维生素A类对大鼠肝贮脂细胞3T3细胞增殖及前胶原Ⅲ表达的影响

目的 研究维生素类物质对离体培养的肝纤维化相关细胞增殖活性及前胶原ⅢmRNA表达的影响。 方法 不连续密度梯度离心法分离纯化大鼠肝贮脂细胞。~3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性,细胞原位杂交,检测细胞前胶原ⅢmRNA表达水平。 结果 10~(-5)mol/L及10~(-4)mol/L的视黄酸分别抑制3T3细胞及贮脂细胞增殖活性(P<0.05及P<0.01),10~(-5)mol/L视黄酸单细胞水平抑制3T3细胞前胶原ⅢmRNA表达。视黄酸棕榈酯对细胞增殖活性无明确作用。 结论 维生素A(视黄酸)对离体肝纤维化相关细胞具有一定抗纤维化效应。     

肝纤康对体外培养贮脂细胞增殖及胶原合成的影响

目的:在国内率先分离、培养肝硬化大鼠贮脂细胞,并用以研究中药抗肝纤维化的作用机理。方法:以~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)、~H-脯氨酸掺入量及掺入率测定方法,观察肝纤康对正常大鼠离体贮脂细胞和肝硬化大鼠离体贮脂细胞功能的影响。结果:该方能抑制贮脂细胞DNA及胶原合成,抑制程度随药物浓度的升高而增高。结论:肝纤康防治肝硬化的机制之一,可能在于该方抑制贮脂细胞增殖及胶原合成。     

IH764—3抗肝纤维化作用的实验研究

目的：研究IH764-3的抗肝纤维化作用，为临床应用提供实验依据。方法：①用四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型，观察IH764—3的防治作用；②分离、培养大鼠贮脂细胞，观察IH764—3对其增殖和胶原合成的影响。结果：①IH764-3可显著抑制大鼠肝纤维化程度,能明显降低肝脏羟脯氨酸和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA含量，降低血清透明质酸、层粘连蛋白水平，改善肝功能。组织学检查亦显示其具有抗肝纤维化作用；②IH764—3可显著抑制大鼠贮脂细胞增殖和胶原的合成，并呈时间、剂量依赖性关系。结论：IH764-3在体内外均具有抗肝纤维化作用，它对于防治肝纤维化可能具有临床应用前景。     

氧化苦参碱对大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的 研究氧化苦参碱对大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成的影响。为应用氧化苦参碱防治肝纤维化提供理论依据。方法 分离、培养大鼠贮脂细胞，采用甲基噻唑基四唑蓝（ＭＴＴ）法和＾３Ｈ－脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和交原合成。结果 氧化苦参碱在５ｕｇ～５００ｕｇ／ｍｌ浓度范围内能呈剂量依赖性抑制贮脂细胞的增殖和胶原合成，提高药物浓度则形成作用平台。结论 氧化苦参碱在体外具有抑制大鼠贮脂细胞增殖和胶原合成的作用。这对防治肝纤维化可能有一定的临床应用价值。     

复方红景天干预大鼠肝纤维化作用的实验研究

目的：从血清、组织、分子等水平探讨复方红景天抗大鼠肝纤维化的作用及其可能的机制，为抗肝纤维化研究提供新的选择。方法：用四氯化碳皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型，同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗，观察大鼠肝功能，血清纤维化相关酶活性ALT、AST、β-NAG、MAO，血清肝纤维化指标PCⅢ、CIV、HA以及肝组织羟脯氨酸含量和病理学变化，同时检测复方红景天对大鼠肝组织TGF β1、I型前胶原mRNA表达水平的影响。结果：口服复方红景天可改善大鼠肝功能，降低血清PCⅢ、CⅣ、HA水平，抑制β－NAG、MAO的活性，降低肝组织羟脯氨酸含量，明显改善大鼠肝组织病理变化，并降低大鼠肝组织TGFβ、I型前胶原mRNA的表达水平。结论：复方红景天可能通过抑制TGF β1、I型前胶原mRNA的表达从而减少胶原合成、保护肝细胞等机制有效干预CC14诱导的大鼠肝纤维化，值得深入研究。     

甘草酸减少鼠肝纤维化Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达和胶原沉积

目的:观察甘草酸对鼠肝纤维化时Ito。细胞增殖和IⅢ型前胶原mRNA表达和肝脏胶原沉积的影响。方法:以CCl_4复制肝纤维化模型,动物分组为止常对照组,模型对照组及甘草酸治疗组三个大组,各组又包括早(2周),中(6周)。晚(9周)期组,分别于用药后第2、6、9周处死动物,分离提取肝Ito细胞,培养两周后提取总RNA,以DIG High-Prlmer去标记IⅢ型前胶析和间质胶原酶cDNA探针,Northern杂交分析IⅢ型前胶原和间质胶原酶mRNA表达.鼠肝IⅢ型胶原沉积用Dot blot测定,用~3H-TDR~3H-脯氨酸观察甘草酸对培养的Ito细胞增殖和胶原合成的影响 结果,甘草酸对Ito细胞H-TDR和H-脯氨酸的掺入在4h、24h、48h与空白对照比呈明显抑制作用(P<0.05),其抑制率分别为15％、21％、31％,在甘草酸浓度≤0.125μg/ml时,对Ito细胞~3H-TDR掺入抑制不明显,而≥0.25μg/ml时呈现明显抑制作用(P<0.05),对H脯氨酸掺入,在甘草酸浓度≥0.125μg/ml时,则出现明显抑制作用(P<0.05),且随浓度增加而抑制作用加强。在鼠肝纤维化早、中、晚各期,模型对照组Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达均高于正常对照组(P<0.05),甘草酸组各期Ito细胞IⅢ型前胶原mRNA表达与模型对照组比均显著降低(P<0.05).Ito细胞间质胶原酶mRNA表达.在早、中期模型对照组均高于正常对照组(P<0.05     

牛磺酸抑制实验性肝纤维化大鼠细胞外基质沉积

目的研究牛磺酸抗肝纤维化作用。大法用四氯化碳（ＣＣＩ４）制备肝纤维化模型;免疫组化检测肝Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原和透明质酸、层粘连素沉积;Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测肝Ⅰ、Ⅲ型前胶原、组织金属蛋白酶抑制因子－１（ＴＩＭＰ—１）ｍＲＮＡ含量。结果ＣＣＩ４肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原、透明质酸和层粘连素染色明显增多;Ⅰ、Ⅲ型前胶原、ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ显著增加。牛磺酸处理的大鼠,上述各指标的阳性染色明显减少,并可明显抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达,而对ＴＩＭＰ—１ｍＲＮＡ却无明显影响。结论牛磺酸对ＣＣＩ４诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,可明显抑制纤维生成与沉积。提示它对防治肝纤维化有一定的临床意义。     

汉防己甲素对大鼠肝细胞,贮脂细胞DNA及胶原合成的影响

以３Ｈ－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴｄＲ）、３Ｈ－脯氨酸掺入量及掺入抑制率测定的方法，观察汉防己甲素对离体大鼠肝细胞、贮脂细胞ＤＮＡ及胶原合成的影响。结果表明，在１０～５０ｕｇ／ｍｌ浓度范围的汉防己甲素能明显抑制细胞内ＤＮＡ及胶原合成，抑制程度与浓度、作用时间均呈正相关。结果提示，汉防己甲素抗肝纤维化作用的机制之一是抑制肝内贮脂细胞、肝细胞增殖及合成胶原。     

三氟拉嗪对贮脂细胞增殖及胶原合成的影晌

目的:探讨三氟拉嗪抗肝纤维化作用的机制。方法:采用链酶蛋白酶、胶原酶及密度梯度离心,分离大鼠肝脏贮脂细胞,用MTT方法及~3H-脯氨酸掺入方法,观察了三氟拉嗪对贮脂细胞增殖的调控。结果:低浓度三氟拉嗪的抑制作用不明显(P>0.05),当药物浓度上升为10～20μmol/L~(-1)时,抑制作用增强,呈明显药物浓度依赖关系。结论:三氟拉嗪可通过抑制贮脂细胞的增殖及胶原合成,而达到抗肝纤维化的作用。     

肝脏细胞胶原合成及其Ⅰ型胶原mRNA的稳定性

目的:为了明确贮脂细胞(Fat Storing Cell,FSC)和肝细胞(Hepatocyte,HC)在肝纤维化胶原合成中的作用.方法:本文在分离培养大鼠FSC和HC的基础上,用~3H-Proline掺入结合胶原酶消化法和定量斑点杂交法,分析了体外培养的FSC和HC胶原和非胶原蛋白的合成以及Ⅰ型前胶原mRNA的稳定性.结果:发现FSC合成胶原蛋白的能力较HC强,而非胶原蛋白则与此相反;FSC中Ⅰ型前胶原mRNA较HC中稳定,且半衰期较长.结论:FSC在ECM胶原合成中可能起主要作用,但HC的作用也不容忽视.