苯扎贝特对2型糖尿病大鼠胰岛B细胞半胱天冬蛋白酶-3表达的影响

目的 观察苯扎贝特对2型糖尿病大鼠胰岛B细胞半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对胰岛B细胞保护的作用机制.方法 将46只SD大鼠给予高糖、高脂饲料喂养8周.然后按30 mg·kg-1剂量腹腔注射0.5%链脲佐菌素(STZ)溶液,建立SD大鼠2型糖尿病模型.总共28只糖尿病大鼠模型建立成功.随即将28只2型糖尿病大鼠按随机数字表法分为2组:糖尿病组(DM组)和糖尿病+苯扎贝特干预组(DMB组),每组14只.另取14只SD大鼠作为正常对照组(NC组).DMB组给予苯扎贝特50 mg·kg-1·d-1灌胃,DM组和NC组给予相应容量的蒸馏水灌胃.3组连续灌胃12周.分别测定药物干预前后血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)等指标.干预12周后,处死各组大鼠,采用TUNEL法检测各组大鼠胰岛B细胞凋亡,免疫组化SP法观察胰岛B细胞caspase-3的表达.结果 ①经苯扎贝特干预后,DMB组大鼠血清TG、TC、FBG水平均较干预前明显下降(均P<0.05),而血清FINS水平则较干预前升高(P<0.05).②与DM组比较,DMB组大鼠胰岛B细胞凋亡率、胰岛B细胞Caspase-3阳性表达率均明显下降(均P<0.05).结论 苯扎贝特可下调2型糖尿病大鼠胰岛中Caspase-3表达,发挥抗脂毒性凋亡的作用,从而保护胰岛B细胞功能.     

Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响

目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠胰腺β细胞凋亡的影响

目的:探讨α-硫辛酸对1型糖尿病大鼠胰腺β细胞凋亡的作用机制。方法:20只雄性Wistar大鼠制作1型糖尿病模型后随机分为α-硫辛酸组和糖尿病组,α-硫辛酸组腹腔注射α-硫辛酸50 mg/kg,连续4周,糖尿病组大鼠腹腔注射同体积的生理盐水。每周检测各组大鼠空腹血糖和胰岛素水平,Western blot检测胰腺组织中Caspase-3和Bcl-2的含量。另取10只雄性Wistar大鼠作为正常对照。结果:4周后α-硫辛酸组大鼠空腹血糖显著低于糖尿病组(P<0.05),但胰岛素值逐渐升高超过糖尿病组(P<0.05)。胰腺β细胞中Caspase-3的表达显著低于糖尿病组(P<0.05),Bcl-2的表达则显著高于糖尿病组(P<0.05)。结论:α-硫辛酸可能通过线粒体途径减少β细胞凋亡而发挥保护作用。     

钾离子通道开放剂二氮嗪对胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因的表达

目的 探讨钾离子通道开放剂(二氮嗪)对糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响.方法 利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导胰岛细胞凋亡.将实验用SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和二氮嗪治疗组(DIA组),治疗4周.观察大鼠的一般状况,监测体重(Weight)、空腹血糖(FPG),摄食量的变化、OGTT的变化.使用TUNEL检测胰岛细胞的凋亡,使用免疫组化法检测bcl-2、bax的含量.结果 ①与NC组比较,DM组大鼠 体重明显下降(P<0.05),四周末时OGTT试验在0'、120'时血糖均上升、bcl-2的表达明显下降而bax的表达则明显升高(P<0.01),胰岛细胞的凋亡也是明显增多的(P<0.05).②与DM组比较,DIA组大鼠体重下降(P<0.05),四周末时 OGTT试验在0'、120'时血糖下降以及bcl-2的含量明显升高(P<0.01),而bax的表达则明显下降(P<0.05),胰岛细胞的凋亡也是减少(P≥0.05).结论 二氮嗪通过开放钾离子通道,明显改善糖尿病大鼠的OGTT,降低体重并且上调bcl-2,下调bax,从而减少胰岛细胞的凋亡,对胰岛细胞具有保护作用.     

肥大细胞活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化形成中的作用

目的:探讨胰腺肥大细胞(MC)活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化发生中的作用。方法:8周龄雄性SD大鼠40只随机分为2组,正常饲养组(NC,n=20)、高脂饲养组(HF,n=20),每组各20只。每组大鼠饲养20周后检测空腹血糖、血胰岛素(Ins)、胰高糖素(Glc)、游离脂肪酸(FFA);正常血糖高胰岛素钳夹评价外周胰岛素抵抗程度;胰岛细胞表面灌注评价β及α细胞分泌功能;检测外周血炎症指标:TNF-α、IL-6,取胰腺组织制片,甲苯胺蓝染色显示肥大细胞并计数定量,免疫组织化学标记胰岛IL-6、TNF-α、苦味酸-天狼星红胶染色鉴别胰岛内沉积的胶原纤维类型。结果:(1)HF组大鼠葡萄糖输注率(GIR)明显低于NC组,血Ins、Glc、FFA水平显著高于NC组;(2)HF组大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能明显下降(P<0.01);HF组大鼠基础Glc的分泌是NC组的3倍(P<0.01),16.7mmol/L葡萄糖灌注后Glc分泌未受抑制;(3)HF组大鼠胰岛纤维化,肥大细胞数量明显增多,部分细胞呈脱颗粒状。肥大细胞IL-6呈阳性表达。苦味酸-天狼星红胶染色结果:根据胰岛内纤维化的范围,将胰岛纤维化程度分为轻、中、重三度:轻度纤维化范围<30%;中度纤维化范围在>30%<60%之间;重度纤维化范围>60%胰岛纤维化,偏振光显微镜观察胰岛内沉积的纤维,主要为I型及III型胶原纤维,炎细胞浸润。结论:长期高脂饲养脂毒性使肥大细胞增生、活化脱颗粒释放致炎因子IL-6、TNF-α从而促进了胰岛内胶原纤维沉积。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛分泌功能和胰岛细胞凋亡的影响研究

目的：研究游离脂肪酸对体外培养SD大鼠胰岛功能和胰岛细胞凋亡的影响并探讨可能机制。方法：取健康雄性SD大鼠胰岛原代分离培养,分为6组,培养1d：NC1组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA1组（0．25mmol／L）、FFA2组（0．5mmol／L）;培养3d：NC2组（5．6mmol／L葡萄糖）、FFA3组（0．25mmol／L）、FFA4组（0．5mmol／L）;每组6个样本,每个样本20个胰岛。采用RT—PCR扩增胰岛素、PDX-1、Bax、Caspase-3基因mRNA表达,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率,放射免疫法检测胰岛素水平。结果：①FFA1、FFA2组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC1组明显下降,FFA1、FFA2组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC1组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;②FFA3、FFA4组Insulin、PDX-1基因表达量、胰岛素分泌较NC2组明显下降,FFA3、FFA4组凋亡基因Bax、Caspase-3表达量及胰岛细胞凋亡率较NC2组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：游离脂肪酸抑制体外培养SD大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能,其可能机制是FFA抑制胰岛素基因、PDX-1基因的合成,刺激胰岛细胞凋亡基因Bax、Caspase-3表达,并导致胰岛细胞凋亡,最终导致胰岛细胞分泌功能下降。     

高尿酸血症诱发糖代谢紊乱大鼠胰岛细胞功能变化

目的观察高尿酸血症（HUA）诱发糖代谢紊乱大鼠胰岛细胞功能的变化,探讨HUA诱发和加重糖代谢紊乱的发病机制。方法健康雄性Wistar大鼠66只,随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病（DM组）和HUA组。采用高酵母饲料饲养、腺嘌呤溶液灌胃及皮下注射氧嗪酸钾溶液的方法建立HUA诱发糖代谢紊乱大鼠模型,采用高糖高脂饲料饲养、腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法建立DM组大鼠模型,每隔2周测定大鼠空腹血糖、空腹血清尿酸的水平;通过酶联免疫吸附法（ELISA法）测定空腹血清胰岛素、胰高血糖素的水平;苏木精-伊红（HE）染色和胰岛细胞双重染色观察持续HUA对胰岛组织学形态及胰岛α、β细胞占胰岛比例的影响。结果HUA组大鼠4、8、12、16周空腹血糖、空腹血清尿酸水平明显升高,与0周比较差异有显著性（F=11.933、17.606,q=3.632-7.342,P〈0.01）;HUA组大鼠第8、12周空腹血清胰岛素水平均较0周显著升高（F=4.680,q=1.916、2.035,P〈0.01）,至第16周差异无显著性（P〉0.05）;HUA组大鼠0、4、8、12周空腹血清胰高血糖素水平无明显变化（P〉0.05）,16周降低,与0周比较差异有显著性（F=3.409,q=1.623,P〈0.01）;HUA组与NC组比较,空腹血糖、血清尿酸、血清胰岛素、血清胰高血糖素在0周时差异均无显著意义（P〉0.05）,16周时差异有显著意义（t=-2.569-11.854,P〈0.05）。HE染色显示,NC组胰岛大小不等,分布均匀,形态规则,无水肿,胰岛细胞正常;DM组胰岛分布弥散,胰岛数量明显减少,部分胰岛轻度肿胀;HUA组与NC组比较胰岛形状变得不规则,胰岛数目减少,但仍然较DM组多。HUA组第16周胰岛α、β细胞分布比例与NC组比较无明显变化（P〉0.05）;HUA组内0、4、8、12、16周不同时间胰岛α、β细胞所占比例动态变化无显著差异（P〉0.05）。结论实验性HUA诱发糖代谢紊乱的机制可能主要与胰岛素抵抗、胰岛β细?     

穴位埋线与穴位注射对2型糖尿病大鼠pander及Caspase-3表达影响的比较研究

目的:探讨和比较穴位注射、穴位埋线保护胰岛β细胞功能的机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分成空白对照组、模型组、穴位注射组、穴位埋线组。空白对照组用普通饲料喂养,其余3组用高糖高脂饲料喂养4周,并按体质量35 mg·kg-1右侧腹腔注射链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠动物模型。空白组注射等量柠檬酸缓冲液,穴位埋线组予双侧足三里、三阴交、胃脘下俞埋线,穴位注射组在相同穴位注射参麦注射液,均隔日1次,共4周。观察各组大鼠的血糖水平、胰岛形态学变化及pander、Caspase-3蛋白的表达。结果:穴位埋线组、穴位注射组空腹血糖显著低于模型组(P0.05),穴位注射组下降更显著。穴位埋线和穴位注射组大鼠胰腺组织内的胰岛细胞损伤少于模型组(P0.05),穴位注射组胰岛细胞损伤更少。与空白组比较,模型组胰腺pander、Caspase-3蛋白表达上升(P0.05);穴位埋线组与穴位注射组胰腺pander蛋白表达较模型组下降(P0.05),穴位埋线组下降更显著。结论:穴位注射、穴位埋线或许通过降低血糖,抑制高血糖对胰岛β细胞pander的激活和Caspase-3表达,以减少胰岛β细胞凋亡,缓解2型糖尿病的进程,且穴位注射改善胰岛β细胞功能更显著。     

干预糖毒性对肥胖大鼠胰岛β、α细胞功能改善的作用

目的 探讨糖毒性对肥胖大鼠胰岛β、α细胞功能及分子生物学的损害作用.方法 雄性SD大鼠36只分为4组:(1)正常组:9只,普通饲料喂养.(2)高脂组:9只,高脂饲料喂养.(3)DM对照组:9只,不给予药物干预.(4)糖毒性干预组:9只,皮下注射超长效甘精胰岛素(5 U·kg-1·d-1)降低血糖,共4周.所有大鼠在实验结束时,通过免疫组化观察分析胰岛β、α细胞形态学特点,RT-PCR测定胰腺内胰岛素原mRNA表达水平,Western印迹方法检测胰腺中胰岛素蛋白质含量,胰岛素干预2周和4周后复测葡萄糖耐量试验.结果 糖毒性干预组,胰岛内β细胞比糖尿病对照组相对量增加(分别为0.38±0.08,0.11±0.05,P＜0.01),β细胞浆内胰岛素水平增加(分别为0.58±0.03,0.34±0.14,P＜0.01),胰岛素原mRNA表达增加(分别为1.52±0.14,1.26±0.14,P＜0.01);Western印迹检测胰岛素蛋白质含量明显升高;胰岛内α细胞相对量减少(分别为0.28±0.15,0.16±0.04,P＜0.01).结论 干预糖毒性4周能显著改善糖尿病大鼠胰岛β、α细胞的病理学变化,部分恢复胰岛细胞的功能.     

槲皮素对糖尿病大鼠心肌非酶糖基化及细胞凋亡的影响

目的 观察槲皮素(quercertin,Que)对糖尿病大鼠心肌非酶糖基化及细胞凋亡、凋亡相关基因Caspase-3表达的影响,探讨槲皮素对糖尿病心肌的保护作用及机制.方法 16只健康雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,随机分为糖尿病组(DM)和槲皮素治疗组(Que).同时设立正常对照组(NC)8只.治疗组灌胃给予槲皮素100 mg/kg,每天1次,共8周.分别测定各组大鼠血糖、血清果糖胺(FMN)、心肌AGEs 含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测心肌Caspase-3蛋白表达.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠血糖、血清果糖胺(FMN)及心肌AGEs含量均明显升高(P＜0.01);Caspase-3蛋白表达显著增强(P＜0.01),心肌细胞凋亡数明显增多(P＜0.01);与糖尿病组相比,槲皮素治疗组大鼠血糖、血清果糖胺(FMN)含量无明显改变(P＞>0.05),心肌AGEs含量明显降低(P＜0.01);Caspase-3蛋白表达减弱(P＜0.01),心肌凋亡细胞数减少(P＜0.05).结论 槲皮素可通过抑制糖尿病大鼠心肌组织非酶糖化,下调Caspase-3表达,减少心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用.     

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠肝脏SIRT1、UCP2表达的变化

目的观察2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏沉默调节蛋白1(SIRT1)、线粒体脱偶连蛋白2(UCP2)表达的情况,探讨T2DM合并NAFLD的可能发病机制。方法雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组(NC组,12只)和T2DM合并NAFLD模型组(MC组,12只)。NC组喂以常规饲料,MC组喂以高脂高糖饲料。12周末隔夜空腹给予MC组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)1次,破坏部分胰岛,NC组注射相应体积的柠檬酸缓冲液。14周末测定两组大鼠体质量、空腹血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、游离脂肪酸、空腹胰岛素、计算胰岛素抵抗指数,并观察肝脏组织的病理变化,免疫组化法及Real-time PCR法测定肝脏组织中SIRT1、UCP2的表达情况。结果 14周时MC组大鼠空腹血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、游离脂肪酸、空腹胰岛素、计算胰岛素抵抗指数均较NC组大鼠升高(P<0.05),高密度脂蛋白较NC组减低(P<0.05)。病理组织学结果表明NC组大鼠肝组织结构完整,肝细胞排列紧密成肝索,细胞质丰富,细胞核圆形;MC组大鼠肝细胞高度气球样变,胞质中有大量脂滴空泡,肝组织均可见中至重度脂肪肝。在免疫组化和mRNA水平上表明,MC组肝脏SIRT1表达较NC组明显降低(P<0.05),而UCP2表达较NC组明显升高(P<0.05)。结论在T2DM合并NAFLD大鼠肝脏组织中SIRT1表达显著降低,UCP2表达显著升高。     

帕立骨化醇上调糖尿病大鼠肾脏中胰岛素受体的表达

目的观察维生素D受体（VDR）激动剂-帕立骨化醇对糖尿病大鼠肾脏胰岛素受体表达的影响。方法 SD大鼠腹腔注射链脲菌素75 mg/kg建立糖尿病（DM）模型,将诱导成功的20只DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组）、DM＋帕立骨化醇治疗组（DA组）。另设相配的10只SD大鼠为对照组（NC组）。第10周测体质量（BW）、收缩压（SBP）,空腹血糖（BG）、血肌酐（Cr）,24 h尿蛋白定量（24 h UP）及尿液足细胞（UPC）的排泄;RT-PCR检测肾组织nephrin、desmin、胰岛素受体α（IRα）的mRNA表达水平;Western boltting检测肾组织IRα蛋白和磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）的表达水平。结果 DM组BG、Cr、24 h UP较NC组显著升高,BW显著降低,SBP、UPC无统计学差异。DM组nephrin mRNA、IRαmRNA及蛋白质,P-Akt蛋白质的表达较NC组显著降低;desmin mRNA的表达较NC组显著增加。帕立骨化醇降低DM大鼠的Cr、24 h UP,恢复肾组织nephrin、IRα、P-Akt的表达,抑制desmin的表达。结论帕立骨化醇上调nephrin并抑制desmin的表达,对足细胞起保护作用;改善胰岛素受体α的表达及磷酸化Akt水平,增强胰岛素信号通路,抑制高糖诱导的胰岛素对抗。     

黄地安消胶囊改善2型糖尿病模型大鼠胰岛细胞功能的作用

目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK大鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)的影响,探讨其改善胰岛功能的分子机制。方法:选取造模成功的50只雄性GK大鼠纳入实验,随机分为模型组、黄地安消胶囊高(12 g/kg)中(6 g/kg)低(3 g/kg)剂量组、参芪降糖颗粒组,每组各10只,另取10只Wistar大鼠为正常对照组。给药6 w后检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和瘦素(leptin)的含量,免疫荧光染色观察大鼠胰腺组织形态学的变化,RT-PCR技术检测脂肪组织IRS-1 mRNA的表达,Western bolt技术检测脂肪组织IRS-1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α和leptin含量明显增加,胰岛细胞表达降低(P0.01);与模型组比较,黄地安消胶囊各剂量组TNF-α和leptin含量显著降低,胰岛细胞表达明显增加,IRS-1 mRNA和蛋白表达显著增加(P0.01)。结论:黄地安消胶囊对T2DM模型GK大鼠胰岛功能具有一定的改善作用,其机制可能与降低炎症细胞因子,增加IRS-1mRNA和蛋白表达有关。     

参附抑制缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡的作用及机制

目的:研究参附注射液对缺血再灌注大鼠黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用大鼠肠缺血再灌注模型,24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),SF组于阻断前30min静注SF液每100g体重2ml。再灌注2h检测回肠黏膜上皮细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达及TUNNEL细胞凋亡检测,同时观察回肠黏膜组织TNF-α水平及病理形态学改变。结果:①凋亡细胞检测显示:I/R组凋亡细胞显著增多,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组(均P<0.05);②Caspase-3、Fas蛋白的表达:Caspase-3和Fas表达均为I/R组显著多于SF组和C组(P<0.01),SF组与C组无明显差异。Caspase-3及Fas表达与凋亡细胞数目呈正相关(Caspase-3:r=0.9149,P<0.01;Fas:r=0.6694,P<0.01);③TNF-α表达:TNF-α的表达在I/R组显著高于C组和SF组(均P<0.01),SF组与C组无明显差异。TNF-α表达与凋亡细胞数目呈正相关(r=0.9133,P<0.01);④SF组小肠黏膜病理损伤程度明显减轻I/R组(P<0.01)。结论:参附注射液通过抑制TNF-α、Fas和Caspase-3表达而抑制缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜缺血再灌注损伤。     

青蒿琥酯联合胰岛素对伴1型糖尿病牙周病大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响

目的：探究青蒿琥酯（ART）联合胰岛素（INS）对伴1型糖尿病牙周病大鼠胰腺组织细胞凋亡的影响,并初步探索其机制。方法：50只雄性SD大鼠随机分为5组：正常对照组（NC组）、伴糖尿病牙周病组（DM+PD组）、伴糖尿病牙周病ART干预组（ART组）、伴糖尿病牙周病INS干预组（INS组）、伴糖尿病牙周病ART联合INS干预组（ART+INS组）,每组10只;建模成功后每日给药1次,用药4周过后过量麻醉处死,测量各组大鼠空腹血糖值（FBG）;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平;微计算机断层扫描技术（Micro-CT）检测牙槽骨吸收情况;苏木精—伊红（HE）染色及免疫组织化学（IHC）法观察胰腺组织病理学改变及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白在胰岛的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹（western blotting）法检测胰腺Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果：与NC组比较,DM+PD组FBG明显升高（P<0.05）;血清TNF-α...     

黄芪甲苷对肥胖糖尿病大鼠肾脏氧化应激、Nrf2蛋白表达和胰岛β细胞的影响

目的观察黄芪甲苷(AS-IV)对肥胖糖尿病(DM)大鼠肾脏氧化应激、Nrf2蛋白表达和胰岛β细胞的影响。方法 2018年1-6月于武汉大学人民医院动物实验室进行实验。最终纳入健康雄性Wistar大鼠24只,随机数字表法分为对照组(n=8)、DM组(n=8)、AS-Ⅳ组(n=8),DM组给予链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg一次性单剂量腹腔注射建立DM模型,AS-Ⅳ组在DM组基础上给予AS-Ⅳ80 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃给药,8周后处死大鼠,检测各组.血尿相关指标、体质量及肾脏氧化应激指标,并观察胰岛细胞病理改变与胰岛细胞凋亡情况,采用Western免疫印迹检测Nrf 2蛋白。结果 (1)DM组及AS-Ⅳ组空腹血糖(FPG)、24h尿白蛋白排泄率(UAER)及体质量显著高于对照组,空腹胰岛素(FINS)显著低于对照组(F=59. 526、69. 342、19. 272、37. 934,P均=0. 000); AS-Ⅳ组FPG、UAER及体质量显著低于DM组,FINS显著高于DM组(P<0. 01)。(2) DM组及AS-Ⅳ组丙二醛(MDA)含量显著高于对照组,总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著低于对照组(F=29. 581、53. 546,P <0. 01); AS-Ⅳ组MDA含量显著低于DM组,T-SOD活性显著高于DM组(P <0.01)。(3)与对照组比较,DM组胰岛细胞数目显著减少,且出现肿胀、坏死及空泡变性,呈不规则排列,AS-Ⅳ组胰岛细胞较DM组显著改善;DM组及AS-Ⅳ组大鼠胰岛细胞凋亡率显著高于对照组(t=9.991、5.987,P均=0.000),AS-Ⅳ组大鼠胰岛细胞凋亡率显著低于DM组,差异均有统计学意义(t=6.952,P=0. 000)。(4) Western免疫印迹结果显示,DM组大鼠肾组织总Nrf 2、核Nrf 2蛋白表达显著低于对照组及AS-Ⅳ组(t=2.542、3.881、2.642、2.267,P=0.024、0.002、0.019、0.040),AS-Ⅳ组大鼠肾组织总Nrf 2、核Nrf 2蛋白表达显著高于DM组,差异均有统计学意义(t=2.985、2.928,P=0.010、0.011)。结论 AS-Ⅳ可有效减轻肥胖DM大鼠肾脏氧化应激反应,上调Nrf2蛋白表达,并延缓胰岛β细胞凋亡,其作用机制可能与Nrf2-ARE通路被激活相关。     

罗格列酮对实验性1型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的影响

目的:观察罗格列酮(Rosiglitazone natrium,RSG)对实验性1型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的影响.方法:6周龄SD大鼠随机分成3组,正常对照(Control,Con)组24只,糖尿病(Diabetic mellitus,DM)组24只,罗格列酮干预(Rosiglitazone,RSG)组24只.以链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液单次腹腔注射,72 h后测空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)≥16.7 mmol/L为造模成功.应用罗格列酮后5个时间段(2、5、7、10、13周),分别用TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling)方法检测胰岛β细胞的凋亡,用免疫组化法检测胰岛中胰岛素(Insulin,Ins)及Fasl的表达.结果:与DM组相比,RSG组胰岛表达胰岛素水平提高,β细胞相对凋亡指数及Fasl表达水平均下降(P均＜0.05).结论:罗格列酮能抑制或延缓β细胞凋亡,其机制可能与抑制Fas/Fasl细胞凋亡通路有关.     

利拉鲁肽对糖耐量异常OLETF大鼠胰岛白细胞介素-1β表达的影响

目的观察利拉鲁肽对糖耐量异常大鼠胰岛炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和凋亡基因caspase3表达的影响。方法 12周龄糖耐量异常OLETF大鼠分为生理盐水组和不同剂量利拉鲁肽干预组(50、100、200μg/kg),8只LETO作为正常对照组。实验12周结束时,所有大鼠均检测糖耐量试验空腹及服糖后30 min胰岛素,并检测胰岛IL-1β和caspase3 mRNA和蛋白水平。结果利拉鲁肽干预的糖耐量异常大鼠和生理盐水干预组相比,胰岛IL-1β和caspase3表达显著降低,血糖、胰岛β细胞功能及早期胰岛素分泌指数明显改善。结论利拉鲁肽可能通过抑制胰岛IL-1β炎症因子表达,从而改善胰岛功能及糖代谢,延缓或阻止糖尿病发生发展。     

罗格列酮钠保护STZ糖尿病大鼠胰岛β-细胞及对JNK信号通路的影响研究

目的 观察罗格列酮钠对链脉佐菌素(STZ)糖尿病大鼠残存胰岛β-细胞的作用,及其对JNK信号通路的影响.方法 SD大鼠随机分为正常对照组(6只),糖尿病对照组(OM组,14只),罗格列酮钠组(RSG组,14只),后两组予STZ(50 mg/kg)腹腔内注射诱导成模后,RSG组予罗格列酮钠干预治疗[4 mg/(kg·d)].治疗10周后,各组大鼠行灌胃葡萄糖耐量试验,评价胰岛功能,之后处死动物,取胰岛组织,光镜下观察胰岛组织病理学形态,以免疫组化法检测胰岛中INS、P-JNK、Caspase-3的表达,TUNEL法检测β-细胞凋亡率.结果 ①与DM组相比,RSG组血糖降低.两组0 h INS(FINS)和2 h INS分别为(17.49±4.59) μU/L vs (23.59±4.59) μU/L和(20.24±3.32) μU/L vs (30.98±9.15) μU/L,RSG组INS水平更高,但差异无统计学意义(P＝0.056),其胰岛功能有好于DM组的趋势.②RSG组较DM组的胰岛边缘较清晰,细胞排列较整齐,染色质较丰富.③RSG组胰岛表达INS的水平高于DM组(P<0.05).④TUNEL检测结果显示RSG组的胰岛β-细胞凋亡率(%)较DM组小,分别为6.52±0.77 vs 10.33±1.07(P<0.05);Caspase-3的表达亦减少(P<0.05).⑤与DM组相比,RSG组JNK的活化受到抑制,P-JNK的表达减少(P<0.05).结论 RSG能够减少胰岛β-细胞的凋亡,改善STZ糖尿病大鼠的胰岛功能,降低血糖,其对胰岛β-细胞的抗凋亡作用可能是通过JNK信号通路起作用的.     

慢性间歇性低氧对大鼠肠道菌群与血糖的影响研究

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)对大鼠肠道菌群失调与血糖变化的影响。方法 选取30只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、CIH 4周组(CIH4组)、CIH 8周组(CIH8组),每组10只。分析大鼠肠道菌群种类及丰度表达,检测静脉血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、胰岛素(INS)、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),观察胰腺及肠道组织病理学改变及核因子-κB(NF-κB)表达。结果 CIH4组、CIH8组大鼠FBG、LPS、HOMA-IR、TNF-α水平均高于NC组(P<0.05),且CIH8组变化更明显(P<0.05)。CIH8组大鼠INS水平均高于NC组、CIH4组(P<0.05),但NC组与CIH4组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CIH可导致肠道组织广泛黏膜糜烂,上皮细胞脱落,固有层广泛可见较多炎性细胞浸润;胰腺组织腺体杯状细胞消失,有的地方可见腺体脱落,残留基底组织。CIH8组大鼠胰腺和肠道组织中NF-κBp65表达高于NC组(P<0.05),其余组间比较差异均无统计学...