熊果酸对THP-1细胞HMGB1表达和NF-kB活性的影响

目的 研究熊果酸(UA)对人单核细胞系THP-1细胞HMGB1表达和NF-kB活性的影响.方法 用不同浓度的UA(0、0.1、1、5和10 μmol/L)作用细胞后进行如下检测:1)MTr检测细胞增殖;2)RT-PCR法检测HMGB1和P65 mRNA表达;3)Western blot检测HMGB1和P65蛋白的表达;4)荧光素酶报告基因转染,质粒pNF-kB-luc瞬时转染THP-1细胞,转染40h后加1μmol/L UA作用,于转染48 h后进行荧光素酶活性测定.结果 1)随着UA浓度的增高,可明显抑制THP-1细胞的增殖;2)不同浓度的UA对THP-1细胞HMGBl mRNA和蛋白表达,呈现出一定的双向性,且以l μmol/L UA作用最强(P ＜0.05);3)UA可增强P65 mRNA和蛋白表达以及NF-kB活性.结论 UA可影响单核细胞HMGB1表达和NF-kB活性.     

低表达HMGB1对宫颈癌干性基因及细胞增殖的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白1(high-mobility group box-1,HMGB1)在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌干性基因和细胞增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测宫颈癌组和对照组HMGB1的表达,分析其与疾病临床病理特征之间的关系.通过低表达HMGB1质粒载体(siRNA-HMGB1)转染HeLa细胞,利...     

三氧化二砷对HMGB1诱导的大鼠滑膜细胞细胞周期蛋白表达的影响

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的以关节滑膜组织侵蚀样增生为病理特点的慢性炎症性自身免疫性疾病.多种细胞因子形成的免疫网络在滑膜细胞增殖过程中发挥着重要作用.     

哮喘气道重塑大鼠肺组织磷酸化JNK、血清/BALF白介素1β表达变化

目的：研究哮喘气道重塑大鼠肺组织磷酸化c-Jun氨基末端激酶（P-JNK）的表达,血清/支气管肺泡灌洗液（BALF）白介素1β（IL-1β）的含量,探讨P-JNK在哮喘气道重塑中的作用及IL-1β对JNK活化的可能影响。方法：SD大鼠随机分为对照组（C）、哮喘组（A）,复制哮喘气道重塑模型。图像分析技术测定支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,ELISA法测定血清、BALF中IL-1β含量,免疫组化（IHC）、Western blot检测肺内P-JNK蛋白表达,直线相关分析显示Wat、Wam与P-JNK蛋白（平均吸光度mean absorbance,mA表示）的相关性及P-JNK蛋白与血清、BALFIL-1β浓度的相关性。结果：A组Wat、Wam及血清、BALFIL-1β浓度均较C组增加（均P〈0.01）;A组P-JNK mA及光密度值均较C组增加（均P〈0.01）;Wat、Wam与P-JNK mA均呈显著正相关（均P〈0.01）;P-JNK mA与血清、BALFIL-1β浓度均呈显著正相关（均P〈0.01）。结论：哮喘气道重塑大鼠肺组织P-JNK、血清、BALFIL-1β表达增强,IL-1β可能促进JNK活化。     

姜黄素通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻小鼠肺缺血再灌注损伤

 目的:探讨姜黄素（curcumin,Cur）是否通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻小鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤。方法:采用C57BL/6J小鼠左侧肺原位I/R损伤模型。实验随机分为6组（每组10只）,包括假手术组（sham组）、I/R组、DMSO组（I/R+DMSO组）和Cur组（I/R+Cur低、中、高剂量组）。实验结束后处死小鼠,留取左肺,检测肺湿干重比（W/D）和总肺水含量（TLW）;光镜、电镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估（IQA）;RT-PCR检测JNK和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA表达;Western blotting检测磷酸化JNK（p-JNK）和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测肺细胞凋亡指数（AI）。结果:与sham组相比,I/R组和DMSO组W/D、TLW、IQA及AI均明显升高（P<0.01）,JNK、GRP78 mRNA和p-JNK、GRP78 蛋白表达量上升（P<0.01）,光镜、电镜均显示肺组织结构出现明显损伤性变化。I/R组与DMSO组相比,上述各指标无显著差异（P>0.05）。与I/R组和DMSO组相比,I/R+Cur低、中、高剂量组各组GRP78 mRNA和蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,W/D、TLW、IQA及AI下降（P<0.05或P<0.01）且肺组织损伤减轻,JNK mRNA和p-JNK蛋白质表达量亦下降,以I/R+Cur高剂量组下降最为明显（P<0.01）。结论: 缺血/再灌注引发肺组织细胞发生过度的内质网应激,损伤肺组织。Cur能减轻肺缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的过度活化有关。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用

 目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody,AT1-AA）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关的JNK表达的作用。方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）及凋亡蛋白p-JNK的表达水平。结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠（P<0.01）。Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显（P<0.05）。结论: AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能。     

JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义

目的 探讨c -Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义. 方法 将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组.采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉.用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达. 结果 免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun( p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱.Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组. 结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用.     

当归与糖皮质激素治疗哮喘对HMGB1 表达及阴虚症状的影响

目的:探讨当归与糖皮质激素及其合用对哮喘小鼠肺组织HMGB1 的表达及阴虚症状的影响。方法:小鼠随 机分为6 组(n =12),采用卵蛋白致敏、激发来复制哮喘模型、利用氢化可的松来复制阴虚模型,观测受试药缓解阴虚症状(进 食及饮水量、体重、自主活动)与平喘(哮喘行为学、肺功能、肺组织病理学)等作用,同时探讨当归与激素及其合用治疗哮喘的 机制(细胞因子、HMGB1)。结果:8 g/ kg 当归与0.05 g/ kg 氢化可的松及其合用可明显缓解哮喘发作及其症状,提高肺功能, 抑制炎性细胞浸润、改善肺组织病理学,降低BALF 中TNF-α、IL-1β及IL-6 水平,当归与氢化可的松合用后可抑制肺组织 HMGB1 的高表达。同时,当归与氢化可的松合用后可缓解糖皮质激素所致小鼠进食及饮水量增加、体重下降、自主活动增多 等阴虚症状。结论:当归与激素及其合用具有明显的平喘作用,抑制HMGB1 通路是当归与激素合用后的平喘机制之一;同时 当归与激素合用后可缓解糖皮质激素引起的阴虚症状。     

SP600125对高血压全脑缺血再灌注大鼠学习记忆的影响

目的:探讨SP600125对高血压大鼠脑缺血再灌注损伤后学习记忆的影响.方法:雄性WKY大鼠随机分为假手术组和全脑缺血再灌注组(IR组);另取雄性自发性高血压大鼠随机分为高血压全脑缺血再灌注组和SP600125干预组.改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型.脑缺血24、48 h,电镜和光镜观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学法检测海马区磷酸化JNK表达;八臂迷宫法测试动物学习记忆功能.结果:与假手术组比较,全脑缺血再灌注组海马区神经元结构损伤明显,神经元细胞存活密度降低;磷酸化JNK表达增高;学习记忆功能降低.与全脑缺血再灌注组比较,高血压全脑缺血再灌注组中海马区神经元结构损伤加重,神经元细胞存活密度降低;磷酸化JNK表达进一步增高;学习记忆功能降低.与高血压全脑缺血再灌注组比较,SP600125干预组海马区神经元结构损伤减轻;神经元细胞存活密度提高;磷酸化JNK表达进一步降低;学习记忆功能提高.结论:SP600125通过抑制脑组织神经细胞的丢失,改善高血压大鼠脑缺血再灌注损伤后学习记忆功能损伤.     

DHA对糖尿病大鼠神经病理性痛和背根节JNK/CXCL1信号通路的影响

目的:研究DHA对糖尿病神经病理性痛大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,探讨DHA对糖尿病大鼠背根节JNK磷酸化和CXCL1水平及其受体表达的影响。方法:采用SD大鼠,随机分为对照组、对照+DHA组、糖尿病组和糖尿病+DHA组。以链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病,DHA组给予DHA(200mg/kg体重)干预,对照组和糖尿病组给予玉米油(0.2 ml/kg体重)。检测各组大鼠机械痛和热痛阈值,ELISA法、PCR法检测背根节中CXCL1含量,免疫荧光法检测CXCR2受体表达情况,Western Blot法检测背根节中JNK磷酸化水平。结果:糖尿病大鼠机械痛敏和热痛敏阈值下降,DHA可在一定程度上缓解大鼠痛反应。糖尿病大鼠背根节JNK磷酸化水平升高,CXCL1水平明显升高,CXCR2受体阳性神经元数量明显升高。DHA干预明显抑制JNK磷酸化水平和CXCR2的表达,降低CXCL1的含量。结论:DHA具有减轻糖尿病神经病理性痛大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,其机制可能与抑制背根节JNK磷酸化,降低炎性因子水平有关。     

冠心病患者高迁移率族蛋白B1水平变化的临床研究

目的:探讨冠心病(CHD)患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平变化及其临床意义。方法:CHD患者158例,分为急性冠脉综合征组(ACS组,87例)和稳定型心绞痛组(SA组,71例),选择30例年龄和性别匹配的健康体检者作为对照组,采用ELISA检测各组人群血清HMGB1水平,并同时检测超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞计数(WBC)和血脂水平。结果:CHD患者血清HMGB1和hs-CRP水平较对照组明显增高(6.47±1.39ng/ml vs 2.19±0.43ng/ml,P<0.01;3.42±0.87g/ml vs 1.15±0.22g/ml,P<0.01)。ACS组患者血清HMGB1水平显著高于SA组(8.52±2.08ng/ml vs 5.38±1.26ng/ml,P<0.01)。ACS组患者血清hs-CRP水平较SA组和对照组也明显升高。CHD患者血清HMGB1水平与hs-CRP水平呈显著正相关(r=0.685,P<0.01)。结论:血清HMGB1水平的变化在CHD的发病过程中有重要意义,可作为CHD的监测指标之一。     

HMGB1在类风湿性关节炎发病中的作用及其机制

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种普遍存在于真核细胞中的染色体蛋白。早期研究证实,HMGB1可作为DNA结合蛋白参与维持DNA构象和核小体结构的稳定：也可作为一种非特异性的转录因子参与基因表达的调控。近期研究发现,HMGB1可于细胞外分泌释放,参与细胞的分化、迁移和再生,并可介导多种炎性和自身免疫性疾病的发病。特别在类风湿性关节炎（RA）患者及实验性关节炎动物关节局部HMGB1的表达明显上调,深入研究揭示这些异常表达的HMGB1可通过多种分子机制在关节炎发病的多个环节中发挥作用,以介导慢性炎症的持续和局部组织的侵蚀破坏,通过阻断和抑制HMGB1的作用可明显减轻和改善关节炎的症状。这为阐明RA的发病机制提供了新的思路,并为RA的治疗提供了新的靶点。     

姜黄素减弱Aβ_(25-35)致大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应

目的:研究姜黄素(Cur)对β-淀粉样蛋白(Aβ)刺激下大鼠原代小胶质细胞活力及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:取新生SD大鼠大脑皮层行混合胶质细胞原代培养,摇床振摇法分离小胶质细胞并行Iba-1免疫细胞化学鉴定。在培养的小胶质细胞中加入Aβ_(25-35)作用24 h后,观察细胞形态并用CCK-8实验确定造模浓度及Cur的治疗浓度。将大鼠原代小胶质细胞分为5组:正常组、Aβ_(25-35)模型组、Cur组、Aβ_(25-35)+Cur治疗组、Aβ_(25-35)+DMSO组;用Western blot法检测细胞内HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、NF-κB的表达情况,取上清液用ELISA检测HMGB1、IL-1β、TNF-α的表达。结果:Iba-1的阳性率在95%以上,培养的大鼠原代小胶质细胞可用于实验。Western blot实验结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显升高(P0.05),加入姜黄素后细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显减少(P0.05)。ELISA结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显升高(P0.05),加入姜黄素后上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显下降(P0.05)。结论:姜黄素可明显抑制Aβ_(25-35)刺激下大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应。     

外源性HMGB1的研究进展

胞内HMGB1可以主动或被动释放到胞外,外源性HMGB1被认为是重要的晚期炎症因子,在炎症的发生发展中起重要作用.胞外HMGB1能与很多因子形成复合物,通过不同的受体通路影响转录因子NF-κB的活性,发挥不同的生物学效应.除发挥炎症因子的作用外,HMGB1在组织的修复和重建中的作用也不容小觑.另外,HMGB1预处理可以诱导产生免疫耐受,可能与脓毒症末期免疫功能低下有一定关系.     

Identification of lipopolysaccharide-binding peptide regions within HMGB1 and their effects on subclinical endotoxemia in a mouse model

Lipopolysaccharide (LPS) triggers deleterious systemic inflammatory responses when released into the circulation. LPS-binding protein (LBP) in the serum plays an important role in modifying LPS toxicity by facilitating its interaction with LPS signaling receptors, which are expressed on the surface of LPS-responsive cells. We have previously demonstrated that high mobility group box 1 (HMGB1) can bind to and transfer LPS, consequently increasing LPS-induced TNF-α production in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). We report here on the identification of two LPS-binding domains within HMGB1. Furthermore, using 12 synthetic HMGB1 peptides, we define the LPS-binding regions within each domain. Among them, synthetic peptides HPep1 and HPep6, which are located in the A and B box domains of HMGB1, bind to the polysaccharide and lipid A moieties of LPS respectively. Both HPep1 and HPep6 peptides inhibited binding of LPS to LBP and HMGB1, LBP-mediated LPS transfer to CD14, and cellular uptake of LPS in RAW264.7 cells. These peptides also inhibited LPS-induced TNF-α release in human PBMCs and induced lower levels of TNF-α in the serum in a subclinical endotoxemia mouse model. These results indicate that HMGB1 has two LPS-binding peptide regions that can be utilized to design anti-sepsis or LPS-neutralizing therapeutics.     

高迁移率族蛋白1在类风湿性关节炎发生中的作用

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种非组蛋白核蛋白,是一个具有双重功能的警报素,其免疫活性取决于细胞定位。在细胞内,HMGB1结合DNA调节转录;在细胞外,HMGB1具有和TNF相似的细胞因子活性。HMGB1参与许多免疫介导疾病的发病过程包括类风湿性关节炎（RA）。因而,研究炎症性关节炎新的发病机制可以提供新的治疗靶点。     

敲减HMGB1表达对TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响

 目的：探讨敲减高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法：采用HMGB1小干扰RNA（siRNA）转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达情况。用TNF-α处理敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Transwell小室法测定各组细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定各组细胞的迁移能力,Western blot法测定细胞中上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、神经钙黏素（N-cadherin）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和Bax的表达情况。结果：HMGB1 siRNA转染后MDA-MB-231细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平明显低于没有转染的细胞（P<0.05）。与对照组相比,TNF-α处理后的乳腺癌细胞的凋亡水平升高,细胞侵袭和迁移能力也升高,细胞中E-cadherin蛋白水平降低,N-cadherin蛋白水平升高,MMP-2、MMP-9和Bax蛋白水平也升高（P<0.05）。敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞经TNF-α诱导以后,细胞凋亡率增加,侵袭及迁移能力下调,细胞中E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平下降,MMP-2和MMP-9蛋白水平也下降,Bax蛋白水平升高（P<0.05）。结论：敲减HMGB1表达可以增强TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡,抑制TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭、迁移和上皮-间充质转化,其作用机制与MMP-2、MMP-9和Bax蛋白表达有关。     

晚期炎症介质HMGB1的病理生理作用

脓毒症(sepsis)指由感染引起的全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),是临床各科十分常见的危重病症,其死亡率高达30%以上,而且发病率以每年1.5%-8%增长[1]。脓毒症发病机制的探索一直在不断进行。肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1(IL-1)等被认为是在     

HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞,观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性;pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。     

缺氧条件下HMGB1对HepG2细胞线粒体功能的影响

目的:探讨缺氧条件下高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人肝癌细胞系HepG2线粒体功能的影响及其机制。方法:将HMGB1小干扰RNA (HMGB1-siRNA)和阴性对照si RNA (si RNA-NC)分别转染入HepG2细胞,实验分为:缺氧(hypoxia)组、hypoxia+HMGB1-siRNA组和hypoxia+si RNA-NC组。流式细胞术检测各组细胞线粒体活性氧簇(mt ROS)含量和线粒体膜电位水平,RT-qPCR检测各组细胞线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,ATP检测试剂盒检测各组细胞内ATP产生量,Western blot检测各组细胞线粒体生物合成相关分子表达的变化。结果:与hypoxia组和hypoxia+si RNA-NC组相比,当HMGB1表达被抑制后,细胞线粒体活性氧簇含量明显升高,线粒体膜电位水平、mt DNA拷贝数和ATP产生量明显下降(P 0. 05); Western blot结果显示,hypoxia+HMGB1-siRNA组的线粒体生物合成相关分子表达量下降(P 0. 05)。结论:缺氧环境下,HMGB1通过调控线粒体生物合成,诱导新生线粒体形成并维持细胞线粒体的正常功能。