葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁稳定性检测

目的:研究共沉淀法制备葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁的稳定性.方法:参照一般注射试剂的基本要求,对采用共沉淀法制备葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁液体,分别进行强化实验和长期实验,观察或测定样品的性状、pH值、铁浓度、粒径、饱和磁化强度及T2磁豫率等参数.结果:与实验前所检测的数据比较,实验后各项数据无统计学差异.结论:葡聚糖修饰的纳米级超顺磁性氧化铁稳定性好,为进一步将其作为磁共振成像对比剂及靶向基因载体研究奠定了基础.     

超顺磁性Fe_3O_4纳米粒的制备及其对小鼠的急性毒性作用

目的制备超顺磁性Fe3O4纳米粒(superparamagnetic Fe3O4 nanoparticle,SPFN),探讨其对小鼠的急性毒性作用。方法采用化学共沉淀法制备SPFN,应用透射电镜和振动样品磁场计等对SPFN进行形态观察和结构表征测定。取60只小鼠按不同的给药方式和剂量,随机数字表法分为3组(n=20):口服灌胃组(总剂量:2 104.8 mg/kg、容积:25 ml/kg)、腹腔注射组(总剂量:1 578.6 mg/kg、容积:20 ml/kg)、尾静脉注射组(总剂量:438.5 mg/kg、容积:10 ml/kg);每组另取10只小鼠予生理盐水作为对照(n=10)。观察小鼠的一般情况;全自动生化分析仪检测小鼠主要血生化指标;HE染色观察主要脏器的病理改变;瑞氏染色观察骨髓组织。结果制成粒径为15～20 nm,饱和磁化强度为21.431 emu/g,剩余磁化强度为0.102 emu/g的SPFN。予SPFN 2周后,各组小鼠均未死亡,血生化指标均无统计学差异(P>0.05),主要脏器和骨髓均未见炎症、水肿、变性、坏死等改变。结论成功制备超顺磁性Fe3O4纳米粒,自制超顺磁性Fe3O4纳米粒对小...     

超顺磁性氧化铁纳米粒子的制备及性能检测

目的:制备超顺磁性磁共振对比剂四氧化三铁纳米颗粒,并检测其物理和磁学性质,以探讨作为反义基因载体的可能性.方法:共沉淀一步法制备葡聚糖包被的四氧化三铁纳米颗粒,采用X射线粉末衍射法分析其结构,用透射电镜及原子力显微镜测量其大小及分布,用振动样品磁强计检测磁化率等参数.结果:所得样品核心为四氧化三铁晶体,核心粒径为5nm左右,包被葡聚糖后整体颗粒直径为20～35nm,驰豫率为0.155×106/(mol·s),质量饱和磁场强度为69.42162emu/g Fe.结论:制备的样品具有粒径小,分散性好,超顺磁性等优点,符合作为磁共振对比剂的要求,可以作为磁共振成像反义基因载体.     

超顺磁性氧化铁纳米粒子标记成肌细胞方法研究

目的:使用超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)对成肌细胞进行体外标记,探讨SPIO标记方法及SPIO对细胞的影响.方法: 常规方法进行成肌细胞培养,应用脂质体包被的SPIO标记成肌细胞,用光镜及电镜观察标记效率及对细胞增殖的影响,台盼蓝染色及JC-1观测SPIO对细胞活力的影响.结果: 普鲁士蓝染色证实了每个标记细胞胞质内有多少不等的蓝染铁颗粒,单纯SPIO标记有效率为50%,脂质体包被的SPIO标记有效率为100%,电镜也观测到细胞内的SPIO颗粒.SPIO标记对细胞无毒性,不影响细胞的增殖及活性.结论: 脂质体包被SPIO标记成肌细胞方法简单、高效、无毒,可用于磁共振对标记细胞进行活体内外无创动态示踪研究.     

超顺磁性纳米氧化铁颗粒淋巴结成像及其与病理超微结构的比较

目的 研究不同性质淋巴结超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)的增强磁共振特征,探讨其与淋巴结超微结构的关系.方法 36只健康新西兰兔随机分为炎症组及肿瘤转移组,兔足垫注射完全弗氏佐剂,用于建立腘窝淋巴结的炎性增生模型;兔后小腿肌肉接种VX2 瘤株,用于建立腘窝肿瘤淋巴结转移模型.两组建模后动物均经静脉注射90 μmol Fe/kg的USPIO,于注射前及注射后24 h分别行磁共振成像(MRI)扫描观察淋巴结信号强度及T2值变化并计算强化率,扫描后取出腘窝淋巴结行HE染色、普鲁士蓝染色及电镜切片,观察淋巴结超微结构的变化、铁颗粒在淋巴结内的分布特征,分析病理显微结构与淋巴结强化的关系.结果 炎症组36枚淋巴结表现为不同程度的反应性增生,肿瘤转移组共26枚淋巴结为肿瘤转移性.平扫时炎性增生的淋巴结和肿瘤转移性淋巴结的T2信号强度差异无显著性,USPIO强化后,炎性增生淋巴结中心T2信号强度明显降低,肿瘤转移淋巴结则表现为均匀而不明显的T2信号下降,二者淋巴结强化率分别为57.39%和29.45%,差异具有显著性(P<0.01).HE染色、普鲁士蓝染色及电镜切片显示淋巴结内的USPIO铁颗粒主要分布于淋巴结髓索结构内,副皮质区及皮质区巨噬细胞相对较少,与MRI图像相对应;电镜检查显示USPIO颗粒均存在于巨噬细胞的胞饮泡内.肿瘤转移淋巴结中,4枚正常淋巴结结构丧失,19枚仍存在部分淋巴结结构但其内含USPIO铁颗粒的巨噬细胞减少且巨噬细胞内铁颗粒数目减少,3枚仅见小片状包膜下转移灶.结论 良恶性淋巴结USPIO强化特征与淋巴结的超微结构特别是巨噬细胞在结内的分布及其功能状态有较密切关系,可能影响USPIO对淋巴结性质的诊断准确性.     

超顺磁性葡聚糖氧化铁纳米颗粒的研制及表征

目的 制备葡聚糖包被的超顺磁氧化铁（SPIO）纳米粒子,并对其主要物理性质和磁学性质进行研究。探讨它作为磁共振造影剂的可能性。方法 通过共沉淀法获得SPIO纳米粒子,分别采用透射电镜和光子相关光谱仪测定其粒径大小,利用邻苯二氮菲比色法测定铁的浓度,同时用核磁共振仪测定弛豫率等参数。结果 X-射线衍射分析确定所制备的葡聚糖磁性粒子主要为Fe3O4晶体,粒子体均粒径为85．9nm,氧化铁核心大小为15nm左右,具有超顺磁性,其弛豫率和质量磁饱和度分别达到0．1567mmol／ms和80emu／gFe。结论 所制备的SPIO粒子稳定,其物理性质表明其具有作为磁共振造影剂的特性。     

超顺磁性氧化铁纳米颗粒单次和连续给药的小鼠组织分布

磁性纳米颗粒除了具有一般纳米颗粒的特性外,还具有超顺磁性,在外加磁场作用下可定向操纵,因此其在生物医学中有着广泛的应用前景,如药物输送、磁共振成像(MRI)对比剂、靶向药物以及细胞分离和免疫分析等等[1 3]>.超顺磁性氧化铁颗粒(superparamagnetic iron oxides,SPIOs)粒径小(直径不超过100 nm),血液半衰期长(一般可达6 h),是医学成像对比剂研究理想的纳米材料.其功能核团为Fe3>O4>晶体.急性毒理实验表明,短期内使用安全剂量的SPIOs对生物体无明显损害[4-5]>.     

超顺磁性氧化铁Resovist标记神经干细胞的实验研究

目的研究超顺磁性氧化铁（superparamgnetic iron oxides，SPIOs）标记神经干细胞及其生物学特性．方法：神经干细胞培养、传代和诱导分化；Resovist（一种SPIOs）标记神经干细胞。制备磁标记神经干细胞；利用免疫细胞化学、透射电镜和Prussian blue染色等方法对磁标记神经干细胞生物学特性进行研究。结果：在原代及传代细胞中有Nestin阳性细胞即神经干细胞．血清诱导下，神经干细胞可分化为GFAP、NF200阳性细胞．Resovist与神经干细胞共同孵育后，透射电镜及Prussian blue染色显示胞浆中含有铁颗粒，Resovist也可以随细胞的分裂增殖而传到子代细胞中。随Resovist浓度的增高（5．6μg／ml-11．2μg/ml），Resovist对神经干细胞存活、分化能力的影响无显著性差异（P〉0．05）．当Resovist的浓度大于22．4μg／ml时。Resovist影响其存活和分化（P〈0．05）。结论：本实验利用Resovist作为磁标记探针，对神经干细胞进行成功磁标记，为进一步利用核磁共振（MRI）对神经干细胞活体追踪奠定实验基础。     

超顺磁性氧化铁对大鼠神经干细胞生物学活性的影响

目的 初步研究利用超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓基质细胞来源的神经干细胞及其对细胞活力、增殖等生物学活性的影响,并确定最佳标记浓度.方法 无菌条件下取大鼠股骨骨髓,梯度密度离心法分离得到骨髓基质细胞.体外培养、诱导成神经干细胞,使用不同终浓度的(6.25、12.5、25、37.5、50μg/ml)Ferumoxides(超顺磁性氧化铁)标记神经干细胞,采用普鲁士蓝染色、MTT法、流式细胞仪、透射电镜等方法鉴定Ferumoxides标记神经干细胞的效率及对细胞活力、增殖等生物学特性的影响.结果 Ferumoxides可以高效率标记神经干细胞,标记效率在90%以上.普鲁士蓝染色显示标记的神经干细胞胞质内存在细小蓝色铁颗粒,细胞呈淡蓝至深蓝色,颜色的深浅与所加Ferumoxides的剂量成正相关.电镜结果显示标记的神经干细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,主要集中在胞体上.当Ferumoxides终浓度高于25 μg/ml时,Ferumoxides颗粒在细胞内聚集成团块状,量较多,在一定程度上影响了细胞超微结构的观察;低于25 μg/ml时,Ferumoxides颗粒散布于细胞胞质内,并随着浓度的降低,Ferumoxides颗粒在胞质内分布越分散,量越少.MTT及流式细胞仪结果显示Ferumoxides终浓度大于25 μg/ml时则对细胞活力、增殖、凋亡有一定影响,小于等于25 μg/ml时对细胞活力、增殖无明显影响.结论 利用Ferumoxides在体外标记神经干细胞是一种可行的实验方案,其最佳终浓度为25 μg/ml.     

绿色荧光蛋白转基因胎鼠神经干细胞的超顺磁性氧化铁标记

目的探讨超顺磁性氧化铁（SPIO）标记对绿色荧光蛋白（GFP）转基因胎鼠神经干细胞（NSCs）的标记效果及标记后对其生物学特性的影响.方法采用多聚赖氨酸（PLL）介导SPIO的方法标记NSCs,用普鲁士蓝染色观察标记后NSCs内铁,比较标记和未标记NSCs的GFP表达、活力、增殖、凋亡及多向分化能力.结果普鲁士蓝染色示标记NSCS胞质内见大量蓝色颗粒,细胞的活力、增殖、凋亡及多向分化能力检测均显示两组细胞间无明显差别.结论用PLL介导SPIO标记NSCs是一种可行、安全、有效的细胞内标记方法.     

甘露糖修饰超顺磁纳米颗粒的制备及体外特性分析

目的探讨以甘露糖(mannose)修饰超顺磁纳米颗粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPION)的制备方法并检测其理学性质,通过体外实验探讨该体系能否被网状内皮系统吞噬。方法采用共沉淀法制备Fe3O4纳米颗粒,然后加入甘露糖溶液,在通氮条件下90℃剧烈搅拌2 h,得到甘露糖包被的SPION。透射电镜测量其大小和分布,傅里叶红外光谱判断甘露糖修饰效果,采用原子吸收分光光度计检测样品中铁含量,体外白细胞吞噬实验检测其能否被白细胞吞噬,细胞毒性实验检测样品的安全性。结果所得样品为球形或类球形,分散性好,核心为Fe3O4晶体,核心粒径为(12.89±3.29)nm,包被甘露糖后的整体颗粒直径不超过20 nm;样品的铁含量为69.84 mg/L;红外吸收光谱测定结果表明甘露糖成功结合到Fe3O4的表面;体外白细胞吞噬实验表明白细胞对甘露糖修饰的SPION的吞噬率较高,细胞毒性实验表明其对细胞的IC50为100.44μg/ml。结论制备的mannose-SPION具有粒径小、分散性好、超顺磁性等优点,容易被吞噬细胞吞噬,且细胞毒性较低。     

磁标记反义探针对小鼠的急性毒理观察

目的 评价SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对小鼠的急性毒性,为进一步将该探针用于活体MR基因成像与靶向基因治疗奠定基础.方法 60只清洁级昆明种小鼠分为口服灌胃、静脉注射、腹腔注射3组,采用最大给药苗法,口服灌胃:总剂量为2 104.8 mg/kg,给药容积40 ml/kg;静脉注射:总剂量为438.5 mg/kg,给药容积25 ml/kg;腹腔注射:总剂量为1 578.6 mg/kg,给药容积30 ml/kg;各组还另设20只小鼠按相应方式给予等量生理盐水作为对照.所有实验小鼠均在25℃室温下连续饲养14 d,观察并记录饲养期问小鼠的一般情况、主要脏器的病理学、血常规、凝血指标和血清主要生化指标改变.结果 在观察期间,各组小鼠均末出现死亡,仅个别出现食欲下降、饮水量增多、腹泻、嗜睡、活动增加等,但均在3 d内恢复正常.脏器系数无统计学差异,肝、脾、肾、心、肺、骨髓、生殖器等主要脏器颜色、形态未见明显异常改变,HE染色切片肝、脾、肾、心、肺、生殖器等细胞和Wright染色的骨髓细胞均无水肿、变性、坏死等改变,普鲁士蓝染色仅见肝、脾内分布少许监色铁颗粒.各组血常规、凝血指标及生化指标无统计学差异.结论 SPIO标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对小鼠无急性毒性.     

壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性四氧化三铁纳米粒子的细胞毒性

目的 研究壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性四氧化三铁纳米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）的细胞毒性,为临床应用提供实验依据。方法 用透射电子显微镜对壳聚糖SPIONs和油酸钠SPIONs进行形态学观察;用10 μg/mL的壳聚糖SPIONs和油酸钠SPIONs悬液处理体外培养的人肺腺癌细胞A549,普鲁士蓝染色观察2种SPIONs在细胞内的分布;用不同浓度（0、25、50、100和200 μg/mL）的2种SPIONs分别处理A549细胞,MTT法测定细胞生长活性;2种SPIONs染毒A549细胞48 h时,测定上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;DAPI染色法观察细胞凋亡情况。结果 （1）2种SPIONs均呈类球形结晶,粒径20~30 nm,此时四氧化三铁纳米粒子之间的热振动能足以克服磁吸引力而呈现超顺磁性。（2）普鲁士蓝染色显示细胞内可见蓝色沉着,说明2种SPIONs均可进入A549细胞内。（3）MTT检测结果显示壳聚糖SPIONs对细胞生长几乎无抑制,而200 μg/mL 油酸钠SPIONs在48 h和72 h时对细胞有明显的抑制作用（P<0.05）。（4）200 μg/mL壳聚糖SPIONs染毒细胞的上清液中LDH活性稍高于对照组（P<0.05）,而100 μg/mL和200 μg/mL油酸钠SPIONs染毒细胞的上清液中LDH活性均高于对照组（P<0.05）,同时也高于相同浓度壳聚糖SPIONs染毒组（P<0.05）。（5）DAPI凋亡检测显示,壳聚糖SPIONs染毒细胞与对照组间差异无统计学意义,而油酸钠SPIONs染毒细胞发生明显的细胞核皱缩及胞核碎裂现象,且细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）。结论 壳聚糖SPIONs与油酸钠SPIONs相比具有较低的细胞毒性。     

柠檬酸修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒的制备及表征

目的：制备并表征柠檬酸（citric acid,CA）修饰的超顺磁性氧化铁纳米粒（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）用于磁靶向、热疗和磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）。方法： 应用共沉淀法制备柠檬酸修饰的SPIONs（CA-SPIONs）,并通过磁铁、透射电子显微镜、激光粒度测定仪、傅里叶转换红外（Fourier transform infrared,FT-IR）光谱仪、热重 差热同步分析仪、振动样品磁强计、X射线衍射仪分别对CA-SPIONs的磁响应性、形态、粒径、红外特征、柠檬酸的质量分数、磁学性质、X射线衍射图谱等进行表征;采用高频感应加热机对CA-SPIONs的发热性能进行考察;通过3.0 T的MRI扫描仪对CA-SPIONs的横向弛豫效能（r2）进行评价。结果： 制备的CA-SPIONs在水中分散性良好,呈深黑色,具有良好的磁响应性,其形态圆整、大小均一,平均粒径在12 nm左右,水力学平均粒径为（72.35±4.47） nm,多分散系数为0.231±0.029。红外光谱结果证明CA SPIONs表面成功修饰上了CA,修饰的CA所占的重量百分比为9.0%。CA-SPIONs具有良好的超顺磁性,其饱和磁化强度为63.58 emu/g;CA-SPIONs为反尖晶石型结构,经Debye-Scherrer半宽公式可计算出晶粒大小为12.4 nm;在9 A和45~50 kHz的交变电磁场下,CA-SPIONs呈现出良好的发热性能,比吸收率（specific absorption rate,SAR）值为26 W/g;在3.0 T的MRI扫描仪下,测得CA-SPIONs的r2为338 (mmol/L)-1·s-1,表明CA-SPIONs具有良好的MRI负性对比增强作用。结论： CA-SPIONs有希望用于磁靶向、热疗和MRI诊断。     

长春新碱超顺磁性氧化铁纳米粒的制备及体外评价

采用自组装法制备长春新碱超顺磁性氧化铁纳米粒,分别通过邻二氮菲显色法和高效液相色谱法测定制剂中铁浓度和药物浓度,计算包封率;分别用透射电镜、动态光散射法对制得纳米粒的形态、粒径进行了表征;通过振动样品磁强计测定制剂的饱和磁化强度,绘制磁滞回线;以硫酸长春新碱为对照,考察等剂量的长春新碱超顺磁性氧化铁纳米粒对人白血病K562细胞的抑制效果,通过四唑单钠盐法检测细胞活力。结果表明,制得的长春新碱超顺磁性氧化铁纳米粒包封率为(81.2±1.5)%,铁浓度为(104±1.4)μg/mL;磁性纳米粒子呈球形,平均粒径为(83±1.2)nm;饱和磁化强度为53 A.m2/kg,且具有超顺磁性;细胞实验表明长春新碱超顺磁性氧化铁纳米粒比硫酸长春新碱对K562的细胞的抑制作用更明显。结果显示,制得的超顺磁性氧化铁纳米粒性能良好,具有一定的应用前景。     

USPIO和GoldMag磁共振成像信号特点的实验研究

目的通过对不同浓度超小超顺磁性氧化铁(ultra-small superparamagnetic iron oxide,USPIO)和金磁微粒(GoldMag-Coreshell,GoldMag)行不同序列MR成像,对比分析其信号特点,探讨合适的MRI检查方法。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)为稀释剂将USPIO和GoldMag分别稀释为0.5～1 000μg/ml的47个不同的浓度,以PBS液为对照,共获得48个浓度,行FSE T1WI、FSE T2WI和GRE T2*WI磁共振成像。观察不同浓度USPIO和GoldMag在3种序列中的信号强度变化规律,计算信号强度变化比率,绘制浓度-信号强度曲线图。结果GoldMag与USPIO的MRI信号变化规律基本一致,随浓度增加,FSE T1WI信号强度呈升高趋势,FSE T2WI信号强度略有下降,GRE T2*WI信号强度明显降低。不同成像序列两种对比剂信号强度比较,在FSE T1WI,浓度高于30μg/ml时信号强度有显著性差异(P<0.05);在FSE T2WI,浓度为40～90μg/ml时信号强度有显著性差异(P<0.05);在GRE T2*WI,两种对比剂信号...     

2种超顺磁性Fe3O4纳米粒子的制备及其对大鼠肺部的急性毒性效应

目的：分别制备壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性Fe3O4纳米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）,并探讨其对大鼠肺部的急性毒性效应。方法：采用化学共沉淀法制备壳聚糖和油酸钠修饰的SPIONs并对其进行表征。将54只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（n=18）、壳聚糖SPIONs组（n=18）和油酸钠SPIONs组（n=18）。口腔内气管插管给药,对大鼠的一般情况进行观察,分别于给药后24、72 h和第14天随机处死每组中6只大鼠,腹腔静脉取血检测主要血生化指标,取支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）,计数细胞总数和中性粒细胞的数量,HE染色观察肺部的病理改变。结果：（1）制备的SPIONs均为30 nm左右的类球形结晶。（2）大鼠一般情况好,未发生死亡。（3）２实验组血清中的主要血生化指标仅有24 h总蛋白（total protein,TP）含量和14 d碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量２项指标与正常对照组有差异[TP（g/L）24 h组：壳聚糖SPIONs组（n=6）：62.40±3.60,油酸钠SPIONs组（n=6）：69.95±5.16,正常对照组（n=6）：63.22±2.55,F=6.344,P=0.010;ALP（u/L）14 d组：壳聚糖SPIONs组（n=6）：78.83±7.92,油酸钠SPIONs组（n=6）：106.83±26.95,正常对照组（n=6）：99.85±9.63,F=4.336,P=0.033）。（4）实验组BALF中的细胞总数（×104个）在24 h和72 h均高于正常对照组（壳聚糖SPIONs 24 h组（n=6）：780.00±130.58,油酸钠SPIONs 24 h组（n=6）：1 000.00±166.85,正常对照24 h组（n=6）：498.33±114.75,F=19.605,P=0.000;壳聚糖SPIONs 72 h组（n=6）：809.17±197.49,油酸钠SPIONs 72 h组（n=6）：920.00±125.54,正常对照72 h组（n=6）：580.00±123.29,F=7.735,P=0.005）,且油酸钠SPIONs组明显高于壳聚糖SPIONs组,在14 d时均下降（壳聚糖SPIONs 14 d组（n=6）：628.33±133.29,油酸钠SPIONs 14 d组（n=6）：654.17±99.27,正常对照14 d组（n=6）：570.83±94.15,F=0.898,P=0.428）。（5）实验组BALF中中性粒细胞的数量（×104个）在24 h和72 h均高于正常对照组（壳聚糖SPIONs 24 h组（n=6）：45.00±14.12,油酸钠SPIONs 24 h组（n=6）：90.00±24.50,正常对照24 h组（n=6）：1.02±0.33,F=44.565,P=0.000;壳聚糖SPIONs 72 h组（n=6）：9.15±8.82,油酸钠SPIONs 72 h组（n=6）：19.17±5.38,正常对照72 h组（n=6）：1.09±0.57,F=13.791,P=0.000）,且油酸钠SPIONs组明显高于壳聚糖SPIONs组,在14 d时下降至接近正常。（6）实验组的肺部HE染色可以明显看到肺泡断裂,肺泡壁增厚,炎症细胞浸润,油酸钠SPIONs组炎症表现更严重。壳聚糖SPIONs组肺损伤有自我修复的趋势,而油酸钠SPIONs组减轻不明显。结论：壳聚糖SPIONs与油酸钠SPIONs相比,对肺部毒性作用小,并且随着时间的延长,毒性效应逐渐减轻。