TNF-α诱导连接蛋白重构在心肌梗死后室性心律失常发生中的作用

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠心肌梗死后连接蛋白(Cx)43重构调节作用及其对室性心律失常发生的影响。方法:采用液氮冷冻法建立大鼠心肌梗死模型。将60只雄性大鼠随机分为3组:心肌梗死组(MI组,20只)、TNF-α螯合剂组(rhTNFR:Fc组,20只)和假手术组(Sham组,20只)。在心肌梗死模型建立30d后,运用程序电刺激方法,观察室性心律失常的诱发情况,应用Western Blot检测TNF-α、Cx43磷酸化和非磷酸化的表达水平。采用激光共聚焦显微镜方法,观察TNF-α的表达、Cx43的分布情况。结果:与假手术组比较,MI组大鼠心肌组织TNF-α表达明显增加(P0.05);Cx43磷酸化水平显著降低(P0.05),而Cx43非磷酸化水平增加(P0.05),Cx43分布呈现不均一分布;该组室性心律失常的诱发率明显增高(P0.05)。与MI组比较,rhTNFR:Fc组大鼠心肌组织TNF-α表达显著减少(P0.05);Cx43磷酸化水平表达增加(P0.05),Cx43非磷酸化水平下降(P0.05),而Cx43不均一分布有所减轻;室性心律失常的诱发率亦明显下降(P0.05)。结论:心肌梗死发生后,TNF-α可以诱导Cx43表达和分布重构,其在心肌梗死后室性心律失常发生中可能发挥重要作用。     

Ghrelin对大鼠心肌梗死后电重构的影响

目的 观察Ghrelin对大鼠心肌梗死后电重构的作用.方法 将65只SD大鼠随机分成假手术组(n=15)和心肌梗死组(n=50).假手术组开胸后剪开心包腔,不结扎冠状动脉.心肌梗死组大鼠结扎冠状动脉前降支制作心肌梗死模型.存活7d的大鼠随机分成Ghrelin干预组(n=17)和梗死对照组(n=17).Ghrelin干预组按Ghrelin 100 μg/kg的剂量皮下注射,2次/d.梗死对照组和假手术组皮下注射等量生理盐水.28 d后采用程控刺激进行在体电生理测定,采用免疫组化方法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的分布,免疫印迹法检测Cx43蛋白表达,实时定量PCR法检测Cx43 mRNA表达.结果 与梗死对照组相比,Ghrelin能显著降低室性心动过速(室速)的诱发率(P＜0.05),心律失常评分也显著降低(P＜0.05).与假手术组相比,梗死心肌内Cx43表达显著降低(P＜0.05),Ghrelin干预使梗死周边心肌Cx43及其mRNA水平增加(P＜0.05).结论 Ghrelin能改善心肌梗死后大鼠心脏的电生理学特性,增加心肌Cx43的表达,防止室性心律失常的发生,可能对心血管系统具有保护作用.     

肿瘤坏死因子-α表达在大鼠心肌梗死后室性心律失常发生中的作用

目的:探讨大鼠心肌梗死(MI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达在室性心律失常发生中的作用。方法:采用液氮冷冻法建立大鼠MI模型。将60只雄性大鼠随机分为3组:MI组(20只)、假手术组(Sham组,20只)和TNF-α螯合剂组(rhTNFR:Fc组,20只)。在MI模型建立30d后,运用程序电刺激方法,观察诱发室性心律失常的发生情况,同时用Western Blot和激光共聚焦显微镜检测TNF-α蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,MI组大鼠心肌组织TNF-α表达显著增加(P0.05),室性心律失常诱发率亦明显增高(P0.05);与MI组比较,rhTNFR:Fc组TNF-α表达显著减少(P0.05),室性心律失常诱发率亦明显降低(P0.05)。结论:MI后大鼠心肌组织TNF-α表达明显增加,大量TNF-α表达与MI后室性心律失常的发生密切相关。     

美托洛尔对陈旧性心肌梗死大鼠心脏Cx43与p-Cx43表达的影响

目的探讨美托洛尔对陈旧性心肌梗死大鼠心脏缝隙连接蛋白(Cx)43与其磷酸化状态(p-Cx43)表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠80只,随机分为假手术组、心肌梗死组、实验1组和实验2组,每组20只。构建心肌梗死模型,实验1组和实验2组分别于建模成功24 h后以灌胃酒石酸美托洛尔10.0 mg/kg和15 mg/kg;假手术组和心肌梗死组灌胃等量蒸馏水,每天灌胃1次,连续30 d。实验结束后,检测心室颤动阈值;Western印迹检测心肌组织Cx43及p-Cx43蛋白表达水平。结果心肌梗死组、实验1组和实验2组大鼠心室颤动阈值均显著低于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心室颤动阈值均显著高于心肌梗死组(P0.05),且实验2组显著高于实验1组(P0.05)。心肌梗死组大鼠心肌组织p-Cx43和P-Cx43/Cx43显著低于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心肌组织p-Cx43和P-Cx43/Cx43显著高于假手术组(P0.05);实验1组和实验2组大鼠心肌组织p-Cx43和Cx43/p-Cx4均显著高于心肌梗死组(P0.05),且实验2组显著高于实验1组(P0.05)。各组大鼠心肌组织Cx43蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死后大鼠心肌组织Cx43去磷酸化,心室颤动阈值降低,应用美托洛尔可促进Cx43的磷酸化,从而逆转心电传导异常。     

交感神经刺激对大鼠缺血性室性心律失常的影响及其机制的探讨

目的 探讨大鼠急性心肌缺血时交感神经刺激对室性心律失常的影响及其潜在的机制.方法 结扎大鼠冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型后随机分组作为心肌缺血组(MI组,n=25)、缺血+交感神经刺激组(MI-SS组,n=25)、交感神经刺激+酚妥拉明+缺血组(MI-SS-Phen组,n=15)、交感神经刺激+普萘洛尔+缺血组(MI-SS-Prop组,n=15)和假手术组(SO组,n=20).心电图监测室性心律失常的发生.蛋白免疫印记法(Western blot)检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的磷酸化蛋白及总量表达变化.逆转录聚合酶链反应(PCR)分析Cx43 mRNA的表达变化.免疫荧光观察Cx43表达分布情况.结果 结扎冠状动脉30 min内MI、MI-SS和MI-SS-Phen组分别有1、3和2只大鼠死于心室颤动(室颤);MI-SS组室性心动过速(室速)/室颤发生率(80.0%,20/25)较MI组(52.0%,13/25)明显增加(P＜0.05);与MI-SS组相比,普萘洛尔明显阻断了交感神经刺激促室速/室颤发生的作用(13.3%,2/15,P＜0.05).冠状动脉结扎30 min后,MI组磷酸化Cx43的比例较SO组显著降低(P＜0.05),但其总量并未减少(P＞0.05).与MI组相比,MI-SS组磷酸化Cx43的比例明显增加(P＜0.05),同时其蛋白总量的表达显著降低(P＜0.05);普萘洛尔显著抑制了交感神经刺激导致的Cx43蛋白降解的作用,同时抑制了缺血引起的Cx43脱磷酸化(P＜0.05).MI和MI-SS组Cx43mRNA表达均较SO组显著减少(P＜0.05).免疫荧光结果 显示,与SO组相比,MI组Cx43由端-端连接转化为侧-侧连接,而MI-SS组Cx43分布明显紊乱,不能分辨出Cx43的分布模式.结论 交感神经刺激能够促进室性心律失常的发生,可能主要与β肾上腺素受体的激活从而促进了Cx43的降解有关.     

缝隙连接蛋白43在老年大鼠缺血性室性心律失常中的作用

目的 探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在老年大鼠心室肌中的表达及急性心肌缺血时迷走神经刺激对老年大鼠缺血性室性心律失常的影响.方法 结扎大鼠冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型,随机分为(1)成年组:假手术组(SO,n=10)、心肌缺血组(MI,n=15)、心肌缺血+迷走神经刺激组(MI-VNS,n=15)、心肌缺血+迷走神经刺激+阿托品(0.5 mg/kg)组(MI-VNS-Atr,n=13)和心肌缺血+迷走神经刺激+生胃酮(10 mg/kg)组(MI-VNS-CBX,n=11).(2)老年组:假手术组(SO,n=10)、心肌缺血组(MI,n=15)、心肌缺血+迷走神经刺激组(MI-VNS,n=15)、心肌缺血+迷走神经刺激+阿托品(0.5 mg/kg)组(M1-VNS-Atr,n=13)和心肌缺血+迷走神经刺激+生胃酮(10 mg/kg)组(MI-VNS-CBX,n=11).心电图监测室性心律失常的发生.Western blot分析Cx43蛋白表达变化.结果 结扎冠状动脉30 min内,老年MI组室性心动过速(室速)和心室颤动(室颤)发生率较成年MI组显著增加(P＜0.05);老年MI-VS组室速和室颤发生率与老年MI组相比差异无统计学意义(P＞0.05),但老年MI-VS组不可逆性室颤发生率较老年MI组明显减少(P＜0.05).冠状动脉结扎30 min后,缺血没有引起成年组和老年组的总Cx43含量改变(P＜0.05);但缺血引起成年组和老年组的非磷酸化Cx43含量明显增加,迷走神经刺激能够明显抑制成年组和老年组中缺血引起的Cx43脱磷酸化(P＜0.05);而阿托品和生胃酮明显阻断了迷走神经刺激抑制缺血引起的Cx43脱磷酸化的作用(P＜0.05).但实验发现老年SO组Cx43表达较成年SO组明显减少(P＜0.05).结论 老年大鼠缺血性室性心律失常发生率明显增加,而迷走神经刺激的抗缺血性室性心律失常的效应明显减弱,其机制可能与老年大鼠心室肌Cx43表达较成年大鼠明显减少有关.     

普伐他汀对心肌梗死大鼠缝隙连接及室性心律失常的影响

目的:探讨大鼠心肌梗死(MI)时普伐他汀对室性心律失常的影响及其潜在的机制。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支制备MI模型后随机分为假手术组(SO组,20只);MI组,25只;MI+普伐他汀组(MI-Pra组,25只),其中MI组和MI-Pra组分别用生理盐水和80mg/kg的普伐他汀喂养,每天2次,持续1周。给予程序性期前刺激诱发室性心律失常的发生,心电图监测室性心律失常。蛋白免疫印记法(Western blot)检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的磷酸化蛋白及总量表达变化。免疫荧光观察Cx43表达分布情况。结果:MI组室性心动过速(室速)/心室颤动(室颤)诱发率(80.0%,20/25)较SO组(5.0%,1/20)明显增加(P<0.05);与MI组相比,MI-Pra组明显减少了MI导致的室速/室颤的发生(13.3%,6/25,P<0.05)。MI组Cx43的表达较SO组显著降低(P<0.05);与MI组相比,MI-Pra组Cx43的表达显著增高。免疫荧光结果显示,与SO组相比,MI组Cx43由端-端连接转化为侧-侧连接;与MI组相比,MI-Pra组Cx43分布紊乱明显改善。结论:普伐他汀能够显著减少MI大鼠室性...     

益气活血药对心肌梗死大鼠心脏结构和Cx43表达的影响

目的探讨益气活血药对心肌梗死(myocardial infarction,MI)大鼠心脏结构及心肌电偶联的关键结构缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立MI模型,将30只MI大鼠随机分为模型组、益气活血组(参芍片0.25 g/kg联合复方丹参片0.75 g/kg)和倍他乐克组(12 mg/kg),每组10只,于造模成功后24 h开始灌胃,1次/日,连续4周。另设假手术组10只,给予等量去离子水灌胃。4周后取材进行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理,图像分析测量左室内径和心肌梗死百分比,免疫组织化学法检测心肌Cx43的表达。结果与假手术组比较,术后4周模型组大鼠左室内径明显增大,心肌Cx43表达的平均光密度值(average optical density,AOD)、阳性表达面积(Area)和积分光密度(integral optical density,IOD)明显降低(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组和倍他乐克组的左室内径和心肌梗死百分比均明显减少(P<0.05或P<0.01),在心肌Cx43的表达上,仅益气活血组心肌Cx43表达的AOD和IOD明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论益气活血治疗能减少MI大鼠左室内径和心肌梗死百分比,增加心肌Cx43表达强度和部分好转Cx43弥散表达状态,对MI后缺血心肌有保护作用,可能是稳定MI后心肌细胞间电偶联的机制之一。     

白藜芦醇对脑组织缺血再灌注大鼠肿瘤坏死因子-α、白介素-6、基质金属蛋白酶9及白介素-1β水平影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对脑组织缺血再灌注损伤的影响,以及其对炎症因子表达水平的影响。方法选取健康成年SPF级SD大鼠30只,体重200～220 g,按随机数表法分为三组:假手术组(Sham组)、脑组织缺血再灌注组(MI/R组)、脑组织缺血再灌注+白藜芦醇组(MI/R+Res组)。采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,建模前连续7 d予MI/R+Res组腹腔注射Res 30 mg/kg,余两组腹腔注射等剂量的0.9%氯化钠溶液。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测三组血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及白介素-1β(IL-1β)的水平;提取缺血脑组织,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测TNF-α、IL-6、MMP-9 mRNA的水平。结果与Sham组相比,MI/R组及MI/R+Res组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-9及IL-1β的水平明显增加(P 0.05);与MI/R组相比,MI/R+Res组TNF-α、IL-6、MMP-9及IL-1β的水平显著减少(P 0.05);与Sham组相比,MI/R组及MI/R+Res组缺血脑组织TNF-α、IL-6、MMP-9 mRNA的表达明显增加(P 0.05);与MI/R组相比,MI/R+Res组TNF-α、IL-6、MMP-9 mRNA的表达显著降低(P 0.05)。结论 Res可以降低脑组织缺血再灌注大鼠炎症因子的表达水平,减轻炎症反应。     

重组人促红细胞生成素对心肌梗死大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rh EPO)对心肌梗死(MI)大鼠心肌肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、MI组和rh EPO治疗组。用ELISA方法检测各组大鼠血清中TNF-α水平,RT-PCR方法检测梗死区及其周围心肌TNF-αm RNA表达变化。结果 MI组血清中TNF-α水平、梗死区及其周围心肌TNF-αm RNA表达显著高于Sham组(P<0.05);与MI组相比,rh EPO治疗组血清中TNF-α水平、梗死区及其周围心肌TNF-αm RNA表达明显降低(P<0.05)。结论 rh EPO可能通过下调TNF-α改善MI大鼠的心功能。