erbB4/HER4在乳腺癌的表达研究

目的检测第四人体表皮生长因子受体（HER4）在乳腺癌组织中的表达,探讨HER4过度表达与乳腺癌临床病理的关系。方法采用免疫组化的方法检测89例乳腺癌组织中HER4的表达。结果 HER4在正常乳腺细胞中呈阴性表达,HER4在乳腺癌细胞中呈强阳性表达,且HER4在乳腺癌肿瘤细胞中主要定位于细胞核和细胞质,乳腺癌组织中HER4的过度表达率为70.78%,乳腺癌中HER4的过度表达仅与淋巴结转移及TNM分期有关联性。结论 erbB4基因是乳腺癌生长的一个调控基因,干预HER4蛋白的过度表达可能是治疗乳腺癌的有效方法。     

Geldanamycin对HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3增殖及迁移能力的影响

目的 探讨Hsp90抑制剂苯醌安莎霉素类抗生素(GA)对HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3增殖及迁移能力的影响.方法 用Western蛋白印迹法检测GA介导的HER2/neu酪氨酸激酶的降解;MTT法分析GA对肿瘤细胞存活率的影响;流式细胞仪测定GA对肿瘤细胞周期的影响;RT-PCR和real-time PCR分析GA对cyclin D1表达的影响以及分析GA对肿瘤细胞迁移能力的干预作用.结果 GA以剂量/时间依赖性的方式降解了HER2/neu酪氨酸激酶的表达并抑制了SKBr3乳腺癌细胞的增殖,这种增殖抑制效应表现在:GA干预后乳腺癌细胞的存活率明显降低;GA阻断了乳腺癌细胞细胞周期的进展,使细胞周期停滞于G1期,而这两种表现与cyclin D1表达量的减低有着明显的关系.GA的干预也同时降低了肿瘤细胞的迁移能力.结论本研究证实GA能够降解HER2/neu酪氨酸激酶并抑制HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3的增殖和迁移能力.     

浸润性乳腺癌DCE-MR征象与HER2不同表达亚组相关性研究

目的探讨浸润性乳腺癌MR征象与HER2阳性、HER2低表达及HER2阴性相关性。方法回顾性分析我院2020年1月-2021年12月首诊为浸润性乳腺癌患者95例,分析HER2不同表达亚组乳腺癌的临床病理及MR征象相关性。结果HER2阳性乳腺癌36.8%(35/95),HER2低表达乳腺癌45.3%(43/95),HER2阴性乳腺癌17.9%(17/95)。肿块大小、肿块周围血供及淋巴结转移在HER2不同表达亚组中有差异(P=0.030,0.013,0.036);而形态、边缘、内部强化方式及动态曲线在HER2不同表达亚组中比较差异均无统计学意义。结论HER2阳性及HER2低表达乳腺癌是决定靶向HER2药物治疗的重要因素,术前MR某些特征与HER2亚组相关,可为乳腺癌HER2靶向治疗筛选获益人群提供参考依据。     

RNA干扰技术抑制乳腺癌SKBr3细胞HER2的表达

目的 构建含表皮生长因子受体2基因(HER2)的短发夹状双链RNA(shRNA)重组质粒,体外观察对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2 mRNA及蛋白表达的影响. 方法 利用分子克隆技术,将含HER2的双链DNA,与经双酶切后的载体pSilencer连接,构建pSilencer-HER2重组质粒,在脂质体的介导下转染高表达HER2的乳腺癌细胞系SKBr3.RT-PCR分析HER2 mRNA的表达,Western blot检测蛋白的表达,MTT法测定细胞增殖情况. 结果 酶切鉴定证实重组质粒构建成功,转染后能明显抑制HER2 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖. 结论 构建的pSilencer-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达,抑制细胞的增殖,为HER2高表达预后不良的乳腺癌基因治疗提供新策略.     

MiR-30d表达变化与HER2阳性乳腺癌赫赛耐药相关性

目的探索miR-30d表达变化与赫赛汀治疗乳腺癌耐药性的关系。检测miR-30d是否调控HER2阳性乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性,并初步证实该效应是否与miR-30d调控细胞自噬过程相关。方法通过Q-PCR检测miRNA-30d在HER2阳性和HER2阴性乳腺癌组织以及乳腺癌细胞中的表达情况,向HER2高表达和HER2低表达的乳腺癌细胞中转染miR-30d mimics和miR-30d inhibitors,检测转染后细胞对赫赛汀的耐药性是否发生改变。通过Q-PCR检测miR-30d过表达和敲减后细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达水平变化。结果HER2阳性乳腺癌组织和乳腺癌细胞中mir-30d表达显著下调(P<0.05);转染mir-30d能逆转HER2阳性乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性,同时下调细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的表达水平。结论 MiR-30d的表达下调与HER2阳性乳腺癌对赫赛汀的耐药性相关。miR-30可能通过调控自噬相关基因的表达,改变乳腺癌细胞对赫赛汀的耐药性。     

ASAP1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白1(ASAP1)蛋白的表达,探讨ASAP1与乳腺癌发生的相关性,为乳腺癌的防治寻找新的靶点。方法采用单纯随机抽样选取2008年6月至2012年6月武汉市汉口医院就诊乳腺癌患者41例,进行免疫组织化学检测并分析乳腺癌组织中增殖细胞相关核抗原Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和人表皮生长因子受体2(HER2)的表达与ASAP1的相关性;比较不同转移能力乳腺癌细胞株中ASAP1与HER2水平;检测RNA干扰抑制ASAP1对MDA-MB-231细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,对照组MDA-MB-231细胞培养体系中加入阴性对照干扰小RNA。结果免疫组织化学显示乳腺癌组织中HER-2的表达与ASAP1无相关性(P=0.803),Ki67和MMP-2的表达与ASAP1有显著相关性(P=0.035;P=0.013);免疫印迹显示高侵袭力乳腺癌细胞中ASAP1高表达,低侵袭力乳腺癌细胞ASAPI呈弱表达(P<0.01),HER-2的表达与ASAP1无相关性(P>0.05);RNA干扰抑制MDA-MB-231细胞中ASAP1的表达,VEGF水平显著低于对照组(P<0.01)。结论乳腺癌组织中ASAP1的表达与肿瘤细胞的增殖和转移存在相关性,ASAP1有望成为乳腺癌的治疗靶点。     

抗HER2抗体的作用机制研究进展

生长因子受体家族通过与各种配体相互反应及家族成员间的相互作用介导细胞的信号转导,HER2属该家族成员,25%～30%的乳腺癌患者HER2过表达,而HER2过表达与肿瘤的侵袭性及不良预后有关.曲佐单抗(trastuzumab)是第一个应用于治疗HER2过表达的乳腺癌患者的人源化单克隆抗体,临床试验结果表明,曲佐单抗对HER2过表达的乳腺癌患者有确切疗效.但是,抗HER2抗体的作用机制尚不十分清楚.本文综述了其有关研究进展,包括HER2表达下调、阻止HER2异二聚体形成、诱导G1期阻滞和p27表达、阻止HER2胞外区结构域的脱落和诱导机体免疫反应等抗体可能的作用机制.     

HER2低表达乳腺癌的治疗及其作用机制研究进展

乳腺癌在全球女性恶性肿瘤中发病率排名第一,其治疗方案因其亚型而定。HER2是一种致癌基因,其扩增与肿瘤的发生和侵袭相关,根据HER2状态,乳腺癌可分为HER2阳性[免疫组织化学(IHC)评分为3+或2+/原位杂交(ISH)阳性]和阴性(IHC评分为0、1+或2+/ISH-),HER2阴性中大部分为HER2低表达即IHC1+或2+/ISH-,由于缺乏HER2基因扩增,这部分患者无法从传统的抗HER2药物治疗中获益,缺乏精准治疗的手段。然而,随着新型抗体药物偶联物(Antibody-drug conjugates, ADC)在HER2低表达乳腺癌中显示出的显著疗效,其精准治疗时代或将到来。除了在DESTINY-Breast04Ⅲ期临床试验中大放异彩的新型ADC药物T-DXd,其他靶向HER2的ADC药物如SYD985、RC48和靶向Trop-2的ADC SG等也在HER2低表达中显示出了显著的疗效。HER2低表达乳腺癌的治疗正在迅速发展。本文将对近年来HER2低表达乳腺癌的药物治疗及其作用机制的研究进展进行综述。     

染料木黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453、MCF-7、MCF-7/HER2增殖能力的影响

目的 探讨染料木黄酮(Genistein)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453(ER-,HER2-high)、MCF-7/HER2(ER ,HER2-high)、和MCF-7(ER ,HER2-low)增殖能力的影响,并观察HER2在染料木黄酮抑制肿瘤增殖中的作用.方法 通过基因转染技术建立HER2/neu高表达的人乳腺癌MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学法鉴定;不同浓度的Genistein分别处理3种乳腺癌细胞,MTT法分别检测Genistein对肿瘤细胞增殖能力的影响.结果 Genistein对MDA-MB-453细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大,IC50约为100 μmol/L;Genistein对MCF-7/HER2和MCF-7细胞在低浓度表现为增殖促进作用,分别在大于40 μmol/L和10μmol/L时表现为增殖抑制作用.结论 Genistein可通过ER依赖和非依赖两种途径,在一定浓度范围内抑制肿瘤细胞增殖,且HER2高表达能够降低染料木黄酮对ER 乳腺癌的增殖抑制作用.     

Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响

目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响,探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3,免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达,Westernblot检测p-Akt和Bad的表达。结果:Herceptin处理组细胞HER2阳性表达率(37.4%)显著低于对照组(78.3%)(P<0.01)。Herceptin处理组与对照组比较,p-Akt蛋白含量降低53.5%(P<0.01),Bad蛋白含量升高0.83倍(P<0.01)。Herceptin处理组细胞p21Cip1和p27Kip1阳性表达率(分别为67%和56.1%)显著高于对照组(分别为19%和21.4%)(P<0.01)。结论:Herceptin下调HER2表达后,通过下调p-Akt表达而上调其下游Bad、p21Cip1和p27Kip1的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

Her-2／neu与乳腺癌的研究进展

HER-2／neu癌基因,又名c—erbB-2,在人体定位于染色体17q21,其编码产物p185Her-2蛋白在许多肿瘤,如乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌等肿瘤中过量表达,与肿瘤的发生、发展及预后关系密切。近年来,随着对Her-2／neu的研究不断深入,其已经成为乳腺癌靶向治疗的研究热点。     

HER2靶向聚合物超声造影微泡的制备及其体外实验

目的：制备以HER2受体为靶点的靶向聚合物微泡超声造影剂,并观测其理化特性、体外肿瘤靶向性及体外超声显像效果。方法：利用生物素-亲和素法构建HER2靶向聚合物微泡,测定其粒径、电位,评价其稳定性。在体外肿瘤靶向性实验中观察其与HER2（+）的乳腺癌细胞BT-474以及HER2（-）的乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞结合情况。并观察靶向聚合物微泡体外超声显影效果。结果：HER2靶向聚合物微泡平均粒径为（1.78±0.37）μm,平均表面Zeta电位为（-37.40±5.74）mV。12 h内靶向聚合物微泡粒径变化差异无统计学意义（P＞0.05）。HER2靶向聚合物微泡在体外对HER2（+）肿瘤细胞具有特异靶向性。体外超声显像显示靶向聚合物超声造影剂呈细腻均匀的点状密集高回声。结论：HER2靶向聚合物微泡稳定性好,靶向能力较强,具有良好的体外超声显影效果,为进一步进行体内肿瘤靶向超声造影奠定了基础。     

CD146在乳腺癌中的表达及意义

目的：检测乳腺癌中CD146的表达情况以及分析与临床病理特征的相关性。方法：收集10例正常乳腺和79例乳腺癌组织标本;用免疫组化法检测CD146、ER、PR、HER2、P53的表达,分析CD146表达与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果：CD146在正常乳腺组织中不表达,在乳腺癌中的表达率约24.1%,且组织学级别越高,其表达率越高（P〈0.05）;CD146表达的乳腺癌中,ER、PR多为阴性表达（P〈0.05）;CD146的表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、以及与HER2和P53的表达无关。结论：CD146在ER阴性表达的乳腺癌中高表达,可能与肿瘤上皮间质转化有关。     

ITSN1 mRNA预测乳腺癌预后的价值

目的:通过数据库对ITSN1 mRNA的表达水平分析,以期能够预测乳腺癌患者的预后。方法:利用Kaplan- Meier Plotter数据库分析ITSN1 mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系,GEPIA数据库分析基因ITSN1和HER2在乳腺癌中的表达。结果: ITSN1 mRNA高表达的乳腺癌总人群有更好的预后。ITSN1 mRNA的高表达预示luminal A、luminal B、HER2阴性、淋巴结阳性乳腺癌患者更长的无复发生存,以及淋巴结阴性乳腺癌患者更好的总生存。ITSN1 mRNA低表达的Her-2扩增型/阳性乳腺癌患者有更好的预后。ITSN1基因在乳腺癌中的表达低于正常乳腺组织,HER2基因在乳腺癌中的表达高于正常乳腺组织。结论:ITSN1 mRNA高表达的乳腺癌患者预后更好,ITSN1在乳腺癌中可能发挥抑癌的功能。     

抗HER2靶向药物治疗HER2阳性乳腺癌脑转移的研究进展

乳腺癌已成为全球发病率最高的恶性肿瘤,同时也是引起女性肿瘤相关死亡的重要原因之一。尽管早期乳腺癌可通过手术及辅助治疗得到治愈,然而仍有部分患者出现转移。一旦发生远处转移,患者5年生存率显著下降。相较于其他转移部位,乳腺癌脑转移(breast cancer brain metastasis,BCBM)患者生存时间最短,仅有3~6个月。由于血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的存在,增加了BCBM的治疗难度,是缩短患者生存时间的重要原因之一。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性患者脑转移发生率较高,近年来各种抗HER2靶向治疗药物为HER2阳性脑转移患者带来了新的挑战和希望。如何延长HER2阳性脑转移患者的生存时间、提高患者生活质量已成为转移性乳腺癌(metastatic breast cancer,MBC)领域临床研究的热点问题。本文根据国内外的最新研究成果,对抗HER2靶向药物在HER2阳性脑转移患者中的应用进行综述,以促进对BCBM的认识,为HER2阳性BCBM患者的治疗及相关临床研究提供参考。     

核干细胞因子在肿瘤细胞中的差异表达及意义

目的: 通过检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在多种肿瘤细胞中的差异表达情况,探讨NS基因与肿瘤细胞增殖调控的相关性。方法: 体外培养子宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)、肝癌细胞(HpeG2)与正常肝细胞,提取对数生长期肿瘤细胞总RNA,以RT-PCR方法检测NS在mRNA水平的差异表达;提取肿瘤细胞的总蛋白,以Western blot方法检测NS在翻译水平的差异表达。结果: 肿瘤细胞中NS基因均有较高水平的表达,尤其以乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)与肝癌细胞(HepG2)中NS基因表达量为最高,而正常肝细胞未检测到NS的表达。结论: NS在肿瘤细胞中的高表达具有普遍性,而在终末分化的细胞中不表达,判断NS基因参与了肿瘤细胞的增殖调控,其为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标。     

MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤乳腺癌细胞的分离培养及鉴定

目的：分离培养小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原（MMTV-PyMT）转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞,初步研究其生长特性、分子表型、体内成瘤和转移能力。方法：取MMTV-PyMT小鼠自发成瘤的乳腺癌组织（n=3）,采用酶解贴壁培养法进行原代细胞分离并传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态特征;采用CCK-8检测细胞的增殖能力;通过Western印迹检测细胞的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2(HER2)表达以鉴定细胞分子亚型。将分离培养的细胞接种于C57BL/6雌性小鼠（n=4）乳腺脂肪垫,观察细胞成瘤能力和生长特性;取肿瘤组织和内脏器官,制备组织切片后采用苏木精-伊红（HE）染色,观察组织形态学特点;采用免疫组织化学（IHC）染色检测ER、PR、HER2及Ki-67蛋白表达,分析分子分型。结果：成功分离得到MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞（MMTV-PyMT细胞）并可稳定生长和传代,细胞倍增时间为56.0 h;MMTV-PyMT细胞可在C57BL/6雌性小鼠乳腺脂肪垫成瘤并生长,但未见远处内脏转移。该细胞在细胞学和组织学中的分子分型皆为HER...     

人源性抗乳腺癌HER-2噬菌体单链抗体库的构建与筛选

目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库,筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv,为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。 方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织,提取总RNA;构建可变区基因的T载体库,将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接,获得pCANTAB-scFv,电转化感受态大肠杆菌TG1;以M13K07辅助噬菌体进行感染,获噬菌体抗体库;利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性,以免疫组织化学法检测抗体亲和力,并通过测序进一步鉴定。 结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库,获得的scFv长度为750 bp,VH和VL长度分别为375和330 kb;电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确,得到库容为2.48×108的大容量抗体库;通过噬菌体展示和淘洗筛选,富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库;所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性,对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力;测序结果与人IgG抗体进行对比,所获得的scFv具有高度的人源性。 结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库,并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv,为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。