uPA系统在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)及其受体(uPAR)和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)在子宫内膜异位症中的表达和意义。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)分别检测30例子宫内膜异位症患者的异位内膜及其相应的在位内膜(研究组)以及30例正常子宫内膜(对照组)中uPA、uPAR、PAI-1的表达。结果:异位内膜和在位内膜及对照组子宫内膜组织中,uPA的表达分别为0.198、0.112、0.079;uPAR的表达分别为0.162、0.119、0.076;PAI-1的表达分别为0.230、0.158、0.080;异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与在位内膜及对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);在位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。无论是增殖期还是分泌期,异位内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1的表达均高于在位内膜及对照组(P<0.05,P<0.01),在位内膜中uPA、uPAR、PAI-1的表达高于对照组(P<0.05)。结论:异位和在位子宫内膜组织中uPA、uPAR、PAI-1表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

子宫内膜癌患者血清uPA和PAI-1的含量变化及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌患者血清尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)含量的变化及其临床意义。方法:用ELISA法测定35例子宫内膜癌(内膜癌组)、18例子宫内膜增生(内膜增生组)和16例正常子宫内膜患者(正常对照组)血清uPA和PAI-1含量及计算两者的比值。结果:内膜癌组患者血清uPA和PAI-1含量及uPA/PAI-1值均显著高于内膜增生组及正常对照组,差异有极显著性(P均<0.01)。内膜增生组及正常对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。内膜癌组Ⅲ~Ⅳ期患者血清uPA和PAI-1含量与Ⅰ期相比差异有极显著性(P<0.01),Ⅲ~Ⅳ期患者血清uPA和PAI-1含量高于Ⅱ期(P<0.05),Ⅱ期患者血清uPA、PAI-1含量高于Ⅰ期(P<0.05)。内膜癌组患者血清uPA、PAI-1含量及uPA/PAI-1值随着手术病理分期及组织学分级的增高、肌层浸润深度的增加及淋巴结的转移而升高,差异有显著性(P均<0.05),而与患者病理类型无关(P>0.05)。结论:子宫内膜癌患者血清uPA和PAI-1含量及uPA/PAI-1值明显升高,并与其手术病理分期、浸润转移有关,提示其可能在内膜癌的发生、发展及浸润过程中起重要作用。     

VEGF,β-连环素及uPA在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、β-连环素(β-catenin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在子宫内膜癌组织中的表达和临床意义.方法:用免疫组化SP法检测VEGF,β-catenin和uPA在49例子宫内膜癌和13例正常子宫内膜组织中的表达.结果:VEGF,β-catenin和uPA在子宫内膜癌中的阳性率分别为69.4%,61.2%和77.6%.VEGF的表达在子宫内膜癌不同的子宫肌层的浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.004),β-catenin的表达在子宫内膜癌不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.036,P=0.016);uPA表达在不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度间差异有统计学意义(P=0.044,P=0.038).三者在子宫内膜癌中的表达具有相关性.结论:VEGF,β-catenin及uPA与子宫内膜癌的发展侵袭相关.三者的异常表达共同作用促进子宫内膜癌的发展和侵袭.     

VEGF，β-连环素及uPA在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、β-连环素(β-catenin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在子宫内膜癌组织中的表达和临床意义。方法:用免疫组化SP法检测VEGF,β-catenin和uPA在49例子宫内膜癌和13例正常子宫内膜组织中的表达。结果:VEGF,β-catenin和uPA在子宫内膜癌中的阳性率分别为69.4%,61.2%和77.6%。VEGF的表达在子宫内膜癌不同的子宫肌层的浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.004),β-catenin的表达在子宫内膜癌不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度之间差异有统计学意义(P=0.036,P=0.016);uPA表达在不同组织病理分级和子宫肌层浸润深度间差异有统计学意义(P=0.044,P=0.038)。三者在子宫内膜癌中的表达具有相关性。结论:VEGF,β-catenin及uPA与子宫内膜癌的发展侵袭相关。三者的异常表达共同作用促进子宫内膜癌的发展和侵袭。     

p27蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的 :探讨p2 7在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 :采用免疫组化S -P法测定 16份正常子宫内膜、18份子宫内膜不典型增生及 50份子宫内膜癌组织中的p2 7蛋白表达。结果 :p2 7蛋白在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜中的表达率分别为 34%、6 6 .6 7%和 93.75% ,正常子宫内膜及不典型增生组均显著高于子宫内膜癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。p2 7蛋白表达与子宫内膜癌组织学分级、肌层浸润程度及患者预后显著相关 (P <0 .0 5) ,但与临床分期无关。结论 :p2 7蛋白表达下降或缺失可能在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用 ,并可能提示患者的预后     

cyclinD1、p16蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨cyclinD1、p16与子宫内膜癌发生与发展的关系。方法 :用免疫组化SP法检测了 50例子宫内膜癌、2 2例子宫内膜不典型增生、10例正常子宫内膜组织中cyclinD1、p16蛋白的表达情况。结果 :cyclinD1蛋白在正常子宫内膜、内膜不典型增生、子宫内膜癌中的表达率分别为 0 ( 0 /10 )、2 2 .73% ( 5/2 2 )、4 0 .0 0 % ( 2 0 /50 ) ,其中子宫内膜癌与正常内膜差异有显著性 (P <0 .0 5)。p16蛋白在内膜癌的表达率为 4 6.0 0 % ,明显低于正常内膜组织的 90 .0 0 % (P <0 .0 5)。 50例内膜癌中 ,cyclinD1蛋白在G2 、G3级及临床Ⅱ～Ⅲ期中的表达率分别高于G1级及临床Ⅰ期 (P <0 .0 5) ,复发组表达率高于未复发组 (P <0 .0 5)。p16蛋白表达与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期及预后有关 (P <0 .0 5) ,p16蛋白表达阴性者分化差 ,分期晚 ,复发率高。相关性分析显示 ,cyclinD1与p16表达呈负相关 ,二者协同异常表达者生物学行为较差。结论 :cyclinD1、p16与子宫内膜癌的发生、发展密切相关 ,二者异常表达提示子宫内膜癌复发率高、预后差     

PTEN p53及hMSH2在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的 探讨PTEN、p53及hMSH2在子宫内膜癌中的蛋白表达及与病理分级的关系.方法 用免疫组织化学SP法检测大连医科大学第二临床学院和抚顺市中心医院妇产科1999年7月至2004年9月收治的99例（病理分级Ⅰ级59例、Ⅱ和Ⅲ级40例）子宫内膜癌中PTEN、p53与hMSH2的蛋白表达.结果 子宫内膜癌组织PTEN蛋白表达总缺失率70.7%,病理Ⅰ级为81.4%,Ⅱ和Ⅲ级55.0%,二者呈负相关（P＜0.05）;p53蛋白阳性表达率42.4%,Ⅰ级20.3%,Ⅱ和Ⅲ级75.0%,二者差异有显著性意义（P＜0.01）;hMSH2蛋白阳性表达率60.6%,Ⅰ级57.6%,Ⅱ和Ⅲ级65.0%,二者无明显相关性（P＞0.05）.在hMSH2（＋）中PTEN蛋白表达缺失率57.1%,hMSH2（-）42.9%;在hMSH2（＋）中p53蛋白表达阳性率78.6%,hMSH2（-）21.4%.PTEN与hMSH2无相关性（P＞0.05）.p53与hMSH2呈正相关（P＜0.05）.结论 检测PTEN、p53蛋白表达可能有助于判断子宫内膜癌的程度.p53基因突变与错配修复基因的功能缺陷有关.     

p27、cdk4在子宫内膜癌中的表达

目的 :探讨子宫内膜癌中p2 7、cdk4蛋白的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化S P法检测 42例子宫内膜癌子宫内膜中p2 7及cdk4蛋白的表达。结果 :(1 )子宫内膜癌p2 7蛋白核表达率为 1 6 .7% ,明显低于对照组 (正常子宫内膜及增生子宫内膜为51 .4% ) ,cdk4的核表达率为 76.2 % ,明显高于对照组的 2 9.7% ;(2 )p2 7或cdk4蛋白核表达均与子宫内膜癌的组织学分级有关 ,分化差的细胞p2 7核表达率低 ,cdk4核表达率则高 ;(3)p2 7核阴性表达合并cdk4核阳性表达与组织学分级及手术病理分期相关 ,分化差及手术病理分期晚的病例p2 7核阴性表达合并cdk4核阳性表达的出现率明显增高 ;(4)p2 7与cdk4蛋白表达之间无相关性 ;(5)内膜癌中p2 7蛋白胞浆表达率明显增高 ,cdk4蛋白胞浆表达则有降低趋势。结论 :p2 7蛋白核表达缺失及cdk4蛋白核表达增高与内膜癌的发生发展相关 ,联合检测p2 7、cdk4蛋白有助于估计预后、指导治疗     

子宫内膜癌p53抑癌基因蛋白表达及其与预后的关系

为研究抑癌基因ｐ５３与子宫内膜癌的关系，本研究用免疫组化ＡＢＣ法检测了２３例正常子宫内膜、４４例子宫内膜增殖症及１０３例子宫内膜癌组织中抑癌基因ｐ５３的表达情况。结果表明：突变型ｐ５３蛋白在于宫内膜癌组织中的阳性率为４７．６％，而在正常子宫内膜及各类型子官内膜增殖症中均为阴性。突变型ｐ５３的表达与子宫内膜癌的病理类型、组织分化、脉管浸润情况及ＤＮＡ异倍体等因素有关。ｐ５３表达阳性者的生存率明显低于无表达者，５年生存率分别为５９．９％及８３．４％。用Ｃｏｘ比例风险模型计算，结果表明ｐ５３表达阳性者的死亡危险度为阴性者的６．３４倍。突变型ｐ５３蛋白的出现与子宫内膜癌的恶性生物学行为有关。     

p16INK4、p21ras及p185C-erbB-2蛋白在子宫内膜癌的表达及临床病理意义

目的研究p16INK4蛋白在子宫内膜增殖症和子宫内膜癌的表达特征,以探讨其与p21ras、p185C-erbB-2蛋白的相互关系及在子宫内膜癌发生发展中的作用.方法应用免疫组化SP法检测65例子宫内膜癌及20例子宫内膜增殖症组织中p16INK4、p21ras及p185C-erbB-2蛋白的表达.结果子宫内膜增殖症组织p16INK4蛋白表达率为85.00%(17/20),子宫内膜癌组织p16INK4蛋白表达率为60.00%(39/65),其表达与组织分级及p185C-erbB-2蛋白表达呈负相关.结论p16INK4蛋白失表达与子宫内膜癌分化差有一定关系,与p21ras、p185C-erbB-2蛋白的联合检测可反映肿瘤的分化.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用.方法选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的足月产妇54例为研究对象,其中36例为子痫前期患者,按病情分为子痫前期轻度组(20例)、子痫前期重度组(16例);同期足月择期剖宫产孕妇为对照组(18例).采用CD34标记血管内皮细胞,计数各组胎盘微血管密度(MVD);SP法检测磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)在胎盘组织中的定位;蛋白印迹法检测各组胎盘p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心ELISA法检测各组血清中可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)及可溶性内皮糖蛋白(soluble endoglin,sEng)的水平.结果 (1)MVD:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘MVD分别为103±3、81±5、63±4,各组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘组织p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.84±0.05、0.90±0.14、0.86±0.18,各组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.13±0.05、0.59±0.12和1.16±0.18,各组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)p-p38 MAPK蛋白的表达部位:p-p38 MAPK蛋白主要表达于胎盘滋养层细胞的胞质及胞核、血管内皮细胞及少量间质细胞的胞核.(4)sFlt-1及sEng的水平:①对照组孕妇血清sFlt-1、sEng水平分别为(5.2±0.3)、(10.9-±0.4)μg/L;子痫前期轻度组分别为(12.5±1.2)、(20.4±5.3)μg/L;子痫前期重度组分别为(19.3±3.0)、(29.5±3.7)μg/L;各组sFlt-1、sEng水平两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);②p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平的相关性:子痫前期重度组和子痫前期轻度组p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平均呈明显正相关(r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中p38 MAPK信号分子的显著活化,使血清中sFlt-l、sEng水平升高,损伤胎盘血管内皮细胞,导致胎盘MVD降低;p38 MAPK信号分子可能是子痫前期患者血管内皮细胞损伤的关键信号传导通路之一.

Abstract：

Objective To study expression and activation of p38 mitogen activated protein kinase (MAPK) in vascular endothelial cells dysfunction in preeclampsia. Methods From Sept. 2009 to Mar.2010, 54 pregnant women underwent deliveries in the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University were enrolled in this study, including 20 patients in mild preeclampsia group, 16 patients in severe preeclampsia group and 18 women with term cesarean section without perinatal complications as control group. Placental endothelial cells were labeled by CD34 to assay microvessel density (MVD) of each group. Immunohistochemical SP and western blot were used to detect localization and expression of p-p38 MAPK protein, respectively. The levels of sera soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1)and soluble endoglin(sEng) were measured by ELISA. Results ①The MVD of placenta were 103 ± 3 in control group, 81 ±5 in mild preeclampsia group and 63±4 in severe group, respectively, which showed statistical difference among each group (P＜0.05).②The expression of p38 MAPK protein were 0.84±0.05 in control group,0.90±0.14 in mild group and 0. 86 ±0.18 in severe group, which did not reach remarkable difference among each group (P＞0.05). The expression of p-p38 MAPK protein were 0.13±0.05 in control group,0.59±0.12 in mild group and 1.16±0.18 in severe group, which show statistical difference among each group(P＜0.05).(3) The localization of p-p38 was in trophoblast, endothelial cells and a few (5.2±0.3)and(10.9±0.4)μg/L in control group,(12.5±1.2) and (20.4±5.3)μg/L in mild group and (19.3±3.0) and (29. 5 ±3.7) μg/L in severe group. When drawing paired comparison in those p-p38 MAPK protein levels and the concentrations of serum sFlt-1, sEng in preeclampsia groups (r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05). Conclusions The remarkable activation of the p38 MAPK in the placenta of patients with preeclampsia induced the increased levels of sFlt-1 and sEng in maternal serum, which confer the injury of vascular endothelial cells that caused the significant decline of MVD in placentas. p38 MAPK signaling might be one of the key pathways in vascular endothelial cell dysfunction in preeclampsia.     

子宫内膜癌组织中环氧化酶-2与雌、孕激素受体的表达及相关性研究

目的:探讨子宫内膜癌组织中环氧化酶-2(COX-2)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达及相关性。方法:应用免疫组化SP法检测56例子宫内膜癌中COX-2、ER和PR的表达。结果:COX-2在子宫内膜癌中的表达率随病理分级的增高而升高,与患者年龄、临床分期和淋巴结转移情况无关。ER和PR在子宫内膜癌的表达与临床分期及病理分级、淋巴结转移有关,表达率随临床分期增加、病理分级增高及淋巴结转移而降低。COX-2的表达与ER和PR无关。结论:COX-2可能介导不同的生物学途径,可以联合内分泌药物与特异性COX-2抑制剂治疗转移或复发的子宫内膜癌。     

尿激酶型纤溶酶原激活因子介导的卵巢上皮癌细胞浸润转移体外的实验研究

目地:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子在卵巢上皮癌浸润转移中的作用机制。方法:用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA基因cDNA全长,克隆至pGEM-T Easy Vector,鉴定后与真核表达载体PCMV-HA连接,酶切及测序。用脂质体法将重组质粒DNA转染至SKOV3细胞。加压筛选并培养PCMV-HA-uPA及对照细胞。分别用RT-PCR和W estern blot方法检测转染前后SKOV3细胞uPA的表达。细胞增殖能力测定用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,细胞周期测定用流式细胞仪法,细胞体外侵袭,迁移和黏附能力测定分别采用Matrigel Invasion,TranswellM igration和Adhersion Assay方法。结果:(1)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞克隆形成,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(2)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞的细胞周期中S期比例增加,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(3)uPA阳性表达介导SK-OV3细胞的体外侵袭,迁移和黏附能力均明显强于对照细胞株,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.0001和0.0049)。结论:uPA通过促进肿瘤细胞侵袭,迁移和黏附能力在卵巢上皮癌浸润转移中起了重要作用。     

子宫内膜癌中Maspin的表达及其与雌激素受体表达的相关性研究

目的:检测Maspin蛋白在正常子宫内膜、不典型增生及内膜癌组织中的表达,及其与雌激素受体(ER)表达的关系,探讨Maspin在子宫内膜癌发生中的作用及其作用机制。方法:免疫组化SP法检测40例子宫内膜腺癌、18例不典型增生及10例正常子宫内膜(对照组)中Maspin蛋白的表达及其与子宫内膜癌患者临床病理特征和ER蛋白表达的关系。结果:Maspin阳性表达在正常子宫内膜组最高(9/10,90%),高于内膜不典型增生组(10/18,55.6%)和内膜癌组(17/40,42.5%),差异有统计学意义(P<0.05),在内膜癌中FIGOⅠ期的表达(13/20,65.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(4/20,20.0%;P<0.05),无淋巴结转移者(17/34,50.0%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.030),但与组织学分级及肌层浸润程度无关(P>0.05)。ER在正常子宫内膜、内膜不典型增生及内膜癌组织的阳性表达率分别为(10/10,100.0%)、(13/18,72.2%)和(20/40,50.0%),各组间差异有统计学意义(P<0.05);内膜癌组织中FIGOⅠ期的表达(14/20,70.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(6/20,30.0%;P<0.05);内膜癌高、中、低分化组中ER表达率分别为(11/15,73.3%)、(8/18,44.4%)、(1/7,14.3%),组间差异有统计学意义(P<0.05);无淋巴结转移者(20/34,58.8%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.020),肌层浸润≤1/2者(16/24,66.7%)明显高于肌层浸润>1/2者(4/16,25.0%;P<0.05)。子宫内膜癌中,Maspin的表达与ER的表达存在正相关关系(r=0.394,P<0.05)。结论:从正常子宫内膜、内膜不典型增生到内膜癌,Maspin蛋白表达逐渐降低,且其低表达与子宫内膜癌临床分期晚、淋巴结转移有关,并与ER蛋白表达呈一致性,提示Maspin蛋白的表达可能受雌激素调控,参与了子宫内膜癌发生发展和转移过程。     

Urokinase plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) in gestational tissues; Measurements and clinical implications

BACKGROUND: Urokinase plasminogen activator (uPA) and urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) are central molecules for uPA/uPAR/plasmin-dependent proteolysis, which is thought to play a significant role in the development of pregnancy, as well as its many complications. OBJECTIVE: To measure the levels of uPA and uPAR in the placenta and myometrium, as well as in the foetal membranes and amniotic fluid. STUDY DESIGN: The study group consisted of 35 women with normal course of pregnancy, but with complications arising during delivery, which led to Caesarean section. Samples of placenta, myometrium, foetal membranes, amniotic fluid and blood were obtained at the time of operation. Tissue extracts were prepared. Measurements were made by the ELISA method. RESULTS: uPA and uPAR concentration in gestational tissues, including amniotic fluid, is 100-200 times higher than in plasma. Among tissues, the highest uPA level was found in placenta ( 1.32 +/- 0.48 ng/mg of protein), and the highest uPAR level in foetal membranes (3.33 +/- 1.20 ng/mg of protein). CONCLUSIONS: uPA and uPAR are present in all gestational tissues, in some in relatively high concentrations. Our results support the modern clinical hypothesis that fibrinolytic system can participate in mechanisms of such obstetric complications as pre-term pre-mature rupture of foetal membranes and placental abruption.     

子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达及其甲基化状态的研究

目的:研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达下调的机制。方法:(1)应用Real-Time PCR法检测子宫内膜癌及正常组织中孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA的表达及去甲基化试剂5-Aza-CdR处理Ishikawa细胞前后孕激素两种受体亚型及DNA甲基化转移酶mRNA的表达;(2)应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa中PRA、PRB的甲基化状态。结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,总PR表达显著降低,与病理类型相关;PRB表达显著下降,与其临床特征无关。子宫内膜癌细胞系Ishikawa中,加入5-Aza-CdR2.5μmol/L48h后,孕激素受体亚型PRA、PRB甲基化条带均消失;孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA表达水平增加;同时Ishikawa细胞中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3B表达下调。结论:子宫内膜癌组织中,孕激素受体亚型mRNA表达下调可能与子宫内膜癌的发生相关;孕激素受体亚型表达下调与其启动子区甲基化状态相关;去甲基化试剂5-Aza-CdR可逆转基因启动子区的甲基化状态,恢复PR基因的表达。