板内的血管形态以及血流量.结果:在椎间盘退变过程中,椎间盘终板内的血管芽形态逐渐被破坏,微血管数量相应减少,终板内的血流量也明显减少,同时终板内血流量中心部位(靠近髓核区域)血流量多于终板内周围区域的血流量.结论:椎体终板内微血管的改变可能是椎间盘退变的促进因素.