乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的 进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者.包括112例HCC患者(HCC组),129例无症状携带者(ASC组),70例肝硬化患者(LC组)和90例慢性肝炎患者(CH组)进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测.结果 401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染,220例发生C型感染.HCC组中C型分布高于其他3个疾病组;C基因型感染者BCP变异多于B基因型;B基因型感染者PC变异多于C基因型;同时BCP变异发生率随着病程进展而递增:在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22.4%、35.0%、50.0%、74.1%.C1与C2亚型相比,C1有较高BCP变异阳性率,而C2有较高PC变异发生率.结论 BCP变异与肝病进程存在依从关系,因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义.     

乙型肝炎病毒基因分型与基因变异的临床相关性分析

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因分型与基因变异的关系.方法 采用基因测序法检测102例HBV感染者血清标本,用特异的引物对待检标本HBV P区进行全序列测定,对测序结果分析有无突变产生和基因分型.结果 102例HBV感染者标本中基因型分布比例:B基因型12例,阳性率为11.8％;C基因型89例,阳性率为87.3％;D基因型1例,阳性率为0.9％.P区基因序列突变结果显示,102例标本中发生突变的有84例,其中YIDD 50例,占59.5％;YVDD 24例,占28.6％;181V 9例,占10.7％;202G 1例,占1.2％.HBV B、C两基因型间HBV基因变异类型差异无统计学意义.结论 ①天津地区流行的HBV基因型主要是B型和C型,其中C型为优势基因型.②本地区HBV p区基因序列突变与基因分型无明显关系.     

南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点

目的探讨南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点.方法随机选择2004年3月～2005年3月南京地区HBV-DNA阳性（荧光PCR）的HBV感染者220例.采用多对型特异性引物PCR法检测HBV基因型,采用特异性引物PCR法检测HBV前C区1896变异株和野生株.结果 HBV感染者中基因型B 71例,基因型C 146例,基因型D 1例,B/C混合型1例,A/B混合型1例,未发现基因型A、E、F存在.有163例HBV感染者发生了前C区1896变异,变异株检出率（单纯变异株/混合变异株）为74.1%.基因型B 78.9%发生了前C区1896变异,基因型C有66.4%发生了C区1896变异,两组比较,差别有显著性意义 （χ2=4.56,P＜0.05）.结论南京地区存在HBV基因B、C、D及B＋C和 A＋B混合型,以B、C型为优势基因型,未发现A、F、E基因型;HBV基因型B前C区1896的变异率较HBV基因型C高.     

鲁南地区HBV基因型和HBV核心启动子双点突变与肝硬化、肝癌的关系

目的 研究鲁南地区肝细胞癌(HCC)、肝硬化(LC)患者与乙型肝炎病毒(HBV)基因型及基本C区启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异之间的关系,探讨其相关性.方法 按慢性HBV感染者111例的不同临床分型,对其中HCC、LC和慢性乙型肝炎(CHB)患者各37例,采用实时荧光定量PCR法及PCR微板核酸杂交ELLSA技术进行HBV基因定量、分型检测;采用HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异;对不同性别、年龄、病毒基因型分布、临床分型患者进行HBV基因分型、BCP区双突变,以及不同HBV基因型BCP双突变的比较.结果 在CHB、LC、HCC患者中,HBeAg阴性者分别为24.3％、75.7％和83.8％;HCC患者HBeAg阴性率较CHB患者明显升高(P＜0.05).男、女性别HBV均以C基因型占优势,分别为57.3％和54.5％,性别间无统计学差异(P＞0.05);年龄＜30岁组HBV以B基因型(40.3％)、C基因型(51.7％)占优势,≥30岁组以C基因型(67.2％)占优势,＜30岁组B基因型构成比高于≥30岁组(29.6％,P＜0.05);HCC、LC患者中HBV以C基因型为主,分别占73.0％和75.6％.BCP双突变率在HCC、LC分别为64.9％和56.8％;HBV C基因型多发生BCP双突变,占63.6％ (42/66).结论 鲁南地区HBV基因型以C型和B型为主,其中LC、HCC患者基因型以C型占优势,HCC患者BCP双突变率显著高于CHB患者,在慢性HBV感染者中HBV C基因型多发生BCP双突变.     

荧光PCR法检测HBV感染者HBV基因型及其临床应用

目的:了解南通地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况及其临床特点.方法:选取本地区HBV感染者共125例,其中无症状携带者(ASC)31例,慢性乙型肝炎(CHB)46例,乙型肝炎肝硬化(LC)23例,原发性肝细胞癌(HCC)25例.应用实时PCR技术对患者进行血清HBV基因分型测定,FAM波长检测B型HBV,JOE或HEX波长检测C型HBV;部分结果进行基因测序验证;以3例非乙型肝炎患者为对照.结果:3例非乙型肝炎患者HBVM、HBV-DNA、HBV B、C基因均阴性.6例患者双份标本荧光PCR法、基因测序检测HBV基因型结果完全一致均为HBV C型.125例HBV感染者中HBV-DNA阳性的104例标本HBV基因型显示:B基因型25例(24.0%),C基因型74例(71.2%),B+C混合基因型5例(4.8%),未检出非B非C型;其中ASC组HBV-DNA定量阳性患者中以B型为主90%(9/10);而其余3组感染者中以C型基因居多:CHB患者中C型为80.43%(37/46),LC患者中C型为69.57%(16/23),HCC患者中C型为80%(20/25).结论:荧光PCR法可特异性检测HBV基因型;南通地区HBV基因型主要以C型为主,其次为B型和少量B+C混合基因型.HBV基因C型与B型各有显著的临床特点,可为临床诊断及指导临床抗病毒治疗药物选择提供依据.     

阿德福韦酯耐药株感染者乙型肝炎病毒基因型和多聚酶区基因变异分析

目的了解阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型、多聚酶区基因变异位点和变异类型,并分析HBV基因型和多聚酶区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测73例阿德福韦酯耐药患者HBV基因型、多聚酶基因区变异位点、病毒载量。结果 73例阿德福韦酯耐药株感染者中,HBV B基因型占35.6%,C型占64.4%;HBV多聚酶基因区基因突变位点主要以rtA181V/T(39.8%)、rtN236T(31.5%)为多见,rtA181V/T+rtN236T(20.5%),其他(8.2%);其中rtA181V/T位点变异中B型占10.3%,C型占89.7%;rtN236T位点变异中B型占78.3%,C型占21.7%。rtA181V/T+rtN236T位点变异B型占26.7%,C型占73.3%;基因型B和C的病毒载量分别为(6.38±1.24)lg和(6.27±1.10)lg拷贝/毫升。结论阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型;HBV多聚酶区基因突变位点主要为rtA181V/T和rtN236T,基因型与多聚酶区基因突变位点之间有一定相关性。C基因型易发生rtA181V/T变异,B基因型多出现rtN236T变异。C基因型比B基因型更易出现rtA181V/T+rtN236T双突变,可能与C基因型容易导致的严重的肝脏疾病有关,基因型与病毒载量之间无相关性。     

阿德福韦酯耐药患者HBV基因型的相关分析

目的探讨慢性乙型肝炎、肝硬化患者阿德福韦酯治疗过程中出现耐药变异与HBV基因型的关系,为优化临床抗病毒治疗提供依据。方法对近年来山西地区122例慢性乙型肝炎、肝硬化患者阿德福韦酯抗病毒治疗过程中出现病毒学反弹患者,采用巢式PCR法检测血清HBV基因型;采用巢式PCR-DNA测序法检测患者血清标本HBVDNA位点,观察是否存在rtA181V/rtN236T变异,并分析其与基因型的关系。结果 122例患者中B基因型7例占5.74%;C基因型115例,占94.26%;在性别上,B、C基因型差异均无显著性意义（P〉0.05）;C型肝硬化率明显高于B基因型（P〈0.05）;均发生了rtA181V和/或rtN236T位点变异。结论 C基因型可能与阿德福韦酯耐药变异及肝硬化关系密切。     

乙型肝炎病毒P区耐药突变与基因型及临床相关性分析

目的探讨HBV的P基因耐药突变的分布特征以及与基因型、临床的相关性。方法对慢性乙肝患者的血液样本进行P基因核苷类似物作用靶区进行聚合酶链反应,扩增产物进行测序,比较序列差异性,同时对其进行基因分型检测。结果 79例乙型肝炎患者共检测出B基因型61例（79.2%）,C基因型18例（20.8%）。通过对HBV-DNA进行P区测序表明耐药突变以拉米夫定耐药为主,为27例（51.9%）;其中B基因型对拉米夫定和阿德福韦的耐药率分别为31.1%（19/61）和9.8%（7/61）,二者交叉耐药率为6.6%（4/61）;而C基因型对拉米夫定和阿德福韦的耐药率分别为44.4%（8/18）和22.2%（4/18）,二者交叉耐药率为16.7%（3/18）,明显高于B型基因（P〈0.05）。慢性肝炎患者中,B型显著多于C型,为89.4%（59/66）;肝癌、肝硬化等重症中,B型感染者则明显少于C型感染者,为15.4%（2/13）（P〈0.05）。结论 79例患者HBV基因型以B型为主,C型次之,耐药突变主要以拉米夫定耐药为主,临床与基因型及耐药突变有显著性关联。     

HBV基因型与HBx基因变异的研究

目的 分析慢性HBV感染者血清中HBV基因型和HBx基因多态性,探讨HBx基因变异与HBV基因型的关系.方法 采用型特异性引物PCR法对110份慢性HBV感染者血清中HBV基因型进行检测.采用巢式PCR、单链构象多态性与异源双链分析、以及基因测序和生物信息学方法分析HBx基因突变.结果 在110份慢性HBV感染者血清中,检出B型、C型和混合型B+C,分别占57份(56.8%)、49份(44.6%)和4份(3.6%).与参考序列相比,B型与C型HBx基因都存在点突变,且C型点突变数明显多于B型(t:-12.599.P<0.05).结论 慢性HBV感染者HBx基因突变与HBV基因型密切相关.     

HBV C基因启动子变异及基因型与肝硬化及原发性肝癌的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒C基因启动子(CP)和前C区基因变异及HBV基因型与肝硬化及原发性肝癌(HCC)的关系.方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH),39例活动性肝硬化(LC),34例HCC患者血清HBV S基因序列,确定其基因型,测定HBV CP和前C区序列,确定其变异状况.结果 HCC、LC患者CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)发生率(82.4%、71.8%)显著高于CH患者(45.5%)(P＜0.01、P＜0.01);HCC、LC患者C基因型检出率(70.6%、69.2%)显著高于CH患者(43.2%)(P值均＜0.05).结论 乙型肝炎病毒CP双变异、C基因型与HCC、LC密切相关.     

长春地区乙型肝炎病毒基因分型

目的：探讨长春地区慢性乙型肝病患者中乙型肝炎病毒（HBV）基因型特点。方法：慢性乙型肝病患者血清中提取HBV DNA,经巢式聚合酶链法(nested-PCR )扩增HBV S基因区片断,利用双脱氧链末端终止法检测HBV S区核苷酸序列并进行基因型分析。结果：39株HBV中C基因型23株,其中16株为C基因型adr亚型,7株为C基因型adw亚型;16株为B基因型adw亚型; 未发现ayr及ayw型;有2株存在“a”决定簇变异;与参照序列比较,S基因存在多处点突变,部分 点突变导致所编码的氨基酸变异;同以往研究的结果类似,未发现癌特异性的HBV S基因变异。结论：研究对象中HBV存在C基因型和B基因型, C基因型为主要基因型;HBV相关性慢性肝病患者中HBV S基因存在序列多态性。     

乙型肝炎病毒相关性原发性肝癌患者前-X基因的分子流行病学意义

目的:了解前-X基因在HBV相关HCC患者中的流行病学分布、前-X基因和HBV基因型与HCC的临床关系.方法:患有乙肝的肝细胞肝癌患者(HCC)35例,采用型特异性引物巢式聚合酶链反应进行基因分型.同时对明确基因分型的肝癌患者,扩增前-X区,TA克隆到PMD18-T载体后进行单克隆测序,分析前-X区在肝癌患者的表达情况,对前-X区和基因型及相关病情进行研究.结果:HCC患者35例中B基因型1例,C基因型24例,B/C混合基因型8例,未定型者2例.明确基因型的患者33例,进一步扩增前-X区,并经TA克隆获得93个单克隆株中,经测序表明,有65个单克隆株编码前-X多肽,占69.9%.HCC患者33例中有29例编码前-X多肽,编码率为87.9%,高于慢性乙型肝炎患者58.8%的编码率.C基因型前-X多肽编码率为91.6%,B/C混合型编码率为87.5%(P＞0.05),B基因型无编码.前-X区的表达与年龄,性别,家族史,AFP,HBV DNA,ALT水平间无关(P＞0.05).结论:HCC患者中C基因型、B/C混合基因型较为多见.前-X多肽在HCC患者中有较高的编码率,前-X区多肽可能和HCC之间有一定相关性.     

海南乙肝患者HBV基因型分布及临床指标的相关性

目的 研究海南地区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的基因型在乙肝携带者、肝硬化和肝癌患者中的分布状态,以及这些基因型与临床相关指标如肝功能转氨酶谱、腺苷脱氨酶（adenosine deaminase ,ADA）、α-L-岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase, AFU）、甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）之间的关系和临床意义。方法 利用巢式PCR方法对海南省第三人民医院163例就诊有HBV感染的携带者、肝硬化和肝癌临床患者的血清标本进行HBV DNA扩增,并用聚合酶链反应–限制性片段长度多态性法鉴定HBV基因型;同时收集患者的民族、临床资料和实验室检查结果等资料,利用SPSS统计软件进行t检验、卡方检验、Logistics回归分析等统计分析。结果 总共检测了207例乙型肝炎病毒感染患者的血清标本,其中44例未获得有效的基因型数据。在检测出具体基因型的163例HBV感染者中,HBV B基因型25例占15.3%,HBV C基因型132例占81.0%,HBV B/C混合型6例占3.7%。HBV基因型之间的患者年龄、性别、民族、疾病状态、乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性率、HBV DNA水平差异并无统计学意义。HBV C型感染者天冬氨酸转移酶（aspartic transferase,AST）水平高于HBV B型感染者。所有HBV C基因型患者中,肝硬化及肝癌患者占的比例最高。患者ADA数值与HBV基因型的状态有明显关联,ADA值升高的患者,感染HBV B型病毒的可能性增加（P=0.044）。结论 海南地区乙型肝炎患者HBV基因型以 C型为主,HBV C型感染者的肝脏功能更容易受损,ADA数值较低,临床上易向肝硬化及肝癌进展。     

江苏地区不同类型乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的:了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系.方法:采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测.结果:176例血清中,C型117人(66.5%),B, C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%).C型与B, C混合型在HBV DNA水平上存在统计学差异(P＜0.05),B, C混合型的HBV DNA水平明显高于C型.C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无统计学意义.结论:江苏地区HBV基因型以C型为主, B, C混合型次之,B型较少,D型,A型极少;B, C混合型患者的HBV DNA数量水平高于C型.     

多位点ARMS-PCR法进行HBVS区检测分型

目的：建立一种准确有效的PCR法HBV分型的实验方案。方法对80例包含了 HBV不同型别（B/C/D型）的血清样本进行了 HBV S区测序，通过分析国人 HBV B/C/D型S区碱基固有差异位点，设计得针对各种HBV 型别的高度特异性A RM S引物与探针，并用于另外120例HBV样本的PCR检测实验，同时进行测序进行检测准确度验证。结果多位点ARMS-PCR法与测序法的型别检出吻合率为99．5％，其中一例HBV B/C型混合感染由ARMS-PCR法检出并经追溯确认。结论经验证可见设计于S区型别固有差异位点之上的ARMS引物与探针于PCR检测中能以极高的特异性对 HBV 血清样本进分型，并能检出 HBV 混合型中的劣势病毒株。PCR法以其低成本、结果容易判定以及高灵敏度等优点，于临床HBV分型上是更为推荐的分子诊断学方法。     

不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型

目的 探讨不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型情况。方法 A组选择15个家系中54份HBV感染者血清,其中HBV携带者（ASC）30例,慢性乙型肝炎（CHB）7例,肝硬化（LC）13例,肝细胞癌（HCC）4例。B组选择非家族聚集性乙肝感染者60份血清,其中HBV携带者（ASC）36例,慢性乙型肝炎（CHB）10例,肝硬化（LC）9例,肝细胞癌（HCC）5例;应用HBV基因型特异性引物进行聚合酶链反应,经琼脂糖凝胶电泳分析其基因型并进行HBVDNA定量检测。结果 114份血清标本中109份HBVDNA阳性,A组有5份血清HBVDNA检测失败,余49份血清标本中,HBV基因型为C型46例,B/C混合型3例,未检测到其他基因型。B组60份血清标本中,HBV基因型为C型44例,B/C混合型5例,B型11例。两组相比在不同临床类型分布方面均无显著差异。但在肝硬化及肝细胞癌患者中,C型所占比例高,分别为80%和100%。结论 不良结局家族聚集性乙肝感染者,以C型为主,基因型与乙肝病情发展有一定关系。     

基因芯片法和测序法检测乙肝病毒基因分型的耐药突变比较

目的比较基因芯片法和测序法检测乙肝病毒基因分型及耐药突变基因的一致性。方法采用基因芯片法和测序法对120例慢性乙型肝炎患者血清标本(HBV-DNA1×103 IU/ml)进行检测,比较两种方法检测乙肝病毒基因分型和耐药突变基因的情况。结果 120例慢性乙型肝炎患者血清中,测序法检出B型52例(43.33%)、C型68例(56.67%);基因芯片法检出B型48例(40.00%)、C型64例(53.33%)、B+C混合型4例(3.33%),有4例未能分型(3.33%);测序有54例发生耐药位点突变,突变率为45.00%;基因芯片有58例发生耐药位点突变,检出率48.33%;以共有的耐药位点来统计,基因芯片法的变异检出数稍高于直接测序法,两种检测方法间差异无统计学意义。结论基因芯片法和测序法在同时进行乙肝病毒基因分型和耐药突交基因的检测中,可认为检测结果一致。     

乙型肝炎病毒基因型B/C型患者血清和肝细胞内HBsAg表达水平的差异

目的 了解HBV基因型（B和C）对血清及肝内HBsAg表达的影响。方法 选择在广州南方医院感染内科住院的76例慢性乙型肝炎患者,具有同期对应的血清和肝组织切片。用PCR-RFLP方法行HBV基因分型;Abbott Architect法定量检测血清HBsAg;采用单克隆抗体或多克隆抗体对肝脏组织内的HBsAg和HBcAg分别进行免疫组织化学染色,计数阳性细胞数。并对6例基因型B和8例基因型C患者血清HBV HBsAg部分区段DNA进行序列测定。结果 共检测到4种基因型：B（47例）、C（21例）、D（3例）和B／C混合（5例）。血清HBsAg水平在基因型B和C之间无区别,但HBV基因C型患者肝内HBsAg的表达高于B型（P〈0．01）。在HBV基因B型患者中,HBsAg阳性肝细胞分布多为单个或散在几个（22／47）,C型中则多为广泛分布（8／21）（P〈0．01）。在基因B型的患者中,血清HBsAg和血清HBVDNA（r=0．674,P=0．000）,核心抗原核内（r=0．534,P0．000）以及细胞质表达水平（r=0．405,P=0．004）呈正相关关系;在基因c型的患者中,血清HBsAg仅与血清HBV DNA正相关（r=0．503,P=0．017）。肝内HBsAg水平仅在基因B型患者中与肝细胞质内HBcAg的表达水平呈正相关关系（r=0．318,P=0．029）,与血清HBsAg、HBV DNA、核心抗原核内表达水平无相关。序列分析显示基因型B和C表面抗原前20个氨基酸序列存在明显差异。结论 基因C型患者肝组织中HBsAg表达水平高于B型;而基因B型的血清HBsAg水平和病毒复制水平相关性明显。