去铁胺对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(deferoxamine,D组),注射用水对照组(control group,C组)和假手术模型(shsm operation,S组)各32只.分别于术后0.5 h、2 h、6 h、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平和肝组织SOD活性与MDA含量;做病理组织学检查,免疫组化检测HIF-1α、TNF-α及IL-1蛋白的表达.结果 在30 min、2 h、6 h及24 h各个时间点,D组大鼠血清ALT及AST水平、肝组织MDA含量及IL-1、TNF-α蛋白表达量明显低于C组,再灌注后2 h、6 h、24 h,D组大鼠肝组织SOD含量(411±70;384±53;379±46)和各时间点HIF-1α蛋白表达量(0.0413±0.0040;0.0684±0.0032;0.0583±0.0032;0.0491±0.0026)明显高于C组[SOD(341±21;323±25;303±25)和HIF-1α(0.0254±0.0024;0.0312±0.0022;0.0381±0.0022;0.0257±0.0015)](F>59.881;P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与促进HIF-1α表达上调,减轻氧化损伤和降低炎性因子水平有关.     

低氧预适应诱导肝脏HIF-1α高表达对自体原位肝移植大鼠JNK信号转导通路的影响

目的 检测低氧诱导因子α(HIF-1α)在自体原位肝移植大鼠肝脏的表达情况,探讨HIF-1α在JNK信号转导通路中的作用机制.方法 采用单纯随机抽样法将96只SD大鼠分为正常对照组、自体肝移植组、低氧预适应+自体肝移植组,每组32只.正常对照组:仅开腹分离血管,不作其他处理;自体肝移植组:采用经门静脉灌注法建立稳定的70%自体原位肝移植模型;低氧预适应+自体肝移植组:术前用8%氮氧混合气体低氧预处理90min,其他处理同自体肝移植组.分别于术后1、2、12、24h检测大鼠血清ALT、AST水平,免疫组织化学染色法测定大鼠肝脏组织HIF-1α的表达,RT-PCR检测c-Jun mRNA表达水平,Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白表达水平.多组比较采用方差分析,两组比较采用t检验.结果 术后1、2、12、24 h,低氧预适应+自体肝移植组大鼠血清ALT和AST水平显著低于自体肝移植组,但高于正常对照组,差异有统计学意义(F=2631.371、1177.642、810.383、682.848,743.618、1095.522、375.995、580.613,P＜0.05).自体肝移植组大鼠术后各时相点HIF-1α蛋白的表达水平明显低于低氧预适应+自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=191.737,284.482,459.419,213.782,P＜0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后1、2、12 h c-Jun mRNA表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=66.211,53.169,9.645,P＜0.05),术后24 h c-Jun mRNA表达水平3组间比较,差异无统计学意义(F=1.100,P＞0.05).低氧预适应+自体肝移植组大鼠术后各时相点Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著低于自体肝移植组,但均高于正常对照组,差异有统计学意义(F=23.133,31.158,14.347,29.043,P＜0.05).结论 肝移植大鼠低氧预适应后HIF-1α的高表达可能通过抑制JNK信号通路的持续激活,下调Cleaved Caspase-3蛋白的表达,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

去铁敏预处理对移植供肝保护作用的研究

目的：探索去铁敏对移植供肝的保护作用及可能机制。方法：SD大鼠,随机分为假手术组（S组）、自体肝移植组（AT组）、自体肝移去铁敏预处理组（DP组）与自体肝移植去铁敏灌肝组（DI组）。检测各组术后24 h血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）,观察肝组织形态学改变并检测肝组织中低氧诱导因子-1（HIF-1α）及丙二醛（MDA）的含量。结果：与S组相比,AT组、DP组和DI组术后血清ALT,AST和ALP明显升高;但DP组、DI组较AT组血清ALT,AST和ALP明显降低,肝形态异常变化减轻,肝组织中HIF-1α蛋白含量升高,MDA含量下降(P﹤0.05)。结论：在肝移植术前行去铁敏预处理或术中行去铁敏溶液灌肝,对供肝有保护作用,且前者优于后者。其机制可能与提高组织HIF-1α含量及减轻脂质过氧化有关。     

三七总皂甙对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

摘要：目的:探讨三七总皂甙预处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法:建立大鼠原位肝移植模型，然后分为三七预处理组（P组）、对照组（N组）和假手术组（S组）3组，取血检查ALT，AST；用免疫组化法检测caspase-3和TNF-α的表达，TUNEL法检测肝细胞凋亡，行肝组织病理检查。结果:鼠肝移植模型N组的血ALT，AST数值、肝细胞中caspase-3和TNF-α的表达及肝细胞的凋亡均明显高于P组，差异均有显著意义（P<0.05）。结论:肝细胞凋亡加重移植肝缺血再灌注损伤，三七总皂甙预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤有保护作用。     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠p-JNK蛋白表达的影响

目的：探讨低氧预适应（HP）对大鼠自体肝移植后p-JNK蛋白表达的影响及其保护作用。方法：采用改良的自体肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照（NC）组、自体肝移植（AT）组和＋AT（HP）组,每组32只。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90min。分别于术后1、2、12和24h处死各组大鼠,每个时相点处死8只,取肝脏标本,抽血检测肝功能,免疫组织化学方法测定大鼠肝组织磷酸化的JNK（p-JNK）蛋白、细胞色素C的表达,并在透射电子显微镜下观察各组肝细胞形态学改变。结果：HP组血清ALT和AST水平显著低于AT组,差异有统计学意义（P〈0.05）;HP组各时相点的肝功能明显优于AT组;HP组各时相点p-JNK蛋白、细胞色素C的表达明显低于AT组,差异有统计学意义（P〈0.05）。透射电子显微镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态。结论：HP对移植所导致的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;其机制可能是通过抑制JNK信号通路的持续激活,下调p-JNK蛋白的表达、抑制线粒体细胞色素C的释放而发挥其保护作用。     

低氧与去铁敏对移植供肝作用的对比性研究

目的 对比研究低氧预处理及去铁敏预处理对移植供肝保护作用的特点,探索一种适合指导临床的供肝保护方法.方法 SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、自体肝移植组(AT组)、去铁敏预处理组(DP组)与低氧预处理组(HP组).检测各组术后24 h血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)、肝组织形态学改变并检测肝组织中低氧诱导因子-1(HIF-1a)及丙二醛(MDA)的含量.结果 与S组相比AT组、DP组、HP组术后血清ALT、AST、ALP明显升高,DP组、HP组与AT组相比血清ALT、AST、ALP显著降低,肝形态异常变化减轻,肝组织中HIF-1a蛋白含量升高,MDA含量下降(P<0.05).结论 在肝移植术前行DP,可以起到与HP相似的供肝保护效果,但DP更适合指导临床.     

高压氧对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及其基因缺氧诱导因子-α、bcl-2及bax表达的影响

目的 观察高压氧(HBO)对精索静脉曲张(VC)SD大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨精索静脉曲张导致男性不育的机制.方法 50只青春期雄性SD大鼠,随机抽出10只作为假手术对照组(A).A组只游离左肾静脉不予结扎,其余40只部分结扎左肾静脉建立VC模型,8周后,将建立了VC模型的40只随机分为VC模型组(B)和HBO干预的VC模型组(C),C组用HBO对VC模型进行干预.实验结束后各组大鼠切取双侧睾丸,采用原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,免疫组织化学检测低氧诱导因子(HIF)-α、bcl-2及bax的基因表达.结果 B组较A组生精细胞凋亡数明显增多,HIF-α、bax表达增强(P＜0.01),bcl-2表达减弱(P＜0.01),bcl-2/bax比值降低;C组大鼠较B组生精细胞凋亡数减少(P＜0.01),HIF-α表达减弱(P＜0.01)、bcl-2/bax比值上升,而与A组比较差异无统计学意义.结论 VC大鼠生精细胞凋亡率增加,HIF-α表达增强、bcl-2和bax基因表达失调为其凋亡机制之一;高压氧可能通过HIF-α、bcl-2和bax基因调控途径调节生精细胞凋亡,从而改善VC所致的生精功能障碍.     

潘生丁对大鼠移植肝缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨潘生丁对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制。方法采用改良Kam ada“二袖套法”制作肝移植模型,48只雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组(A组),同基因大鼠肝移植组(B组)和潘生丁预处理 同基因大鼠肝移植组(C组)。于供肝再灌注2 h后测定各组PAGT、ALT、AST、SOD、MDA含量,比较肝细胞凋亡和组织形态学改变。结果移植肝再灌注2 h后C组较B组肝组织损害轻,SOD、MDA、ALT、AST、PAGT变化及肝细胞凋亡差异有显著性(P<0.05)。结论潘生丁可通过改善肝脏微循环状况,改善缺血肝脏组织的能量代谢,提高肝组织抗氧化能力,抑制细胞凋亡和减少肝脏细胞的变性坏死程度而对肝脏热缺血再灌注起保护作用。     

低氧预处理对大鼠自体肝移植后胰腺的保护作用

目的探讨低氧预处理对大鼠自体肝移植后胰腺的保护作用及其机制。方法 90只大鼠随机分成假手术组(sham组,术后6h、24h、48h,每组10只)、自体肝移植组(术后6h、24h、48h,每组10只)和低氧预适应组(术前通过低氧装置给予低氧预适应90min,氧浓度为8%O2∶92%N2;12 h后行自体肝脏移植,6 h、24h、48 h,每组10只)。测定血淀粉酶、脂肪酶,了解胰腺外分泌功能;测定胰腺组织MDA的含量;光镜、电镜观察胰腺形态学改变。SP法检测HIF-1a在胰腺中的表达。结果低氧预适应组大鼠血淀粉酶、脂肪酶、胰腺组织MDA的含量与自体肝移植组比较显著降低(P0.05),光镜、电镜观察低氧预适应组大鼠组织学结构损害轻于自体肝移植组,相应时间点低氧预处理组HIF-1a表达增加(P0.05)。结论低氧预处理对大鼠自体肝移植后胰腺具有保护作用,其机制与胰腺组织HIF-1a表达增加有关。     

低氧诱导因子-1α和p53在肝脏低氧损伤中的作用

目的:探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53及细胞凋亡在大鼠肝脏低氧损伤中的作用。方法:雄性SD大鼠64只,随机分为对照组和肝动脉结扎组(n=32)。各组均行剖腹、肝脏骨骼化及肝素林格液肝脏灌注,肝动脉结扎组行肝动脉结扎术。术后1、3、7、14d留取肝脏组织及血标本。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝脏组织HIF-1αmRNA表达水平;免疫组织化学方法检测肝脏组织HIF-1α及p53蛋白表达水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡。自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性以评价肝损伤。结果:肝动脉结扎后肝组织HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白较对照组明显增高,分别于结扎后3d和7d达峰值[0.834±0.129比0.372±0.048,(7.8±3.1)%比(2.1±1.7)%,P均<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞p53均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(41.2±9.1)%比(5.2±4.3)%,P<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(21.3±7.4)%比(3.7±3.5)%,P<0.01]。肝动脉结扎组ALT水平均明显高于对照组。HIF-1α、p53蛋白表达及凋亡细胞都主要位于肝小叶中央静脉周围。结论:HIF-1αmRNA表达增加、HIF-1α蛋白积聚以及p53促凋亡途径的激活在肝脏低氧损伤中可能发挥重要作用。     

缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的肝损伤的机制研究

目的：探讨缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的肝损伤的作用机制,为外科防治缺血再灌注损伤提供策略。方法将36只SD大鼠随机分为假手术组（SO组,仅手术显露肠系膜上动脉）、缺血再灌注组（IR组,阻断肠系膜上动脉60min,再灌注120min）、缺血后处理组（IP组,阻断肠系膜上动脉60min后行3个循环的灌注30s/阻断30s,再持续灌注117min）,每组12只。建立模型2h后采集各组大鼠动、静脉血及部分小肠、肝组织,检测血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,测定血清及肝组织内丙二醛（MDA）、髓过氧化酶（MPO）水平,光学显微镜下观察小肠及肝脏病理学改变,免疫组织化学法检测肝脏组织中核因子κBp65（NF-κBp65）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化。结果与SO组比较,IR组小肠、肝脏病理损伤加重,肝组织NF-κBp65和HIF-1α的表达显著升高,血清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、IL-10、ALT和AST水平升高;与IR组比较,IP组小肠、肝脏损伤减轻,肝组织NF-κBp65表达下降而HIF-1α的表达显著升高,血清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、ALT和AST水平均显著下降,血清IL-10水平增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论缺血后处理可以促进抗炎因子的激活,抑制NF-κB信号通路调控的炎症级联反应,上调HIF-1α的表达,减轻小肠缺血再灌注引起的肝损伤。     

急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中TLR2/4mRNA的表达及氯喹的干预效应

目的： 研究急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肝损伤中Toll-样受体(TLR)2/4mRNA表达的变化及氯喹的干预效应。 方法：采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠（TAC）注射造成大鼠AHNP肝损伤动物模型。动物分为假手术组（S组）、胰腺炎组和氯喹（CQ）治疗组。后2组于术后3，6，12 h分批剖杀，S组于术后6 h剖杀。观察血清淀粉酶、ALT和AST及肝组织NO和TNF-α的变化，RT-PCR方法检测各组不同时点肝组织TLR2和TLR4mRNA的表达。 结果：相对于S组，胰腺炎组大鼠3 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达开始增高，术后6～12 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达迅速达到峰值（P<0.05），肝损伤加重，血清淀粉酶升高，肝组织TNF-α浓度升高，NO浓度逐渐降低（P<0.05）；相对胰腺炎组，CQ治疗组TLR2/4mRNA表达降低（P<0.05），肝损伤程度减轻，血清淀粉酶降低，肝组织TNF-α浓度降低，NO浓度显著升高（P<0.05）。 结论：AHNP大鼠肝组织内TLR2和TLR4的基因表达上调；其表达增高可能在AHNP肝损伤的发生、发展中起重要作用。氯喹对大鼠AHNP过程中肝损伤可能有保护作用。     

TAT-血红素氧合酶-1融合蛋白对大鼠供肝冷保存期炎性反应及肝功能的影响

目的 探讨HIV-1反式激活蛋白-血红素氧合酶-1(TAT-HO-1)融合蛋白对大鼠供肝冷保存期炎性反应及肝功能的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,开腹游离腹主动脉并结扎,于左右髂总动脉分叉处向心端穿刺腹主动脉,切断肝上下腔静脉,随机灌注4℃HTK液(C组,U=24)或4℃含TAT-HO-1融合蛋白50 μg/ml的HTK液(P组,n=24),至流出灌洗液清亮后停止灌注,取肝脏,置于相应保存液中冷保存.分别于冷保存即刻、6、12和18 h时取保存液并切取肝组织.采用全自动生化分析仪测定保存液谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫组化法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,光镜下观察肝组织形态学.结果 随冷保存时间延长,两组保存液AST、ALT及LDH活性升高,TNF-α表达上调(P<0.05);与C组比较,冷保存6、12、18 h时P组保存液AST、ALT及LDH活性降低,TNF-α表达下调(P<0.05).结论 TAT-HO-1融合蛋白可抑制大鼠供肝冷保存期的炎性反应,对肝功能具有一定保护作用.     

肝脏缺血/再灌注后Toll样受体4表达情况及丙泊酚对其表达的影响

Objective To observe the changes in TLR4 expression during hepatic ischemia/reperfusion (I/R) and the effects of propofol on the expression of TLR4 induced by I/R injury in rats.Methods Fifty six male SD rats were randomly divided into min before isehemia in P groups,and the same volume of sodium lactate Ringer's solution was infused in sham group and I/R groups.Plasma ALT,AST,TNF-α levels were measured,and the expression of Tlr4 was detected 2,6,24 h after reperfusion.Results The levels of plasma ALT,AST and TNF-α were lower,and Tlr4 expression was weaker in P groups than those in I/R groups (P＜0.05).Conclusion Propofol decreases hepatic ischemia/reperfusion (I/R)-induced Tlr4 expression and exerts property of liver protection.     

RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平(56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05)、肝组织中MDA含量(93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高(22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05).结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.