沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：探究环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB1）基因沉默对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA），采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组，同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western-blot法检测转染效率；CCK-8法检测细胞的增殖能力；集落形成实验检测细胞的集落形成能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡率；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力；Western-blot法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果： 在MCF-7和MDA-MB-231细胞中，相较于shSCR组，shCREB1#1和shCREB1#2组中CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降（P＜0.001）。沉默CREB1后，MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱且细胞的凋亡率升高（P＜0.05）。此外，沉默CREB1可使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达水平下调而促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平上调。 结论：沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对膀胱癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨应用RNA干扰技术沉默信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因对膀胱癌T24及5637细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA（siRNA）的DNA模板，构建pGenesil-1-shRNASTAT3重组质粒，转染人膀胱癌T24及5637细胞。通过半定量RT-PCR、Western印迹检测STAT3基因不同水平的表达情况，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、流式细胞仪检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化。结果成功构建pGenesil-1-shRNA—STAT3重组质粒，并成功转染T24及5637膀胱癌细胞；半定量RT-PCR、Western印迹检测结果显示，重组质粒实验组细胞的STAT3基因表达在RNA及蛋白水平上显著低于对照组（P〈0．05）；MTT实验、流式细胞仪检测结果显示，重组质粒实验组细胞的增殖明显受到抑制并出现凋亡现象。结论pGenesil-1-shRNA—STAT3转染T24及5637膀胱癌细胞后，可有效抑制STAT3的表达，并抑制膀胱癌细胞的生长及增殖。     

hTERT基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性及COX-2表达的影响

目的本研究探讨hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞生物学特性及环氧化酶-2(COX-2)的影响。方法设计合成特异性针对hTERT mRNA的siRNA,电转染入乳腺癌细胞,以致目的基因沉默。应用RT-PCR及Western blot法检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白的表达状况;应用流式细胞仪检测细胞周期;并通过CCK-8增殖实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力;经小室侵袭实验检测沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力。利用免疫组织化学法检测COX-2蛋白的表达。结果 hTERT基因沉默48h后,hTERT转染组在沉默hTERT基因后乳腺癌MCF-7细胞的mRNA及蛋白表达呈现明显降低(P0.05);细胞周期检测结果示乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,三组比较统计学差异明显(P0.05);CCK-8增殖实验结果表明乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞在hTERT转染组的增殖得到显著抑制(P0.05);小室侵袭实验结果表明,hTERT转染组穿过滤膜的细胞数量明显减少(P0.05);免疫组织化学法检测结果显示,COX-2蛋白在hTERT转染组的表达明显降低,并与hTERT基因的表达相关联。结论 hTERT基因沉默后对乳腺癌细胞的增值和迁移能力均有影响,并能降低COX-2蛋白的表达,从而改善乳腺癌患者预后。     

RNA干扰抑制PIN1对肺癌A-549细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究应用RNA干扰技术在肺癌A549细胞沉默PIN1基因的表达对细胞增殖和细胞周期的影响.方法:构建靶向PIN1基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染A549细胞,G418抗生素筛选稳定沉默PIN1基因的细胞株,Real-time PCR和Western blot验证PIN1基因在mRNA和蛋白水平的抑制效率.PI染色流式细胞仪检测细胞增殖状况和细胞周期分布,分析PIN1下调对A549细胞增殖能力的影响.结果:成功构建了PIN1 shRNA真核表达载体,其表达量较阴性对照载体转染组最高下降了89.3%,蛋白表达显著抑制.流式细胞仪分析表明,PIN1抑制导致细胞出现G1期阻滞,增殖指数显著降低.结论:shRNA真核表达载体稳定转染A549能够有效沉默PIN1基因的表达,进而抑制肺癌细胞的增殖,影响细胞周期,改善肿瘤恶性表征.     

Livin基因对口腔鳞癌细胞TCA8113增殖及凋亡调控作用的研究

目的研究Livin基因在口腔鳞癌细胞TCA8113凋亡和增殖中的作用。方法通过建立高表达的Livin基因、RNA的干扰载体和脂质体转染的TCA8113细胞,采用Western blot和荧光定量PCR进行转染mRNA及蛋白表达变化的验证。细胞经Annexin V/PI染色,流式细胞仪检测其凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析转染后细胞增殖。结果细胞转染pcDNA3.1-Livin后高表达,而pSuper-shLivin转染后Livin基因被有效沉默。MTT增殖检测结果表明,高表达的Livin基因能促进TCA8113细胞增殖,而沉默的Livin基因能抑制细胞的增殖。细胞凋亡检测结果表明,高表达的Livin基因能抑制细胞凋亡,而沉默的Livin基因促进细胞凋亡。转染细胞时与顺铂同时使用后发现沉默的Livin基因能增强顺铂诱导细胞凋亡的能力。结论本研究证实,Livin基因的高表达和沉默能有效调控口腔鳞癌细胞TCA8113系的凋亡和增殖。顺铂与沉默的LIVIN基因联合使用后,诱导细胞凋亡的能力显著增强。     

p62基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响

目的探讨p62基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和对顺铂敏感性的影响。方法选取宫颈癌Hela细胞株,随机分为对照组、空白shRNA组和p62-shRNA组,其中空白shRNA组转染空白慢病毒载体,p62-shRNA组转染沉默p62表达的慢病毒载体,采用RT-PCR检测各组p62 mRNA表达,CCK法检测各组细胞增殖以及在不同顺铂浓度下细胞存活情况,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果 p62-shRNA组p62 mRNA相对表达量为(0.241±0.096),明显低于对照组和空白shRNA组(P0.05);p62-shRNA组培养24h、48h、72h细胞OD值明显低于对照组和空白shRNA组(P0.05);p62-shRNA组细胞凋亡率为(23.20±2.91)%,明显高于对照组和空白shRNA组(P0.05);0.05mg/L、0.5mg/L和5mg/L顺铂作用下,p62-shRNA组细胞存活率分别为(60.11±3.10)%、(34.38±2.91)%和(22.10±3.00)%,明显低于对照组和空白shRNA组(P0.05)。结论 p62基因沉默可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,促进细胞凋亡,增加对顺铂的敏感性。     

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后的体外实验研究

目的:探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后对MCF-7细胞的影响.方法:利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞.通过RT-PCR检测转染后mRNA的表达情况.MTT比色法测定细胞增殖的抑制.Hoechst 33342检测细胞的凋亡情况.结果:Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达,其转染后24、48、72 h后mRNA表达量逐渐增高.Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24、48、72 h抑制率之间的差异具有显著性(P＜0.05).Hoechst 33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24、48、72 h凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05).结论:Noxa基因特染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡.     

人乳癌细胞小球藻CvFad3基因的表达和作用

目的构建真核表达载体pEGFP-C3-n-3,检测小球藻n-3脂肪酸脱氢酶基因CvFad3在人乳癌MCF-7细胞中的表达和作用。方法通过RT-PCR法扩增得到CvFad3基因,将CvFad3基因cDNA插入到真核表达载体pEGFP-C3中,构建重组表达载体pEGFP-C3-n-3,并将其转染入MCF-7细胞中,设空载体pEGFP-C3为对照组。采用RT-PCR检测CvFad3基因的表达,MTT法分析CvFad3基因对MCF-7细胞增殖的影响,气相色谱检测CvFad3基因对MCF-7细胞n-3多不饱和脂肪酸含量的影响。结果构建的重组载体pEGFP-C3-n-3转染入乳癌MCF-7细胞48 h后可检测到CvFad3基因mRNA的条带,而转染pEGFP-C3的MCF-7细胞48 h后检测不到CvFad3基因mRNA的条带。与对照组比较,转染pEGFP-C3-n-3的细胞MTT吸光度明显降低（t=6.039,P〈0.01）;人乳癌细胞MCF-7细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量显著升高。结论重组载体pEGFP-C3-n-3构建成功,CvFad3基因能在MCF-7细胞内有效异源表达,且抑制了MCF-7细胞的增殖,增加了细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

RNA干扰Caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用

目的:探讨RNA干扰caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用效果.方法:构建针对大鼠caspase-8基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-caspase-8 shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定表达caspase-8 shRNA的细胞系.实验分为3组,(1)正常对照组,未转染的RK3E细胞;(2)阴性对照组,转染空载体pRNAT-U 6.1的RK3E细胞系;(3)实验组,转染caspase-8 shRNA的RK3E细胞系.经脂多糖孵育12 h后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR和Real time PCR检测mRNA的表达,以及各组caspase-8蛋白的活性.结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),caspase-8的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P＜0.01).结论:针对caspase-8的特异性shRNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制细胞凋亡的发生.     

Protein tyrosine phosphatase PRL-3 in malignant cells and endothelial cells: expression and function

Protein tyrosine phosphatase PRL-3 mRNA was found highly expressed in colon cancer endothelium and metastases. We sought to associate a function with PRL-3 expression in both endothelial cells and malignant cells using in vitro models. PRL-3 mRNA levels were determined in several normal human endothelial cells exposed or unexposed to the phorbol ester phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and in 27 human tumor cell lines. In endothelial cells, PRL-3 mRNA expression was increased in human umbilical vascular endothelial cells and human microvascular endothelial cells (HMVEC) exposed to PMA. An oligonucleotide microarray analysis revealed that PRL-3 was among the 10 genes with the largest increase in expression on PMA stimulation. Phenotypically, PMA-treated HMVEC showed increased invasion, tube formation, and growth factor-stimulated proliferation. A flow cytometric analysis of cell surface markers showed that PMA-treated HMVEC retained endothelial characteristics. Infection of HMVEC with an adenovirus expressing PRL-3 resulted in increased tube formation. In tumor cells, PRL-3 mRNA levels varied markedly with high expression in SKNAS neuroblastoma, MCF-7 and BT474 breast carcinoma, Hep3B hepatocellular carcinoma, and HCT116 colon carcinoma. Western blotting analysis of a subset of cell line lysates showed a positive correlation between PRL-3 mRNA and protein levels. PRL-3 was stably transfected into DLD-1 colon cancer cells. PRL-3-overexpressing DLD-1 subclones were assessed for doubling time and invasion. Although doubling time was similar among parental, empty vector, and PRL-3 subclones, invasion was increased in PRL-3-expressing subclones. In models of endogenous expression, we observed that the MCF-7 cell line, which expresses high levels of PRL-3, was more invasive than the SKBR3 cell line, which expresses low levels of PRL-3. However, the MDA-MB-231 cell line was highly invasive with low levels of PRL-3, suggesting that in some models invasion is PRL-3 independent. Transfection of a PRL-3 small interfering RNA into MCF-7 cells inhibited PRL-3 expression and cell invasion. These results indicate that PRL-3 is functional in both endothelial cells and malignant cells and further validate PRL-3 as a potentially important molecular target for anticancer therapy.     

反义血管内皮生长因子对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的　构建表达反义血管内皮生长因子165(VEGF165)的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法　应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果　成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞增殖能力降低。结论　VEGF165反义RNA能够明显减少人乳腺癌细胞株MCF- 7内VEGF165的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,证明了反义基因干预治疗的有效性,为乳腺癌的基因治疗进行了有益探索。     

血管内皮生长因子mRNA干扰提高乳腺癌MCF-7细胞对放化疗敏感性的研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）mRNA干扰对乳腺癌的治疗意义。方法应用RNA干扰技术,对乳腺癌细胞株MCF-7进行VEGFmRNA干扰,并辅以放、化疗处理。在干扰前后用流式细胞技术、MTr比色法等技术对MCF-7细胞株的细胞周期、凋亡率、抑制率进行检测。结果流式细胞技术显示,转染VEGFsiRNA后MCF-7细胞出现GO—G1阻滞（F=15．237,P=0．017）、凋亡明显增加（F=11．160,P=0．029）;MTr比色法发现,转染前后,紫杉醇对MCF-7细胞的抑制效率明显提高（F=5．256,P=0．036）,作用转染前后MCF-7细胞48hIC50分别为4．76mmol/L、3．29mmoVL;克隆形成率实验中,MCF-7细胞经转染后,克隆形成率出现明显下降,并对紫杉醇及放射治疗具有明显的协同作用（P〈0．05）。结论VEGF基因干扰可以抑制MCF-7细胞的增殖、促进其凋亡．并能提高MCF-7细胞对放化疗的敏感性。     

慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

目的:探究慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的研究。方法:利用shRNA基因干扰技术,构建shRNA LINGO-1干扰载体,慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况分成空白对照组(未转染慢病毒的BMSCs)、空载体病毒组(转染不含shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)、干扰载体病毒组(转染shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面蛋白,利用RT-PCR和Western-Blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、巢蛋白的表达。结果:CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60.2%和58.3%;CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3.4%和2.6%。慢病毒转染效率为90%以上。空白对照组、空载体病毒组和干扰载体病毒组的GFAP、NSE、NF和巢蛋白m RNA的相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),其中空载体病毒组和空白对照组的比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰载体病毒组和空载体病毒组的差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点。结论:慢病毒介导shRNA LINGO-1干扰载体转染促进BMSCs可提高BMSCs向神经细胞转化的效率。     

CHOP基因shRNA载体构建及沉默效应

背景:研究认为,CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)通路是内质网应激介导细胞凋亡的3条通路之一,目前国内外对内质网应激介导细胞凋亡在胃癌方面的研究较少。目的:构建针对人CHOP基因的短发卡RNA表达载体,观察RNA干扰对人胃癌细胞系BGC823细胞CHOP基因表达的抑制作用。方法:设计CHOP的shRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入真核表达载体pSUPER-EGFP1,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人胃癌细胞系BGC823细胞,采用RT-PCR和Western blotting分别检测CHOP基因mRNA和蛋白表达的变化。结果与结论:把针对CHOP基因的shRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPER-EGFP1载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Western blot检测显示,CHOP基因的表达水平明显降低,其中以CHOP-1为靶序列的shRNA沉默作用最强,CHOP的表达抑制率约67%。     

Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究

目的探讨Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因,以及Fra-1启动子高转录活性的分子机制。方法选取2株人乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7、1株人脐静脉内皮细胞株ECV304进行研究。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法和蛋白质印迹法分别检测Fra-1mRNA和蛋白的表达情况;构建Fra-1双荧光报告载体,检测Fra-1启动子转录活性;构建Fra-1启动子短截报告载体及相关位点的突变型报告载体,检测短截报告载体及突变型载体转录活性;通过凝胶迁移阻滞试验观察生物素标记的特异性探针与活化因子蛋白-1(AP1)结合情况。结果乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中,Fra-1的mRNA和蛋白的相对表达量及其启动子全长报告载体转录活性均高于人脐静脉内皮细胞株ECV304,差异有统计学意义(P0.05);在构建的一系列Fra-1启动子短截报告载体中,只有pGL3B-256活性明显下降,差异有统计学意义(P0.05);AP1突变型报告载体pGL3B-M2、特异性蛋白1及AP1双突变报告载体pGL3B-M3活性明显低于野生型报告载体pGL3B-M1,差异有统计学意义(P0.05);凝胶迁移阻滞试验观察到生物素标记的特异性探针与AP1结合发生了明显的阻滞效应。结论在体外培养的乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中,反式作用因子AP1通过激活Fra-1基因启动子上调其表达。     

Survivin基因沉默对恶性胶质瘤U87细胞的影响

目的探讨Survivin基因沉默对人脑胶质瘤细胞株U87体外细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法利用脂质体将pGenesil Survivin shRNA干扰质粒转染U87细胞,通过western法检测干扰48h后Survivin蛋白的抑制率,通过MTT法观察转染后24 h、48 h和72 h细胞增殖的变化,流式细胞术观察转染后48 h细胞凋亡和细胞周期的变化。结果pGenesil Survivin shRNA干扰质粒转染U87细胞48 h后,Survivin蛋白的抑制率约为78%;阻滞U87细胞由G1期进入S期,抑制细胞的生长,增加了细胞的凋亡。结论Survivin shRNA表达载体可以特异高效地抑制胶质瘤U87细胞Sur-vivin基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖。     

miR-34a调控下游基因FUT8表达介导乳腺癌多药耐药的实验验证

目的探究miR-34a及FUT8的异常表达对乳腺癌多药耐药性的调控机制,明确乳腺癌耐药的诊疗靶点。方法采用Real-time PCR及western blot技术检测MCF-7和MCF-7/ADR中miR-34a和FUT8的表达水平; Real-time PCR技术检测乳腺癌细胞系中miR-34a的转染效率;通过生物信息学方法预测并采用双荧光素酶报告实验验证FUT8与miR-34a之间的靶向关系;特异性调控miR-34a的表达后,分别通过Real-time PCR、western blot以及免疫荧光染色检测转染细胞系中FUT8基因及蛋白质水平变化;采用CCK8实验、免疫荧光实验检测其对MCF-7和MCF-7/ADR细胞增殖、耐药性的调控作用。结果 miR-34a在MCF-7中的表达水平明显高于MCF-7/ADR(P=0.002 6);FUT8基因在MCF-7/ADR中的表达水平明显高于MCF-7(P=0.001 6);FUT8是miR-34a调控乳腺癌耐药性的靶点(P=0.001 9);特异性上调MCF-7/ADR细胞中miR-34a的水平可明显抑制FUT8的表达,并抑制该细胞的多药耐药性及增殖性;而下调MCF-7细胞中miR-34a表达后,FUT8的表达水平明显升高,同时增强了细胞多药耐药及增殖能力。结论 miR-34a通过调控下游基因FUT8的表达介导乳腺癌多药耐药。     

序列特异性短发夹状RNA逆转白血病多药耐药性研究

本研究旨在构建并筛选MDR1序列特异性短发夹状RNA干扰载体,研究其对K562／A02细胞的影响。采用脂质体介导方法,将含mdr1—shRNA质粒转入K562／A02细胞,经G418筛选得到稳定表达细胞株,用实时定量RT—PCR和Westemblot分别检测干扰后mdrlmRNA水平及蛋白水平的表达变化,通过ccK8测定干扰后细胞对化疗药的敏感性变化,Rhodamine123外排实验检测P—gP功能的变化。结果发现：与对照组相比,4种MDR1-shR—NA载体均能显著下调P—gP的表达,其中508—526靶住点的shRNA作用效果最好。结论：筛选得到的MDR1-shRNA载体能够显著下调MDR1的表达,逆转耐药表型,为后续进行的动物实验研究创立了条件。