吗啡成瘾戒断对大鼠海马CA1区P-CREB表达的影响

目的探讨吗啡成瘾戒断后大鼠海马CA1区P-CREB的表达变化。方法48只健康雄性成年SD大鼠,随机分为实验组和对照组:实验组腹腔注射吗啡起始剂量5mg/kg,1d2次,逐日递增,连续10d;对照组:以生理盐水代替吗啡。停药后7d、14d和21d处死。用免疫组织化学方法(ABC法)检测海马CA1区P-CREB的表达,图像分析系统测定阳性反应产物的平均灰度值。结果P-CREB表达在7d、14d实验组与对照组相比表达上调(P<0.05),21d与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论海马CA1区CREB磷酸化在吗啡依赖的形成中发挥作用。     

八肽胆囊收缩素对吗啡戒断大鼠蓝斑和中脑导水管周围灰质CREB及p-CREB的影响

目的 探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）及其受体拮抗剂对吗啡戒断症状的影响及其相应的信号转导机制。方法 建立吗啡依赖及戒断动物模型,每组6只。应用改良柳田知司法对戒断症状评分,并采用免疫组织化学方法检测大鼠蓝斑和中脑导水管周围灰质内CREB及p-CREB的变化。结果 腹腔及侧脑室注射CCK-8,CCK1及CCK2受体拮抗剂均可明显降低戒断症状评分;吗啡依赖后蓝斑和中脑导水管内p-CREB明显增高,戒断后蓝斑内p-CREB水平较依赖组进一步增高,而中脑导水管内p-CREB却较依赖组下降。腹腔及侧脑室注射CCK-8,CCK1及CCK2受体拮抗剂均可逆转戒断后中脑导水管内p-CREB的降低;腹腔及侧脑室注射CCK1 及CCK2受体拮抗剂可逆转戒断后蓝斑内p-CREB的升高,而CCK-8却对蓝斑内p-CREB的表达无明显影响。结论 CCK-8可通过对蓝斑和中脑导水管内p-CREB的调节减轻吗啡戒断症状,且表现出明显的脑区特异性。     

八肽胆囊收缩素在吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区的表达变化

目的:探究慢性吗啡依赖及戒断大鼠相关脑区八肽胆囊收缩素(CCK-8)表达的变化。方法:利用Wistar大鼠建立慢性吗啡依赖及戒断模型,分为对照组(control)、吗啡依赖组(MOR)、纳洛酮催促戒断组(NAL)。Gellert-Holtzman评分评价吗啡成瘾及戒断程度,采用免疫组织化学和原位杂交技术分别检测相关脑区CCK-8蛋白及CCK mRNA表达的变化。结果:戒断组Gellert-Holtzman评分与对照组和吗啡依赖组比较显著增加;前额叶皮质(PFC)、黑质致密部(SNc)、中脑腹侧被盖区(VTA)CCK-8及CCK mRNA表达依赖组较对组明显升高,戒断后表达下降;杏仁核、蓝斑(LC)吗啡依赖后CCK-8及CCK mRNA表达较对照组显著增高,海马齿状回(PoDG)、杏仁核、LC戒断后较依赖组表达进一步升高;尾壳核(CPU)、伏隔核(NAc)、中脑导水管周围灰质(PAG)未检测到CCK-8及CCK mRNA的表达。结论:CCK-8参与了大鼠吗啡依赖与戒断过程并具有脑区特异性。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内CREB mRNA表达的影响

探讨外源性神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内的cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的影响。用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,运用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质内CREBmRNA的表达。结果显示:缺血再灌注组缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREBmRNA阳性反应产物平均光密度(OD)比假手术组减少(P<0.05),NGF组CA1区和顶叶皮质内的CREBmRNA阳性产物平均光密度高于缺血再灌注组(P<0.05)。本研究结果提示NGF可以上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质缺血神经元CREBmRNA的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。     

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠海马CREB表达的影响

目的探讨单唾液酸神经节苷脂(GM1)对脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为:假手术组(Sham,8只)、神经节苷脂治疗组(GM1,32只)、缺血再灌注组(I/R,32只)。GM1治疗组和I/R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为6h、12h,24h、3d,共4个小组。应用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠海马CREB蛋白的表达。结果免疫组织化学方法检测时发现,缺血处理后,CREB表达水平迅速增高,在6h时最高,之后持续激活,至12h时开始降低,与假手术组相比,CREB阳性产物的平均光密度值(MOD)显著升高(P0.01);与相同时间点的缺血组比较,GM1治疗组的CREB蛋白阳性表达水平明显升高(P0.01)。Western blot方法也得到了相同的结论。结论 GM1对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用可能与上调CREB蛋白的表达相关。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB表达的上调作用

为探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学、WesternBlotting和图像分析方法检测大鼠缺血侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达。结果显示:缺血再灌注组CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);NGF组CREB和p-CREB表达高于缺血再灌注组(P<0.05)。以上结果表明NGF明显上调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过上调CREB和p-CREB的表达来实现。     

慢性吗啡依赖和戒断对大鼠远位触液神经元环腺苷酸反应元件结合蛋白表达的影响

目的 研究慢性吗啡依赖和戒断大鼠远位触液神经元环腺苷酸反应元件结合蛋白(pCREB)表达的变化.方法 雄性SD大鼠24只,随机分为3组(n=8):空白对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组.采用侧脑室注射CB-HRP和CB-HRP/pCREB免疫组织化学双重标记技术,观察大鼠远位触液神经元pCREB表达的变化.结果 慢性吗啡依赖、戒断后,远位触液神经元出现CREB蛋白激活,两组CB-HRP/pCREB双标的神经元数量分别为223.0±61.5和213.0±50.6;与空白对照组相比较,磷酸化的CREB出现表达上调(P<0.01).吗啡依赖组和戒断组的CB.HRP双标神经元的数量相比,差异无显著性(P>0.05).结论 远位触液神经元通过上调磷酸化CREB的表达参与吗啡依赖和戒断的形成.     

电针对海洛因成瘾大鼠学习记忆及海马CREB表达的影响

目的：探讨电针对海洛因成瘾大鼠学习记忆的影响及作用机制。方法130只Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因成瘾组（简称成瘾组）和海洛因成瘾后作电针治疗组（简称电针组）。进行跳台实验测试大鼠学习记忆能力,并用免疫组化方法检测鼠脑海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）和磷酸化CREP（P—CREB）的表达。结果：成瘾组大鼠学习记忆下降（P％0．01）,电针组大鼠学习记忆有所改善（P〈0．01）;成瘾组大鼠海马CREB、P—CREB表达较对照组增高（P〈0．05）,电针组更高（P〈0．01）。结论：电针治疗可在一定程度上对抗海洛因成瘾大鼠所致的学习记忆下降,其机制可能与海马内CREB、P—CREB表达变化有关;CREB、PCREB参与学习记忆及海洛因成瘾的形成。     

吗啡依赖及戒断对大鼠海马内神经甾体水平的影响

目的:探讨吗啡躯体依赖、精神依赖及戒断对雄性大鼠海马内神经甾体水平的影响。方法:腹腔注射递增剂量吗啡建立大鼠吗啡躯体依赖模型,纳洛酮诱发戒断症状;条件性位置偏爱实验建立吗啡精神依赖模型。高效液相色谱-质谱法测定大鼠海马和血浆中脱氢表雄酮(DHEA)及其硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮(PREG)及其硫酸酯(PREGS)和别孕烯醇酮(AP)含量。结果:大鼠吗啡躯体依赖形成时海马内DHEA、PREG水平较对照组升高(0·88±0·19/0·67±0·17,t=2·52,P<0·05,10·94±2·02/7·53±2·64,t=3·24,P<0·01),血浆中DHEAS、PREGS水平较对照组升高(115·4±99·7/29·3±8·3,t=3·20,P<0·01;234·5±216·1/38·2±18·8,t=3·39,P<0·01);大鼠吗啡精神依赖形成时海马及血浆中DHEA水平降低(0·90±0·55,15·6±5·0/1·63±0·76,24·5±9·8,t=2·42,2·69,P<0·05),血浆中DHEAS水平显著升高(187·4±44·8/136·7±30·7,t=2·88,P<0·05)。与纳洛酮对照组比较,大鼠吗啡戒断时海马内DHEA、AP、DHEAS、PREGS水平升高(t=2·33~3·96,P<0·05),血浆中PREG、AP、DHEAS和PREGS水平升高(t=3·72~4·82,P<0·01)。结论:吗啡依赖、戒断可影响大鼠海马内某些神经甾体的水平,表明内源性神经甾体可能参与吗啡依赖的形成。     

γ-促分泌酶抑制剂对脑缺血再灌注小鼠海马CREB表达的影响

目的研究γ-促分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对脑缺血再灌注小鼠海马cAMP反应元件结合蛋白（CREB）表达的影响。方法72只昆明小鼠随机分为：假手术组（Sham,8只）、γ-促分泌酶抑制剂组（MW167,32只）、缺血再灌注组（I／R,32只）。γ-促分泌酶抑制剂组和I／R组依据缺血后再灌注的不同时间点再细分为1、3、7、14d4个亚组。应用免疫组织化学方法和Westernblot方法检测各组小鼠海马CREB蛋白的表达。结果免疫组织化学方法检测时发现．缺血处理后1d时,CREB表达迅速增高,之后持续激活,与假手术组相比,显著升高（P〈0．01）;与相同时间点的缺血组比较,MW167组的CREB蛋白阳性表达则明显升高（P〈0．05）;Westernblot方法也得到了相同的结论。结论γ-促分泌酶抑制剂很可通过上调CREB蛋白的表达参与脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

慢性间歇低氧对幼鼠认知及相关脑区CREB的影响

目的:观察慢性间歇低氧(CIH)对幼鼠认知的影响并探讨其潜在的机制。方法:取八臂迷宫训练成功的SPF级健康雄性SD幼鼠40只,随机分为:间歇低氧2周(2IH)、4周组(4IH),对照2周(2C)、4周组(4C),建立IH幼鼠模型,低氧结束后进行八臂迷宫测试,观察海马和前额叶皮层超微结构变化及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA和磷酸化CREB蛋白的表达。结果:4组幼鼠的记忆错误次数比较均有显著差别(均P0.05);IH各组海马及前额叶皮层神经元均出现早期凋亡和变性,尤以4IH组最为明显,对照组则基本正常;与相应对照组相比,2IH、4IH组幼鼠海马和前额叶皮层CREB mRNA和p-CREB蛋白的表达水平显著降低(均P0.05),且以4IH组最低(均P0.01),差异显著,两对照组之间无显著差异(P0.05)。结论:慢性间歇低氧诱导海马和前额叶皮层神经元超微结构改变,还下调CREB的基因转录和抑制CREB蛋白磷酸化,抑制记忆相关蛋白的合成,这可能是引起学习记忆能力下降的重要机制之一。     

三种复方对慢性应激模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达的影响

 目的:探讨慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达及疏肝、疏肝健脾与健脾3种方剂的效应。方法:SD雄性大鼠40只,用随机区组设计的方法分为对照组、模型组、四逆散组、逍遥散组和四君子汤组,多种应激处理共21 d后,测定1%蔗糖水摄取率和强迫游泳中累计不动时间,用RT-PCR的方法检测海马CREB和BDNF mRNA表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠1%蔗糖水摄取率明显降低,强迫游泳中累计不动时间明显延长,海马CREB、BDNF mRNA表达明显降低;与模型组比较,四逆散组、逍遥散组的1%蔗糖水摄取率明显升高,强迫游泳中累计不动时间明显缩短,CREB、BDNF mRNA表达均明显升高;四君子汤组各行为学指标及BDNF表达与模型组相比没有差异,仅CREB表达升高。结论:慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF的mRNA表达降低,具有疏肝作用的方剂四逆散和逍遥散可以对抗这种降低,而健脾方剂四君子汤无明显效应。     

气味对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的:探讨不同气味(苹果、香水、樟脑)对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化的CREB(pCREB)的影响。方法:让小鼠在不同气味的环境下生活14d,在第7d开始方形水迷宫训练,3d后进行测试,连续测试5d。测试完后断髓处死动物,取出脑组织,用免疫组织化学染色观察海马pCREB和CREB表达情况,并进行图像分析。结果:樟脑组和香水组水迷宫的潜伏期较对照组延长,错误次数增多(P＜0.05)。免疫组化染色显示鼠海马CREB的磷酸化水平大大降低(P＜0.05),但对CREB的表达无明显影响。苹果组与对照组比各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:樟脑气味和香水气味对小鼠记忆能力有负面作用,且这种作用可能是通过降低CREB磷酸化水平而实现的。苹果气味对小鼠记忆能力无明显影响。     

活化蛋白-1和cAMP反应元件结合蛋白在脂多糖注射大鼠肺组织中的变化及地塞米松的影响

目的：探讨活化蛋白-1(AP-1)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在急性肺损伤(ALI)发生发展中的可能作用，以及地塞米松的抗炎作用机制。方法： 采用脂多糖（LPS）5 mg/kg颈静脉注射复制ALI大鼠模型，用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)观察ALI大鼠肺组织AP-1和CREB的改变和地塞米松的影响。结果： ALI大鼠肺组织AP-1的DNA结合活性在2 h达到峰值，12 h后接近正常水平。CREB的活性在1 h即到达峰值，但直到12 h并未完全达到正常水平。地塞米松对AP-1和CREB的DNA结合活性均有显著抑制作用。 结论： AP-1和CREB可能在大鼠的急性肺损伤的发生中发挥重要作用，在转录水平的调节可能是糖皮质激素发挥抗炎作用的重要机制之一。     

Activation of the spinal extracellular signal-regulated kinase 5 signaling pathway contributes to morphine physical dependence in rats

The activation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) has been observed in synaptic plasticity processes of learning and memory in morphine dependence. However, the role of extracellular signal-regulated protein kinase 5 (ERK5), a member of MAPKs, has not been studied yet in morphine dependence. To identify the function of ERK5 in the formation and development of morphine physical dependence, morphine withdrawal-like behavioral test and western blot technique were used in this research. Morphine was subcutaneously injected by an intermittent and escalating procedure to induce physical dependence, which was measured by withdrawal symptoms. In this study, spinal ERK5 signaling pathway was remarkably activated by chronic morphine injection and naloxone-precipitated withdrawal. Intrathecal injection of BIX02188, a novel specific inhibitor of mitogen-activated protein kinases kinase 5 (MEK5), produced a dose- and time-dependent inhibition of the activation of spinal ERK5, without affecting activation of other MAPKs. Moreover, selective attenuation of spinal p-ERK5 expression by BIX02188 could significantly relieve morphine withdrawal symptom, accompanying with the decreased phosphorylation of cAMP response-element binding protein (CREB) in the spinal cord. These findings suggested that activation of the ERK5 signaling pathway might contribute to morphine physical dependence and its specific pharmacological inhibitor BIX02188 could be a potential therapeutic choice for alleviation of morphine withdrawal symptoms in the future.     

转录因子环腺苷酸反应元件结合蛋白介导的细胞凋亡及其调控机制

细胞凋亡是一个精细而复杂的过程,需要一系列的蛋白参与.其中环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)作为一个核转录因子,通过自身磷酸化实现调节转录功能,改变细胞内的信号转导途径,从而调控细胞凋亡过程.我们结合研究结果对CREB介导的细胞凋亡及其调控机制作一综述.     

学习记忆过程中p-CREB在大鼠丘脑前核内的表达

目的探讨在学习记忆过程中磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在大鼠丘脑前核的表达情况,以进一步阐明磷酸化的CREB(p-CREB)与学习记忆的关系。方法选择形态相近成年雄性Wistar大鼠20只,简单随机法分为实验组(水迷宫训练)与对照组(游泳),每组10只。大鼠训练完毕后2 h内直接灌注取脑,免疫组织化学分析大鼠丘脑前核组织内p-CREB含量变化,观察不同丘脑前核部位实验组与对照组染色有无差别。结果水迷宫训练后实验组大鼠丘脑前核组织内即有明显的p-CREB阳性表达,而对照组均无明显p-CREB阳性表达(0.05)。实验组丘脑前背侧核与丘脑前腹侧核比较,两者间p-CREB阳性表达无明显差异(0.05)。结论丘脑前核内p-CREB可能参与学习记忆的信号转导过程。     

CGRP对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的上调作用

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB（p-CREB）表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型，应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组大鼠顶叶皮质CREB表达少于假手术组，CGRP组大鼠顶叶皮质CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。假手术组右侧顶叶皮质p-CREB表达很少，缺血再灌注组顶叶皮质p-CREB表达多于假手术组，CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠右侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达，CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。