L-左旋肌肽对人口腔鳞癌干细胞增殖及凋亡作用的实验研究

目的研究L-左旋肌肽对人口腔癌细胞Tca8113的凋亡作用及机制。方法体外培养Tca8113细胞,将对数生长期的Tca8113细胞分为L-左旋肌肽(5、20、50 mmol/L)处理组和空白对照组。按照分组条件分别用L-左旋肌肽5、20、50 mmol/L和生理盐水处理各组对应细胞。采用MTT法检测处理24 h和48 h后各组Tca8113细胞增殖情况;干预48 h后流式细胞仪检测各组Tca8113细胞凋亡和细胞周期情况;Western blot方法检测各处理组48 h后AKT、p-AKT和p38、p-p38蛋白的表达情况。结果 MTT和流式结果显示,L-左旋肌肽对Tca8113细胞的抑制作用依赖于浓度和时间。Western blot结果显示,L-左旋肌肽干预细胞48 h后,随着L-左旋肌肽浓度的提高,p-AKT和p-p38的蛋白表达量降低。结论 L-左旋肌肽通过抑制AKT和MAPK信号通路,抑制Tca8113细胞的增殖,并促进其凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌细胞端粒酶逆转录酶和c-myc基因表达的调控作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)作用肝癌细胞时端粒酶活性的变化、端粒酶逆转录酶(TERT)及cmyc基因表达的改变,以探讨EGCG对肝癌细胞端粒酶活性的调控机制。方法用聚合酶链反应免疫酶联吸附试验(PCR-ELISA)测定肝癌细胞端粒酶活性,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测肝癌细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)和c-mycmRNA表达。结果在一定时间、一定剂量范围内,EGCG能抑制肝癌细胞端粒酶活性,随着浓度的增加和时间的延长,端粒酶活性逐渐下调;尤其当EGCG浓度超过50mg/L或作用时间超过36h时,端粒酶活性下调更明显,与对照组比较差异用统计学意义(P<0.01);EGCG能抑制肝癌细胞hTRETmRNA的表达,其下降趋势与端粒酶活性下降趋势基本一致,且下调幅度较端粒酶活性下降更明显,两者呈正相关(r=0.931,P<0.01);而EGCG对肝癌细胞cmycmRNA表达的抑制率比hTRETmRNA表达的抑制率更高,并且c-mycmRNA表达先受到抑制,与hTRETmRNA表达的抑制相关明显(r=0.907,P<0.01)。结论EGCG对c-myc的抑制作用可能导致hTERTmRNA的抑制并进一步下调端粒酶活性。     

端粒酶hTERT基因反义核酸对前列腺癌细胞PC3端粒酶活性的抑制作用

目的探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸（ASPS—ODN）对前列腺癌细胞PC3端粒酶活性的抑制作用。方法采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性；采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平；以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化。结果hTERT基因的两端部分硫代修饰ASPS—ODN作用于PC3细胞48h，其端粒酶活性下降，作用72h，其端粒酶活性受到抑制。结论通过hTERT基因的两端部分硫代修饰ASPS—ODN特异性抑制hTERT基因mRNA的表达，可降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性。     

靶向hTERT 人工miRNA 表达框架的构建及其对HepG2 细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：构建针对hTERT基因的人工miRNA表达框架,并验证其对HepG2细胞端粒酶活性的抑制作用。 方法：应用融合PCR技术针对不同位点设计并构建3个靶向hTERT的人工miRNA表达框架,对各表达框架鉴定后,将其单独或两种共转染HepG2细胞,采用TRAP-银染法和TRAP-二聚体蝎形探针荧光定量PCR法检测细胞端粒酶活性。 结果：3个针对hTERT基因的人工miRNA表达框架均成功构建,单独或共转染HepG2细胞后,HepG2细胞的端粒酶活性均被不同程度的抑制,且两种表达框架共转染的抑制作用明显大于单独转染,差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：靶向hTERT基因的人工miRNA表达框架能有效而特异抑制HepG2细胞端粒酶活性,多位点联合抑制是一种有效的实验方案。     

全硫代反义寡聚脱氧核苷酸对胃肠道间质瘤细胞株增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的 观察全硫代反义寡聚脱氧核苷酸(PS-ASODN)对胃肠道间质瘤细胞株GIST867增殖、凋亡及端粒酶活性的影响.方法 将1μmol/L伊马替尼和1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L PS-ASODN作用于GIST867；采用噻唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术检测增殖抑制、端粒酶活性和细胞凋亡,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2) mRNA表达.结果 MTT显示PS-ASODN浓度为5.00μmol/L时,抑制作用明显较对照组强；PS-ASODN对端粒酶活性有明显抑制作用并具时间依赖性；流式细胞检测表明PS-ASODN组的细胞凋亡率为(16.16±1.35)％,显著高于伊马替尼组及对照组；RT-PCR检测表明PS-ASODN可显著下调bcl-2 mRNA的表达.结论 PS-ASODN可能通过抑制端粒酶活性并下调bcl-2基因表达从而抑制GIST867细胞增殖及诱导细胞凋亡.     

冬凌草甲素对膀胱癌EJ细胞的生长抑制作用及机制

目的研究冬凌草甲素（ORI）对膀胱癌EJ细胞株的抑制作用及机制。方法 MTT法检测ORI对EJ细胞的生长抑制作用;电子显微镜和Hoechst 33258染色法观察细胞的形态学变化;Western blot检测Bcl-2和Bax表达的变化。TRAP-PCR-银染法检测端粒酶活性的变化。结果 ORI对EJ细胞有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系。随着ORI作用时间延长,Bcl-2的表达逐渐减弱,Bax的表达逐渐增强。EJ细胞的端粒酶活性随着ORI作用时间的延长而逐渐降低。结论 ORI对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用;机制可能是通过下调Bcl-2/Bax和通过抑制端粒酶活性诱发EJ细胞凋亡的。     

肽核酸对大肠癌细胞生长影响的实验研究

研究肽核酸（PNA）对大肠癌细胞端粒酶活性的抑制作用及其对大肠癌细胞生长的影响,探索大肠癌治疗新方法。（1）检测不同浓度PNA对大肠癌LS-174T细胞端粒酶活性的影响;（2）应用脂质体Lipfectamine^TM介导不同浓度PNA-DNA杂交混合物转染LS-174T细胞,观察细胞克隆生长抑制结果,确定PNA对细胞生长的最佳抑制剂量;（3）选用最佳抑制剂量PNA转染LS-174T细胞、Lipfectamine^TM组和空白对照组,并观察其克隆形成率、细胞形态及群体生长差异。结果显示：（1）不同浓度PNA对大肠癌细胞端粒酶活性均有抑制作用,且与PNA浓度呈正相关;（2）细胞克隆形成抑制实验中PNA对LS-174T细胞最佳抑制浓度为200nmol／L;（3）PNA实验组端粒酶活性明显低于脂质体组和空白对照组。结果表明,PNA抑制大肠癌细胞端粒酶活性对大肠癌LS-174T细胞生长具有明显抑制作用,为大肠癌早期诊断与治疗开辟新途径。     

反义人类端粒酶 RNA逆转录病毒载体构建及其对结直肠癌细胞的抑制作用

目的 研究反义人类端粒酶RNA逆转录病毒载体对结直肠癌HT29细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。探讨以端粒酶为酸点的结直肠癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染结直肠癌HT29细胞，采用RT-PCR检测hTR表达。端粒酶重复扩增法（telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性，绘制生长曲线了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和DNA片段电泳检测细胞凋亡。结果 反义hTR作用后的结直肠癌细胞hTR表达下降，端粒酶活性和细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论 反义hTR对结直肠癌HT29细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制人舰艇可能以hTR为靶点对结直肠癌进行基因治疗。     

羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的机制

目的 探讨羟基磷灰石纳米粒子(nano-HAP)诱导肝癌细胞凋亡的机制.方法 羟基磷灰石纳米粒子处理BEL-7402细胞后,免疫印迹法检测p53、c-myc蛋白表达水平;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;端粒重复序列扩增-酶链免疫吸附反应法(TRAP-ELISA)方法测定细胞内端粒酶活性的变化.结果 羟基磷灰石纳米粒子处理BEL-7402细胞使抑癌基因p53的表达上升、癌基因c-myc的表达下降.随羟基磷灰石纳米粒子浓度的递增(0、50、75、100、150、200 mg/L),端粒酶活性降低(1.94、1.26、1.21、1.14、0.86、0.59),随着作用时间延长(0、12、24、36、48 h)端粒酶活性降低(1.94、1.73、1.57、1.43、1.26),并激活Caspase-3.结论 羟基磷灰石纳米粒子能通过上调p53、下调c-myc基因表达,抑制端粒酶活性及激活Caspase-3等途径诱导肝癌细胞凋亡.     

吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的调节作用

目的:探讨吲哚美辛对原代培养胃癌细胞端粒酶活性的影响,研究其抗肿瘤的作用机制。方法:常规组织块培养法进行胃癌原代细胞培养,取终浓度为200、400及600μmol/L的吲哚美辛作用于原代培养胃癌细胞后,用MTT比色法测定细胞的生长抑制率,采用半定量-TRAP银染法检测端粒酶活性,流式细胞学检测Bcl-2表达水平。结果:不同浓度的吲哚美辛对原代培养胃癌细胞的增殖均有抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,其作用呈时间-剂量依赖性;端粒酶活性的降低与Bcl-2水平下降有关。结论:吲哚美辛能抑制胃癌细胞的增殖,降低端粒酶活性,作用机制与Bcl-2水平下降有关。     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶基因表达和活性的抑制作用及其增殖、凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100nmol/L)转染肾癌7860细胞,采用RTPCR检测7860细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡。结果hTRsiRNA处理组7860细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1.5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,凋亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加。分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mRNA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

短发夹状RNA对PC-3M细胞端粒酶逆转录酶基因表达和端粒酶活性的影响

目的:研究短发夹状RNA(shRNA)对PC 3M细胞中端粒酶逆转录酶(hTRT)基因表达及端粒酶活 性的影响。方法:构建针对hTRT基因的shRNA表达质粒psilencer TRT,在质脂体介导下转染人前列腺癌PC 3M细胞,应用RT PCR及免疫组织化学检测hTRTmRNA及蛋白表达水平,应用SYBR Green染色法检测端粒 酶活性的变化。结果:重组体psilencer TRT转染细胞24h和48h后显著下调hTRTmRNA及蛋白水平,作用 48h后,其抑制率分别为85.39%和79.17%,较空白对照组差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着时间的延 长,端粒酶活性亦有明显下降(P<0.01)。结论:利用短发夹状RNA干扰技术能有效抑制靶基因的表达,为前 列腺癌的基因治疗提供新思路。     

端粒酶活性与膀胱肿瘤T24细胞的诱导分化研究

目的：探讨人膀胱肿瘤T24细胞诱导分化治疗与端粒酶活性改变的关系。方法：用全反式维甲酸（ATRA）诱导分化人膀胱肿瘤T24细胞，用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验（PCR-ELISA）法检测T24细胞诱导分化后端粒酶活性变化，用流式细胞术检测细胞周期动力学改变。结果：T24细胞经ATRA诱导分化后，细胞周期动力学发生改变：S期细胞所占比例逐渐降低，G0/G1期细胞所占比例逐渐增加；端粒酶活性被明显抑制，与对照组比较，ATRA处理后1、3、5、7d端粒酶活性抑制率分别为10.9％、34.7％、81.2％、92.5％；端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态有关。结论：人膀胱肿瘤T24细胞诱导分化后，其细胞周期动力学发生改变，端粒酶活性被抑制，这可能为膀胱肿瘤的诱导分化治疗提供理论依据。     

替米沙坦通过Wnt/β-catenin信号通路影响非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的研究

目的 研究替米沙坦对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 体外培养非小细胞肺癌细胞株A549,采用CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对A549细胞增殖活性的影响,以克隆形成实验检测不同浓度替米沙坦处理下A549的存活分数,以划痕实验检测不同浓度替米沙坦对A549细胞迁移能力的影响,Hoech...