红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经生长相关蛋白的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注损伤(I/R)后神经生长蛋白(GAP-43)表达的影响。并探讨其可能的机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组和红景天苷组,采用线栓法制造大鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)模型,MCAO2h后恢复再灌注。用免疫组化方法检测再灌注后1d、3d、7d、14d、21d的与个时间点GAP-43的表达。结果红景天苷明显减小梗死灶范围,梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻。假手术组中枢神经系统GAP-43表达较少,I/R组GAP-43阳性表达,在术后1d开始增高,3d表达最强,高水平维持到7d,14d明显降低,但未降至正常水平。红景天苷组各个时间点GAP-43阳性表达强度均显著高于I/R对照组(P<0.05)。结论红景天苷能提高脑缺血/再灌注后GAP-43的表达,促进轴突生长,易化脑缺血再灌注损伤后神经可塑性。     

尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的:研究尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用。方法:在大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO)前30min给予腹腔注射尼古丁酒石酸盐溶液,观察局灶性脑缺血2h再灌注24h后,大鼠神经行为学评分及脑梗死容积的变化。结果:再灌注24h后,与单纯缺血再灌注组相比,给予尼古丁酒石酸盐溶液注射可以改善动物的神经行为学评分、减少脑梗死容积百分比(P0.05)。结论:尼古丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用。     

MK-801的浓度与局灶性脑缺血大鼠内源性神经干细胞增殖的关系

目的 研究兴奋性氨基酸（NMDA）受体拮抗剂MK-801的浓度与局灶性脑缺血大鼠神经干细胞增殖的关系。方法 将60只大鼠随机分为正常对照组（6只）、假手术对照组（6只）、手术对照组（12只）和MK-801不同荆量组（0．2mg／kg、0．4mg／kg、0．6mg／kg、0．8mg／kg、1．0mg／kg、1．2mg／kg）（36只）。除正常对照组外，其它组均需制作大鼠大脑中动脉缺血（middle cerebral artery occlusion，MCAO）动物模型，在模型制作前30分钟按照不同剂量组腹腔注射MK一801，假手术组和手术对照组腹腔注射等量的生理盐水。在模型建立后第7天，通过免疫组化技术标记大鼠梗塞灶附近大脑皮质的Nestin阳性细胞数目。结果 MK-801浓度为0．4mg／kg时，可以明显抑制内源性神经干细胞的增殖，0．8mg／kg剂量以上有显著的抑制作用，并且随着浓度升高抑制作用呈递增趋势，在1．2mg／kg以上有明显的全身副作用。结论 NMDA受体拮抗剂MK-801在局灶性脑缺血后，对大鼠内源性神经干细胞的增殖有抑制作用，并且随浓度的增加抑制作用也随之加强。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马CHOP mRNA及蛋白表达的影响

探讨NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠海马神经元CHOPmRNA及蛋白表达的影响。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),应用原位杂交方法检测CHOPmRNA的表达;应用免疫组织化学SABC法检测CHOP蛋白表达;应用显微图像分析系统进行分析。结果显示:假手术组大鼠海马CHOPmRNA及蛋白表达极少;缺血组较假手术组CHOP表达mRNA和蛋白均显著增加(P<0.01),缺血再灌注3h后CHOPmRNA表达明显增加,24h达高峰,48h开始显著下降,72h接近对照组水平,CHOP蛋白在缺血再灌注12h时明显表达增高,24h达到高峰,72h显著下降,但仍高于对照组水平(P<0.01);在缺血再灌注12、24、48h,NGF组CHOPmRNA及蛋白表达明显低于缺血组(P<0.01)。本研究表明,外源性NGF能显著抑制局灶性脑缺血再灌注后CHOPmRNA及蛋白表达,提示NGF可能对脑缺血再灌注损伤后的海马神经元有保护作用。     

当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经元的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后当归补血汤对大脑皮质神经元的保护作用。方法雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞再灌注组、生理盐水对照组、当归补血汤治疗组。治疗组术前连续6d灌胃,每日2次(早、晚各1次),术后4h再灌胃2次,每次2.5ml,次日取材。观察各组大鼠神经行为学缺陷;脑梗死体积和梗死率变化;血脑屏障通透性变化;大脑皮质神经元的形态和数量;大脑皮质神经元p53和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况以及大脑皮质凋亡神经元的形态和数量。结果与缺血再灌注组、生理盐水对照组比较,当归补血汤治疗组2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色显示大脑皮质梗死区体积减少(P0.05);荧光显微镜观察脑组织中伊文斯蓝的含量减少(P0.05),Nissl染色显示大脑皮质神经元数量增加(P0.05);免疫组织化学方法显示大脑皮质神经元Caspase-3、p53的阳性细胞数减少(P0.05);TUNEL染色法显示大脑皮质神经元凋亡细胞减少(P0.05)。结论当归补血汤治疗组能减少大脑皮质神经元的死亡,这与其减少大脑皮质神经元Caspase-3、p53的表达,并通过减少细胞凋亡起保护作用有关。     

高迁移率族蛋白B1在肾脏冷缺血再灌注损伤中的作用

背景：缺血再灌注损伤是临床器官移植不可避免的病理生理过程,冷缺血再灌注损伤具有研究肾移植更强的针对性。 目的：观察高迁移率族蛋白B1在大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤中的作用。 方法：将SD大鼠随机分为假手术组、冷缺血再灌注组、丙酮酸乙酯(可显著抑制高迁移率族蛋白B1的合成与释放)治疗组。冷缺血再灌注组和丙酮酸乙酯治疗组制冷缺血再灌注模型前分别经阴茎背静脉注射林格液与丙酮酸乙酯,假手术组将腹腔打开后经阴茎背静脉注射林格液,45 min后关闭腹腔。 结果与结论：冷缺血再灌注组和丙酮酸乙酯治疗组各时间点肌酐、高迁移率族蛋白B1、肿瘤坏死因子α、核因子κB水平均显著高于假手术组(P < 0.01),其中冷缺血再灌注组上述指标高于丙酮酸乙酯治疗组(P < 0.01)。表明高迁移率族蛋白参与了肾移植冷缺血再灌注的病理过程,丙酮酸乙酯能够减轻肾脏冷缺血再灌注损伤。     

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质胶质瘢痕形成的影响

目的 观察电针对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)大鼠大脑皮质胶质瘢痕形成的影响。方法 采用线栓法构建局灶性脑缺血/再灌注模型,选取“百会”穴(GV 20)及左侧“四关”穴(合谷LI 4/太冲LR 3)为电针穴位。78只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血/再灌注(I/R)组、局灶性脑缺血/再灌注+电针(I/R+EA)组。再灌注后7 d,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估神经功能缺损情况,HE染色观察缺血侧大脑皮质损伤情况,免疫荧光标记缺血侧大脑皮质胶质纤维酸性蛋白(GFAP)⁺/神经蛋白聚糖(neurocan)⁺、GFAP⁺/磷酸肌酸蛋白聚糖(phosphacan)⁺细胞,分析各组GFAP、neurocan及phosphacan平均免疫荧光强度。采用Real-time PCR分析各组缺血侧大脑皮质GFAP、neurocan及phosphacan mRNA含量。结果 与I/R组相比,I/R+EA组大鼠mNSS评分明显降低(P<0.01),脑组织损伤程度明显减轻。Sham组G...     

糖尿病大鼠 局灶脑缺血／再灌注损伤与脑组织TGF—β1mRNA表达

目的：观察糖尿病和对照组鼠脑缺血/再灌注损伤与转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达的异质性。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测大鼠中脑动脉阻塞（MCAO）后脑内TGF-β1mRNA表达水平,并且应用组织病理进行损伤程度评定。结果：糖尿病组大鼠脑缺血及缺血/再灌损伤程度明显重于“相应对照组”。糖尿病及对照组大鼠在MCAO2h时TGF-β1mRNA表达量明显增高,后者增高比前者更为明显。再灌24h后TGF-β1mRNA表达量下降,但仍高于假手术组。结论：糖尿病加重缺血/再灌性脑损伤;MCAO后TGF-β1mRNA表达增高可能有是机体一种抗损伤反应,糖尿病组抗损伤反应下降。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质IL-1β表达的调控作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响.方法:线栓法制作大鼠局灶性腩缺血再灌注模型,应用免疫组织化学显色、免疫印迹分析方法,结合图像分析技术检测大鼠缺血侧顶叶皮质 IL-1β蛋白表达变化.结果:假手术组大鼠顶叶皮质IL-1β没有表达,缺血再灌注组顶叶皮质IL-1β蛋白在各时间点明显表达,IL-1β蛋白阳性产物的光密度值高于假手术组;NGF组IL-1β蛋白阳性产物的光密度值低于缺血冉灌注组.结论:脑缺血再灌注损伤后诱导 IL-1β蛋白表达,NGF 明显降低缺血再灌注大鼠顶叶皮质IL-1β蛋白表达,这可能是 NGF发挥神经保护作用的分子机制之一.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注病灶及周围区PAI-1表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后病灶及周围区Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达与脑微血管结构改变的关系。方法:采用光镜、电镜、免疫组织化学、Westernblot等技术,观察大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时期病灶及周围区脑微血管结构改变及PAI-1表达。结果:大鼠局灶性脑缺血再灌注6h、3d组病灶及周围区脑微血管外间隙水肿及出血,脑微血管基底膜大量破坏,同时再灌注6h、1d组PAI-1表达低于正常对照组,密度值分别为0.16±0.43和0.33±0.61,与对照组(2.19±1.03)差异显著(P＜0.05)。再灌注后期7d组、14d组脑微血管内皮细胞增生,同时PAI-1表达增加,密度值分别为9.48±1.76和8.61±1.35,明显高于对照组(P＜0.01)。结论:大鼠局灶性脑缺血再灌注病灶及周围区脑水肿及出血以6h至3d最严重。PAI-1表达降低可能是导致脑微血管基底膜破坏的原因之一。再灌注后期PAI-1表达增加可能参与脑微血管的再生。     

动员造血干细胞对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织C-FOS mRNA表达的影响

目的探讨应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体造血干细胞(HSC)对大脑中动脉栓塞/再灌注大鼠(MCAO/R)脑组织C-FOSmRNA表达的影响。方法制作MCAO/R模型;免疫组化双标记法鉴定HSC向神经元样细胞分化;RT-PCR法检测C-FOSmRNA表达水平。结果模型 G-CSF组再灌注后24 h出现CD34/Brdu双标记,48 h时双标记最为显著;再灌注后48 h出现CD34/NSE双标记。模型组各时间点C-FOSmRNA表达显著高于假手术组;G-CSF致再灌注48 h后C-FOSmRNA表达显著下调。结论应用G-GSF动员大鼠自体HSC可促进脑缺血再灌注损伤修复,调节C-FOSmRNA表达水平可能为其作用机制之一,而部分HSC来源的细胞分化为神经元样细胞可能参与缺血损伤修复过程。     

红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠突触超微结构的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注损伤后突触结构和数密度的变化。方法采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血(2h)/再灌注模型(I/R模型),于灌注后1d、3d、7d、14d时间点断头取脑,电镜观察突触结构和数密度的变化。结果I/R模型组数目减少,7d降至最低,14d突触数目回升;突触结构随再灌注时间延长损伤加重,14d有所恢复;红景天组突触损害程度减轻,突触数目增加(P<0.05),突触数密度恢复的时间提早至7d。结论红景天苷可以减轻脑缺血再灌注后突触的损伤,易化突触可塑性。     

银杏叶提取物对局灶性脑缺血再灌注不同时段的大鼠脑组织GFAP的影响

目的观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,EGB)对大鼠局灶性脑缺血再灌注梗死区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞脑缺血再灌注模型。观察再灌注1～4d里大鼠神经功能缺损程度并应用免疫组织化学法、Metamoph图像分析系统对结果进行分析。结果EGB药物组神经功能评分较缺血再灌组好(P<0.05),GFAP阳性细胞于脑缺血2h再灌注24h后即已出现,48、72、96h阳性细胞表达量增加,其中以72h为最多,EGB可抑制缺血后GFAP的表达(P<0.05)。结论局灶性脑缺血后可诱导脑组织GFAP表达增强,EGB可抑制脑缺血再灌注后星形胶质细胞GFAP的高表达,提示EGB对缺血诱导的星形胶质细胞活化具有抑制作用,可能对脑缺血损伤的恢复起重要作用。     

橄榄苦苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤和炎性反应的作用

目的:探讨橄榄苦苷(OE)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤和炎性反应的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、溶媒处理组(Vehicle组)和OE处理组(OE组)。用线栓法制作大脑中动脉脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型。TTC染色检测脑梗死体积,免疫组化法检测缺血侧大脑皮层髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达,Western Blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)及基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)的表达。结果:(1)Vehicle组大脑缺血侧有明显的梗死灶,而OE处理组脑梗死体积明显有所缩小(P0.01)。(2)Vehicle组MPO和TNF-α表达与Sham组相比显著提高(P0.01),而OE组两者的表达较Vehicle组明显降低(P0.01,P0.05)。(3)Western Blot显示:Vehicle组MMP2、MMP9的表达水平较Sham组显著提高,而OE处理下调两者表达(P0.01,P0.05)。结论:OE可能通过抑制炎性反应保护脑缺血再灌注损伤。     

机械牵张诱导THP-1细胞高迁移率族蛋白B1移位出核

目的: 探讨机械牵张对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在THP-1细胞内移位的影响。方法: 构建HMGB1－增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的真核表达载体。通过两步亚克隆的方法,将HMGB1和EGFP的编码序列以融合蛋白的形式克隆到pcDNA3-HA载体上,随后转染THP-1细胞并施加机械牵张应变,荧光显微镜观察HMGB1在细胞内的表达及移位情况。 结果: 重组质粒经酶切鉴定证明构建正确,并在THP-1细胞中大量表达。荧光显微镜观察发现,HMGB1-EGFP融合蛋白主要分布于细胞核,经机械牵张18 h,可见细胞中融合蛋白从细胞核移位到细胞质,在细胞浆中观察到明显的绿色荧光。 结论: 成功构建了HMGB1-EGFP融合蛋白,在THP-1细胞中观察到机械牵张可诱导HMGB1移位出核。     

开颅法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的改良研究

目的:改良传统的开颅造模法,建立一种稳定、可靠的大鼠脑缺血再灌注模型。方法:20只SD大鼠随机分为假手术与缺血再灌注组,每组10只,分别行假手术操作及改良模型制作。改良模型为,大鼠开颅后暴露左侧大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA),将直径0.12 mm的不锈钢丝放置于MCA下,近其主干,钢丝两端架于颞骨表面120 min,撤去钢丝即再灌注。假手术仅暴露MCA,不进行缺血及再灌注。大鼠再灌注24 h,通过神经功能缺失评分,TTC染色,神经元计数及病理形态学的方法对模型进行评价。结果:改良后的造模成功率为100%,梗死灶位于额、顶叶皮层,病理形态学表现为典型的缺血性改变,正常神经元数减少(P0.01)。神经功能缺失评分1.3±0.5,脑梗死体积比率为5.32%±1.28%,与假手术组相比均有统计学意义(P0.01)。结论:这一改良模型阻断及恢复MCA血流明确,梗死灶的大小、位置稳定,死亡率低,为脑缺血再灌注机制的研究及治疗方法的探讨提供了有益帮助。     

巴曲酶对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区的影响

目的 通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时段，巴曲酶对海马CAl神经元及星形胶质细胞数目、形态等方面的影响，从而探讨巴曲酶对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、不同再灌注时间段(3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d)的大鼠短暂局灶性脑缺血(transient focal cerebral isehemia)模型，随机设立巴曲酶组(Bat)、生理盐水对照组(N．S)、假手术组(sham-operated)，通过HE染色及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异核抗原(NeuN)的免疫组化染色，观测CAl区神经元和星形胶质细胞的形态、数目的动态变化。结果巴曲酶能显提高再灌注早期(6～24h)CAl区GFAP阳性细胞的数目，再灌注7d组存活锥体细胞的数量较盐水对照组有明显提高，提示局灶性脑缺血后早期反应性星形胶质细胞的增多对维持神经元的存活有积极意义，巴曲酶对短暂局灶性脑缺血再灌注引起的海马CAl区延迟性神经元坏死(DND)有一定的抑制作用。     

Distribution and in situ proliferation patterns of intravenously injected immortalized human neural stem-like cells in rats with focal cerebral ischemia

Neural stem cells are considered as a candidate for cell replacement therapy in various neurological diseases. To investigate whether human neural stem cells can migrate into the adult ischemic rat brain, we transplanted immortalized human neural ‘tem-like’ cells intravenously 24 h after focal cerebral ischemia. The intravenously injected human neural stem-like cells were found around the infarcted area, differentiated into neurons and astrocytes in the lesioned areas, and survive up to 56 days after transplantation. The number of the injected cells increased between 7 and 14 days after transplantation with incorporating BrdU. Our findings show that intravenously injected human neural stem-like cells may incorporate into the ischemic brain, and undergo proliferation responding to the endogenous mitotic signal during the acute period of focal ischemia.