Anti-angiogeneic Target Therapy for Cancer with Vaccine Based on the Recombinant Chicken FGFR-1 in Tumor-bearing Mice

To explore the anti-tumor effect of immunotherapy with recombinant protein vaccine based on FGFR-1 of chicken (cFR-1) in a mouse Meth A fibrosarcoma model, tumor volume and sur- vival rate of the mice were observed at a 3-day interval. Microvessel density (MVD) was detected by immunohistochemistry. Auto-antibodies against self-FGFR-1 were detected by Western blotting and ELISA, respectively. The anti-FGFR-1 antibody-producing B cells (APBCs) were detected by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay. Eighteen days after inoculation of tumor cells, the tumor volume was significantly smaller in cFR-1-immunized group than in mouse FGFR-1 (mFR-1) immunized group and normal saline (NS) control group (P<0.05), and the survival time was signifi- cantly longer in cFR-1-immunized group than in the control groups (P<0.01). MVD was significantly lower in cFR-1-immunized group than in mFR-1-immunized group and NS group (16.8 ±5.6 vs 64.6±1.8 and 59.6±8.7, P<0.01). Antibodies against self-FGFR-1 were found in mFR-1-immunized group, the major antibody subclasses were IgG1 and IgG2b. Compared with the two control groups, the numbers of APBCs in cFR-1-immunized group were significantly increased (P<0.01) These re- sults demonstrated that the cFR-1-related anti-angiogenesis protein vaccine could induce the produc- tion of auto-antibodies against self-FGFR-1, which futher inhibit angiogenesis and growth of solid tumor.     

Ag43／FGFR-1嵌合蛋白疫苗抗小鼠纤维肉瘤血管生成的实验研究

目的：利用Antigen43（Ag43）／成纤维细胞生长因子I型受体（FGFR一1）重组嵌合蛋白作为疫苗,了解其是否具有抑制小鼠肿瘤生长的作用,并初步探讨其作用机理。方法：40只BALB／c雌性小鼠接种MethA细胞后第7天,随机分为Ag43／FGFR．1蛋白免疫组（AF组）、A酗3蛋白免疫组（Ag43组）、FGFR—1蛋白免疫组（FGFR一1组）和生理盐水对照组（NS组）4组,每组10只,观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存曲线,分别用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD）,免疫印迹（Western blot）方法检测抗自身FGFR—1的抗体,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞的数量。结果：Ag43／FGFR-1组与FGFR-1蛋白、A甜3蛋白、生理盐水对照组肿瘤组织MVD计数分别为11．9±2．3、59．6±3．8、60．6±1．2和61．9±3．4（P〈0．01）;与对照组相比,Ag43／FGFR-1组肿瘤体积明显变小（P〈0．01）,存活时间明显延长（P〈0．01）,血清中发现含有抗自身FGFR-1的抗体且发现小鼠脾脏中分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞数目明显增多（P〈0．01）。结论：Ag43／FGFR-1蛋白质疫苗能够诱导荷瘤鼠产生特异性免疫反应,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤的生长。     

猪endoglin胞外段真核表达载体的构建及其诱导抗小鼠自身endoglin抗体的实验研究

目的分别扩增猪和小鼠endoglin胞外段cDNA,构建真核表达载体作为DNA疫苗,了解猪endoglin DNA疫苗是否能够在小鼠体内诱导产生抗小鼠endoglin的自身抗体.方法利用RT-PCR技术,从猪和小鼠胚肝中分别扩增出猪和小鼠的endoglin胞外段,用内切酶消化后分别将其插入真核表达质粒pcDNA3.1( )中,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后,体外转染真核细胞COS-1,用RT-PCR和免疫印迹鉴定是否能正确表达.然后大量扩增和提取相应质粒,将这些质粒作为DNA疫苗,肌注免疫小鼠,通过ELISA、免疫印迹和ELISPOT测定抗自身endoglin的抗体和脾脏中分泌特异性抗endoglin抗体的B淋巴细胞.结果琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实RT-PCR扩增的cDNA及构建的重组真核表达质粒正确,重组的真核表达质粒能在COS-1细胞中正确表达,猪endoglin胞外段真核质粒DNA疫苗免疫小鼠可以诱导产生抗小鼠endoglin的自身抗体.结论重组猪endoglin胞外段真核表达载体可作为DNA疫苗用于抗肿瘤血管生成的基因治疗.     

鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体胞外段原核表达载体的构建及表达鉴定

目的构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体（FGFR-1）胞外段活性蛋白，为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础。方法利用RT—PCR技术，从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD—NA，用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中。经过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后，体外转化大肠埃希菌，用RT—PCR和免疫印迹方法鉴定是否能够正确表达，同时利用Ni—NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确，并在大肠埃希菌中正确表达。经纯化后，进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40ku的蛋白质条带。结论成功构建鸡FGFR-1胞外段原核表达载体并获得重组活性蛋白。     

Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性血清型单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制Ⅰ型登革病毒(DEN1)非结构蛋白1(NS1)蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其特异性。方法以具有良好免疫原性的DEN1重组NS1蛋白、DEN1全病毒及两者混合免疫共3种免疫方案,分别免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法双筛I、FA和Western Blot进行mAbs的类型及亚类、特异性等鉴定。结果采用3种免疫方案免疫Balb/c小鼠,获得9株抗NS1蛋白的mAb,其亚类测定一株为IgG2a,另外8株为IgG1。这些mAbs与DEN1重组NS1蛋白和DEN1全病毒均结合,而且特异性好,仅1株杂交瘤分泌的单抗和其余3型DEN有交叉反应。结论成功获得了特异性针对DEN病毒NS1蛋白的特异性血清型mAb,将为进一步研究NS1蛋白的结构和功能及临床诊断试剂研发奠定基础。     

重组Ag43-CD154嵌合蛋白诱导抗肝纤维化免疫反应

目的:了解基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43重组嵌合蛋白是否能够诱导产生抗自身抗CD154抗体的免疫反应。方法:将CD154-Ag43重组蛋白作为模式疫苗免疫刀豆素蛋白诱导肝纤维化模型小鼠,用免疫印迹和酶联免疫斑点试验了解是否能够诱导产生抗CD154抗体,用HE染色观察肝脏纤维化状态,用Masson trichrome和硝酸银染色观察肝脏组织胶原蛋白和网状纤维。结果:免疫印迹发现CD154-Ag43免疫的小鼠可以有效产生抗自身CD154抗体,酶联免疫斑点试验发现脾脏中有特异分泌抗CD154抗体的B淋巴细胞。肝脏组织HE染色发现CD154-Ag43免疫的肝纤维化模型小鼠肝脏纤维化明显轻于对照组,并且肝脏胶原蛋白和网状纤维也明显少于对照组。结论:基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43嵌合蛋白有可能是一种防治肝纤维化的有效模式疫苗。     

铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究

目的 构建并鉴定含有铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, Pa）外膜蛋白I（OprI)基因与两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum, Bb）疫苗 （Bb-pGEX-OprI）,并研究该疫苗对小鼠Pa感染的保护作用。方法 PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprI,将pGEX-OprI电穿孔转化Bb,构建Bb-pGEX-OprI疫苗,进行双酶切、PCR和测序鉴定后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分别分析并鉴定表达产物。21只小鼠随机分为3组,分别灌胃接种Bb-pGEX-OprI 疫苗、空载体疫苗（Bb-pGEX-1λT)和Bb。首次免疫后4周用PA01株攻击。攻击后2周处死小鼠取肺组织,计数肺组织的细菌菌落数。免疫前、首次免疫后4周和PA01株攻击后2周采小鼠静脉血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE。结果 PCR成功扩增出194 bp的OprI抗原编码基因;双酶切、PCR和测序证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中,并且pGEX-OprI成功转化Bb,构建为Bb-pGEX-OprI疫苗;SDS-PAGE显示Bb-pGEX-OprI 表达相对分子质量约32×103的OprI-谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白;Western blot证实融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别。Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠肺组织的细菌菌落数低于Bb-pGEX-1λT组和Bb组（P<0.01）,Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平在首次免疫后4周和攻击后2周依次升高,相同时间点Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清抗体水平均高于Bb-pGEX-1λT和Bb组（P＜0.01或P<0.05）。结论 成功构建了重组疫苗Bb-pGEX-OprI,其在小鼠抗Pa感染过程中可产生有效的体液免疫应答。     

Anti-tumor angiogenesis with a recombinant ag43/FGFR1 chimeric protein as a model antigen

In order to investigate the anti-tumor angiogenesis activity with a recombinant Ag43/FGFR1 chimeric protein(AF)vaccine in a mouse H22 hepatoma model,tumor volume and survival rate of the mice were studied at a 3-day interval.Microvessel density(MVD)was detected by immunohistochemistry.The endothelial deposition of autoantibodies within tumor tissues was examined by immunofluorescent staining,and anti-FGFR1 antibody-producing B cells(APBCs)were tested by enzyme-linked immunospot(ELISPOT)assay.Compared with t...     

Ⅲ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及鉴定

目的 研制Ⅲ型登革病毒(DV3)非结构蛋白1(NS1)单克隆抗体,鉴定其血清型特异性.方法 以具有良好抗原性的重组DV3-NS1蛋白与DV3交替免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光(IFA)和Weatern Blot对抗体的特异性进行鉴定.结果 经交替免疫法免疫Balb/c小鼠,共获得14株抗DV3-NS1单抗,其亚类测定1株为IgG2a,余为lgG1.其中3株特异性结合DV3及DV3-NS1蛋白,4株能同时结合4型登革病毒NS1蛋白,其余7株与其他3型登革病毒NS1蛋白存在交叉反应.结论 成功获得了针对DV3-NS1的特异性单抗及交叉性单抗,将为进一步研究登革病毒NS1蛋白的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定基础.     

重组空肠弯曲菌蛋白疫苗免疫 BA LB／c小鼠的研究

目的探讨重组空肠弯曲菌rLTB-PEB1蛋白疫苗的免疫机制。方法经口服免疫 BALB/c 小鼠后，ELISA 法检测特异性抗体IgG 、IgA 水平；ELISPOT 法检测派伊尔结特异性抗体分泌细胞；实时荧光定量PCR 检测IFN-γ、IL-4 mRNA 表达的差异。计算疫苗保护率。结果免疫组小鼠派伊尔结特异性抗体、IFN-γ、IL-4 mRNA 水平明显增高（ P ＜0．05）。免疫组的疫苗保护率为89．3％～93．7％，可维持30周。结论重组空肠弯曲菌rLTB-PEB1蛋白疫苗口服免疫小鼠可有效预防空肠弯曲菌的感染，其免疫机制可能为诱导了TH1/TH2型免疫应答。     

特异性SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位初步分析

目的：用分段表达纯化的SARS冠状病毒（SARS-CoV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid N蛋白）制备针对该蛋白不同区域抗原表位的高特异性单克隆抗体（McAb）,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。方法：用分段表达纯化的SARS～CoV的N蛋白（分别记为N1蛋白、N2蛋白）分别免疫Balb／c小鼠制备McAb,通过检测其亚类、效价及相对亲和力鉴定McAb的生物学特性,以Western blot鉴定单克隆抗体特异性,并对McAb结合表位进行初步分析。结果：筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CovN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,腹水效价10^5以上;亲和常数达10^8以上。Western blot证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoVN蛋白发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示2株N1 McAb识别相同的抗原表位,其余均识别不同的抗原表位。结论：通过分段表达纯化的SARS-CoVN蛋白而制备的特异性针对SARS-CoV N蛋白不同区域抗原表位的单克隆抗体中,N1单抗识别N蛋白N端（1-549bp）,N2单抗识别N蛋白C端（496～1269bp）,可初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。     

Immune responses against Schistosoma japonicum after vaccinating mice with a multivalent DNA vaccine encoding integrated membrane protein Sj23 and cytokine interleukin-12

Background The vaccination of mice with DNA encoding single candidate antigens has failed to induce significant protection against Schistosoma japonicum ( S. japonicum) challenge infections. In this study, we evaluated the feasibility of using a multivalent DNA vaccine which co-expressed S.japonicum integral membrane protein Sj23 and murine cytokine IL-12 to induce protective immune responses.Methods The plasmid pVIVO2-IL12-Sj23, a eukaryotic expression vector expressing Sj23 and murine IL-12 simultaneously, was constructed, identified, and tested for expression in vitro. Its ability to protect against S. japonicum challenge infections was analyed according to worm reduction rate and egg reduction rate after vaccination of BALB/c mice. The serum levels of specific IgG antibody were determined by enzyme-linked-immuno sorbent assay (ELISA) and Western blot analysis. Using cultured spleen cells, IFN-γ and IL-4 post-stimulation were quantified by ELISA. The phenotypes of splenocyte populations were analyzed by flow cytometry (FCM).Results The plasmid DNA pVIVO2-IL12-Sj23 was proven to express well in vitro by transient transfection of HEK-293 cells. Immunization resulted in a worm reduction rate of 45. 53% and egg reduction rate of 58.35%. ELISA and Western blot analysis indicated that immunized mice generated specific IgG against Sj23. Spleen cells showed significant increases in IFN-γ but decreases in IL-4.No significant differences in CD4^ and CD8^ subgroup ratios were observed after the challenges.Conclusions The multivalent DNA vaccine pVIVO2-1L12-Sj23 is sufficient to elicit moderate but highly significant levels of protective immunity against challenge infections. Cytokine IL-12, as a gene adjuvant, was able to enhance the Thl responses and, hence, the protective immunity.     

细粒棘球蚴重组延伸因子-1抗原的免疫原性研究

目的对细粒棘球蚴重组抗原EF-1的免疫原性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据.方法用重组目的蛋白及融合表达蛋白作为抗原,分别免疫昆明小鼠获得抗血清,通过蛋白免疫印迹试验（Western blot）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中产生的特异性抗体成分及其程度.结果重组目的蛋白EF-1和融合蛋白GST/EF-1免疫小鼠后均诱发产生了特异性抗体,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义（P＜0.05）;目的蛋白和融合蛋白免疫两组小鼠所得血清的抗体含量差异没有统计学意义.结论目的蛋白EF-1和融合蛋白GST/EF-1都具有一定的免疫原性.     

结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6 的构建、鉴定及免疫效应评价

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因
装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染
Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫
小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6 特异性抗体IgG 的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;
ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,
测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处
见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组
（空质粒组和生理盐水对照组）明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对
照组（空质粒组和生理盐水对照组）。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细
胞免疫和体液免疫效应。
     

沙眼衣原体T细胞抗原CT143原核表达、纯化及免疫活性鉴定

目的克隆沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）T细胞抗原Ct143基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法采用PCR技术从ct基因组中扩增Ct143基因,并构建pGEX-6p—Ct143原核表达质粒,转化E．coli XL1-Blue．IPTG诱导重组GST-CT143融合蛋白表达,经酶切后得到无GST标签的纯蛋白免疫Balb／c鼠,ELISA及Western-blot分析CT143蛋白免疫原性及免疫反应性。结果成功构建了pGEX-6p—CT143原核表达质粒,序列测定证实重组质粒插入片段与GenBank登陆的CtD型一致,长度为843bp;GST—CT143融合蛋白在E．coli中获得稳定高效表达;纯蛋白与佐剂混匀后肌肉免疫小鼠,ELISA检测免疫小鼠的血清效价为1：12800,Westem blot结果表明该蛋白与Ct泌尿生殖道感染病人混合血清中IgG结合,具有免疫反应性。结论成功克隆表达了CtT细胞抗原CT143,该抗原经纯化后具有良好的免疫原性及免疫反应性。     

严重发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白核酸疫苗的构建及免疫原性研究

目的:构建SFTSV的核蛋白核酸疫苗并探讨其免疫原性?方法:采用PCR方法扩增SFTSV核蛋白基因,并用引物引入限制性内切酶酶切位点,克隆入载体pJW4303?经酶切和测序鉴定正确的质粒,用PEI瞬时转染HEK293T细胞,用免疫印迹法鉴定核蛋白的表达?同时以质粒pJW4303作为阴性对照,免疫BALB/c小鼠,酶联免疫法验证其免疫原性?结果:成功构建质粒pJW4303-N,经Western blot证实SFTSV核蛋白能够在HEK293T细胞中表达?ELISA检测免疫后小鼠血清特异性IgG抗体及其亚型发现,IgG抗体及其亚型较免疫前明显升高,亚型中以IgG2a升高为主?结论:SFTSV核蛋白核酸疫苗pJW4303-N具有良好的免疫原性,为进一步研究SFTSV核蛋白奠定了基础?     

抗人SOCS1单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的锏备高效价的抗人SOCS1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS1融合蛋白免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与Sp2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernb1ot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Westernb1ot显示在相对分子量为6．0×10^4处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1：1280,腹水效价为1;102400,Ig亚类为IgG1,相对亲和力达1．17×10^7L／mol。结论成功制备出能特异性识别人SOCS1的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS1在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:10⁷.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.     

人精胺/精眯N 1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

 目的制备鼠抗人精胺/精眯N1鄄乙酰基转移酶（SSAT）单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21（DE3）中原核表达带6伊His 标签的SSAT 重组蛋白,并用Ni鄄NTA 树脂亲和层析纯化。用SSAT 重组蛋白免疫Balb/C 小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT 单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT 单克隆抗体,为SSAT 相关的分子和病理研究奠定了基础。