BRD4抑制剂JQ1联合醋酸甲羟孕酮对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1与醋酸甲羟孕酮(MPA)单独或联合作用对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:JQ1与MPA单独或联合作用于孕激素敏感的子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素不敏感的子宫内膜癌HEC-1A细胞。MTT法和流式细胞仪检测药物对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用和凋亡作用。Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、PARP、cleaved PARP及mTOR/Akt通路等相关蛋白的表达。利用siRNA沉默BRD4后,MTT法检测BRD4 siRNA与MPA联用对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用。结果:在孕激素敏感的Ishikawa细胞中,与对照组比较,JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中JQ1+MPA组的细胞增殖率最低,析因分析提示JQ1与MPA有交互作用(P<0.05);JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞凋亡率显著增加(P均<0.05),凋亡相关蛋白变化明显,其中JQ1+MPA组的细胞凋亡率增加最为显著(P<0.05),凋亡相关蛋白变化最大。利用siRNA沉默BRD4后观察联合MPA的作用显示,与对照组比较,BRD4 siRNA组、MPA组、BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率最低。结论:BRD4抑制剂JQ1联合MPA对孕激素敏感的子宫内膜癌细胞有较好的增殖抑制及凋亡作用,其可能机制与抑制mTOR/AKT通路有关。     

醋酸甲羟孕酮增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞抗癌作用的研究

目的:观察醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢癌CoC1/cDDP细胞移植瘤的生长抑制作用及对DDP的耐药逆转作用,并分析其作用机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组5只。(1)对照组:腹腔注射等体积生理盐水;(2)DDP治疗组:每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg。(3)MPA治疗组:每只每次灌胃30mg/kg;(4)联合治疗组:每只每次灌胃MPA 30mg/kg,1h后每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg,每隔2天给药1次,共4次,于治疗第1、5、10、15、20天分别测瘤体积,20天后处死裸鼠,完整剥出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率;通过流式细胞仪检测亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞鉴定细胞凋亡,分析移植瘤细胞周期;用半定量RT-PCR法检测移植细胞组织Survivin-ΔEx3、caspase-3、P21WAF1/CIP1及GST-π4基因mRNA表达。结果:(1)MPA组、MPA+DDP组治疗第10天起皮下移植瘤体积明显小于DDP组和对照组,且进行性缩小(P<0.01);抑瘤率分别为51.63%、62.21%,均明显大于DDP组的6.84%(P<0.01),并且两组间有显著差异(P<0.01);(2)流式细胞仪分析显示,移植瘤出现亚G1期峰及AnnexinV+/PI-细胞均证实MPA能诱导CoC1/cDDP细胞凋亡,并显著高于对照组及DDP组,并出现G1期阻滞;与DDP合用除出现G1期阻滞外又出现G2/M期阻滞,S期明显减少,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞进一步上升;(3)半定量RT-PCR检测显示,MPA组Survivin-ΔEx3、GST-πmRNA下调,而P21WAF1/CIP1、caspase-3 mRNA上调,与DDP合用后,对Survivin-ΔEx3、P21WAF1/CIP1及GST-πmRNA的表达无协调作用,而对caspase-3 mRNA有协同上调作用。结论:MPA通过阻滞G0/G1期明显抑制了CoC1/cDDP移植瘤生长,并有很强的致凋亡作用,同时下调GST-πmRNA,从而逆转对顺铂耐药。     

阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对子宫内膜癌生长抑制作用的研究

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路抑制剂(PD98059)对ER阳性表达的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A人子宫内膜癌细胞系的裸鼠体内抗增殖作用,探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞,将对数生长期的两种细胞分别接种于裸鼠背部皮下,建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型。将两种细胞系成瘤阳性裸鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,分别腹腔注射生理盐水和PD98059,每周2次,共3周,观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,建立移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。实验结束时取肿瘤组织切片HE染色,原位末端标记(TUNEL)法检测组织细胞的凋亡,Western blot检测各组织中ERK1/2的活化。结果:(1)PD98059能有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞裸鼠皮下移植瘤的生长;(2)HE染色可见实验组瘤细胞核浆比相对较小,血管密度降低;TUNEL染色可见两种细胞移植瘤中实验组细胞凋亡率较对照组明显增加;(3)Western blot检测结果:PD98059能有效降低裸鼠移植瘤组织中p-ERK表达。结论:PD98059通过阻断MAPK/ERK信号传导通路增加Ishikawa和HEC-1A细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡,抑制肿瘤生长,抗肿瘤效果明显,可成为治疗子宫内膜癌的有效方法。     

来曲唑对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的探讨第三代芳香化酶抑制剂(aromatase inhibitors,AIs)来曲唑对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的作用。方法2006年5月至6月于南京军区南京总医院、南京大学医学院临床学院,将人子宫内膜癌细胞株RL-952接种于裸鼠皮下,建立裸鼠的移植瘤动物模型,随机分成5组,分别给予包括来曲唑在内的药物干预。8周后计算移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行HE染色病理检查,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果实验组裸鼠肿瘤体积增长相对缓慢[来曲唑1组(2539.83±461.23)mm3、来曲唑2组(2330.02±496.84)mm3];对照组肿瘤体积增长明显[治疗后为(3787.94±697.54)mm3],差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术检测实验组肿瘤细胞凋亡率[来曲唑1、2组分别为(32.90±5.76)%,(35.80±5.12)%]明显高于对照组[(16.97±4.80)%](P<0.05)。结论来曲唑抗子宫内膜癌作用与醋酸甲地孕酮(megestrol ace-tate,MA)相似。     

丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用及对DEDD表达的影响

目的:评价丙氨瑞林对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞裸鼠移植瘤的作用及机制。方法:建立人子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠皮下接种HEC-1-B细胞,成瘤后,根据裸鼠体积进行区组随机化分组,共分成4组(各8只),即阴性对照组(生理盐水0.2 m L/只)、丙氨瑞林低(20μg/kg)、中(40μg/kg)、高(80μg/kg)剂量组。各组给药期间测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;用药结束后处死裸鼠,将瘤体完整取出,测瘤体积,计算抑瘤率,比较各组移植瘤体积的差异;利用苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤形态学变化,免疫组织化学检测肿瘤死亡效应结构域蛋白(DEDD)表达情况。结果:肿瘤生长曲线表明,阴性对照组及丙氨瑞林低、中、高剂量组的肿瘤生长速度依次减慢;丙氨瑞林低、中、高剂量组的抑瘤率分别为12.65%、27.38%和35.43%,组间多重比较差异均有统计学意义(均P0.05);HE染色表明,阴性对照组瘤细胞排列密集,有明显异型性,细胞核大深染,核分裂相较多,间质较少,而丙氨瑞林各剂量组瘤体细胞形态各异,细胞排列较稀疏,可见大片无结构坏死区,瘤细胞核深染、固缩较多,核分裂相较少。免疫组织化学结果显示:丙氨瑞林低、中、高剂量组DEDD蛋白表达灰度值分别为156.20±5.10、142.85±7.27和113.65±4.38,均明显低于对照组的171.75±8.21,差异均有统计学意义(P0.001)。结论:丙氨瑞林可抑制肿瘤生长,且呈一定的剂量依赖性,其机制可能与上调DEDD蛋白的表达有关。     

三氧化二砷对子宫内膜癌醋酸甲羟孕酮耐药细胞的作用研究

目的研究三氧化二砷(AS_2O_3)对子宫内膜癌细胞和耐药细胞的作用及机制。方法 (1)分别采用MTS法和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测不同浓度的AS_2O_3在不同作用时间下对ISK细胞增殖和凋亡的影响;(2)采用浓度梯度递增持续刺激诱导法,体外建立MPA耐药细胞后,采用MTS法和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术,检测AS_2O_3对ISK/MPA增殖和凋亡的影响,并与ISK组对比。(3)Western-blot法检测AS_2O_3作用后ISK与ISK/MPA细胞内p-AKT、p-ERK1/2及Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化。(4)建立裸鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射2 mg/kg的AS_2O_3,观察裸鼠瘤体的体积变化及毒副作用。结果 (1)AS_2O_3对ISK细胞有生长抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;AS_2O_3作用后,ISK的凋亡率呈浓度依赖性升高,48 h细胞凋亡率大于24 h(P0.05);(2)成功建立人子宫内膜癌MPA耐药细胞系;AS_2O_3对ISK/MPA细胞具有生长抑制和促凋亡作用,且呈时间和浓度依赖性;AS_2O_3对ISK细胞组的促凋亡作用强于ISK/MPA细胞组(P0.05),但生长抑制作用比较,差异无统计学意义(P0.05);(3)AS_2O_3作用后,ISK及ISK/MPA细胞内p-AKT、p-ERK1/2和Caspase-3表达降低,Bcl-2表达降低而Bax表达升高(P0.05);(4)成功建立裸鼠皮下移植瘤模型,AS_2O_3作用后,裸鼠瘤体体积明显减小(P0.05)。结论 AS_2O_3对ISK/MPA细胞有增殖抑制和促凋亡作用,机制可能为AS_2O_3可导致Akt、ERK1/2磷酸化水平的降低,抑制P13K/AKT通路和MPAK/ERK通路的激活及在下调Bcl-2表达的同时,上调Bax蛋白的表达,继而调节凋亡相关蛋白通路分子Caspase-3的表达发挥增殖抑制和促凋亡作用。     

骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的研究

目的:研究骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A,将对数生长期的HEC-1-A细胞株接种于裸鼠右侧背部皮下。将成瘤的裸鼠随机分为两组,分别为对照组、骨化三醇组。观察两组裸鼠生长状况,测量移植瘤的体积和重量,RT-PCR检测肿瘤组织凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达,流式细胞仪Annexin-V/PI双标法观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果:对比两组裸鼠用药前后净体重(净体重=裸鼠体重-移植瘤的质量)变化:骨化三醇组与对照组差异无显著性(P>0.05);对比两组裸鼠用药前后移植瘤体积变化:骨化三醇组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);流式检测两组移植瘤凋亡率分别为:对照组(1.45 0.23)%,骨化三醇组(22.52 1.25)%,两组间比较差异均有显著性(P 0.05)。对照组、骨化三醇组Bcl-2 mRNA表达依次下降,而Bax mRNA表达依次上升。骨化三醇组Bcl-2 mRNA和Bax mRNA转录强度与对照组相比差异均有显著性(p<0.05)。结论:本研究结果表明,骨化三醇对HEC-1-A移植瘤具有较强的抗肿瘤作用,该作用是通过Bax/Bcl-2途...     

骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的研究

目的:研究骨化三醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A,将对数生长期的HEC-1-A细胞株接种于裸鼠右侧背部皮下。将成瘤的裸鼠随机分为两组,分别为对照组、骨化三醇组。观察两组裸鼠生长状况,测量移植瘤的体积和重量,RT-PCR检测肿瘤组织凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达,流式细胞仪Annexin-V/PI双标法观察肿瘤细胞的凋亡情况。结果:对比两组裸鼠用药前后净体重(净体重=裸鼠体重-移植瘤的质量)变化:骨化三醇组与对照组差异无显著性(P>0.05);对比两组裸鼠用药前后移植瘤体积变化:骨化三醇组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);流式检测两组移植瘤凋亡率分别为:对照组(1.45 0.23)%,骨化三醇组(22.52 1.25)%,两组间比较差异均有显著性(P 0.05)。对照组、骨化三醇组Bcl-2 mRNA表达依次下降,而Bax mRNA表达依次上升。骨化三醇组Bcl-2 mRNA和Bax mRNA转录强度与对照组相比差异均有显著性(p<0.05)。结论:本研究结果表明,骨化三醇对HEC-1-A移植瘤具有较强的抗肿瘤作用,该作用是通过Bax/Bcl-2途径诱导HEC-1-A肿瘤细胞凋亡起作用。     

二甲双胍用于子宫内膜癌预防和治疗的研究进展

随着代谢性疾病发病率不断升高,子宫内膜癌的发病率不断增长,发病年龄趋于年轻化。前期研究发现,二甲双胍在多种生殖道恶性肿瘤的预防和治疗中发挥着重要作用。流行病学显示,二甲双胍可降低糖尿病患者子宫内膜癌的发病风险,提高子宫内膜癌患者的总生存率和无瘤生存期。本文就二甲双胍在子宫内膜癌预防和治疗方面的研究进展做一综述。     

二甲双胍诱导子宫内膜异位症在位内膜细胞凋亡的研究

目的:研究二甲双胍对大鼠子宫内膜异位症模型在位内膜细胞凋亡的影响。方法:采用手术自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机将成模鼠分为A组(二甲双胍50mg/kg·d),B组(二甲双胍100mg/kg·d)和C组(二甲双胍200mg/kg·d)各10只,D组(0.9%氯化钠溶液对照)8只。用药4周后采用TUNEL法检测细胞凋亡指数,逆转录PCR(RT-PCR)技术分别检测在位子宫内膜组织中Bcl-2、Bax和P53基因转录水平;Westernblotting检测磷酸化AMPK和磷酸化mTOR蛋白的表达;流式细胞仪分析细胞周期的分布情况。结果:A、B、C组凋亡率均高于D组(P<0.05),其中B组效果更显著;A、B、C组Bcl-2mRNA、BaxmRNA、P53mR-NA、Bcl-2mRNA/BaxmRNA比值、P-AMPK、P-mTOR与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B、C组在位内膜细胞G0/G1期比例明显高于D组(P<0.05),且B组高于A组(P<0.05)、A组高于C组(P<0.05)。结论:二甲双胍调节Bcl-2、Bax和P53基因表达,从而诱导在位内膜细胞凋亡,以100mg/kg·d效果最明显。     

白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨

目的：探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用。方法：于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×10 7个／mLHela细胞悬液100uL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine2000与基因重组质粒pDC316-hIL-24（A组）、空质粒pDC316（B组）以及磷酸盐缓冲液（C组）,比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率。应用RT-PCR法测定移植瘤中h／L-24的表达．HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化。免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况。结果：①IL-24基因成功转染人肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组（F=63．395,P〈0．05）;A组的平均抑瘤率高于B组（t=130．920,P〈0．01）。②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。⑧免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组（F=6．164,P〈0．05）,而其同源蛋白BAX表达高于其他2组（F=58．426,P〈0．05）。结论：基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡。     

Treg细胞/Th17细胞比例失衡在卵巢癌的生长以及微血管、淋巴管生成中的作用

目的:探讨Treg细胞/Th17细胞比例失衡对移植瘤生长及微血管和淋巴管生成的影响。方法:构建卵巢癌裸鼠皮下和原位移植瘤模型,用磁珠分选人外周血CD3+淋巴细胞,加曲古抑菌素A(TSA)刺激使其Treg/Th17细胞比例失衡,采用流式细胞仪检测Treg/Th17细胞比例。分别将Treg/Th17细胞比例较高和较低的淋巴细胞与人卵巢癌细胞系SKOV3按1∶20比例注射入裸鼠皮下和卵巢包膜下,分别于注射后28天和35天处死称重,观察其对移植瘤生长的影响;免疫组化CD31和LYVE-1染色检测微血管(MVD)和淋巴管(LVD)的表达。结果:Treg高组能促进皮下和原位卵巢癌的生长。皮下模型:注射后第21和28天,Treg高组的肿瘤总荧光强度值均大于Th17高组和对照组;Treg高组的肿瘤重量为(0.60±0.07)g,Th17高组(0.35±0.24)g,对照组(0.25±0.22)g,Treg高组肿瘤重量较Th17高组和对照组重。原位模型:注射后第28天Treg高组肿瘤总荧光强度值均大于其他两组;Treg高组(0.34±0.20)g,Th17高组(0.06±0.03)g,对照组(0.17±0.05)g,Treg高组肿瘤重量比Th17高组重。Treg高组的MVD和LVD表达高于Th17高组和对照组(P0.05)。结论:Treg细胞/Th17细胞比例失衡在卵巢癌裸鼠移植瘤生长中起着重要作用,且Treg高组能影响卵巢癌的生长、微血管和淋巴管的形成。     

白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨

目的：探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用。方法：于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×107个/mL Hela细胞悬液100 μL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine 2000与基因重组质粒pDC316-hIL -24（A组）、空质粒pDC316（B组）以及磷酸盐缓冲液（C组）,比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率。应用RT-PCR法测定移植瘤中hIL-24的表达,HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化,免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况。结果：①IL-24基因成功转染入肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组（F=63.395,P ＜0.05）;A组的平均抑瘤率高于B组（t=130.920,P ＜0.01）。②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。③免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组（F=6.164,P ＜0.05）,而其同源蛋白BAX表达高于其他2组（F=58.426,P ＜0.05）。结论：基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡。     

白细胞介素-15治疗3AO裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探讨白细胞介素-15(IL-15)治疗3AO裸鼠皮下移植瘤的效果及其机制。方法:建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组,每组12只。I组为顺铂(cD-DP)3mg/kg;Ⅱ组、Ⅲ组分别为IL-1550μg/kg,100μg/kg;Ⅳ组为cDDP1.5mg/kg加IL-1550μg/kg;Ⅴ组为对照组,注射生理盐水(各组药物均腹腔注射,按每只裸鼠0.2ml配制),1次/d,连用1周。观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期、生存延长率及肿瘤生长曲线。停药1天,1周,2周后,观察移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;对移植瘤及裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果:实验组与对照组相比荷瘤裸鼠生存延长率,脾脏重量,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数均有明显差异。病理学检查示各治疗组均见肿瘤坏死,肿瘤细胞周围及肿瘤内淋巴细胞明显浸润。IL-15治疗组脾脏有充血增生表现,肝脏肝细胞嗜酸性变性,肝细胞水肿,周围有浊肿;cDDP治疗组肾脏近曲小管和远曲小管细胞水肿,管腔变小;对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论:IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,其机制可能与IL-15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。     

二甲双胍对人子宫内膜癌细胞迁徙能力的影响

目的：体外检测二甲双胍对人子宫内膜癌（Ec）细胞迁徙能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：培养Ishikawa和HEC-1A人子宫内膜癌细胞系,用不同浓度的二甲双胍干预EC细胞。采用划痕试验检测细胞迁徙能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot法检测Akt、p-Akt及PTEN的表达。结果：二甲双胍显著抑制Ishika—wa和HEC-1A细胞的迁徙能力（P均〈0．05）。流式细胞术检测显示,二甲双胍使G0／G1期细胞比例显著升高,同时有凋亡诱导作用;Westernblot法检测显示,二甲双胍能下调P—Akt的表达（P均〈0．05）。结论：二甲双胍显著抑制EC细胞的迁徙能力,其作用机制可能与下调p-Akt的表达有关。     

白介素β1及凝血酶降低孕早期蜕膜细胞同源框A10基因的表达

目的:探讨炎症及出血导致流产的作用机制。方法:选择复发性流产(RSA)及正常妊娠孕6~10周的蜕膜组织各10例,并在体外分离培养正常妊娠的蜕膜细胞,加入雌、孕激素、白介素β1(IL-β1)及凝血酶处理后,用实时荧光定量RT-PCR及Western blotting检测RSA患者、正常妊娠者蜕膜组织及培养处理的各组蜕膜细胞内的同源框A10(HOXA10)的表达情况。结果:1HOX A10基因在孕早期蜕膜细胞中有表达;与正常妊娠者相比,RAS患者蜕膜组织HOXA10的表达明显下降(P0.05)。2雌、孕激素处理组的蜕膜细胞HOXA10 mRNA的表达显著增加(P0.05),是未处理组的9.5倍。3进一步加入IL-β1或凝血酶后,HOXA10 mRNA表达显著下降(P0.05);与雌、孕激素组相比,分别下降89.5%和74.9%。结论:1 HOXA10基因在孕早期蜕膜细胞中有显著表达,在RAS患者中的表达显著下降。2雌、孕激素促进HOXA10的表达,而IL-β1及凝血酶抑制HOXA10的表达。     

低氧环境对人上皮性卵巢癌细胞株上皮间质转化及侵袭能力的影响及机制探讨

目的:探讨低氧环境对人卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响及可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、3AO,将每株细胞分为对照组、Co Cl2(模拟低氧环境)组、VPL(钙离子拮抗剂)组和VPL+Co Cl2组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Co Cl2对SKOV-3、3AO细胞生长情况的影响;倒置相差显微镜下观察低氧后细胞形态的改变;采用Western blot法检测SKOV-3、3AO细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转录因子Twist、上皮型钙黏蛋白(E-cad)及神经型钙黏蛋白(N-cad)表达的变化;体外侵袭实验穿膜小室(Transwell小室)检测细胞的侵袭能力。结果:Co Cl2作用后,两种细胞的存活率均较对照组明显降低(P0.05)。低氧环境下,部分细胞伸出伪足,呈多角形,细胞排列松散、紊乱。Co Cl2能体外模拟细胞低氧环境,诱导HIF-1α蛋白高表达。SKOV-3、3AO细胞中,Co C12组中HIF-1α、Twist、N-cad蛋白表达明显高于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);E-cad蛋白表达明显低于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);VPL组与对照组相比,各蛋白表达的变化无明显差异(P0.05)。Co C12组两种细胞的穿膜数均显著多于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05)。结论:钙信号途径参与了低氧环境下HIF-1α调节卵巢癌SKOV-3、3AO细胞中Twist的表达,从而诱导这两种细胞EMT的发生并增强其侵袭能力。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜不典型增生的药物转化分析

目的:分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜不典型增生的药物转化疗效及安全性。方法:回顾性分析17例PCOS子宫内膜不典型增生患者,其中9例曾用孕激素治疗未转化者为A组;8例未曾治疗者为B组,均检测口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并同时行胰岛素释放试验,以检测患者是否存在胰岛素抵抗(IR)及高胰岛素血症。17例患者均采用口服避孕药联合二甲双胍治疗。结果:17例PCOS患者均存在IR及高胰岛素血症,经药物治疗3~6个周期后,内膜不典型病变均成功转化。结论:采用口服避孕药联合二甲双胍治疗PCOS合并IR的子宫内膜不典型增生患者是一种临床上实用、有效的治疗方法。     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠反复自发性发作及海马损伤的干预作用

目的观察中药熄风胶囊单药和联合用药干预治疗对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠反复自发性发作及海马损伤的影响。方法将SPF级健康雄性Wistar大鼠160只随机分为正常组、模型组、熄风胶囊高剂量干预组(熄高组)、熄风胶囊中剂量干预组(熄中组)、熄风胶囊低剂量干预组(熄低组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯联合干预组(联高组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯1/2剂量联合干预组(联低组)、托吡酯干预组(TPM组)各20只。运用氯化锂-匹罗卡品化学点燃法,复制癫痫大鼠模型,观察熄风胶囊单药和联合用药干预治疗对大鼠反复自发性发作(SRS)的影响;通过常规病理及电镜观察海马结构形态学改变,应用Timm组织化学染色法进行海马苔藓纤维出芽(MFS)的观察。结果 (1)所有干预组大鼠痫样发作平均级别均低于模型组而高于正常组,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)各干预组诱发癫痫持续状态的大鼠SRS发作次数均高于正常组而低于模型组,差异均有统计学意义(P0.01),其中熄高组SRS次数低于熄中组、TPM组、熄低组,差异均有统计学意义(P0.05);联髙组SRS次数低于熄低组,差异有统计学意义(P0.01)。(3)Timm染色结果显示:所有干预组海马CA3始层及齿状回分子层Timm染色颗粒MFS总面积低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05),其中在CA3区熄高组、联髙组、联低组与模型组相比,差异有统计学意义(P0.01)。(4)光、电镜结果显示:各干预组中联低组海马结构损伤最轻,熄高组海马结构损伤较熄中组、熄低组轻。结论熄风胶囊单药及与TPM联合用药可以有效地减低氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,减轻海马损伤,抑制MFS。     

靶向沉默Gata3对妊娠期哮喘小鼠树突状细胞表型及效应T细胞失衡表达的影响

目的:研究慢病毒介导siRNA靶向沉默Gata3基因表达对妊娠哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗原递呈及其免疫生物学特性的影响。方法:以脂质体DNA沉淀法将重组慢病毒干扰质粒与包装质粒共转染AD293细胞,包装生成慢病毒感染体外诱导DC,RT-PCR、Western blot分析其对siGata3基因的整合转录效果;流式细胞术观察细胞表型变化。通过尾静脉注射将pSH1/siGata3转移至小鼠体内,ELISA法测定其肺泡灌洗液(BALF)中的炎性因子含量;MTT法验证混合淋巴细胞反应(MLR)后T细胞增殖能力。结果:经重组、包装携有Gata3特异siRNA慢病毒感染DC成功,其siRNA靶点Gata3 mRNA及蛋白的转录表达分别下调87.30%和81.33%(P0.05);同时降低DCs膜表面CD86荧光强度(P0.05)。减少pSH1/siGata3组小鼠BALF中IL-5、IL-17分泌而提升IL-12水平(P0.05);MLR证实,共培养感染DC激活T细胞的能力明显不足(P0.05)。结论:siRNA干扰可有效抑制模型小鼠免疫微环境特定Gata3通路,阻遏T细胞及其亚群分化由此来诱导DC免疫耐受,为妊娠期哮喘防治奠定基础并提供新的思路和手段。