扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠H22肿瘤细胞凋亡及p53和Caspase-3基因表达的影响

目的 研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠H22肿瘤细胞生长的抑制作用,及其对细胞凋亡和p53、Caspase-3基因表达的影响。方法 用体内实验观察FYK对H22瘤株的抑瘤率,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定野生型p53(Wtp53)和Caspase-3的mRNA表达情况。结果 12g／kg、24g／kg FYK均能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞的生长,最高抑瘤率为51．24％(P<0．01)。流式细胞术检测表明,FYK显著提高H22肿瘤细胞的凋亡率,最高为15．84％(P<0．01);肿瘤细胞阻滞在G0／G1期,S期细胞比率降低;RT-PCR实验表明,FYK可显著上调p53和Caspase-3 mRNA的表达水平。结论 FYK能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,促进Wt p53与Caspase-3基因的表达有关。     

扶正抑瘤颗粒对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞P53、 BCL-2蛋白表达的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠肿瘤细胞凋亡相关基因P53、BCL-2蛋白表达的影响。方法:将48只小鼠分成FYK大剂量组、FYK小剂量组、天仙胶囊阳性对照组和荷瘤模型组,造模形成实体瘤后分别灌胃FYK、天仙胶囊、生理盐水18天,取瘤组织用流式细胞仪检测P53、BCL-2蛋白表达。结果:FYK组肿瘤细胞P53蛋白表达升高、BCL-2蛋白表达下降,与模型组相比较有显著性差异(P<0.01)。结论:FYK具有促进肿瘤细胞P53表达和抑制BCL-2表达作用。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

四逆汤上调p53蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡研究

目的:以中医温阳法代表方四逆汤为研究对象,研究其对p53蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的影响,为提高肝癌中西医结合治疗效果提供实验依据。方法:采用含药血清方法,整体小鼠移植瘤实验,建立肝癌动物模型后,随机分为空白组、四逆汤组、阳性组共3组,每组10只,每日按0.2mL/10g标准定时胃饲给药1次。四逆汤组:3.7g生药/kg;空白组:同法灌胃等量0.9%氯化钠溶液;阳性组:顺铂4mg/kg,腹腔注射,每周给药1次,连续给药3周。用Tunel法检测细胞凋亡,Western Blot测定p53蛋白表达,从分子水平分析细胞凋亡的机制。结果:①四逆汤组对肝癌细胞具有抑制作用(P<0.05)。②四逆汤组在抑制肝癌组织生长的同时,对胸腺及脾脏起到了一定的保护作用。③Tunnel法测凋亡细胞结果表明,四逆汤可诱导小鼠肝癌细胞凋亡。④四逆汤明显上调肝癌组织p53蛋白的表达(P<0.01)。结论:温阳法对肝癌有抑制作用,同时具有免疫保护作用,降低肿瘤恶性程度的作用;促进肝癌组织p53蛋白的表达,四逆汤诱导细胞凋亡中的作用可能与p53蛋白的表达存在密切关系。     

牛黄参含药血清诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的机理研究

目的探讨牛黄参胶囊含药血清对人肝癌Hep G-2细胞凋亡及Fas表达的影响。方法将实验分为对照组,环磷酰胺组,牛黄参胶囊含药血清5%、10%和20%组。采用DNA Ladder观察DNA凋亡条带的形成,运用荧光显微镜观察凋亡细胞核的形态,采用流式细胞术检测其诱导细胞凋亡的凋亡率;分别采用免疫组织化学和流式细胞术检测牛黄参胶囊含药血清对Hep G2细胞表面Fas表达的影响。结果牛黄参胶囊含药血清作用于Hep G2细胞48 h后,有明显的DNA凋亡条带的形成,Hep G2细胞核染色质明显固缩和碎裂,产生凋亡小体;其促进Hep G2细胞的凋亡具有明显的浓度依赖性(P0.01);能明显上调Hep G2细胞表面Fas的表达,具有明显的剂量依赖性(P0.01)。结论牛黄参胶囊含药血清能促进人肝癌Hep G-2细胞凋亡,上调Fas蛋白表达可能是其抗肝癌药效机制之一。     

荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响

目的观察荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒（FYG）含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响。方法应用流式细胞仪检测FYG含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用激光共聚焦显微镜检测H22细胞DNARNA、自由基含量和线粒体膜电位的变化。结果FYG含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞DNARNA和线粒体膜电位降低,自由基含量升高。结论FYK含药血清引起H22细胞的凋亡可能与其影响H22细胞自由基含量和线粒体膜电位变化有关。     

扶正抑瘤颗粒对荷瘤(H22)小鼠T淋巴细胞Fas/FasL蛋白表达的影响

目的:观察复方中药制剂扶正抑瘤颗粒(FYK)对荷瘤(H22)小鼠T淋巴细胞凋亡相关基因Fas/FasL蛋白表达的影响。方法:将48只小鼠分为中药大、小剂量组、天仙胶囊阳性对照组和模型组,造模形成实体瘤后,分别灌胃FYK和天仙胶囊、生理盐水,18天后取血应用流式细胞仪测定Fas和FasL的蛋白表达。结果:各治疗组Fas蛋白表达较模型组下降,与模型组相比较有显著性差异(P<0.001)。各治疗组FasL蛋白表达较模型组升高,与模型组相比较有显著性差异(P<0.001)。结论:FYK可显著减轻荷瘤(H22)动物T淋巴细胞凋亡,在肿瘤的免疫逃逸中有重要意义。     

基于P38 MAPK信号通路探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞增殖、凋亡及p38 MAPK通路的作用。方法：应用CCK-8法观察扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪分析扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞凋亡的影响,Western Blot法检测LNCaP细胞p38 MAPK、p-p38MAPK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果：扶正利湿抗癌方含药血清能够以剂量依赖性地抑制LNCaP细胞增殖并诱导其凋亡,上调p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论：扶正利湿抗癌方含药血清可能通过激活p38 MAPK信号传导通路抑制LNCaP细胞增殖并促进其凋亡。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞H22凋亡的影响

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响.方法:扶正抑瘤颗粒含药血清温育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,利用光镜、电镜、流式细胞仪、原位末端标记(TUNEL)等方法观察其诱导小鼠肝癌H22细胞的凋亡作用.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可明显诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡,随着培养时间的延长和用药剂量的增加,细胞凋亡率随之增加,与空白对照组比较P＜0.01或0.05.结论:扶正抑瘤颗粒药物血清可诱导肝癌H22细胞凋亡.     

黄连素诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡及其机制研究

目的:探讨黄连素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及其机制。方法:不同浓度的黄连素处理人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测黄连素对HepG2细胞的抑制率,用流式细胞仪检测黄连素对HepG2细胞凋亡的影响,Western blot法检测细胞p53和BCL-2蛋白的表达。结果:黄连素可显著的降低HepG2细胞的存活率,流式细胞仪表明在黄连素作用48h后,HepG2细胞的凋亡率显著增加,同时给药组细胞中的p53蛋白表达显著升高,BCL-2蛋白表达显著降低。结论:黄连素可通过上调p53蛋白表达、下调BCL-2蛋白表达来诱导HepG2细胞凋亡。     

温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响。方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱。A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组。孵育24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、大黄素及乌头碱。含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P<0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P<0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P<0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P<0.05)。结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药。     

犀黄丸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

观察犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步的探讨,目的:研究犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨.方法:犀黄丸含药血清对肝癌细胞生长的影响,检测对肿瘤Bel-7402杀伤率.在用不同浓度犀黄丸含药血清作用Bel-7402细胞不同时间后,用TUNEL法检测凋亡,用SASB法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:犀黄丸含药血清能明显抑制Bel-7402细胞生长,其肿瘤细胞Bel-7402杀伤率最高达75%,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).TUNEL法显示,细胞凋亡率明显提高,与对照组比较有显著性差异;Bel-7402细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.     

灵芪胶囊对H_（22）荷瘤小鼠细胞形态的影响

目的：研究灵芪胶囊（LQC）对H22肿瘤形态学的影响。方法：采用血清药理学方法,通过Annex-inV/PI双染法、琼脂糖凝胶电泳法观察LQC含药血清对肿瘤细胞形态学变化的影响,研究LQC含药血清在体外对H22肿瘤细胞的抑瘤和诱导细胞凋亡作用。结果：LQC含药血清作用于人红白血病细胞系H22细胞72h,可见细胞凋亡和坏死特有的形态学特征。结论：LQC对肿瘤细胞具有诱导凋亡作用。     

疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L~(-1)用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg~(-1))灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P0.01),且存活率随剂量增加而增高(P0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠移植性肿瘤细胞间通讯的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(红芪、当归、墓头回、莪术)含药血清对荷瘤小鼠H22细胞的凋亡和肿瘤细胞间通讯的影响.方法:Annexin V/PI双染法检测FYK含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用共聚焦激光显微镜检测H22细胞RNA、DNA、[Ca2 ]、细胞间通讯状况.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞RNA、DNA含量降低,[Ca2 ]升高,细胞间通讯状况得到改善.结论:扶正抑瘤颗粒含药血清抑制H22细胞的增殖,并提高肿瘤细胞[Ca2 ],阻止肿瘤细胞分裂.     

川芎嗪对人肝癌HepG2细胞的影响及与突变型p53蛋白表达的影响

目的观察川芎嗪对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其与突变型p53蛋白表达变化的关系。方法应用不同浓度的川芎嗪作用于人肝癌HepG2细胞24h、48h和72h,MTT法检测细胞活力;Hoechst染色法检测细胞凋亡;免疫细胞化学法检测川芎嗪对突变型p53蛋白表达的影响。结果不同浓度的川芎嗪呈时间、剂量依赖性地抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并促进其凋亡（均P〈0.01）,800mg/L川芎嗪作用细胞72h后,其抑制率及凋亡率分别为49.59%和31.31%。免疫细胞化学法显示,不同浓度的川芎嗪作用人肝癌HepG2细胞48h后,突变型p53表达呈显著降低（均P〈0.01）。结论川芎嗪可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其抑制突变型p53蛋白的表达有关。     

半枝莲含药血清对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨中药半枝莲提取物（ESB）对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。方法：体外培养小鼠H22肝癌细胞,以ESB高、中、低剂量含药血清培养液作用于H22细胞,并设立空白血清及5-氟尿嘧啶组。应用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察细胞凋亡;流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡情况。结果：ESB高、中剂量含药血清组有一定的抑制H22肝癌细胞增殖的作用,且呈明显的时效关系。荧光显微镜下可见部分细胞呈典型凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示：细胞周期各时相中,ESB高、中、剂量含药血清组S期细胞所占的比例明显减少,G1期细胞增多,有明显的诱导凋亡作用。其中空白对照、ESB低、中、高剂量组、5-氟尿嘧啶组H22细胞凋亡率分别为0.51%、1.07%、3.15%、7.83%、11.26%。结论：ESB含药血清不仅可直接抑制小鼠H22肝癌细胞生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法:采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24 h、48 h,显微镜下观察细胞形态学变化;锥虫蓝染色检测细胞蓝染率;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及APO 2.7蛋白的阳性表达率;均与10%无药血清组做对照。结果:实验组部分细胞变小、变圆,贴壁能力明显下降,呈漂浮状态,集落性明显降低,呈单个生长状态;锥虫蓝染色显示,细胞蓝染率无明显变化;流式细胞仪检测,可见明显的凋亡峰,细胞周期中G1、S期下降,G2/M期升高,APO 2.7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度呈一定的时效和量效关系。结论:蟾酥胶囊可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白影响内皮细胞Bcl-2、Bax、p_(53)和caspase-3蛋白表达的调节

目的 :研究沥水调脂胶囊抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的机制。方法 :沥水调脂胶囊含药血清和ox LDL与人脐静脉内皮细胞 (hUVEC)共同孵育 15h ,用免疫荧光标记结合流式细胞仪分别测定Bcl 2、Bax、p53 和caspase 3蛋白表达量。结果 :发现ox LDL可使hUVECBcl 2蛋白表达降低 ,Bax、p53 和caspase 3蛋白表达量升高 ,而沥水调脂胶囊可使ox LDL对Bcl 2、p53和caspase 3的上述作用明显减弱 ,但对Bax未见明显影响。结论 :沥水调脂胶囊抑制ox LDL诱导的血管内皮细胞凋亡 ,可能是从正反两个方面、多条途径调节与凋亡密切相关的基因表达以及保护细胞结构功能有关。