细胞周期G1／S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参与，起关键作用的在于G1／S期调控元件，包括p21，p27，p53，p16，p15，Cyclin E，Cyclin D，CDK2，CDK4和CDK6等。对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达，或p27低表达，或p16和p15缺失，或Cyclin D1过度表达，表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关。对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失，或p16和p15缺失，或Cyclin D1高表达，或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关，而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感。关键词卵巢癌细胞周期细胞周期蛋白类     

~(131)I-Herceptin对卵巢癌细胞的体外作用

目的:研究~(131)I标记抗HER-2/neu单克隆抗体Herceptin(~(131)I-Herceptin)体外对高表达HER-2/neu卵巢癌细胞的生物学作用,探讨将其用于卵巢癌放射免疫治疗的可行性。方法:(1)流式细胞仪检测人卵巢癌SKOV3和HO8910细胞株HER-2/neu的表达。(2)Iodogen法~(131)I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯度、稳定性及免疫活性。(3)MTT比色法检测~(131)I-Herceptin对人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的抑制作用。(4)流式细胞法检测SKOV3在~(131)I-Herceptin作用下细胞周期改变和凋亡情况。结果:(1)SK-OV3细胞株HER-2/neu表达率为92.67%;HO8910表达率为9.59%。(2)~(131)I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯度为98.4%,24h后仍大于80%,标记物免疫活性较好。(3)131I-Her-ceptin对SKOV3细胞株的抑制作用明显高于HO8910(P<0.001),且明显高于~(131)I组﹑Her-ceptin组以及~(131)I+Herceptin组(P<0.01)。(4)流式细胞检测~(131)I-Herceptin组SKOV3细胞的凋亡率明显高于~(131)I+Herceptin、Herceptin和~(131)I组(P<0.05),各干预组均检测到细胞周期阻滞,~(131)I-Herceptin组G0-G1期细胞比例明显高于其它三组(P<0.05)。结论:~(131)I-Herceptin对高表达HER-2/neu的人卵巢癌细胞SKOV3有明显的抑制和杀伤作用。     

LAIR-1通过影响线粒体生物能量代谢抑制卵巢癌HO8910细胞生长

目的:研究人白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)对卵巢癌细胞HO8910线粒体能量代谢的影响。方法:利用低氧模拟剂CoCl_2处理细胞,分析缺氧对LAIR-1表达的影响;利用LAIR-1慢病毒RNAi干扰载体(LAIR-1-RNAi-lentivirus),下调LAIR-1在卵巢癌HO8910细胞中的表达。Western blot、qRT-PCR法鉴定HO8910慢病毒感染后LAIR-1的表达水平;通过CCK-8实验和细胞克隆形成实验,验证下调LAIR-1表达对HO8910细胞生长的影响;通过Seahorse生物能量分析仪,检测下调LAIR-1表达后对HO8910细胞生物能量代谢的影响。结果:在低氧环境下,HO8910细胞的LAIR-1表达显著上调;LAIR-1-RNAi-lentivirus转染后,HO8910细胞的LAIR-1表达显著下调,细胞生长能力明显增强(P0.01);LAIR-1表达显著下调的HO8910细胞,ATP产生明显改善(P0.001),同时其基础呼吸(P0.001)和最大呼吸能力(P0.001)均明显提高。结论:LAIR-1分子可能通过影响线粒体生物能量代谢抑制人卵巢癌HO8910细胞的生长。     

紫花牡荆素体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的效应及其机制。方法:MTT法检测casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制;Hoechest33258染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测casticin处理HO-8910细胞的凋亡率;Western blotting分析caspase-3、CyclinB1、p21蛋白表达变化。结果:casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。经casticin作用48h后HO-8910细胞表现出典型的凋亡形态特征,并剂量依赖性地增加亚二倍峰,降低CyclinB1蛋白表达,增高caspase-3和p21表达。结论:casticin通过降低CyclinB1表达、活化p21和caspase-3抑制HO-8910细胞增殖并诱导凋亡。     

细胞周期G1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参?起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,佑p15,Cyolin E,Cyclin D,CDK2,CDK4和CDK6等.对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或Cyclin D1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关.对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或Cyclin D1高表达,或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感.     

细胞周期G1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参?起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,佑p15,Cyolin E,Cyclin D,CDK2,CDK4和CDK6等.对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或Cyclin D1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关.对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或Cyclin D1高表达,或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感.     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对卵巢癌HO8910细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响

目的:检测卵巢癌HO8910细胞株中WWOX基因甲基化状态,探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对WWOX基因甲基化状态及其对HO8910细胞株生物学行为的影响。方法:将HO8910细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测两组细胞WWOX基因甲基化状态;蛋白印迹法检测两组细胞WWOX蛋白的表达。体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验及流式细胞仪等分析5-Aza-CdR对HO8910细胞生物学活性的影响。体内实验:用处理前后的HO8910细胞株分别接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察两组裸鼠的生存时间及肿瘤生长情况,并采用Western blot分别检测两组裸鼠肿瘤组织中WWOX蛋白的表达。结果:(1)WWOX基因在HO8910细胞株中呈甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后呈去甲基化状态。(2)Western blot检测结果显示,5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平高于对照组(0.71±0.023 vs 0.13±0.012,P<0.05)。(3)5-Aza-CdR处理组各时间点的细胞增殖能力较对照组下降(P<0.05)。(4)体外侵袭实验显示,5-Aza-CdR处理组穿膜细胞数较对照组少(92.2±4.7 vs 172.1±5.2,P<0.05)。(5)流式细胞检测显示5-Aza-CdR处理组中67.13%的细胞阻滞于G0/G1期,较对照组高(21.52%,P<0.05)。(6)裸鼠体内实验表明,5-Aza-CdR处理组裸鼠体内的致瘤能力明显低于对照组,且5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平明显高于对照组(0.65±0.031 vs 0.25±0.047,P<0.05)。结论:5-Aza-CdR能逆转HO8910细胞WWOX基因甲基化状态,并抑制细胞增殖。     

Fn14在上皮性卵巢癌细胞转移中的作用

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)在上皮性卵巢癌转移中的作用。方法:选取人上皮性卵巢癌细胞株HO8910及其配对高转移能力细胞株HO8910-PM。Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14表达,以及Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞株后Fn14、Slug、MMP-9蛋白的表达情况。Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力。结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭细胞数均多于HO8910细胞(P0.05)。HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P0.05)。Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(5.4±0.314)倍(P0.05),细胞的迁移和侵袭能力明显降低,同时细胞中侵袭转移相关蛋白Slug和MMP-9表达明显下降(P0.05)。结论:Fn14可能通过下调Slug和MMP-9表达进而抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移,Fn14可能为临床治疗上皮性卵巢癌提供新靶标。     

DCC基因对卵巢上皮性癌细胞生长及其化疗敏感性的影响

目的研究DCC基因对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞生长及其化疗敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将含有DCC基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-DCC质粒导人卵巢癌细胞系HO8910细胞中（HO8910-DCC组）,以转染空载体pcDNA3．1（＋）质粒（HO8910-Neo组）和脂质体（空白对照组）为对照。转染24h后,经氨基糖甙类抗生素G418筛选,RT-PCR技术以及免疫组化法检测3组细胞DCC mRNA及蛋白表达情况;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定3组细胞转染后1～7d的细胞生长情况及经梯度浓度[0．1、0．2、1．0、5．0、10．0血浆峰浓度（PPC）]化疗药物顺铂和紫杉醇处理后48h的细胞存活率,并绘制细胞生长曲线。结果转染DCC基因后,DCC基因可在HO8910细胞中稳定表达。转染后1～7d,HO8910-DCC组细胞生长速度较其他两组细胞明显减慢,除转染后第1天外,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;空白对照组和HO8910-Neo组细胞生长速度比较,差异则无统计学意义（P〉0．05）。HO8910-DCC组细胞经0．1～5．0PPC的顺铂和紫杉醇处理后,细胞存活率显著低于空白对照组和HO8910-Neo组（P〈0．01）;经10．0PPC的顺铂处理后细胞存活率也明显低于空白对照组和HO8910-Neo组（P〈0．05）;但经10．0PPC的紫杉醇处理后细胞存活率与空白对照组和HO8910-Neo组相比,差异则无统计学意义（P〉0．05）。空白对照组和HO8910-Neo组细胞经各梯度浓度药物处理后的细胞存活率间比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论DCC基因可明显抑制卵巢癌细胞的生长,并增强卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及机制研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌细胞的杀伤作用和机制。方法:用不同浓度的Apicidine作用于体外培养的宫颈癌细胞株HeLa和正常呼吸道上皮细胞REC;用MTT法检测细胞生长存活率;用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR法和Western blot法分析Apicidine作用后宫颈癌细胞中p21WAF1和p53表达的变化。结果:Apicidine纳摩尔级浓度即能有效地抑制宫颈癌细胞增殖,对正常细胞无明显抑制效应。FCM结果表明,Apicidine能显著诱导宫颈癌细胞发生凋亡,对正常细胞无明显促凋亡作用;加入2μmol/L Apicidine作用24h和48h后宫颈癌细胞HeLa凋亡率分别为(10.11±0.63)%和(23.28±0.34)%,差异有显著性(P<0.05),正常呼吸道上皮细胞REC凋亡率分别为(5.81±0.92)%和(6.8±0.55)%,差异无显著性(P>0.05);FCM结果亦表明,Apicidine主要引起G0/G1期细胞周期阻滞,1μmol/L Apicidine处理24h后HeLa细胞G0/G1期细胞显著增多,由(46.8±3.2)%增至(69.5±6.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,Apici-dine能显著诱导p21WAF1RNA和蛋白水平表达,对p53表达无明显影响。上述结果都呈现明显的量-效与时-效关系。结论:Apicidine在体外能有效地抑制人宫颈癌细胞生长,对人正常细胞无明显影响,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21WAF1蛋白水平和引起G0/G1期细胞周期阻滞实现的。     

survivin基因修饰后对卵巢上皮性癌HO-8910细胞周期及化疗敏感性的影响

目的 探讨survivin基因经不同方式基因修饰后对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系HO-8910细胞周期和化疗敏感性的影响.方法 对survivin基因进行两种方式的基因修饰,即survivin基因核苷酸序列第34位苏氨酸突变为丙氨酸(T34A)和N末端缺失8个氨基酸(N-8AA),构建含survivinN-8AA和survivinT34A基因的表达载体,将含survivinN-8AA、survivinT34A和野生型survivin基因的表达载体转染HO-8910细胞(分别为SN-HO-8910组、M-HO-8910组和Sur-HO-8910组),以转染空载体pcDNA3.1质粒(PC-HO-8910组)为对照.(1)采用逆转录(RT)PCR技术检测和测序法鉴定转染后HO-8910细胞各目的 基因mRNA的表达;(2)采用流式细胞仪检测各组转染后HO-8910细胞的细胞周期比例;(3)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组转染后HO-8910细胞对顺铂、紫杉醇和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--LY294002的敏感性[以50%抑制浓度(IC50)表示].结果 (1)RT-PCR技术检测和测序法鉴定结果显示,转染后的HO-8910细胞分别稳定表达survivinT34A、survivinN-8AA和野生型survivin mRNA.(2)SN-HO-8910组细胞G0/G1期比例为44.72%,明显低于PC-HO-8910组的49.64%(P＜0.05);而G2/M期和S期比例(分别为1.06%和54.22%)明显高于PC-HO-8910组(分别为0.56%和49.80%;P＜0.05).M-HO-8910组细胞G2/M期和S期比例分别为0.16%和36.33%,明显低于PC-HO-8910组(P＜0.05);而G0/G1期比例(63.51%)明显高于PC-HO-8910组(P＜0.05).Sur-HO-8910组G0/G1期、G2/M期和S期比例分别为54.46%、0.62%、44.92%,分别与PC-HO-8910组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)Sur-HO-8910组细胞对顺铂和紫杉醇的IC50[分别为(20.4±6.1)和(36.7±4.0)μmol/L]均明显高于PC-HO-8910组[分别为(14.4±3.9)和(28.6±3.6)μmol/L;P＜0.05].SN-HO-8910组细胞对顺铂和LY294002的IC50[分别为(7.6±1.0)和(13.2±4.0)μmol/L]均明显低于PC-HO-8910组[分别为(14.4±3.9)和(41.0±7.9)μmol/L;P＜0.01],而对紫杉醇的IC50[(37.9±4.8)μmol/L]明显高于PC-HO-8910组(P＜0.05).M-HO-8910组细胞对顺铂的IC50[(9.9±1.2)μmol/L]明显低于PC-HO-8910组(P＜0.05),而对LY294002的IC50[(66.9±4.8)μmol/L]明显高于PC-HO-8910组(P＜0.01).结论 survivin基因行缺失N-8AA和突变T34A修饰后,使细胞周期分别向G2/M期、S期及G0/G1期移行.survivinN-8AA比survivinT34A更为显著地介导了顺铂和LY294002诱导的细胞毒作用,提示这可能与survivin基因功能的细胞周期依赖性以及不能形成活性二聚体有关.     

微小RNA-7调控EGFR抑制上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)调控人上皮性卵巢癌(EOC)细胞上皮间质转化,抑制肿瘤侵袭转移的作用及机制。方法:选取EOC细胞株HO-8910pm、ES-2,用li-pofectmin 2000体外瞬时转染miR-7质粒,分别通过实时PCR和Western blot检测转染前后细胞株miR-7及EGFR蛋白表达情况;Western blot法检测转染前后细胞株上皮标记β-catenin、间质标记Vimentin及EGFR下游信号通路AKT、ERK蛋白磷酸化水平;实时PCR检测转染前后EMT相关转录因子Snail、Slug、ZEB1、ZEB2的表达。Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测转染前后细胞体外侵袭能力。结果:转染miR-7质粒后,HO-8910pm细胞miR-7的表达水平提高了(8.015±0.181)倍,ES-2细胞miR-7表达提高了(28.03±1.253)倍;EGFR蛋白表达均显著下降;转染后细胞的侵袭能力显著下降,HO-8910pm与ES-2的侵袭抑制率分别为62.33%、71.32%;转染后两种细胞的β-catenin蛋白表达均升高,而Vimentin蛋白表达降低;转录因子Snail、Slug的表达较未转染前显著降低(P<0.05),转染前后ZEB1、ZEB2无显著差异;转染后细胞p-AKT,p-ERK1/2表达均下降。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制其下游AKT和ERK1/2信号通路的活化以及逆转EMT,从而抑制EOC细胞的侵袭转移能力。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞化疗增敏作用的研究

目的:通过检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡结果,探讨SAHA对宫颈癌细胞化疗增敏的疗效及机制。方法:将SAHA 0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP 1、2、4、6、8、10μg/mL分别组成单药组和不同SAHA+DDP联合用药组,另设不加药对照组。MTT法检测两种药物单用及联合用药对SiHa细胞的增殖抑制作用;通过流式细胞术(FCM)观察药物对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡情况;镜检观察药物作用后细胞形态的变化。结果:SAHA有抑制癌细胞生长的作用,两药联合具有协同作用或相加作用(P<0.05);SAHA使细胞停滞在G1/G0期,与DDP联合作用后凋亡率增加,使细胞周期进一步阻滞在G1/G0期(P<0.05)。镜下可见对照组癌细胞生长旺盛,异型性高,SA-HA组与DDP组则可见细胞缩小变形,胞膜皱缩,贴壁不良,肿瘤细胞大量坏死,联用组尤为明显。结论:SAHA联合DDP可以抑制细胞增殖,停滞细胞周期,促进细胞凋亡,二者联合有协同作用。     

Histone deacetylase inhibitors trichostatin A and valproic acid induce cell cycle arrest and p21 expression in immortalized human endometrial stromal cells

OBJECTIVE: Following our observation that histone deacetylase inhibitors (HDACIs) trichostatin A (TSA) and valproic acid (VPA) can suppress proliferation of endometrial stromal cells, we sought to determine whether TSA and VPA do so by inducing cell cycle arrest and p21 expression. STUDY DESIGN: A recently established immortalized endometrial stromal cell line was treated with TSA, VPA, and/or all-trans retinoic acid (ATRA) and the consequent cell cycle progression was measured by flow cytometry and p21 protein expression by Western blot analysis. RESULTS: Both TSA and VPA induced cell cycle arrest and p21 expression in a concentration-dependent manner. Treatment with ATRA alone also induced cell cycle arrest and moderate increase in p21 expression but joint treatment of ATRA and TSA/VPA did not further enhance cell cycle arrest as compared with TSA/VPA treatment alone. CONCLUSIONS: HDACIs suppress proliferation of endometrial stromal cells through induction of cell cycle arrest and possibly also through apoptosis as well. RA also induces cell cycle arrest but it does not synergize with HDACIs in inducing cell cycle arrest. HDACIs may be promising compounds for treating endometriosis.     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)HO8910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)基因的表达,探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响.方法 将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA)、非特异性siRNA分别转染细胞;转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法(western blot)、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化;转染后24、48、72、96 h通过细胞增殖/毒性检测试剂cell counting kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;于转染后24 h给予不同浓度的顺铂作用24 h,通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率;于转染后24 h给予10μg/ml顺铂作用24 h,通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病/淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)蛋白的表达.结果 (1)转染后48 h,IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调,转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85.5%(P＜0.01).(2)转染后48、72、96 h,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性分别为1.71±0.13、2.32±0.23、2.79±0.28,与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)转染后48 h有24.37%的细胞处于G2期(P＜0.05).(4)转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用24 h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/ml时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率分别为(25.94±0.08)%、(40.25±0.05)%、(59.48±0.03)%、(74.18±0.08)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).(5)在转染siRNA 24 h后给予10μg/ml顺铂作用24 h,可使细胞的凋亡率增加至17.95%(P＜0.05),并使Bcl-2蛋白的表达水平下调.结论 通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,出现G2期阻滞,明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性.     

双氢青蒿素对卵巢上皮性癌发展和转移的影响

目的：研究双氢青蒿素（DHA）对体外培养的卵巢上皮性癌高度转移细胞株HO-8910pm黏附、侵袭能力以及体内生长的影响,并探讨其相关分子作用机制。方法：用不同浓度DHA处理HO-8910pm,采用基质胶贴壁黏附法检测DHA对癌细胞体外黏附能力的影响;用跨膜小室模型和划痕实验检测DHA对癌细胞侵袭和迁徙能力的影响。用裸鼠的HO-8910pm原位接种卵巢癌模型,检测DHA对卵巢癌侵袭和转移的影响。Western blot法检测DHA对癌细胞聚焦黏附激酶（FAK）磷酸化、MMP-2和MMP-9的体外影响。结果：（1）DHA作用于HO-8910pm细胞后,细胞增殖能力显著抑制,体外黏附和侵袭能力显著下降;（2）体内实验中,DHA可显著抑制卵巢癌腹膜转移;HO-8910pm细胞p-FAK和MMP-2蛋白水平降低,但MMP-9蛋白水平无显著降低。结论：DHA对卵巢上皮性癌细胞的增殖、黏附、侵袭能力及肿瘤转移有-定的抑制作用,其具体机制可能与抑制p-FAK、MMP.2表达水平有关。     

Distinctive cell cycle regulatory protein profiles by adenovirus delivery of p53 in human papillomavirus–associated cancer cells

In this study, microarray analyses were performed to determine the time course of gene expression profiles in SiHa cells after infection with an adenovirus-expressing p53 (Adp53). We then investigated the consequences of Adp53 gene transfer on the expression level of six genes associated with cell cycle control and on apoptosis and cell cycle arrest in SiHa cells and compared these results with those from CaSki and HeLa cells. Gene expression profiling of the p53-targeted genes in SiHa cells revealed that p21, p53, and mdm2 protein expression was significantly upregulated at 24 and 48 h. Western blot results revealed that p21 and p53 expression levels had significantly increased after Adp53 infection. Cyclin-dependent kinase 4 levels were decreased 48 h after treatment in SiHa and CaSki cells. Proliferating cell nuclear antigen levels were unchanged after Adp53 infection. Only SiHa cells exhibited significant cell death. Cell cycle arrest at the G1 phase was induced in the SiHa and HeLa cells but was not induced at the G2/M and S phases in the CaSki cells. These data support the notion that the understanding of p53-dependent apoptosis and cell growth arrest could be applicable to advanced strategies in the development of preferential tumor cell-specific delivery.     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖和乙酰肝素酶基因表达的影响。方法不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HO-8910PM增殖情况;免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测苏拉明作用前后HO-8910PM乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达变化。结果MTT结果显示50、100、200、300、400、500、600μg/ml浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率(GI)分别是13.1%、22.6%、35.1%、43.7%、54.3%、64.8%、70.9%(P0.01),不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义(P0.01)。对照组比较苏拉明作用48h后,HO-8910PM细胞乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖;同时下调乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达;提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

Anticancer effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on ovarian carcinoma cell lines

Purpose: A constituent of green tea, (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG), has been known to possess anti-cancer properties. In this study, we investigated the time-course anticancer effects of EGCG on human ovarian cancer cells to provide insights into the molecular-level understanding of growth suppression mechanism involved in EGCG-mediated apoptosis and cell cycle arrest. Methods: Three human ovarian cancer cell lines (p53 negative, SKOV-3 cells; mutant type p53, OVCAR-3 cells; and wild type p53, PA-1 cells) were used. The effect of EGCG treatment was studied via cell count assay, cell cycle analysis, FACS, Western blot, and macroarray assay. Results: EGCG exerts a significant role in suppressing ovarian cancer cell growth. Also, EGCG showed growth inhibitory effects in each cell line in a dose-dependent fashion and induced apoptosis and cell cycle arrest. The cell cycle was arrested at the G(1) phase by EGCG in SKOV-3 and OVCAR-3 cells. In contrast, the cell cycle was arrested in the G(1)/S phase arrest in PA-1 cells. EGCG differentially regulated the expression of genes and proteins (Bax, p21, Retinoblastoma, cyclin D1, CDK4, Bcl-X(L)) more than 2-fold, showing a possible gene regulatory role of EGCG. The continual expression in p21WAF1 suggests that EGCG acts in the same way with p53 proteins to facilitate apoptosis after EGCG treatment. And Bax, PCNA, and Bcl-X are important in EGCG-mediated apoptosis. In contrast, CDK4 and Rb are not important in ovarian cancer cell growth inhibition. Conclusion: EGCG can inhibit ovarian cancer cell growth through induction of apoptosis and cell cycle arrest as well as regulation of cell cycle-related proteins. Thereby, the EGCG-mediated apoptosis can be applied to an advanced strategy in the development of a potential drug against ovarian cancer.