苦菜总黄酮对小鼠脑缺血缺氧保护作用的实验研究

目的研究苦菜总黄酮对小鼠脑缺血缺氧的保护作用。方法采用小鼠断头、结扎双侧颈总动脉等脑缺血缺氧模型,观察苦菜总黄酮对脑缺血缺氧小鼠存活时间、断头小鼠喘息时间及脑毛细血管通透的影响;TBA法、NBT法测定小鼠脑缺血缺氧后脑组织MDA含量和SOD活性。结果苦菜总黄酮能显著延长小鼠存活时间、喘息时间,能显著降低缺血缺氧小鼠脑毛细血管的通透性,能显著降低脑组织MDA含量,能显著提高脑组织SOD活性。结论苦菜总黄酮对小鼠脑缺血缺氧有显著的保护作用,其作用机制可能与提高SOD活性,降低MDA含量有关。     

鲁斯可皂苷元多克隆抗体的制备

目的：通过人工抗原的构建,制备针对鲁斯可皂苷元（ruscogenin,RUS）的特异性抗体,为建立鲁斯可皂苷元的免疫生物分析方法奠定基础。方法：将鲁斯可皂苷元衍生为带有两个-COOH臂的双丁二酸单酯衍生物（succinylated ruscogenin,RUS-2HS）并采用活泼酯法使其与牛血清白蛋白（BSA）相结合,成为全抗原（RUS-2HS-BSA）免疫新西兰兔,制备抗鲁斯可皂苷元的多克隆抗体,并用酶联免疫吸附测试对抗血清进行鉴定。以同样的蛋白质偶联方法制备鲁斯可皂苷元与卵清蛋白的结合物（RUS-2HS-OVA）作为包被抗原。结果：抗血清的效价为1∶25600,理想的包被抗原浓度为1.563μg·mL^-1,相应抗血清工作浓度为1∶8000。结论：运用活泼酯法可制备鲁斯可皂苷元的人工抗原,进一步免疫可获得抗鲁斯可皂苷元的特异性抗血清。     

以鲁斯可皂苷元为配基的亲和层析柱的制备及其在纯化抗体中的应用

目的:以鲁斯可皂苷元(ruscogenin,RUS)为配基制备亲和层析柱,并应用于免疫亲和纯化抗血清。方法:将鲁斯可皂苷元衍生为带有两个-COOH臂的丁二酸单酯衍生物(succinylatedruscogenin,RUS-2HS),与带有10碳原子链的琼脂糖凝胶EAHSepharose4B偶联,制成亲和层析柱;以制备的亲和层析柱纯化人工合成抗原RUS-2HS-BSA(牛血清白蛋白)免疫家兔产生的抗血清,得到特异性较高的抗体,并检测纯化抗体的纯度及特异性。结果:成功将RUS-2HS作为配体偶联至亲和介质上,偶联量为4.24mg.mL-1,偶联率为53.25%;竞争性抑制试验显示纯化抗体交叉反应率下降,特异性提高;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示单一蛋白质条带,其相对分子质量约为51.2kD。结论:建立了以小分子天然活性产物为配基制备亲和柱的方法,应用于抗血清的纯化,获得的特异性抗体为探索该类难检测的活性成分的药理作用机制提供新的技术手段。     

通窍活血汤对小鼠脑缺血缺氧保护作用的研究

目的：研究通窍活血汤对脑缺血缺氧小鼠的保护作用。方法：采用小鼠断头、结扎双侧颈总动脉等脑缺血缺氧模型，观察通窍活血汤对脑缺血缺氧小鼠存活时间、断头小鼠喘息时间及脑毛细血管通透性的影响。结果：通窍活血汤能显著延长双侧颈总动脉合并迷走神经结扎所致脑缺血缺氧小鼠的存活时间，并能延长断头小鼠的喘息时间；降低双侧颈总动脉结扎所致脑缺血缺氧小鼠脑毛细血管的通透性。结论：通窍活血汤对小鼠脑缺血缺氧有显著的保护作用。     

黄芪对脑缺血缺氧的保护作用机制

黄芪是临床常用的益气类中药之一,具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌之功效,常用于气虚乏力、中气下陷、气虚水肿等诸多病症的治疗。近年来黄芪越来越多地应用于新生儿脑缺氧性疾病、缺血性卒中等缺血缺氧性脑病的治疗,并取得了较好的临床疗效。为了解黄芪是通过哪些途径发挥脑保护作用,现就近期有关黄芪对脑缺血缺氧保护作用机制的相关研究阐述如下：     

蒺藜果总皂苷对大鼠实验性脑缺血的保护作用

目的：研究蒺藜果总皂苷对大鼠实验性脑缺血的保护作用。方法：采用结扎大鼠脑中动脉的方法制备脑缺血模型，测定脑含水量及血通透性，并观察脑缺血后血中内皮素含量，超氧化物歧化酶（SOD）、6-Keto-PGF1α和TXB2等指标。结果：蒺藜果总皂苷20，50，100mg/kg均能明显减轻脑含水量及血管通透性，降低脑缺血后大鼠血中内皮素含量，提高血中SOD活性，结论：蒺藜果总皂苷对实验性脑缺血有明显的保护作用。     

络泰粉针剂对脑缺血的保护作用

目的：研究络泰粉针剂对脑缺血的保护作用。方法：用结扎颈总动脉合并降压法制备脑缺血模型研究络泰粉针剂对动物脑缺血的影响。结果：络泰粉针剂（60mg/kg,120mg/kg）可使脑缺血大鼠的脑含水量、脑毛细血管通透性、脑组织缺血损伤程度下降;络泰粉针剂（120mg/kg）还能使小鼠耐缺氧能力明显提高。结论：络泰粉针剂对脑缺血有保护作用。     

脑脉舒宁对小鼠急性脑缺血保护作用的实验研究

目的：观察脑脉舒宁（NMS）对小鼠脑缺血损伤的保护作用。方法：采用小鼠双侧颈总动脉和迷走神经结扎法制作脑缺血模型并观察NMS对其的影响。结果；急性脑缺血时脑内丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）明显增加（P＜0．05），超氧化物歧化酶（SOD）减少，而NMS可明显增加SOD，降低MDA，NO（P＜0．05）。结论：NMS对小鼠急性脑缺血具有一定的保护作用。     

桔梗皂苷对乙醇诱导的小鼠急性肝毒性的保护作用

从桔梗PlatycodongrandiflorumA．DC．根部分离的皂苷成分（CKS）对化学物质诱导的肝毒性具保护作用,且在体内、外实验中均显示抗氧化作用。然而其生理功能和它对乙醇诱导的肝损伤的保护机制尚不清楚。研究了CKS对乙醇诱导的小鼠肝损伤的保护作用,并探讨其保肝作用机制。     

川芎嗪口服微乳对小鼠脑缺血再灌注保护作用研究

目的研究口服川芎嗪微乳对小鼠脑缺血再灌注保护作用。方法用小鼠双侧颈总动脉夹闭缺血再灌注模型,考察川芎嗪微乳对缺血再灌注后脑组织内NO、MDA、SOD的含量的影响。结果实验表明其能显著降低缺血再灌注后脑内NO、MDA的含量,提高SOD的活力。结论川芎嗪口服微乳对脑缺血再灌注有一定的保护作用。     

针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察针刺对大鼠大脑中动脉栓塞再灌注后的神经保护作用。方法 :将 3 0只大鼠随机分为正常组、模型组和针刺组。模型组和针刺组均用栓线插入大鼠大脑中动脉根部 ,2hr后抽出 ,使缺血组织再灌注 ,复制可逆性大脑中动脉栓塞 (rMCAo)模型 ,正常组和模型组不经任何治疗 ,针刺组分别在模型复制前 1hr、模型复制后 8hr和 1 6hr电针“水沟”、“太冲”、“曲池”、“足三里”、“丰隆”。观察神经行为症状 ,2 4hr后断颈处死大鼠 ,检测血液流变学指标 ,脑组织TTC染色后测量脑梗死及水肿体积 ,行病理组织学检查。结果 :神经行为学针刺组与模型组比较差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;脑梗死和脑水肿体积百分率针刺组明显低于模型组 (P <0 0 1 ) ;血液流变学中全血比粘度针刺组与模型组比较差异有显著性 (P <0 0 5) ,但血浆比粘度、红细胞压积无明显变化 (P>0 0 5) ;病理组织学观察表明 ,针刺对大鼠脑组织损伤有明显的保护作用。结论 :针刺对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用     

补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察补阳还五汤对脑缺血再灌注24h后大鼠行为动作评分、脑梗塞面积、脑梗塞率、脑含水量以及脑组织NO、NOS、MDA、SOD等影响。结果补阳还五汤可以明显改善大鼠因中动脉缺血所致的行为学障碍;明显缩小脑梗塞面积,降低梗塞率;降低脑组织含水量;同时可以降低脑内NO和NOS的含量,增加SOD含量。结论补阳还五汤对于中动脉阻断脑缺血中风模型大鼠有明显的改善作用。     

电针对大鼠脑缺血-再灌注损伤的防护

目的　观察电针治疗缺血性脑病的可能机制。方法　采用结扎大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血 -再灌注损伤模型 ,测定不同时间电针前后海马内 MDA含量和 SOD、GSH -Px活性并计数断头后大鼠喘息次数和持续时间。每日电针“百会”、“风池”、“大钟”及“足三里”穴 30 min共 14 d,取疏 -密波 ,频率 :2 -2 0 H z,强度 :2 .0 A。结果　电针能显著延长大鼠脑缺血 -再灌注后的存活时间 ;降低缺血 -再灌注后大鼠海马的 MDA含量 (d7:2 .5 7± 0 .62 nmol/mg,d14 :1.18± 0 .47nm ol/m g)及提高SOD(d7:5 .18± 1.82 u/m g,d14 :6.91± 2 .47u/mg)及 GSH-Px(d7:9.5 0± 1.0 9u/mg,d14 :11.65± 1.72 u/m g)的活性。结论　电针能提高大鼠抵抗脑缺血 -再灌注的损伤能力 ,其作用机制可能与电针提高动物体内氧化酶活性、抑制自由基生成有关     

芎冰微乳抗脑缺血再灌注损伤保护作用研究

目的探讨芎冰微乳对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型及小鼠双侧颈总动脉夹闭的脑缺血再灌注模型。观察芎冰微乳对脑组织含水量、大鼠脑梗死面积、脑组织中超氧化物歧化酶(MDA)、脂质过氧化物丙二醛(SOD)、一氧化氮(NO)含量变化的影响。结果与模型组相比,芎冰微乳组脑组织含水量、梗死面积显著减小,脑组织中MDA、NO的含量显著降低,SOD的活性显著提高,上述作用与尼莫地平对照组相似。结论芎冰微乳对大鼠、小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NO合成,提高SOD的活性,减少脂质过氧化作用有关。     

地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用及其机制

目的:探讨地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其初步机制。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.01 g·kg~(-1)),地黄饮子高、中、低剂量组(38.80,19.40,9.70 g·kg~(-1)),每组20只,连续给药28 d;术后第7,14,28天通过改良神经功能缺损评分(m NSS),第28天行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,苏木素-伊红(HE)染色观察地黄饮子的保护作用,应用免疫荧光技术观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)阳性细胞数(第28天)以分析神经干细胞(NSCs)增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达情况。结果:术后第7,14,28天地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组的m NSS明显低于同时间段的模型组(P0.05,P0.01);术后第28天地黄饮子高、中剂量组和尼莫地平组的脑梗死体积占脑组织体积的百分比均低于模型组(P0.01); HE染色显示地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组大鼠脑组织坏死和软化灶不明显,并可见神经元细胞和神经胶质细胞增生;术后第28天,上述3组SVZ的Brd U阳性细胞数显著高于模型组(P0.05,P0.01),地黄饮子高剂量组Brd U阳性细胞数高于尼莫地平组(P0.05);术后28 d地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组SVZ的Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达水平明显高于模型组(P0.05,P0.01);尼莫地平组Hes1 mRNA水平高于地黄饮子高、中、低剂量组(P0.05,P0.01)。结论:地黄饮子能改善MCAO大鼠模型的神经功能缺损,减小脑梗死体积,减轻脑组织病理改变,从而对脑缺血再灌注损伤大鼠起到保护作用,可能与激活Notch信号通路,上调Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达,从而促进NSCs增殖有关。     

阿魏酸钠对大鼠脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用及机制分析

目的:观察阿魏酸钠对大鼠脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:取SD雄性大鼠,建立大脑中动脉阻塞(MCAO)致脑缺血/再灌注损伤模型,造模成功的36只随机分成模型组,阿魏酸钠低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),并另取9只作为假手术组。采用神经功能评分法观察大鼠神经功能情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学形态变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清和脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6)含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺血周边区核转录因子-кB p65 (NF-κB p65)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分升高,神经元坏死,大量炎症细胞产生,血清和脑组织中TNF-a,IL~(-1)β,IL-6水平显著升高(P 0. 01),细胞核/细胞浆NF-κB p65蛋白表达比例显著升高(P 0. 01);与模型组比较,阿魏酸钠可明显降低脑损伤大鼠神经行为学评分(P 0. 05,P 0. 01),抑制神经元坏死,减少炎症细胞产生,并可明显降低血清和脑组织中TNF-a,IL~(-1)β,IL-6水平(P 0. 05,P 0. 01),抑制NF-κB p65由细胞质向细胞核转位(P 0. 05,P 0. 01),最终减轻缺血再灌注造成的神经细胞炎症损伤。结论:阿魏酸钠可通过抑制NF-κB p65核转位减轻缺血再灌注大鼠脑神经细胞炎症反应,维持脑部正常形态,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

地奥心血康对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的观察地奥心血康（DAXXK）对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用结扎大鼠双侧颈总动脉造成急性脑缺血模型,随后再灌注。将大鼠随机分为3组,即正常对照组、模型组（缺血再灌注组）、DAXXK组。以DAXXK 0．5％、0．2ml／10g连续灌胃7d,第8天除正常对照纽外,其余各组复制大鼠脑缺血再灌注模型,测定脑匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量和脑组织含水量。结果DAXXK组与模型组比较,脑匀浆SOD活性显著增高（P〈0．01）,MDA含量显著降低（P〈0．01）,脑组织含水量治疗组显著降低（P〈0．01）。结论DAXXK对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

三海龙胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察三海龙胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,脑缺血1.5 h后再灌注.造模成功的大鼠随机分为假手术组、模型组、三海龙胶囊组和尼莫地平片组.分别在缺血再灌注1、3、7d进行神经功能评分,“干-湿”法测定脑组织含水量,TTC染色观察脑梗死面积以及甲苯胺蓝法进行大脑皮层神经元尼氏体染色.结果 与模型组相比,口服三海龙胶囊能够显著改善大鼠受损的神经功能障碍（P＜0.05）,减少脑梗死面积（P＜0.05）,降低大脑组织含水量（P＜0.05）,阻止大脑皮层神经元中尼氏体的减少.结论 三海龙胶囊能够改善大鼠缺血再灌注损伤.     

通心络胶囊对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及作用机制

目的:研究通心络胶囊对脑缺血再灌注损伤的保护作用,并通过网络药理学探讨通心络胶囊治疗脑缺血的作用机制。方法:C57BL/6小鼠采用改良线栓法制作小鼠中动脉闭塞(MCAO)模型,分为假手术组、模型组、通心络低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg^-1,灌胃给药)、阿司匹林组(2.055 g·L^-1,腹腔注射),于小鼠脑缺血再灌注24,48,72 h参照Longa评分法对小鼠进行神经功能评分,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织病理学变化情况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定小鼠脑梗死面积。首先从BATMAN-TCM数据库中筛选通心络胶囊化学成分并分析作用靶点,然后分析靶点富集的信号通路,之后构建中药-活性成分-靶点网络,最后预测通心络胶囊治疗脑缺血的多维药理作用机制。结果:Longa评分法,HE染色和TTC染色法都提示通心络胶囊可改善脑缺血再灌注小鼠的脑损伤,并且通心络胶囊对脑损伤的改善程度随着通心络胶囊剂量升高而逐渐升高。在通心络胶囊所含12味中药中筛选得到132个有效活性成分及环磷酸腺苷(cAMP)依赖性蛋白激酶催化亚基(PRKACA),腺苷酸环化酶1(ADCY1),丝氨酸/苏氨酸激酶1(Akt1),多巴胺受体D2(DRD2),Discs大同源物4(DLG4)等240个交集靶点。基因本体(GO)富集于阳离子通道活性、离子门控通道活性、门控通道活性、神经递质受体活性、离子通道活性等。京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集于cAMP信号通路,钙信号通路,神经活性配体-受体相互作用,环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶G(PKG)信号通路、多巴胺能突触信号通路。结论:通心络胶囊可减轻脑缺血再灌注小鼠的脑损伤,其通过多靶点、多环节实现脑保护作用;网络药理学揭示了通心络胶囊治疗脑缺血的有效成分、靶点及通路,为通心络胶囊治疗脑缺血的作用机制提供理论支持。